ISO 14183:2005

Animal feeding stuffs — Determination of monensin, narasin and salinomycin contents — Liquid chromatographic method using post-column derivatization

ISO 14183:2005 specifies a high-performance liquid chromatographic (HPLC) method for the determination of the monensin, narasin and salinomycin contents of animal feeding stuffs, supplements (dry and liquid) and mineral premixtures. The method is not applicable to drug premixes (pharmaceutical products). Lasalocid and semduramicin cannot be determined by this method. The limit of quantitation is approximately 1 mg/kg, 2 mg/kg and 2 mg/kg for monensin, salinomycin and narasin, respectively. A lower limit of quantitation can be achievable but this is to be validated by the user.

Aliments des animaux — Détermination des teneurs en monensine, narasine et salinomycine — Méthode par chromatographie liquide utilisant la dérivatisation post-colonne

L'ISO 14183:2005 spécifie une méthode de détermination des teneurs en monensine, en narasine et en salinomycine dans les aliments pour animaux, les compléments (secs et liquides) et les prémélanges de minéraux, par chromatographie liquide à haute performance (CLHP). La méthode ne s'applique pas aux prémélanges médicamenteux (produits pharmaceutiques) et ne permet pas de déterminer le lasalocide et la semduramicine. La limite de quantification est respectivement d'environ 1 mg/kg, 2 mg/kg et 2 mg/kg pour la monensine, la salinomycine et la narasine. Une limite de quantification inférieure peut être atteinte mais cela est sujet à validation par l'utilisateur.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 03-Nov-2005
• ICS: 65.120 - Animal feeding stuffs
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 10 - Animal feeding stuffs
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 10 - Animal feeding stuffs
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 07-Dec-2019

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14183
First edition
2005-11-01


Animal feeding stuffs — Determination of
monensin, narasin and salinomycin
contents — Liquid chromatographic
method using post-column derivatization
Aliments des animaux — Détermination des teneurs en monensine,
narasine et salinomycine — Méthode par chromatographie liquide
utilisant la dérivatisation post-colonne





Reference number
ISO 14183:2005(E)
©
ISO 2005

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ISO 14183:2005(E)
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ISO 14183:2005(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 1
5 Apparatus . 4
6 Sampling. 5
7 Preparation of test sample. 5
8 Procedure . 6
8.1 Preparation of quality control sample . 6
8.2 Extraction . 6
8.3 HPLC analysis . 7
8.4 Determination. 8
9 HPLC confirmation . 9
9.1 General. 9
9.2 Post-column derivatization with DMAB. 9
9.3 Hexane extraction. 10
10 Calculation of results . 10
10.1 General. 10
10.2 Monensin . 10
10.3 Salinomycin. 11
10.4 Narasin. 12
10.5 Interpretation of confirmation data. 13
11 Precision. 14
11.1 Interlaboratory test . 14
11.2 Repeatability. 14
11.3 Reproducibility. 14
11.4 Limit of quantitation . 15
12 Test report . 15
Annex A (informative) Results of interlaboratory test. 16
Bibliography . 21

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ISO 14183:2005(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 14183 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 10, Animal
feeding stuffs.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 14183:2005(E)

Animal feeding stuffs — Determination of monensin, narasin
and salinomycin contents — Liquid chromatographic method
using post-column derivatization
1 Scope
This International Standard specifies a high-performance liquid chromatographic (HPLC) method for the
determination of the monensin, narasin and salinomycin contents of animal feeding stuffs, supplements (dry
and liquid) and mineral premixtures. The method is not applicable to drug premixes (pharmaceutical products).
Lasalocid and semduramicin cannot be determined by this method.
The limit of quantitation is approximately 1 mg/kg, 2 mg/kg and 2 mg/kg for monensin, salinomycin and
narasin, respectively. A lower limit of quantitation can be achievable but this is to be validated by the user.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6498:1998, Animal feeding stuffs — Preparation of test samples
3 Principle
The ionophores monensin, narasin and salinomycin are extracted using methanol/water (90 + 10) with
mechanical shaking for 1 h, then the extracts are filtered. The ionophores are determined by reverse-phase
HPLC using post-column derivatization with vanillin and detection at 520 nm. Suspect positive trace-level
samples and medicated feed samples containing unexpected ionophores are confirmed using a hexane
extraction or post-column derivatization with dimethylaminobenzaldehyde (DMAB).
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
4.1 Water, HPLC grade, or equivalent (e.g. Milli-Q purified water).
4.2 Methanol (CH OH), HPLC grade.
3
4.3 Sulfuric acid (H SO ), 97 % to 98 %.
2 4
4.4 Acetic acid (CH CH CO H), glacial, 97 % to 98 %.
2 3 2
4.5 Sodium hydrogen carbonate (NaHCO ), minimum 99 % purity.
3
4.6 Vanillin (4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde), minimum 99 % purity.
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ISO 14183:2005(E)
4.7 Dimethylaminobenzaldehyde (DMAB), minimum 99 % purity.
4.8 Hexane [CH (CH ) CH ], distilled in glass.
3 2 4 3
4.9 Extraction solvent, methanol/water (90 + 10).
Combine 1 800 ml of methanol (4.2) and 200 ml of water (4.1) in a 2 l flask. Mix well.
4.10 Mobile phases
4.10.1 Post-column reaction system
While stirring gently, slowly add by pipette 20 ml of sulfuric acid (4.3) to 950 ml of methanol (4.2). Allow to cool,
then add 30 g of vanillin (4.6) while stirring. Protect from light. Prepare fresh daily.
4.10.2 HPLC column
Use methanol (4.2)/water (4.1)/acetic acid (4.4) (940/60/1). Filter under vacuum using the equipment in 5.7.
4.11 Neutralized methanol
Add 1,0 g of sodium hydrogen carbonate (4.5) into 4 l of methanol (4.2). Mix well and filter if necessary
1)
through an 11 µm filter paper (e.g. Whatman No. 1) . See Note to 4.13.
4.12 Reference standards
Composition or potency is required for each lot of reference standard.
2)
4.12.1 Monensin sodium
2)
4.12.2 Narasin
3)
4.12.3 Sodium salinomycin
WARNING — Avoid inhalation of and exposure to the toxic standard materials and solutions thereof.
Work in a fume-hood when handling the solvents and solutions. Wear safety glasses and protective
clothing.
4.13 Ionophore stock standards, ca. 0,50 mg/ml.
Accurately weigh, to the nearest 0,1 mg, 25 mg of each standard (4.12.1 to 4.12.3) into separate 50 ml
volumetric flasks. Dissolve in neutralized methanol (4.11) and dilute to volume. Prepare freshly every month.
Store in a refrigerator.
Protect all standard solutions from light or prepare them in low actinic flasks.
NOTE The requirement for neutralized methanol has not been verified for salinomycin. It is not required if analysing
monensin only, but is required for analysis of narasin.

