ISO 13366-2:1997
(Main)Milk — Enumeration of somatic cells — Part 2: Electronic particle counter method
Milk — Enumeration of somatic cells — Part 2: Electronic particle counter method
Lait — Dénombrement des cellules somatiques — Partie 2: Méthode au compteur électronique de particules
La présente partie de l'ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques, à l'aide d'un compteur électronique de particules1). NOTE -- Il convient que l'utilisateur de la présente méthode soit conscient du fait qu'en raison du principe de dénombrement (dénombrement de particules), le ou les résultat(s) ne sont pas toujours comparables à ceux obtenus par les méthodes des parties 1 et 3 de l'ISO 13366.
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IS0
INTERNATIONAL
STANDARD 13366-2
First edition
1997-06-15
Milk - Enumeration of somatic cells
Part 2:
Electronic particle counter method
Lait - Dgnombrement des cellules somatiques -
Partie 2: Mkthode au compteur 6lectronique de partiicuies
Reference number
IS0 13366-2:1997(E)
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IS0 13366=2:1997(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 13366-2 was prepared by Technical
Committee ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, in collaboration with the International Dairy
Federation (IDF) and AOAC INTERNATIONAL, and will also be published
by these organizations.
IS0 13366 consists of the following parts, under the general title Milk -
Enumeration of soma tic cells:
- Part I: Microscopic method
- Par? 2: Electronic particle counter method
- Part 3: Fluoro-opto-electronic method
Annex A of this part of IS0 13366 is for information only.
0 IS0 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Internet central @ isocs.iso.ch
x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
ii
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INTERNATIONAL STANDARD o Iso
IS0 13366-2: 1997(E)
Milk - Enumeration of somatic cells -
Part 2:
Electronic particle counter method
WARNING - The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment. This
standard does not purport to address all of the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices and to
determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of IS0 13366 specifies a method for counting the number of somatic cells in both raw and chemically
preserved milk, using an electronic particle counter?
The user of this method should be aware that due to the counting principle (particle counting) the results are not
NOTE -
always comparable with those obtained by the methods of part 1 and part 3 of IS0 13366.
2 Definition
For the purposes of this part of IS0 13366, the following definition applies.
2.1 somatic cells: Those cells that are counted by an electronic particle counter, after fixing a lower threshold
pping the size range of somatic cells.
level and elimination of fat particles overls
3 Principle
in) to the sample to be examined to fix the somatic cells. Dilution by an
Addition of formaldehyde solution (forma
emulsifying electrolyte mixture and subsequent heating sufficient to break down the fat globules overlapping the
size range of the cells. Direct reading of the number of somatic cells in thousands per millilitre.
In an electronic particle counter, the milk passes through an aperture located between electrodes. When a particle
NOTE -
passes through the aperture, it displaces its own volume of highly conductive liquid by one of lower conductivity. The increased
resistance raises the voltage, producing a voltage pulse proportional to the volume of the particle. The number of pulses
indicates the number of passing particles. Only pulses above a fixed threshold level are counted.
1) The Coulter Counter, supplied by Coulter Electronics Ltd., Northwell Drive, Luton LV 3 3 RH, Bedfordshire, England, is an
example of suitable equipment available commercially. This information is given for the convenience of users of this part of
IS0 13366 and does not constitute an endorsement by IS0 of the equipment named.
1
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@ IS0
IS0 13366-2: 1997(E)
4 Reagents
WARNING - Formaldehyde is poisonous. The preparation and application of the emulsifier electrolyte
mixture shall be carried out in a fume cupboard.
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or deionized water or
water of equivalent purity.
4.1 Emulsifier electrolyte mixture
4.1 .l Composition
Ethanol 95 % (V/V) 125,0 ml
Poly(ethylene glycol) mono-p( 1 ,I ,3,34etramethylbutyI)
phenyl ether l) 20,O ml
Sodium chloride solution, 0,9 g/l00 ml 8850 ml
For example, Triton X-l 00 concentrate.
4.1.2 Preparation
Carefully mix the poly(ethylene glycol) ether and the ethanol. Add the sodium chloride solution. Pass the mixture
through an appropriate filter (5.6).
Carry out tests daily in order to determine the number of extraneous particles in the emulsifier electrolyte mixture.
This mixture and the plastic and glassware are considered sufficiently clean if the number of particles is below
20 per 0,l ml of emulsifier electrolyte mixture.
To prevent bacterial growth, 10 ml of formaldehyde solution, 35 % (m/m), may be added to the emulsifier electrolyte
mixture (4.1).
NOTE - Commercially available emulsifying electrolyte mixture may be used; e.g. Somaton 2) diluent.
4.2 Fixative liquid
4.2.1 Composition
Eosin ow g
Formaldehyde solution, 35 % (m/m) l) 9,40 ml
1) The formaldehyde concentration of commercially available formalin varies
between 35 % (m/m) and 40 % (m/m). This should be taken into account when
preparing the fixative liquid.
