ISO 7932:2004
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 degrees C
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 degrees C
ISO 7932:2004 specifies a horizontal method for the enumeration of viable Bacillus cereus by means of the colony-count technique at 30 °C. It is applicable to products intended for human consumption and the feeding of animals, and environmental samples in the area of food production and food handling. In order to have a practicable test method, the confirmatory stage has been restricted to the typical aspect on MYP agar and the haemolysis test. Thus the term presumptive has been introduced in order to acknowledge the fact that the confirmatory stage does not enable the distinction of B. cereus from other closely related but less commonly encountered Bacillus species, such as B. anthracis, B. thuringiensis, B. weihenstephanensis, B. mycoides. An additional motility test may help to differentiate B. cereus from B. anthracis in cases where the presence of the latter is suspected.
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement de Bacillus cereus présomptifs — Technique par comptage des colonies à 30 degrés C
L'ISO 7932:2004 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement de Bacillus cereus présomptifs revivifiables par comptage des colonies à 30 °C. Elle est applicable aux produits pour l'alimentation humaine et animale; et aux échantillons d'environnement pour la production et la distribution des aliments. Dans le but de mettre en oeuvre une méthode pratique, l'étape de confirmation consiste uniquement à la caractérisation des colonies sur le milieu MYP et au test de l'hémolyse. Le terme «présomptif» a donc été introduit de façon à souligner le fait que l'étape de confirmation ne permet pas de faire la différence entre B. cereus et d'autres espèces proches mais néanmoins moins rencontrées, comme B. anthracis, B. thuringiensis, B. weihenstephanensis, B. mycoides. Un test de mobilité effectué en plus peut toutefois aider à la différentiation entre B. cereus et B. anthracis, dans les cas où la présence de ce dernier est suspectée.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 7932
Third edition
2004-06-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of presumptive Bacillus
cereus — Colony-count technique at
30 °C
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement de Bacillus cereus présomptifs — Technique par
comptage des colonies à 30 °C
Reference number
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ISO 7932:2004(E)
Contents Page
Foreword. iv
0 Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle . 1
5 Dilution fluid, culture media and reagents . 2
6 Apparatus and glassware. 4
7 Sampling . 5
8 Preparation of test sample. 5
9 Procedure. 5
9.1 Test portion, initial suspension and dilutions . 5
9.2 Inoculation and incubation . 5
9.3 Counting of the colonies. 5
9.4 Confirmation. 6
10 Expression of results. 6
10.1 Count of presumptive B. cereus colonies. 6
10.2 No colonies. 7
10.3 Precision . 7
11 Test report. 8
Annex A (normative) Confidence limits for the estimation of small numbers of colonies. 9
Annex B (informative) Results of interlaboratory test . 10
Bibliography . 13
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ISO 7932:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 7932 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 7932:1993) and Technical Corrigendum 1
(ISO 7932:1993/Cor.1:1997).
In this edition the previous confirmation tests [mannitol/egg yolk/polymyxin (MYP) agar medium, glucose
fermentation, Voges-Proskauer reaction and nitrate reduction] are replaced by the following:
haemolysis reaction;
MYP agar medium.
This edition introduces precision data obtained during an interlaboratory trial based on ISO 7932:1993 and
using the following confirmation tests: MYP agar medium, glucose agar medium, VP medium and nitrate
medium.
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ISO 7932:2004(E)
0 Introduction
0.1 This International Standard is intended to provide general guidance for the microbiological examination
of food products not dealt with by existing International Standards and to be taken into account by
organizations preparing microbiological test methods for application to foods or to animal feeding stuffs.
Because of the large variety of products within this field of application, these guidelines may not be
appropriate in every detail for certain products and for some other products it may be necessary to use
different methods. Nevertheless, it is hoped that in all cases every attempt will be made to apply the
guidelines provided as far as possible and that deviations from them will only be made if absolutely necessary
for technical reasons.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of all information then available
regarding the extent to which the guidelines have been followed and the reasons for deviation from them in
the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate and, for certain groups of products, International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with the guidelines. In cases where
International Standards already exist for the product to be tested, they should be followed, but it is hoped that
when such standards are reviewed they will be changed to comply with this International Standard so that
eventually the only remaining departures from these guidelines will be those necessary for well-established
technical reasons.