1) This is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users
of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
2) Available from Lilly Research Laboratories, Lilly Corporate Center, Indianapolis, Indiana 46285, USA.
3) Available from Alpharma Inc., Animal Health Division, 1 Duggar Drive, Willow Island, WV, USA 26134-97111, and
Hoechst Roussel Vet, D-65926 Frankfurt am Main, Gebaude H 790, Germany.
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ISO 14183:2005(E)
4.13.1 Monensin stock standard
Prepare as described in 4.13. Calculate the concentration of stock standard based on the principle component,
[4]
monensin A. The minor component, monensin B, which elutes just before monensin A is determined in test
samples based on monensin A. Use the component composition identified on the reference standard profile
sheet:
0,5 S
M
ρ =
M
100
where
0,5 is the concentration of the stock standard (4.13), in milligrams per millilitre, recorded to three
significant figures;
ρ is the concentration of the given component monensin A in the stock standard, in milligrams per

M
millilitre;
S is the proportion of the given component monensin A in the reference standard according to the
M
profile sheet, in percent.
EXAMPLE Reference standard lot RS0234 contains 93,71 % of monensin A on an “as-is” basis.
4.13.2 Salinomycin stock standard
Prepare as described in 4.13. Determine the concentration using the reference standard concentration value
[2]
provided by the supplier :
0,5 w
ρ =
S
1000
where
ρ is the concentration of salinomycin in the stock standard, in milligrams per millilitre;

S
w is the concentration of the salinomycin standard given by the supplier, in micrograms per milligram.

EXAMPLE For lot WS-19B, the standard concentration is 986 µg/mg.
4.13.3 Narasin stock standard
Prepare as described in 4.13. Calculate the concentration of the stock standard based on the principle
[5]
component, narasin A. The minor components (narasin D and l), which elute after narasin A , are
determined in test samples based on narasin A. Use the component composition identified on the reference
standard profile sheet:
0,5 S
N
ρ =
N
100
where
ρ is the concentration of the component narasin A in the stock standard, in milligrams per millilitre;

N
S is the proportion of the given component narasin A in the reference standard according to the profile
N
sheet, in percent.
EXAMPLE For reference standard lot RS0302, the percentage of each component on an “as-is” basis is:
narasin A = 85,4 %,
narasin D = 1,9 %,
narasin I = 0,7 %.
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ISO 14183:2005(E)
4.14 Intermediate mixed standard solution, ca. 20 µg/ml, 40 µg/ml and 40 µg/ml monensin, salinomycin
and narasin, respectively.
Transfer by pipette 10,0 ml, 20,0 ml and 20,0 ml of monensin, salinomycin and narasin stock standards (4.13),
respectively, into a 250 ml volumetric flask. Dilute to volume with extraction solvent (4.9). Mix well. Prepare
freshly every month.
4.15 Mixed HPLC standards
Prepare five mixed HPLC standard solutions by pipetting an aliquot of the mixed intermediate standard (4.14)
into 100 ml low-actinic volumetric flasks and diluting to volume with extraction solvent (4.9), as specified in the
Table 1. Mix well. Prepare freshly every month.
Table 1
Mixed HPLC Amount of Approximate HPLC standard concentration
standard intermediate
µg/ml
identification standard (4.14)
Monensin Salinomycin Narasin
ml
A 1 0,2 0,4 0,4
B 5 1 2 2
C 10 2 4 4
D 25 5 10 10
E 50 10 20 20
4.16 Single HPLC standards
4.16.1 Monensin, ca. 5 µg/ml.
Accurately pipette 1,0 ml of monensin stock standard (4.13.1) into a 100 ml low-actinic volumetric flask. Dilute
to volume with extraction solvent (4.9). Mix well. Prepare freshly every month. Store in a refrigerator.
4.16.2 Salinomycin, ca. 10 µg/ml.
Accurately pipette 2,0 ml of salinomycin stock standard (4.13.2) into a 100 ml low-actinic volumetric flask.
Dilute to volume with extraction solvent (4.9). Mix well. Prepare freshly every month. Store in a refrigerator.
4.16.3 Narasin, ca. 10 µg/ml.
Accurately pipette 2,0 ml of narasin stock standard (4.13.3) into a 100 ml low-actinic volumetric flask. Dilute to
volume with extraction solvent (4.9). Mix well. Prepare freshly every month. Store in a refrigerator.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 HPLC system consisting of the following.
5.1.1 Pump, pulse free, flow capacity 0,1 ml/min to 2,0 ml/min.
5.1.2 Injection system, manual or autosampler, with loop suitable for 100 µl injections.
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ISO 14183:2005(E)
5.1.3 UV/VIS detector, with variable wavelength, suitable for measurements at 520 nm and 592 nm.
5.1.4 Integrator or computer data system.
5.1.5 Post-column reactor, with a 1,5 ml to 2,0 ml reaction coil, for operation at 98 °C.
The coil may be a commercially available knitted coil or it may be made using 7,5 m to 10 m of 316 SS tubing,
0,5 mm ID, coiled in a format to fit the reactor heating chamber. For example, wrap the coil in sufficient
aluminium foil to make it fit snugly in the heater and to provide good heat transfer to the coil. A knitted coil is
preferable. To ensure effective mixing of reagent and column effluent, use a vortex or static mixing tee (not a
regular tee) before the reaction coil.
5.1.6 Post-column reagent pump, pulse free, with flow capacity 0,5 ml/min to 2,0 ml/min.
5.1.7 Analytical column.
NOTE A 5 µm C , 25 × 0,46 cm Nucleosil 120A, Partisil 5 ODS-3, or Waters Nova Pak (4 µm), or equivalent, has
18
4)
been found to be suitable.
5.1.8 Guard column, C .
18
5.2 Nitrogen evaporator, for evaporation of solvents under a stream of nitrogen.
5.3 Shaker, rotary or wrist-action.
5.4 Balances: analytical balance of 10 g capacity or greater with 0,1 mg readability, and another balance of
100 g capacity or greater with 0,01 g readability.
5.5 Erlenmeyer flasks, of capacities 125 ml, 250 ml and 500 ml, with glass stoppers.
5.6 Filter papers, Whatman No. 41 (15 cm), Whatman No. 42 (15 cm), and Whatman No. 1 (15 cm), or
4)
equivalent.
5.7 Solvent filtration system, all glass filter apparatus, suitable for 47 mm filter, and 47 mm diameter
nylon filter of pore size 0,45 µm.
5.8 Sample filtration system, equipped with nylon or PTFE filter of pore size 0,45 µm.
5.9 Sieve, with 1 mm apertures.
6 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
is given in ISO 6497.
7 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 6498.
Grind the laboratory sample (> 200 g) so that it passes completely through a sieve with 1 mm apertures. For
trace-level samples, grind the entire laboratory sample. Mix thoroughly.

