ISO 22174:2024

Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection and quantification of microorganisms — General requirements and definitions

This document specifies the general requirements for the in vitro amplification of nucleic acid sequences (DNA or RNA). This document is applicable to the testing for microorganisms and viruses from the food chain using the polymerase chain reaction (PCR). This document, or parts of it, is applicable to other fields of PCR diagnostics based on a case-by-case evaluation. The minimum requirements laid down in this document are intended to ensure that comparable and reproducible results are obtained in different laboratories. This document has been established for microorganisms from the food chain and is applicable to: — products intended for human consumption; — products for feeding animals; — environmental samples in the area of food and feed production and handling; — samples from the primary production stage.

Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche et la quantification de micro-organismes — Exigences générales et définitions

Le présent document spécifie les exigences générales relatives à l’amplification in vitro des séquences d’acide nucléique (ADN ou ARN). Le présent document s’applique aux essais pour la détection de micro‑organismes et de virus issus de la chaîne alimentaire en faisant appel à la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Le présent document, ou certaines de ses parties, s’applique(nt) à d’autres domaines de diagnostic par PCR sur la base d’une évaluation au cas par cas. Les exigences minimales déclarées dans le présent document sont destinées à garantir l’obtention de résultats comparables et reproductibles dans des laboratoires différents. Le présent document a été conçu pour les micro‑organismes issus de la chaîne alimentaire et s’applique aux: — produits destinés à la consommation humaine; — produits destinés à l’alimentation animale; — échantillons environnementaux prélevés dans des zones de production et de manipulation de produits alimentaires et d’aliments pour animaux; — échantillons de production primaire.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 15-Aug-2024
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 16-Aug-2024
• Due Date: 16-Aug-2024
• Completion Date: 16-Aug-2024

Relations

• Consolidates: ISO 683-5:2017 - Heat treatable steels, alloy steels and free-cutting steels — Part 5: Nitriding steels
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 20837:2006 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Requirements for sample preparation for qualitative detection
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 22174:2005 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 20838:2006 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Requirements for amplification and detection for qualitative methods
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 22119:2011 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Real-time polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

International
Standard
ISO 22174
Second edition
Microbiology of the food chain —
2024-08
Polymerase chain reaction (PCR)
for the detection and quantification
of microorganisms — General
requirements and definitions
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de
polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche et la
quantification de micro-organismes — Exigences générales et
définitions
Reference number
© ISO 2024
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
3.1 General terms .2
3.2 Terms related to the extraction and purification of DNA/RNA .3
3.3 Terms related to reverse transcription of RNA to DNA .4
3.4 Terms related to DNA amplification by PCR/RT-PCR .4
3.5 Terms related to controls .5
3.6 Terms related to qPCR .6
3.7 Terms related to dPCR .7
4 Principle . 8
4.1 General .8
4.2 Laboratory sample .9
4.3 Sampling, transport and storage.9
4.4 Preparation of test sample .9
5 Microbial enrichment and virus concentration . 9
5.1 Microbial enrichment .9
5.2 Virus concentration .9
6 Nucleic acid preparation . 10
6.1 General .10
6.2 Prevention of amplification of DNA from dead cells .10
6.3 Nucleic acid extraction, release and purification .10
6.4 Nucleic acid quality and quantity .10
7 PCR amplification . .11
8 Detection and confirmation of amplicons .11
9 General environmental laboratory requirements .12
9.1 General . 12
9.2 Laboratory setup . 12
9.2.1 General . 12
9.2.2 Control of flows . 13
9.2.3 Cleaning of laboratory .14
9.2.4 Environmental monitoring for nucleic acid contamination .14
10 Reagents and consumables . 14
11 Equipment . 14
12 Procedure .15
12.1 Enrichment and sample treatment . 15
12.2 Amplification .16
12.2.1 General .16
12.2.2 Control reaction .16
12.2.3 Detection of amplicon .18
12.2.4 Data analysis .18
12.3 Evaluation .19
12.3.1 Qualitative evaluation .19
12.3.2 Quantitative evaluation . 20
12.4 Test report .21
13 Performance characteristics of PCR-based methods .21
14 Validation and verification of PCR-based methods.21
14.1 General .21

iii
14.2 Validation .21
14.3 Verification . . 22
Annex A (informative) Fluorescence signals and amplification curve .23
Bibliography .26

iv
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
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constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee TC 34, Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology,
in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 463,
Microbiology of the food chain, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and
CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces ISO 22174:2005, ISO 20837:2006, ISO 20838:2006 and
ISO 22119:2011, which have been technically revised.
The main changes are as follows:
— inclusion of requirements for the implementation of digital PCR;
— inclusion of requir
...