0.2 It appears that the spores of many, if not most, strains of B. cereus germinate readily on the surface of
culture media used for enumeration. In most cases there does not seem to be a need for heat shock treatment
to provoke germination. Sometimes a heat shock procedure is desirable, for example for spore counts or to
inhibit growth of vegetative bacterial cells. In such cases, treatment for 10 min at 80 °C is recommended.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 7932:2004(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus —
Colony-count technique at 30 °C
1 Scope
This International Standard specifies a horizontal method for the enumeration of viable presumptive Bacillus
cereus by means of the colony-count technique at 30 °C. It is applicable to
products intended for human consumption and the feeding of animals, and
environmental samples in the area of food production and food handling.
NOTE In order to have a practicable test method, the confirmatory stage has been restricted to the typical aspect on
MYP agar and the haemolysis test. Thus the term “presumptive” has been introduced in order to acknowledge the fact that
the confirmatory stage does not enable the distinction of B. cereus from other closely related but less commonly
encountered Bacillus species, such as B. anthracis, B. thuringiensis, B. weihenstephanensis, B. mycoides. An additional
motility test may help to differentiate B. cereus from B. anthracis in cases where the presence of the latter is suspected.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation
of the initial suspension and decimal dilutions
ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations,
and Amd.1:2001
ISO/TS 11133-2:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
presumptive Bacillus cereus
microorganism that forms typical colonies on the surface of a selective culture medium and which gives a
positive confirmation reaction under the conditions specified in this International Standard
NOTE See Note in Clause 1.
4 Principle
4.1 A specified quantity of the test sample if the initial product is liquid, or a specified quantity of an initial
suspension in the case of other products, is surface plated on a solid selective culture medium contained in
Petri dishes.
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Other plates are prepared under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of the initial
suspension.
4.2 The plates are incubated under aerobic conditions at 30 °C for 18 h to 48 h.
4.3 The number of B. cereus per gram or per millilitre of sample is calculated from the number of confirmed
colonies obtained on plates at dilution levels chosen so as to give a significant result, and confirmed according
to the test specified.
5 Dilution fluid, culture media and reagents
For current laboratory practice, see ISO 7218.
NOTE Commercially prepared ready-to-use reagents may be used.
5.1 Dilution fluid
See ISO 6887-1 and any specific standard dealing with the product to be examined.
5.2 Agar medium (see [1])
5.2.1 Base medium
5.2.1.1 Composition
Beef extract 1,0 g
Enzymatic digest of casein 10,0 g
D-Mannitol 10,0 g
Sodium chloride (NaCl) 10,0 g
Phenol red 0,025 g
a
Agar 12 g to 18 g
Water 900 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.
5.2.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water, by heating if necessary.
Adjust the pH, if necessary, so that the pH of the complete medium (5.2.4), after sterilization, is 7,2 ± 0,2 at
25 °C.
Dispense the medium in quantities of 90 ml into flasks of appropriate capacity.
Sterilize for 15 min in an autoclave (6.1) set at 121 °C.
5.2.2 Polymyxin B solution
5.2.2.1 Composition
6
Polymyxin B sulfate 10 IU
Water 100 ml
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5.2.2.2 Preparation
Dissolve the polymyxin B sulfate in the water. Sterilize by filtration.
5.2.3 Egg yolk emulsion
Use fresh hens' eggs with their shells intact. Wash the eggs in liquid detergent using a brush. Rinse under
running water, dip in 95 % (by volume) ethanol for 30 s and dry. Using aseptic procedures, break each egg
and separate the yolk from the white by repeatedly transferring the yolk from one half of the egg shell to the
other. Put the yolks into a sterile measuring cylinder and add four parts by volume of sterile water. Transfer
aseptically into a sterile flask and mix vigorously.
Heat the mixture for 2 h in a water bath (6.4) set at 44 °C to 47 °C. Then leave for 18 h to 24 h at 5 °C ± 3 °C
to allow a precipitate to form.
Collect the supernatant emulsion aseptically.
The emulsion may be stored at 5 °C ± 3 °C for not longer than 72 h.
5.2.4 Complete medium (MYP agar)
5.2.4.1 Composition
Base medium (5.2.1) 90 ml
Polymyxin B solution (5.2.2) 1,0 ml
Egg yolk emulsion (5.2.3) 10,0 ml
5.2.4.2 Preparation
Melt the base medium and cool it in a water bath (6.4) set at 44 °C to 47 °C.