4) These are examples of suitable products available commercially. This information is given for the convenience of
users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of these products.
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ISO 14183:2005(E)
8 Procedure
8.1 Preparation of quality control sample
The use of quality control samples and quality control charts is recommended.
With each set, include a sample spiked at approx. 100 mg/kg, 50 mg/kg, 50 mg/kg (for medication levels) or at
4 mg/kg, 6 mg/kg, and 6 mg/kg (for trace levels) for monensin, salinomycin and narasin, respectively.
EXAMPLE 1 4,0 ml of monensin stock standard added to 20 g of sample gives 100 mg/kg, and 2,0 ml each of
salinomycin and narasin stock standard gives 50 mg/kg. All stock standards have approximately equal concentrations
(0,50 mg/ml, see 4.13).
EXAMPLE 2 3,0 ml of mixed intermediate standard (4.14) added to 20 g of sample gives 3 mg/kg monensin and
6 mg/kg salinomycin and narasin.
Acceptable recovery for medication level samples (> 10 mg/kg) is between 95 % and 108 %. Acceptable
recovery for trace-level samples (< 10 mg/kg) is between 90 % and 110 %.
8.2 Extraction
8.2.1 Dry feeds and premixes containing < 5 000 mg/kg
Accurately weigh a 20 g test portion into a 250 ml Erlenmeyer flask. For mineral premixes, add 5 g of sodium
hydrogen carbonate. Add 100 ml of extraction solvent (4.9). Stopper the flask and shake vigorously for 1 h on
the shaker (5.3).
8.2.2 Dry feeds and premixes containing > 5 000 mg/kg
Accurately weigh a 5 g test portion into a 500 ml Erlenmeyer flask. For mineral premixes, add 2 g of sodium
hydrogen carbonate. Add 200 ml of extraction solvent (4.9). Stopper the flask and shake vigorously for 1 h on
the shaker (5.3).
8.2.3 Liquid samples
Homogenize the sample by stirring the sample bottle contents on a magnetic stirrer or with a propeller mixer.
Measure a 20 ml liquid sample into a tared 25 ml graduated cylinder. Weigh and transfer the sample to a
500 ml Erlenmeyer flask. Add 180 ml of methanol (4.2) (using some to rinse the graduated cylinder). Stopper
the flask and shake vigorously for 1 h on the shaker (5.3).
8.2.4 Filter extract
Filter extracts through a No. 41 Whatman filter paper (5.6) into a 125 ml Erlenmeyer flask.
For extracts containing a high level of ionophores, dilute to the approximate concentration of HPLC
standard D (4.15). The dilution required, D, can be calculated using the following formula:
wm
st
D=×
ρ V
std e
where
w is the sample target level, in milligrams per kilogram;
s
ρ is the concentration of the HPLC standard, in micrograms per millilitre;

std
m is the mass of the test portion, in grams;
t
V is the volume of extractant, in millilitres.