Norme
internationale
ISO 22174
Deuxième édition
Microbiologie de la chaîne
2024-08
alimentaire — Réaction de
polymérisation en chaîne
(PCR) pour la recherche et la
quantification de micro-organismes
— Exigences générales et
définitions
Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction
(PCR) for the detection and quantification of microorganisms —
General requirements and definitions
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2024
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
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E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
3.1 Termes généraux .2
3.2 Termes relatifs à l’extraction et à la purification de l’ADN/ARN .3
3.3 Termes relatifs à la transcription inverse de l’ARN en ADN .4
3.4 Termes relatifs à l’amplification de l’ADN par PCR/RT‑PCR .4
3.5 Termes relatifs aux témoins .6
3.6 Termes relatifs à la qPCR .7
3.7 Termes relatifs à la dPCR .8
4 Principe. 9
4.1 Généralités .9
4.2 Échantillon pour laboratoire .9
4.3 Échantillonnage, transport et stockage .9
4.4 Préparation de l’échantillon pour essai .10
5 Enrichissement microbien et concentration virale .10
5.1 Enrichissement microbien .10
5.2 Concentration virale .10
6 Préparation de l’acide nucléique . 10
6.1 Généralités .10
6.2 Prévention de l’amplification de l’ADN provenant de cellules mortes .11
6.3 Extraction, libération et purification des acides nucléiques .11
6.4 Qualité et quantité d’acide nucléique .11
7 Amplification par PCR .12
8 Détection et confirmation des amplicons .12
9 Exigences générales pour l’environnement de laboratoire .13
9.1 Généralités . 13
9.2 Configuration du laboratoire . 13
9.2.1 Généralités . 13
9.2.2 Contrôle des flux .14
9.2.3 Nettoyage du laboratoire . 15
9.2.4 Surveillance de l’environnement pour la contamination des acides nucléiques . 15
10 Réactifs et consommables .15
11 Équipement .16
12 Mode opératoire . 17
12.1 Enrichissement et traitement des échantillons.17
12.2 Amplification .17
12.2.1 Généralités .17
12.2.2 Témoins de réaction .17
12.2.3 Détection de l’amplicon . 20
12.2.4 Analyse des données . 20
12.3 Évaluation .21
12.3.1 Évaluation qualitative .21
12.3.2 Évaluation quantitative . 22
12.4 Rapport d’essai . 23
13 Caractéristiques de performance des méthodes basées sur la PCR .23
14 Validation et vérification des méthodes basées sur la PCR .23
14.1 Généralités . 23

iii
14.2 Validation . 23
14.3 Vérification . .24
Annexe A (informative) Signaux de fluorescence et courbe d’amplification .25
Bibliographie .28

iv
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant‑propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 463, Microbiologie de la chaîne alimentaire,
du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO
et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace l’ISO 22174:2005, l’ISO 20837:2006, l’ISO 20838:2006 et
l’ISO 22119:2011, qui ont fait l’objet d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— ajout d’exigences pour la mise en œuvre
...

ISO/TC 34/SC 9 22174:2024(fr)
SecondeDeuxième édition
2024-08
Date :  : 2024-08-10-07
ISO/TC 34/SC 9
Secrétariat :  AFNOR
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation
en chaîne (PCR) pour la recherche et la quantification de micro-
organismes — Exigences générales et définitions
Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection and quantification of
microorganisms — General requirements and definitions

