EN 17477:2021

Algae and algae products - Identification of the biomass of microalgae, macroalgae, cyanobacteria and Labyrinthulomycetes - Detection and identification with morphological and/or molecular methods

This document specifies a method for the detection and identification of microalgae, macroalgae, cyanobacteria and Labyrinthulomycetes by using morphological methods and/or molecular methods.
The morphological methods in this document are applicable to harvested wet biomass and to harvested dried unground biomass from microalgae, macroalgae, cyanobacteria and Labyrinthulomycetes that have been grown and/or harvested for further processing and/or use.
The molecular methods in this document are applicable to harvested wet biomass and to harvested dried and/or ground biomass from microalgae, macroalgae, cyanobacteria and Labyrinthulomycetes that have been grown and/or harvested for further processing and/or use.
This document describes a toolbox, consisting of several identification methods that can be chosen according to the applicability and purpose of the identification:
-   morphological methods based on observation and referring to scientific literature on taxonomy:
-   macroscopic identification;
-   light microscopic identification.
-   molecular methods for sequencing and blasting of sequences:
-   16S rDNA sequencing;
-   18S rDNA sequencing;
-   rbcL DNA sequencing;
-   ITS sequencing;
-   COX1 gene sequencing;
-   tufA gene sequencing.
This document does not deal with genetic purity of the biomass or quantification of the identified taxa.
This document is not suitable for the analysis of highly processed biomass with highly degraded DNA where the fragments’ length are not sufficient for amplification of the targets and the morphological characteristics cannot be assessed.

Algen und Algenprodukte - Identifizierung der Biomasse von Mikroalgen, Makroalgen, Cyanobakterien und Labyrinthulomycetes - Erkennung und Identifizierung mit morphologischen und/oder molekularen Verfahren

Dieses Dokument legt ein Verfahren für den Nachweis und die Identifizierung von Mikroalgen, Makroalgen, Cyanobakterien und Labyrinthulomycetes (Netzschleimpilze) mittels morphologischer und/oder moleku-larer Verfahren fest.
Die in diesem Dokument dargelegten morphologischen Verfahren sind anzuwenden für geerntete feuchte Biomasse und geerntete trockene, ungemahlene Biomasse von Mikroalgen, Makroalgen, Cyanobakterien und Labyrinthulo¬mycetes, die für die Weiterverarbeitung und/oder Verwendung kultiviert und/oder geerntet wurden.
Die in diesem Dokument dargelegten molekularen Verfahren sind anzuwenden für geerntete feuchte Biomasse und geerntete trockene und/oder gemahlene Biomasse von Mikroalgen, Makroalgen, Cyanobakterien und Labyrinthulomycetes, die für die Weiterverarbeitung und/oder Verwendung kultiviert und/oder geerntet wurden.
In diesem Dokument wird eine Sammlung von Verfahren beschrieben, die aus mehreren Identifizierungs-verfahren besteht, welche je nach Anwendbarkeit und Zweck der Identifizierung gewählt werden können:
-   morphologische Verfahren, die auf Beobachtung unter Bezug auf die wissenschaftliche Literatur zur Taxonomie basieren:
-   makroskopische Identifizierung;
-   lichtmikroskopische Identifizierung;
-   molekulare Verfahren zur Sequenzierung und zum Sequenzvergleich („Blasting“):
-   16S rDNS Sequenzierung;
-   18S rDNS Sequenzierung;
-   rbcL DNS Sequenzierung;
-   ITS Sequenzierung;
-   COX1 Gensequenzierung;
-   tufA Gensequenzierung.
Dieses Dokument behandelt weder die genetische Reinheit der untersuchten Biomasse noch die Quantifizierung der identifizierten Taxa.
Dieses Dokument ist nicht geeignet für die Analyse von stark verarbeiteter Biomasse mit hochgradig abgebauter DNS, bei der die Länge der Fragmente für die Amplifikation der Targets nicht ausreichend ist, und bei der die morphologischen Merkmale nicht beurteilt werden können.