e
Pass the above extract or eluate through a 0,45 µm filter before proceeding to HPLC analysis.
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ISO 14183:2005(E)
8.3 HPLC analysis
8.3.1 HPLC conditions
a) HPLC separation parameters:
⎯ column: as in 5.1.7
⎯ mobile phase: as in 4.10.2
⎯ flow rate: 0,7 ml/min
⎯ wavelength: 520 nm
⎯ chart speed: 0,5 cm/min
⎯ injection volume: 100 µl
⎯ guard column: as in 5.1.8 (change or repack the guard column frequently, especially when
analysing trace level samples)
⎯ attenuation: adjust to give 50 % to 60 % full-scale deflection for HPLC standard B (4.15)
for low level sample, and HPLC standard D for samples containing medication
levels.
b) Post-column reaction parameters:
⎯ post-column reactor: as in 5.1.5
⎯ mobile phase: as in 4.10.1
⎯ flow rate: 0,9 ml/min
⎯ reactor temperature: 98 °C
The system suitability criteria in 8.3.2 shall be met. The three ionophores and minor components should be
baseline resolved, however, a minor component of salinomycin may appear as a shoulder peak on the front
side of the narasin peak. Using the Nucleosil column (5.1.7), with the above conditions, retention times for
monensin B, monensin A, salinomycin, narasin A and narasin (D + I) should be approximately 8,7 min,
9,8 min, 11,2 min, 12,8 min and 14,6 min, respectively.
The flow rates and mobile phase for the analytical column may be varied slightly, however, the total flow rate
shall be between 1,5 ml/min and 1,6 ml/min to allow at least a 1 min reaction time. Sensitivity is determined by
the reaction conditions and detector signal/noise.
Maduramicin is a potential interference when analysing trace levels of salinomycin; maduramicin elutes about
0,3 min before salinomycin. Semduramicin is a potential interference when analysing monensin; it elutes
about 0,4 min before monensin B. Both maduramicin and semduramicin exhibit low sensitivity and can be
effectively handled using the confirmation procedures in Clause 9.
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ISO 14183:2005(E)
8.3.2 System suitability
8.3.2.1 Resolution
Inject HPLC standard D (4.15).
Calculate the resolution factor, F , for each pair of adjacent peaks as follows:
R
⎛⎞dd−
21
F = 2
R⎜⎟
ww+
12
⎝⎠
where
d is the distance on the baseline between the starting point of the chromatogram and the peak
n
maximum, in centimetres;
w is the triangulated peak width at the baseline, in centimetres;
n
n is the number of the peak (n = 1 or 2).
EXAMPLE Data for calculation of resolution between monensin B (1) and monensin A (2):
d = 10,38 cm, w = 0,46 cm;
1 1
d = 11,98 cm, w = 0,52 cm.
2 2
(11,98−10,38)
F==23,3
R
0,46+ 0,52
The value of F shall be greater than 1,4 for all adjacent peaks. If this requirement is not met, adjust the HPLC
R
conditions to improve the resolution, then repeat the injection and calculations.
8.3.2.2 Tailing factor
Calculate the tailing factor, F , as follows:
T
tt−
ba
F =
T
2tt−
()
a
where
t is the retention time of the given peak (time of the maximum of the fitted Gaussian curve), in minutes;
t is the retention time when the peak first reaches a height equal to 5 % of the peak maximum;

a
t is the retention time when the peak descends to a height equal to 5 % of the peak maximum.

b
The tailing factor, F , for monensin A, salinomycin and narasin A shall be less than 1,4.
T
8.4 Determination
8.4.1 Make replicate 100 µl (full loop) injections of HPLC standard D (4.15) or the appropriate single
standard (4.16) until the peak area is repeatable to within ±1 % and a stable baseline is obtained. Inject 5 µl of
each stock standard, if necessary, to identify all the peaks. Check the linearity by injecting 100 µl of each
HPLC standard A, B, C, D and E (4.15). The HPLC response shall be linear (correlation factor not less
than 0,999), and the intercept should not be significantly different from zero.
8 © ISO 2005 – All rights reserved

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ISO 14183:2005(E)
Quantification may be carried out using a single-point calibration or a calibration curve. The latter is preferable.
For single-point calibration, when analysing medication samples use the appropriate single standard (4.16) for
quantitation (inject a mixed standard for qualitative purposes in case other ionophores are present in any of
the samples). For trace-level samples, use mixed HPLC standard B (4.15) for quantification. Re-inject the
standard solution after every 8 to 10 test solution injections.
For use of a calibration curve, inject the five mixed HPLC standards (4.15) at the start and end of the sample
set. Construct a linear regression plot.
Inject 100 µl of the test solution. Measure the peak area. If the peak is larger than the single standard or
outside the range of the calibration curve, dilute the test solution with extraction solvent (4.9). Do not reduce
the injection volume.
NOTE Because test solutions receive no clean-up, retention times can be up to 0,5 min longer than for standard
solutions. This occurs most often with monensin. However, the presence of factor B peak usually confirms the identity of
monensin. If in doubt, peak identity can be confirmed by standard addition to the test solution, or confirmation with
DMAB (9.2), or by use of the hexane extraction (9.3).
8.4.2 Shut off the system as follows. Turn off the post-column reagent flow before stopping the HPLC pump
to prevent back flow of reagent into the analytical column. Wash the column and reactor for 30 min to 45 min
with methanol (4.2).
9 HPLC confirmation
9.1 General
Positive trace-level samples and medication samples containing an unexpected ionophore should be
confirmed to verify the correct identity of the peak(s). Either of the two following procedures may be used,
however confirmation using DMAB is recommended. Hexane extraction cannot be applied to mineral
premixtures or liquid samples, and results using hexane are less quantitative (approximately 90 %), but
chromatograms for difficult samples may be significantly improved (less interfering peaks). See 10.5 for
interpretation of results.
9.2 Post-column derivatization with DMAB
[6]
This may be applied to all types of feeds .
Follow steps 8.1 to 8.4 and HPLC system parameters (8.3.1), but use the following post-column reaction
parameters.
a) Post-column reaction parameters:
⎯ reagent flow: 0,8 ml/min
⎯ reactor temperature: 95 °C
⎯ wavelength: 592 nm.
b) Post-column reagent (mobile phase):
⎯ while gently stirring, slowly add 20 ml of sulfuric acid (4.3) to 950 ml of methanol (4.2)
⎯ allow to cool, then add 30 g of DMAB (4.7) while stirring
⎯ protect from light; prepare freshly daily.
© ISO 2005 – All rights reserved 9

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ISO 14183:2005(E)
9.3 Hexane extraction
This cannot be applied to mineral or liquid samples.
Accurately weigh a 20 g sample into a 250 ml Erlenmeyer flask. Add 100 ml of hexane (4.8). Stopper the flask
and shake overnight on the shaker (5.3). Filter sample solutions through No. 42 Whatman filter paper (5.6)
into a 125 ml Erlenmeyer flask. Pipette 10 ml of extract into a tube and evapo
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 14183
Première édition
2005-11-01