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvreoeuvre, aucune partie
de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique
ou mécanique, y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable.
Une autorisation peut être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du
demandeur.
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E-mail: [e-mail]
Web Website: www.iso.org
Publié en Suisse
Sommaire Page
Avant-propos . iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
3.1 Termes généraux . 2
3.2 Termes relatifs à l’extraction et à la purification de l’ADN/ARN . 4
3.3 Termes relatifs à la transcription inverse de l’ARN en ADN . 4
3.4 Termes relatifs à l’amplification de l’ADN par PCR/RT-PCR . 4
3.5 Termes relatifs aux témoins . 6
3.6 Termes relatifs à la qPCR . 7
3.7 Termes relatifs à la dPCR . 8
4 Principe . 9
4.1 Généralités . 9
4.2 Échantillon pour laboratoire . 10
4.3 Échantillonnage, transport et stockage . 10
4.4 Préparation de l’échantillon pour essai . 10
5 Enrichissement microbien et concentration virale . 10
5.1 Enrichissement microbien . 10
5.2 Concentration virale . 11
6 Préparation de l’acide nucléique . 11
6.1 Généralités . 11
6.2 Prévention de l’amplification de l’ADN provenant de cellules mortes. 11
6.3 Extraction, libération et purification des acides nucléiques . 11
6.4 Qualité et quantité d’acide nucléique . 12
7 Amplification par PCR . 12
8 Détection et confirmation des amplicons . 13
9 Exigences générales pour l’environnement de laboratoire . 13
9.1 Généralités . 13
9.2 Configuration du laboratoire . 14
10 Réactifs et consommables . 16
11 Équipement . 17
12 Mode opératoire . 18
12.1 Enrichissement et traitement des échantillons . 18
12.2 Amplification . 18
12.3 Évaluation . 22
12.4 Rapport d’essai . 24
13 Caractéristiques de performance des méthodes basées sur la PCR . 24
14 Validation et vérification des méthodes basées sur la PCR . 24
14.1 Généralités . 24
14.2 Validation . 25
14.3 Vérification . 25
Annexe A (informative) Signaux de fluorescence et courbe d’amplification . 26
Bibliographie . 29

iii
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont décrites
dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents critères
d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été rédigé
conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de propriétébrevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO
n’avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application.
Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des
informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à
l'adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou
partie de tels droits de brevetpropriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions spécifiques
de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de l'ISO aux
principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au commerce
(OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 463, Microbiologie de la chaîne alimentaire,
du Comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO
et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace l’ISO 22174:2005, l’ISO 20837:2006, l’ISO 20838:2006 et
l’ISO 22119:2011, qui ont fait l’objet d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— ajout d’exigences pour la mise en œuvre de la PCR digitale;
— ajout d’exigences relatives à la surveillance des flux de laboratoire, y compris la surveillance
environnementale pour la PCR;
— extension du paragraphe 12.2.2 Témoins de réaction, avec description des différents témoins;
— modification du paragraphe 12.3 pour inclure l’évaluation quantitative;
— ajout de l’Article 14 sur la validation et la vérification.
iv
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
v
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation
en chaîne (PCR) pour la recherche et la quantification de micro-
organismes — Exigences générales et définitions
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie les exigences générales relatives à l’amplification in vitro des séquences d’acide
nucléique (ADN ou ARN).
Le présent document s’applique aux essais pour la détection de micro-organismes et de virus issus de la chaîne
alimentaire en faisant appel à la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Le présent document,
ou certaines de ses parties, s’applique(nt) à d’autres domaines de diagnostic par PCR sur la base d’une
évaluation au cas par cas.
Les exigences minimales déclarées dans le présent document sont destinées à garantir l’obtention de résultats
comparables et reproductibles dans des laboratoires différents.
Le présent document a été conçu pour les micro-organismes issus de la chaîne alimentaire et s’applique aux:
— produits destinés à la consommation humaine;
— produits destinés à l’alimentation animale;
— échantillons environnementaux prélevés dans des zones de production et de manipulation de produits
alimentaires et d’aliments pour animaux;
— échantillons de production primaire.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur contenu,
des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments de la chaîne alimentaire — Exigences générales et recommandations pour
les examens microbiologiques
ISO 20836, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
recherche de micro-organismes — Essais de performance thermique des thermocycleurs
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes ::
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https://www.electropedia.org/
3.1 Termes généraux
3.1.1
échantillon pour laboratoire
échantillon dans l’état de préparation où il est envoyé au laboratoire et destiné à être utilisé pour un contrôle
ou pour des essais
[SOURCE: ISO 7002:1986, A.19]
3.1.2
échantillon pour essai
échantillon préparé à partir de l’échantillon pour laboratoire (3.
...