Algues et produits d'algues - Identification de la biomasse de microalgues, macroalgues, cyanobactéries et Labyrinthulomycètes - Détection et identification à l'aide de méthodes morphologiques et/ou moléculaires

Le présent document spécifie une méthode de détection et d’identification des microalgues, macroalgues, cyanobactéries et Labyrinthulomycètes à l’aide de méthodes morphologiques et/ou moléculaires.
Les méthodes morphologiques utilisées dans le présent document sont applicables à la biomasse humide récoltée et à la biomasse sèche non broyée récoltée provenant des microalgues, macroalgues, cyanobactéries et Labyrinthulomycètes qui ont été cultivées et/ou récoltées en vue d’un traitement ultérieur et/ou d’une utilisation ultérieure.
Les méthodes moléculaires utilisées dans le présent document sont applicables à la biomasse humide récoltée et à la biomasse sèche et/ou broyée récoltée provenant des microalgues, macroalgues, cyanobactéries et Labyrinthulomycètes qui ont été cultivées et/ou récoltées en vue d’un traitement ultérieur et/ou d’une utilisation ultérieure.
Le présent document décrit une boîte à outils, comprenant plusieurs méthodes d’identification qui peuvent être choisies en fonction de l’applicabilité et de l’objectif de l’identification :
-   méthodes morphologiques reposant sur l’observation et faisant référence aux ouvrages scientifiques sur la taxonomie :
-   identification macroscopique ;
-   identification au microscope optique ;
-   méthodes moléculaires de séquençage et d’alignement de séquences :
-   séquençage de l’ADNr 16S ;
-   séquençage de l’ADNr 18S ;
-   séquençage de l’ADN rbcL ;
-   séquençage de l’ITS ;
-   séquençage du gène COX1 ;
-   séquençage du gène tufA.
Le présent document ne traite ni de la pureté génétique de la biomasse ni de la quantification des taxons identifiés.
Le présent document ne convient pas à l’analyse de la biomasse hautement traitée contenant de l’ADN fortement dégradé dans lequel la longueur des fragments n’est pas suffisante pour amplifier les cibles et dans lequel les caractéristiques morphologiques ne peuvent pas être évaluées.

Alge in izdelki iz alg - Ugotavljanje biomase pri mikroalgah, makroalgah, cianobakterijah in labirintulomicetah - Odkrivanje in prepoznavanje z morfološkimi in/ali molekularnimi metodami

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 10-Aug-2021
• Withdrawal Date: 27-Feb-2022
• ICS: 13.020.55 - Biobased products
• Technical Committee: CEN/TC 454 - Algae and algae products
• Drafting Committee: CEN/TC 454/WG 2 - Classification
• Current Stage: 6060 - Definitive text made available (DAV) - Publishing
• Start Date: 11-Aug-2021
• Due Date: 18-Jan-2022
• Completion Date: 11-Aug-2021
• Mandate: M/547 - [C(2016)1582] Standardisation request to CEN on Algae and their products
• Ref Project: SIST EN 17477:2021 - Algae and algae products - Identification of the biomass of microalgae, macroalgae, cyanobacteria and Labyrithulomycetes - Detection and identification with morphological and/or molecular methods

Standards Content (Sample)

SLOVENSKI STANDARD
01-oktober-2021
Alge in izdelki iz alg - Ugotavljanje biomase pri mikroalgah, makroalgah,
cianobakterijah in labirintulomicetah - Odkrivanje in prepoznavanje z morfološkimi
in/ali molekularnimi metodami
Algae and algae products - Identification of the biomass of microalgae, macroalgae,
cyanobacteria and Labyrithulomycetes - Detection and identification with morphological
and/or molecular methods
Algen und Algenprodukte - Identifizierung der Biomasse von Mikroalgen, Makroalgen,
Cyanobakterien und/oder Labyrinthulomycetes - Erkennung und Identifizierung mit
morphologischen und/oder molekularen Methoden
Algues et produits d'algues - Identification de la biomasse de microalgues, macroalgues,
cyanobactéries et/ou Labyrinthulomycètes - Détection et identification à l'aide de
méthodes morphologiques et/ou moléculaires
Ta slovenski standard je istoveten z: EN 17477:2021
ICS:
13.020.55 Biološki izdelki Biobased products
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