Add the other liquids, mixing well after each addition.
Cool the complete medium in a water bath (6.4) set at 44 °C to 47 °C.
5.2.5 Preparation of agar plates
Pour 15 ml to 20 ml portions of the complete medium (5.2.4) into sterile Petri dishes (6.6) and allow to solidify.
The plates may be stored prior to drying at between 5 °C ± 3 °C for up to 4 days.
Immediately before use, dry the plates, preferably with the lids off and the agar surface downwards, in a
drying cabinet or incubator (6.2) set between 37 °C and 55 °C until the agar surface is dry.
5.2.6 Performance testing
See ISO/TS 11133-2:2003, Annex B.
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ISO 7932:2004(E)
5.3 Sheep blood agar
5.3.1 Base medium: Blood agar base No. 2
5.3.1.1 Composition
Proteose peptone or equivalent peptone 15 g
Liver hydrolysate 2,5 g
Yeast extract 5 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
a
Agar 12 g to 18 g
Water 1 000 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by boiling.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
Dispense into flasks and sterilize for 15 min at 121 °C.
5.3.2 Defibrinated sheep blood
5.3.2.1 Complete medium
5.3.2.1.1 Composition
Base medium (5.3.1) 100 ml
Defibrinated sheep blood 5 ml to 7 ml
5.3.2.1.2 Preparation
After cooling to 44 °C to 47 °C, add to the base medium (5.3.1) the defibrinated sheep blood. Mix.
Pour at least 12 ml portions of the complete medium into sterile Petri dishes (6.6) and allow to solidify.
6 Apparatus and glassware
NOTE Disposable apparatus is an acceptable alternative to re-usable glassware if it has similar specifications.
Usual microbiological laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet sterilization (autoclave)
See ISO 7218.
6.2 Drying cabinet or incubator, ventilated by convection, for drying the agar plates, capable of operating
between 37 °C ± 1 °C and 55 °C ± 1 °C.
6.3 Incubator,
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 7932
Troisième édition
2004-06-15
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement de
Bacillus cereus présomptifs — Technique
par comptage des colonies à 30 °C
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of presumptive Bacillus cereus — Colony-count
technique at 30 °C
Numéro de référence
ISO 7932:2004(F)
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ISO 2004
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ISO 7932:2004(F)
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Publié en Suisse
ii © ISO 2004 – Tous droits réservés
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ISO 7932:2004(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
0 Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Diluant, milieux de culture et réactifs . 2
6 Appareillage et verrerie . 4
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l'échantillon pour l'essai . 5
9 Mode opératoire . 5
9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions . 5
9.2 Ensemencement et incubation . 5
9.3 Comptage des colonies. 6
9.4 Confirmation. 6
10 Expression des résultats. 7
10.1 Comptage des colonies de B. cereus présomptifs . 7
10.2 Aucune colonie . 7
10.3 Fidélité. 7
11 Rapport d'essai . 8
Annexe A (normative) Limites de confiance des estimations des petits nombres de colonies . 9
Annexe B (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires. 10
Bibliographie . 13
© ISO 2004 – Tous droits réservés iii
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ISO 7932:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 7932 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 7932:1993) et le Rectificatif technique 1
(ISO 7932:1993/Cor.1:1997).
Dans la présente édition, les essais de confirmation [gélose MYP (mannitol/jaune d’œuf/polymyxine),
fermentation du glucose, réaction de Voges-Proskauer et réduction des nitrates] sont remplacés par les
suivants:
hémolyse;
gélose MYP.
La présente édition introduit des données de fidélité obtenues lors d'un essai interlaboratoires basé sur
l'ISO 7932:1993 avec les essais de confirmation suivants: gélose MYP, fermentation du glucose, réaction de
Voges-Proskauer et réduction des nitrates.