Aliments des animaux — Détermination
des teneurs en monensine, narasine et
salinomycine — Méthode par
chromatographie liquide utilisant la
dérivatisation post-colonne
Animal feeding stuffs — Determination of monensin, narasin and
salinomycin contents — Liquid chromatographic method using post-
column derivatization




Numéro de référence
ISO 14183:2005(F)
©
ISO 2005

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ISO 14183:2005(F)
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Version française parue en 2008
Publié en Suisse

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ISO 14183:2005(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application.1
2 Références normatives .1
3 Principe.1
4 Réactifs .1
5 Appareillage .5
6 Échantillonnage .6
7 Préparation de l’échantillon pour essai .6
8 Mode opératoire.6
8.1 Préparation de l’échantillon de contrôle qualité .6
8.2 Extraction .6
8.3 Analyse CLHP .7
8.4 Détermination.9
9 Confirmation CLHP.10
9.1 Généralités .10
9.2 Dérivation post-colonne à l’aide de DMAB .10
9.3 Extraction à l’hexane.10
10 Calculs des résultats.10
10.1 Généralités .10
10.2 Monensine .11
10.3 Salinomycine.12
10.4 Narasine.12
10.5 Interprétation des données de confirmation .14
11 Fidélité .14
11.1 Essai interlaboratoires .14
11.2 Répétabilité.15
11.3 Reproductibilité.15
11.4 Limite de quantification .16
12 Rapport d’essai.16
Annexe A (informative) Résultats de l’essai interlaboratoires .17
Bibliographie .22

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ISO 14183:2005(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 14183 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 10,
Aliments des animaux.
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NORME INTERNATIONALE ISO 14183:2005(F)

Aliments des animaux — Détermination des teneurs en
monensine, narasine et salinomycine — Méthode par
chromatographie liquide utilisant la dérivatisation post-colonne
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination des teneurs en monensine, en
narasine et en salinomycine dans les aliments pour animaux, les compléments (secs et liquides) et les
prémélanges de minéraux, par chromatographie liquide à haute performance (CLHP). La méthode ne
s’applique pas aux prémélanges médicamenteux (produits pharmaceutiques) et ne permet pas de déterminer
le lasalocide et la semduramicine.
La limite de quantification est respectivement d’environ 1 mg/kg, 2 mg/kg et 2 mg/kg pour la monensine, la
salinomycine et la narasine. Une limite de quantification inférieure peut être atteinte mais cela est sujet à
validation par l’utilisateur.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6498:1998, Aliments des animaux — Préparation des échantillons pour essai
3 Principe
Les ionophores monensine, narasine et salinomycine sont extraits à l’aide d’un mélange méthanol/eau
(90 + 10) par agitation mécanique pendant 1 h, puis les extraits sont filtrés. Les ionophores sont déterminés
par CLHP en phase inverse utilisant la dérivation post-colonne à l’aide de vanilline et détection à 520 nm. Les
échantillons supérieurs à la limite de détection ainsi que les échantillons d'aliments médicamenteux contenant
des ionophores inattendus suspects sont confirmés par une extraction à l’hexane ou par une dérivation post-
colonne avec du diméthylaminobenzaldéhyde (DMAB).
4 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
4.1 Eau, qualité CLHP ou équivalente (par exemple eau purifiée Milli-Q).
4.2 Méthanol (CH OH), qualité CLHP.
3
4.3 Acide sulfurique (H SO ), de 97 % à 98 %.
2 4
4.4 Acide acétique (CH CH CO H), glacial, de 97 % à 98 %.
2 3 2
© ISO 2005 – Tous droits réservés 1

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ISO 14183:2005(F)
4.5 Hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO ), pureté d’au moins 99 %.
3
4.6 Vanilline (4-hydroxy-3-méthoxybenzaldéhyde), pureté d’au moins 99 %.
4.7 Diméthylaminobenzaldéhyde (DMAB), pureté d’au moins 99 %.
4.8 Hexane [CH (CH ) CH ], distillé sur verre.
3 2 4 3
4.9 Solvant d'extraction, méthanol/eau (90 + 10).
Mélanger 1 800 ml de méthanol (4.2) et 200 ml d’eau (4.1) dans une fiole de 2 l. Bien mélanger.
4.10 Phases mobiles
4.10.1 Système de réaction post-colonne
Tout en remuant doucement, ajouter lentement à l’aide d’une pipette 20 ml d’acide sulfurique (4.3) à 950 ml
de méthanol (4.2). Laisser refroidir, puis ajouter 30 g de vanilline (4.6) tout en remuant. Mettre à l'abri de la
lumière. Renouveler chaque jour.
4.10.2 Colonne CLHP
Utiliser du méthanol (4.2)/de l’eau (4.1)/de l’acide acétique (4.4) (940/60/1). Filtrer sous vide à l’aide de
l’équipement indiqué en 5.7.
4.11 Méthanol neutralisé
Ajouter 1,0 g d’hydrogénocarbonate de sodium (4.5) dans 4 l de méthanol (4.2). Bien mélanger et filtrer si
1)
nécessaire à l’aide d’un papier filtre de 11 µm (par exemple Whatman N° 1) . Voir la Note en 4.13.
4.12 Étalons de référence
Le titre ou la composition est requis pour chaque lot d’étalons de référence.
2)
4.12.1 Monensine sodium
2)
4.12.2 Narasine
3)
4.12.3 Sodium salinomycine
AVERTISSEMENT — Éviter toute inhalation et exposition aux substances étalons toxiques et leurs
solutions. Travailler sous une hotte aspirante lors de la manipulation des solvants et des solutions.
Porter des lunettes et des vêtements de protection.
4.13 Solutions mères étalons de ionophore, environ 0,50 mg/ml.
Peser exactement, à 0,1 mg près, 25 mg de chaque étalon (4.12.1 à 4.12.3) dans des fioles jaugées séparées
de 50 ml. Dissoudre dans du méthanol neutralisé (4.11) et diluer au volume. Les renouveler tous les mois.
Stocker au frais.

1) Exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de
la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit
ainsi désigné.
2) Disponible auprès des laboratoires Lilly Research, Lilly Corporate Center, Indianapolis, Indiana 46285, États-Unis.
3) Disponible auprès de la société Alpharma Inc., Animal Health Division, 1 Duggar Drive, Willow Island, WV, États-
Unis 26134-97111, et Hoechst Roussel Vet, D-65926 Frankfurt am Main, Gebaude H 790, Allemagne.
2 © ISO 2005 – Tous droits réservés

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ISO 14183:2005(F)
Protéger toutes les solutions étalons de la lumière ou les préparer dans des fioles qui arrêtent les rayons
actiniques.
NOTE L’exigence relative au méthanol neutralisé n’a pas été vérifiée pour la salinomycine. Elle n’est pas requise s’il
s’agit uniquement d’une analyse de monensine mais elle est requise pour l’analyse de narasine.
4.13.1 Solution mère étalon de monensine
Préparer comme décrit en 4.13. Calculer la concentration de la solution mère étalon basée sur le composant
[4]
principal, monensine A. Le composant secondaire, monensine B, élué juste avant la monensine A est
déterminé dans les échantillons pour essai basés sur la monensine A. Utiliser la composition du composant
identifiée sur la feuille de profil de l’étalon de référence:
0,5 S
M
ρ =
M
100
où
0,5 est la concentration de la solution mère étalon (4.13), en milligrammes par millilitre, consignée à trois
chiffres significatifs;
ρ est la concentration du composant donné de monensine A dans la solution mère étalon, en

M
milligrammes par millilitre;
S est la proportion du composant donné de monensine A dans l’étalon de référence conformément à la
M
feuille de profil, en pourcentage.
EXEMPLE Le lot d’étalon de référence RS0234 contient 93,71 % de monensine A sur une base «en l’état».
4.13.2 Solution mère étalon de salinomycine
Préparer comme décrit en 4.13. Déterminer la concentration à l’aide de la valeur de concentration de l’étalon
[2]
de référence donnée par le fournisseur :
0,5 w
ρ =
S
1000
où
ρ est la concentration de salinomycine dans la solution mère étalon, en milligrammes par millilitre;

S
w est la concentration de l’étalon de salinomycine donnée par le fournisseur, en microgrammes par

milligramme.
EXEMPLE Pour le lot WS-19B, la concentration de l’étalon est égale à 986 µg/mg.
4.13.3 Solution mère étalon de narasine
Préparer comme décrit en 4.13. Calculer la concentration de la solution mère étalon basée sur le composant
[5]
principal, narasine A. Les composants secondaires (narasine D et I) élués après la narasine A sont
déterminés dans les échantillons pour essai basés sur la narasine A. Utiliser la composition du composant
identifiée sur la feuille de profil de l’étalon de référence:
0,5 S
N
ρ =
N
100
où
ρ est la concentration du composant de narasine A dans la solution mère étalon, en milligrammes par

N
millilitre;
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ISO 14183:2005(F)
S est la proportion du composant donné de narasine A dans l’étalon de référence conformément à la
N
feuille de profil, en pourcentage.
EXEMPLE Pour le lot d’étalon de référence RS0302, le pourcentage de chaque composant sur une base «en l’état»
est:
narasine A = 85,4 %,
narasine D = 1,9 %,
narasine I = 0,7 %.
4.14 Solution étalon intermédiaire mélangée, environ respectivement 20 µg/ml, 40 µg/ml et 40 µg/ml de
monensine, salinomycine et narasine.
Transférer, à l’aide d’une pipette, respectivement 10,0 ml, 20,0 ml et 20,0 ml des solutions mères étalons de
monensine, salinomycine et narasine (4.13) dans une fiole jaugée de 250 ml. Diluer au volume à l'aide de
solvant d'extraction (4.9). Bien mélanger. Renouveler tous les mois.
4.15 Étalons mélangés pour CLHP
Préparer cinq solutions étalons mélangées pour CLHP en pipettant une partie aliquote de l’étalon
intermédiaire mélangé (4.14) dans des fioles jaugées de 100 ml qui arrêtent les rayons actiniques et diluer au
volume à l’aide du solvant d’extraction (4.9), tel que spécifié dans le Tableau 1. Bien mélanger. Renouveler
tous les mois.
Tableau 1
Identification de Quantité d’étalon Concentration approximative d’étalon pour CLHP
l’étalon mélangé intermédiaire (4.14)
µg/ml
pour CLHP
ml
Monensine Salinomycine Narasine
A 1 0,2 0,4 0,4
B 5 1 2 2
C 10 2 4 4
D 25 5 10 10
E 50 10 20 20
4.16 Étalons uniques pour CLHP
4.16.1 Monensine, environ 5 µg/ml.
Pipetter exactement 1,0 ml de solution mère étalon de monensine (4.13.1) dans une fiole jaugée de 100 ml
qui arrêtent les rayons actiniques. Diluer au volume à l'aide de solvant d'extraction (4.9). Bien mélanger.
Renouveler tous les mois. Stocker au frais.
4.16.2 Salinomycine, environ 10 µg/ml.
Pipetter exactement 2,0 ml de solution mère étalon de salinomycine (4.13.2) dans une fiole jaugée de 100 ml
qui arrêtent les rayons actiniques. Diluer au volume à l'aide de solvant d'extraction (4.9). Bien mélanger.
Renouveler tous les mois. Stocker au frais.
4.16.3 Narasine, environ 10 µg/ml.
Pipetter exactement 2,0 ml de solution mère étalon de narasine (4.13.3) dans une fiole jaugée de 100 ml qui
arrêtent les rayons actiniques. Diluer au volume à l'aide de solvant d'extraction (4.9). Bien mélanger.
Renouveler tous les mois. Stocker au frais.
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ISO 14183:2005(F)
5 Appareillage
Appareillage courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Système de CLHP constitué des éléments suivants:
5.1.1 Pompe, sans impulsions, avec un débit de 0,1 ml/min à 2,0 ml/min.
5.1.2 Système d’injection, manuel ou par échantillonneur automatique, muni d’une boucle permettant des
injections de 100 µl.
5.1.3 Détecteur UV/VIS, avec longueur d'ondes variable, adapté aux mesurages à 520 nm et 592 nm.
5.1.4 Intégrateur ou système de données informatiques.
5.1.5 Réacteur post-colonne, avec une bobine de réaction de 1,5 ml à 2,0 ml, pour une utilisation à 98 °C.
La bobine peut être une bobine disponible dans le commerce ou une bobine fabriquée à l’aide de 7,5 m à
10 m de tube en acier inoxydable 316, de diamètre intérieur de 0,5 mm, enroulé dans un format compatible
avec l’étuve du réacteur. Par exemple, enrouler la bobine dans une feuille d’aluminium de taille suffisante
pour qu’elle s’adapte à l’étuve et fournisse un transfert de chaleur approprié à la bobine. Une bobine tricotée
est préférable. Pour assurer un mélange efficace du réactif et de l’effluent de colonne, utiliser un té de
mélange statique ou té vortex (et non un té normal) avant la bobine de réaction.
5.1.6 Pompe à réactif post-colonne, sans impulsions, avec un débit de 0,5 ml/min à 2,0 ml/min.
5.1.7 Colonne analytique.
NOTE Une colonne C , 5 µm, 25 × 0,46 cm, Nucleosil 120A, Partisil 5 ODS-3 ou Waters Nova Pak (4 µm) ou
18
4)
équivalent est considéré comme appropriée.
5.1.8 Précolonne, C .
18
5.2 Évaporateur à azote, pour l'évaporation des solvants sous un courant d’azote.
5.3 Agitateur, rotatif ou manuel.
5.4 Balances: balance analytique d’une capacité d’au moins 10 g d'une précision de 0,1 mg et une autre
balance d’une capacité d’au moins 100 g d’une précision de 0,01 g.
5.5 Fioles Erlenmeyer, de 125 ml, 250 ml et 500 ml de capacités, munies de bouchons en verre.
5.6 Papiers filtres, Whatman N° 41 (15 cm), Whatman N° 42 (15 cm) et Whatman N° 1 (15 cm) ou
4)
équivalent.
5.7 Système de filtration des solvants, tout appareil de filtration en verre, adapté aux filtres de 47 mm et
aux filtres en nylon de 47 mm de diamètre, de taille de pores de 0,45 µm.
5.8 Système de filtration des échantillons, muni de filtre en nylon ou en PTFE de taille de pores
de 0,45 µm.
5.9 Tamis, de dimension nominale d'ouvertures de 1 mm.