EN 17477
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
August 2021
EUROPÄISCHE NORM
ICS 13.020.55
English Version
Algae and algae products - Identification of the biomass of
microalgae, macroalgae, cyanobacteria and
Labyrinthulomycetes - Detection and identification with
morphological and/or molecular methods
Algues et produits d'algues - Identification de la Algen und Algenprodukte - Identifizierung der
biomasse de microalgues, macroalgues, cyanobactéries Biomasse von Mikroalgen, Makroalgen,
et Labyrinthulomycètes - Détection et identification à Cyanobakterien und Labyrinthulomycetes - Erkennung
l'aide de méthodes morphologiques et/ou moléculaires und Identifizierung mit morphologischen und/oder
molekularen Verfahren
This European Standard was approved by CEN on 7 June 2021.

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Contents Page
European foreword . 4
Introduction . 5
1 Scope . 6
2 Normative references . 7
3 Terms and definitions . 7
4 Abbreviations . 11
5 Reagents . 12
5.1 Reagents for morphological methods . 12
5.1.1 Isotonic solution . 12
5.2 Reagents for molecular methods . 12
5.2.1 Primer . 12
5.2.2 Deoxynucleotide triphosphate mix (dNTPs) . 12
5.2.3 Thermostable DNA polymerase . 12
5.2.4 PCR reaction buffer . 12
5.2.5 Agarose gel . 12
5.2.6 Gel electrophoresis buffer . 13
5.2.7 Loading buffer . 13
5.2.8 DNA Ladder . 13
6 Apparatus . 13
6.1 General . 13
6.2 Apparatus for morphological identification methods . 13
6.2.1 Low-magnifying optical system . 13
6.2.2 Light microscope . 13
6.2.3 Scientific literature on taxonomy . 13
6.2.4 Microscope slide . 14
6.2.5 Microscope cover glass . 14
6.3 Apparatus for molecular identification methods . 14
6.3.1 Thermocycler . 14
6.3.2 Gel electrophoresis device . 14
6.3.3 DNA sequencer . 14
6.3.4 Plastic consumables, DNA free, disposable . 14
7 Principle . 14
7.1 General . 14
7.2 Morphological methods . 15
7.3 Molecular methods . 15
8 Procedure. 15
8.1 General laboratory requirements . 15
8.2 Choice of methods . 15
9 Morphological identification methods . 17
9.1 General . 17
9.2 Macroscopic identification with the naked eye or a magnifying glass . 17
9.3 Light microscopy . 17
9.3.1 General . 17
9.3.2 Staining . 17
9.3.3 Preparation of microscope slides . 17
9.3.4 Microscopic identification . 18
9.3.5 Use of identification keys . 18
10 Molecular identification methods . 18
10.1 General . 18
10.2 DNA extraction and purification . 19
10.3 DNA Amplification . 19
10.3.1 Principle of DNA Amplification . 19
10.3.2 Method . 19
10.4 Selection of primers . 20
10.5 Control reactions . 20
10.6 Evaluation of PCR products . 21
10.7 PCR product cloning . 21
10.8 PCR product sequencing . 21
10.9 Evaluation of sequence data . 21
10.10 Sequence analysis/comparison with reference sequences in public databases . 22
11 Test report . 23
Annex A (informative)  Examples of applicable primers . 24
Annex B (informative) Scientific literature that may be used for identification . 26
Bibliography . 28
European foreword
This document (EN 17477:2021) has been prepared by Technical Committee CEN/TC 454 “Algae and
algae products”, the secretariat of which is held by NEN.
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of
an identical text or by endorsement, at the latest by February 2022 and conflicting national standards
shall be withdrawn at the latest by February 2022.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. CEN shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
This document has been prepared under a Standardization Request given to CEN by the European
Commission and the European Free Trade Association, and supports essential requirements of EU
Directive(s) / Regulation(s).
Any feedback and questions on this document should be directed to the users’ national standards body.
A complete listing of these bodies can be found on the CEN website.
According to the CEN-CENELEC
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