iv © ISO 2004 – Tous droits réservés
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ISO 7932:2004(F)
0 Introduction
0.1 La présente Norme internationale se propose de fournir des directives générales pour l'examen
microbiologique de produits alimentaires non concernés par les Normes internationales existant actuellement
et à prendre en considération par les organismes élaborant des méthodes d'essais microbiologiques
destinées à être appliquées à des produits alimentaires ou à des aliments pour animaux. En raison de la
grande diversité des produits entrant dans ce domaine d'application, il est possible que ces directives, dans
tous leurs détails, ne conviennent pas exactement à certains produits et que, pour certains autres produits, il
puisse être nécessaire d'employer des méthodes différentes. Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les
cas, tous les efforts seront faits pour appliquer, chaque fois qu'il sera possible, les directives données, et
qu'on n'aura recours à des dérogations que si cela est absolument nécessaire pour des raisons techniques.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives auront été suivies et les raisons pour
lesquelles il aura été nécessaire d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immédiate et, pour certains groupes de produits, des
Normes internationales et/ou des Normes nationales existent peut-être déjà, qui ne concordent pas avec ces
directives. Dans le cas où des Normes internationales existent déjà pour le produit à contrôler, elles devront
être appliquées, mais il serait souhaitable que, lorsqu'elle viendront en révision, elles soient modifiées de
façon à se conformer à la présente Norme internationale, si bien que, finalement, les seules divergences
restantes seront celles vraiment nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
0.2 Il apparaît que les spores de beaucoup de souches de B. cereus, sinon la plupart, germent aisément à
la surface du milieu de culture utilisé pour le dénombrement. Dans la plupart des cas, il ne semble pas qu'il y
ait besoin d'un traitement de choc thermique pour provoquer la germination. Parfois ce traitement de choc
thermique est souhaitable, par exemple pour le dénombrement des spores ou l'inhibition de cellules
végétatives de micro-organismes; dans ce cas, il sera de 10 min à 80 °C.
© ISO 2004 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 7932:2004(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement de Bacillus cereus présomptifs — Technique
par comptage des colonies à 30 °C
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement de Bacillus cereus
présomptifs revivifiables par comptage des colonies à 30 °C. Elle est applicable aux
produits pour l'alimentation humaine et animale, et aux
échantillons d'environnement pour la production et la distribution des aliments.
NOTE Dans le but de mettre en œuvre une méthode pratique, l'étape de confirmation consiste uniquement à la
caractérisation des colonies sur le milieu MYP et au test de l'hémolyse. Le terme «présomptif» a donc été introduit de
façon à souligner le fait que l'étape de confirmation ne permet pas de faire la différence entre B. cereus et d'autres
espèces proches mais néanmoins moins rencontrées, comme B. anthracis, B. thuringiensis, B. weihenstephanensis,
B. mycoides. Un test de mobilité effectué en plus peut toutefois aider à la différentiation entre B. cereus et B. anthracis,
dans les cas où la présence de ce dernier est suspectée.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1:1999, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques, et
Amd.1:2001
ISO/TS 11133-2:2003, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Bacillus cereus présomptifs
micro-organisme qui forme des colonies typiques à la surface d'un milieu de culture sélectif et qui donne une
réaction de confirmation positive (quand les essais sont exécutés selon la méthode spécifiée dans la présente
Norme internationale
NOTE Voir la Note de l'Article 1.
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ISO 7932:2004(F)
4 Principe
4.1 Ensemencement en surface d'un milieu sélectif solide coulé dans des boîtes de Petri, avec une quantité
déterminée de l'échantillon pour essai si le produit est liquide, ou de la suspension mère dans le cas d'autres
produits.
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions décimales obtenues à partir de l'échantillon pour
essai ou de la suspension mère.
4.2 Incubation de ces boîtes en aérobiose à 30 °C pendant 18 h à 48 h.
4.3 Calcul du nombre de B. cereus, par millilitre ou par gramme d'échantillon, à partir du nombre de
colonies caractéristiques obtenues dans des boîtes choisies aux niveaux de dilution donnant un résultat
significatif, et confirmées selon les essais spécifiés.
5 Diluant, milieux de culture et réactifs
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 7218.
NOTE Les réactifs ou les préparations du commerce prêts à l'emploi peuvent être utilisés.
5.1 Diluant
Voir l'ISO 6887-1 et la norme spécifique du produit à analyser.
5.2 Milieu gélosé (voir [1])
5.2.1 Milieu de base
5.2.1.1 Composition
Extrait de viande 1,0 g
Digestat enzymatique de caséine 10,0 g
D-Mannitol 10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl) 10,0 g
Rouge de phénol 0,025 g
a
Agar-agar 12 g à 18 g
Eau 900 ml
a
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.