4) Ces produits sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée à
l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande
l'emploi exclusif des produits ainsi désignés.
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ISO 14183:2005(F)
6 Échantillonnage
Il convient qu’un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire. Il convient qu’il n’ait été ni
endommagé ni modifié lors du transport ou de l’entreposage.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
procédure d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 6497.
7 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 6498.
Broyer l’échantillon pour laboratoire (> 200 g) de façon qu’il passe à travers un tamis de dimension nominale
d'ouvertures de 1 mm. Pour les échantillons de détection, broyer entièrement l’échantillon de laboratoire.
Mélanger soigneusement.
8 Mode opératoire
8.1 Préparation de l’échantillon de contrôle qualité
L’utilisation d’échantillons de contrôle qualité et de graphiques de contrôle qualité est recommandée.
Dans chaque lot, inclure un échantillon dopé à environ 100 mg/kg, 50 mg/kg, 50 mg/kg (pour les niveaux de
médicaments) ou à 4 mg/kg, 6 mg/kg et 6 mg/kg (pour les limites de détection) pour la monensine, la
salinomycine et la narasine, respectivement.
EXEMPLE 1 4,0 ml de solution mère étalon de monensine ajoutés à 20 g d’échantillon donnent 100 mg/kg, et 2,0 ml
de solution mère étalon de salinomycine et de solution mère étalon de narasine donnent 50 mg/kg. Tous les solutions
mères étalons ont des concentrations à peu près équivalentes (0,50 mg/ml, voir 4.13).
EXEMPLE 2 3,0 ml de solution étalon intermédiaire mélangée (4.14) ajoutés à 20 g d’échantillon donnent 3 mg/kg de
monensine et 6 mg/kg de salinomycine et de narasine.
La récupération acceptable pour les échantillons de niveau de médicaments (> 10 mg/kg) est comprise entre
95 % et 108 %. La récupération acceptable pour les échantillons de détection (< 10 mg/kg) est comprise entre
90 % et 110 %.
8.2 Extraction
8.2.1 Aliments et prémélanges secs contenant moins de 5 000 mg/kg
Peser exactement une prise d’essai de 20 g dans une fiole Erlenmeyer de 250 ml. Pour les prémélanges de
minéraux, ajouter 5 g d’hydrogénocarbonate de sodium. Ajouter 100 ml de solvant d’extraction (4.9). Boucher
la fiole et agiter énergiquement pendant 1 h sur l’agitateur (5.3).
8.2.2 Aliments et prémélanges secs contenant plus de 5 000 mg/kg
Peser exactement une prise d’essai de 5 g dans une fiole Erlenmeyer de 500 ml. Pour les prémélanges de
minéraux, ajouter 2 g d’hydrogénocarbonate de sodium. Ajouter 200 ml de solvant d’extraction (4.9). Boucher
la fiole et agiter énergiquement pendant 1 h sur l’agitateur (5.3).
6 © ISO 2005 – Tous droits réservés

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ISO 14183:2005(F)
8.2.3 Échantillons liquides
Homogénéiser l’échantillon liquide à l’aide d’un agitateur magnétique ou à hélices. Mesurer un échantillon
liquide de 20 ml dans une éprouvette graduée de 25 ml tarée. Peser et transférer l’échantillon dans une fiole
Erlenmeyer de 500 ml. Ajouter 180 ml de méthanol (4.2) (en utiliser une partie pour rincer l’éprouvette
graduée). Boucher la fiole et agiter énergiquement pendant 1 h sur l’agitateur (5.3).
8.2.4 Extrait filtré
Filtrer les extraits à travers un papier filtre N°41 Whatman (5.6) dans une fiole Erlenmeyer de 125 ml.
Pour les extraits contenant un niveau élevé d’ionophores, diluer jusqu’à la concentration approximative de
l’étalon D pour CLHP (4.15). La dilution requise, D, peut être calculée à l’aide de la formule suivante:
wm
st
D = ×
ρ V
std e
où
w est le niveau cible d’échantillon, en milligrammes par kilogramme;
s
ρ est la concentration de l’étalon pour CLHP, en microgrammes par millilitre;

std
m est la masse de la prise d’essai, en grammes;
t
V est le volume du solvant d’extraction, en millilitres.

e
Filtrer l’extrait ci-dessus ou éluer à travers un filtre de 0,45 µm avant de procéder à l’analyse CLHP.
8.3 Analyse CLHP
8.3.1 Conditions de la CLHP
a) Paramètres de séparation CLHP:
⎯ colonne: comme décrit en 5.1.7
⎯ phase mobile: comme décrit en 4.10.2
⎯ débit: 0,7 ml/min
⎯ longueur d’onde: 520 nm
⎯ vitesse de déroulement du diagramme: 0,5 cm/min
⎯ volume injecté: 100 µl
⎯ précolonne: comme défini en 5.1.8 (modifier ou reconditionner la
précolonne fréquemment, notamment lors de l’analyse
des échantillons de limite de détection)
⎯ atténuation: ajuster pour donner entre 50 % et 60 % de déviation
maximale pour l’étalon B pour CLHP (4.15) pour un
échantillon de niveau faible, et pour l’étalon D pour
CLHP pour les échantillons contenant des niveaux de
médicaments.
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ISO 14183:2005(F)
b) Paramètres de réaction post-colonne:
⎯ réacteur post-colonne: comme décrit en 5.1.5
⎯ phase mobile: comme décrit en 4.10.1
⎯ débit: 0,9 ml/min
⎯ température du réacteur: 98 °C
Les critères de compatibilité du système définis en 8.3.2 doivent être satisfaits. Il convient que les trois
ionophores et les composants secondaires soient réglés en fonction de la ligne de base; toutefois, un
composant secondaire de salinomycine peut apparaître comme un pic d’épaulement sur la partie frontale du
pic narasine. À l’aide de la colonne Nucleosil (5.1.7), dans les conditions ci-dessus, il convient que les temps
de rétention approximatifs pour la monensine B, monensine A, salinomycine, narasine A et narasine (D + I)
correspondent respectivement à 8,7 min, 9,8 min, 11,2 min, 12,8 min et 14,6 min.
Les débits et la phase mobile pour la colonne analytique peuvent varier légèrement; toutefois, le débit total
doit être compris entre 1,5 ml/min et 1,6 ml/min pour disposer d’un temps de réaction d’au moins 1 minute. La
sensibilité est déterminée par les conditions de la réaction et le détecteur signal/bruit.
La maduramicine constitue une interférence potentielle lors de l’analyse des limites de détection de la
salinomycine; la maduramicine présente une élution environ 0,3 min avant la salinomycine. La semduramicine
constitue une interférence potentielle lors de l’analyse de la monensine; elle présente une élution environ
0,4 min avant la monensine B. La maduramicine et la semduramicine présentent une faible sensibilité et
peuvent être efficacement traitées à l’aide des modes opératoires de confirmation présentés à l’Article 9.
8.3.2 Compatibilité du système
8.3.2.1 Résolution
Injecter l’étalon D pour CLHP (4.15).
Calculer le facteur de résolution, F , pour chaque paire de pics adjacents comme suit:
R
⎛⎞
dd−
21
F = 2
⎜⎟
R
ww+
⎝⎠12
où
d est la distance sur la ligne de base entre le point de départ du chromatogramme et le pic maximal,
n
en centimètres;
w est la largeur à la base du pic triangulaire, en centimètres;
n
n est le numéro du pic (n = 1 ou 2).
EXEMPLE Données pour le calcul de la résolution entre la monensine B (1) et la monensine A (2):
d = 10,38 cm, w = 0,46 cm;
1 1
d = 11,98 cm, w = 0,52 cm.
2 2
11,98−10,38
()
F==23,3
R
0,46+ 0,52
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ISO 14183:2005(F)
La valeur de F doit être supérieure à 1,4 pour tous les pics adjacents. Si cette exigence n’est pas satisfaite,
R
ajuster les conditions de CLHP pour améliorer la résolution, puis répéter l’injection et les calculs.
8.3.2.2 Facteur de traînée
Calculer le facteur de traînée, F , comme suit:
T
tt−
ba
F =
T
2(tt− )
a
où
t est le temps de rétention du pic donné (temps du maximum de la courbe de Gauss ajustée), en
minutes;
t est le temps de rétention lorsque le pic atteint pour la première fois un niveau égal à 5 % du pic

a
maximal;
t est le temps de rétention lorsque le pic descend à un niveau égal à 5 % du pic maximal.

b
Le facteur de traînée, F , pour la monensine A, la salinomycine et la narasine A doit être inférieur à 1,4.
T
8.4 Détermination
8.4.1 Répéter des injections de 100 µl (boucle complète) de l’étalon D pour CLHP (4.15) ou de l’étalon
unique approprié (4.16) jusqu’à ce que l’aire des pics puisse être répétée à ± 1 % près et qu’une ligne de
base stable soit obtenue. Injecter 5 µl de chaque solution mère étalon, si nécessaire, afin d’identifier tous les
pics. Vérifier la linéarité en injectant 100 µl de chaque étalon A, B, C, D et E pour CLHP (4.15). La réponse de
la CLHP doit être linéaire (facteur de corrélation
...