5.2.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau, en chauffant, si nécessaire.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte que le pH du milieu complet (5.2.4), après stérilisation, soit égal à
7,2 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir le milieu par quantités de 90 ml dans des flacons de culture de capacité appropriée.
Stériliser à l'autoclave (6.1) réglé à 121 °C pendant 15 min.
2 © ISO 2004 – Tous droits réservés
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ISO 7932:2004(F)
5.2.2 Solution de polymyxine B
5.2.2.1 Composition
6
Sulfate de polymyxine B 10 UI
Eau 100 ml
5.2.2.2 Préparation
Dissoudre le sulfate de polymyxine B dans l'eau. Stériliser par filtration.
5.2.3 Émulsion de jaune d'œuf
Utiliser des œufs frais de poule, à coquille intacte. Nettoyer les œufs avec une brosse, à l'aide d'un détergent
liquide. Les rincer à l'eau courante, les plonger dans de l'alcool à 95 % (fraction volumique) pendant 30 s et
les sécher. En opérant de façon aseptique, casser chaque œuf et séparer les jaunes des blancs par transferts
répétés du jaune d'une demi-coquille dans l'autre. Placer les jaunes dans une éprouvette stérile et ajouter
quatre parties en volume d'eau stérile. Transférer de façon aseptique dans un flacon stérile et mélanger
vigoureusement.
Porter le mélange au bain d'eau (6.4) réglé entre 44 °C et 47 °C pendant 2 h et entreposer à 5 °C ± 3 °C
pendant 18 h à 24 h pour permettre au précipité de se former.
Recueillir aseptiquement l'émulsion surnageante.
L'émulsion peut être conservée à 5 °C ± 3 °C au maximum pendant 72 h.
5.2.4 Milieu complet (agar-agar MYP)
5.2.4.1 Composition
Milieu de base (5.2.1) 90 ml
Solution de polymyxine B (5.2.2) 1,0 ml
Émulsion de jaune d'œuf (5.2.3) 10,0 ml
5.2.4.2 Préparation
Faire fondre le milieu de base puis le refroidir au bain d'eau (6.4) réglé entre 44 °C et 47 °C.
Ajouter les autres liquides en mélangeant soigneusement après chaque addition.
Refroidir le milieu complet dans un bain d'eau (6.4) réglé entre 44 °C et 47 °C.
5.2.5 Préparation des boîtes de milieu gélosé
Couler 15 ml à 20 ml de milieu complet (5.2.4) dans des boîtes de Petri (6.6) stériles et laisser se solidifier.
Les boîtes peuvent être conservées, avant séchage, jusqu'à 4 jours au maximum à 5 °C ± 3 °C.
Immédiatement avant utilisation, sécher les boîtes, de préférence couvercle enlevé et surface de la gélose
tournée vers le bas, dans une enceinte de séchage ou une étuve (6.2) réglée à une température comprise
entre 37 °C et 55 °C jusqu'à séchage de la surface de la gélose.
© ISO 2004 – Tous droits réservés 3
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ISO 7932:2004(F)
5.2.6 Essais de performance
Voir l’ISO/TS 11133:2003, Annexe B.
5.3 Gélose au sang de mouton
5.3.1 Milieu de base: Sang base n° 2
5.3.1.1 Composition
Protéose peptone ou peptone équivalente 15 g
Hydrolysat de foie 2,5 g
Extrait de levure 5 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
a
Agar-agar 12 g à 18 g
Eau 1 000 ml
a
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.
5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau bouillante.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir le milieu dans des flacons et stériliser à 121 °C pendant 15 min.
5.3.2 Sang de mouton défibriné
5.3.2.1 Milieu complet
5.3.2.1.1 Composition
Milieu de base (5.3.1) 100 ml
Sang de mouton défibriné 5 ml à 7 ml
5.3.2.1.2 Préparation
Refroidir le milieu de base (5.3.1) à une température comprise entre 44 °C et 47 °C, puis ajouter le sang de
mouton défibriné. Mélanger.
Verser au moins 12 ml de milieu complet dans les boîtes de Petri stériles (6.6) et laisser solidifier.
6 Appareillage et verrerie
NOTE Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que la verrerie réutilisable, si ses spécifications sont
similaires.
Matériel courant de laboratoire de microbiologie et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four) ou en chaleur humide (autoclave)
Voir ISO 7218.
4 © ISO 2004 – Tous droits réservés
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ISO 7932:200
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