4.2.2 Preparation
Transfer the eosin and the formaldehyde solution to a 100 ml volumetric flask and mix. Dilute to 100 ml with water
and mix again. Filter or centrifuge the liquid in order to remove particles.
NOTE - Eosin is included in the fixative liquid to colour the fixed test samples.
2) Somaton is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users
of this part of IS0 13366 and does not constitute an endorsement by IS0 of this product.
2
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@ IS0 IS0 13366-2: 1997(E)
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
Prior to use, all glassware shall be carefully cleaned so as to be as near as possible free from particles.
5.1 Particle counter, electronic particle counter with a capillary tube of 100 pm diameter and counting volumes of
0,l ml or 05 ml (e.g. Coulter Counter models F or FN). Alternatively, an automatic counter (e.g. milk cell counter)
may be used with a tube with aperture of 140 pm diameter and a counting volume of 0,3 ml.
CAUTION - When the counter is installed, make sure that any electromagnetic interference is excluded. Both the
screen and the time of counting shall be continuously checked.
Calibrate the apparatus before use to determine the relation between the volume of the particles to be counted and
the threshold level above which the counts are made. Calibrate in accorda
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13366-2
Première édition
1997-06-l 5
Lait
- Dénombrement des cellules
somatiques -
Partie 2:
Méthode au compteur électronique de
particules
Milk - Enumeration of somatic cells
Par? 2: Electronic particle counter method
Numéro de référence
ISO 13366-2: 1997(F)
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ISO 13366-2: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 13366-2 a été élaborée par le comité
technique ISORC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers en collaboration avec la Fédération internationale de
laiterie (FIL) et I’AOAC INTERNATIONAL, et sera également publiée par
ces organisations.
L’ISO 13366 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
Dénombrement des cellules somatiques:
général Lait -
Partie 1: Méthode au microscope
Partie 2: Méthode au compteur électronique de particules
- Partie 3: Méthode fluoro-opto-électronique
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 13366 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
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Imprimé en Suisse
ii
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NORME INTERNATIONALE @ ISO ISO 13366-2: 1997(F)
Lait - Dénombrement des cellules somatiques -
Partie 2:
Méthode au compteur électronique de particules
AVERTISSEMENT - L’utilisation de la présente Norme internationale implique l’intervention de produits,
d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale n’a pas la
prétention d’aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. II est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente Norme internationale de consulter et d’établir des règles de sécurité et d’hygiène
appropriées et de déterminer I’applicabilité des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d’application
La présente partie de I’ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois
dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques, à l’aide d’un compteur électronique de
particules’).
NOTE - II convient que l’utilisateur de la présente méthode soit conscient du fait qu’en raison du principe de dénombrement
(dénombrement de particules), le ou les résultat(s) ne sont pas toujours comparables à ceux obtenus par les méthodes des
parties 1 et 3 de I’ISO 13366.
2 Définition
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 13366, la définition suivante s’applique.
2.1 cellules somatiques: Cellules dénombrées par un compteur électronique de particules après qu’un seuil
limite minimal a été fixé et que l’on a éliminé les particules de matière grasse couvrant la plage des dimensions des
cellules somatiques.
3 Principe
Addition d’une solution de formaldéhyde (formaline) à l’échantillon à examiner afin de fixer les cellules somatiques.
Dilution par un mélange électrolytique émulsifiant, puis chauffage suffisant pour décomposer les globules de
1) Le compteur Coulter, distribué par Coulter Electronics Ltd., Northwell Drive, Luton LV3 3RH, Bedfordshire, Angleterre, est
un exemple d’appareil approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs de la
présente partie de I’ISO 13366 et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif de l’appareil ainsi
désigné.
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ISO 13366-2: 1997(F) @ ISO
matière grasse couvrant la plage des dimensions des cellules. Lecture directe du nombre de cellules somatiques en
milliers par millilitre.
NOTE - Dans un compteur électronique de particules, le lait passe par une ouverture située entre des électrodes.
Lorsqu’une particule passe par l’ouverture, elle déplace son propre volume de liquide très conducteur par un volume de
moindre conductivité. La résistance accrue augmente la tension, provoquant une impulsion en tension proportionnelle au
volume de la particule. Le nombre d’impulsions indique le nombre de particules qui passent. Seules les impulsions se situant
au-dessus d’un seuil déterminé sont comptées.
4 Réactifs
AVERTISSEMENT
- Le formaldéhyde est un poison. La préparation et l’application du mélange
électrolytique émulsifiant doivent être effectuées sous hotte fermée.
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou déionisée ou de pureté
équivalente.
4.1 Mélange électrolytique émulsifiant
4.1 .l Composition
Éthanol à 95 % (WV)
Polyéthylèneglycol mono-p(tétraméthyl-1 ,1,3,3 butyle)
Chlorure de sodium, solution à 0,9 g/lOO ml
1) Par exemple, Triton X-100 concentré.
I
4.1.2 Préparation
Mélanger soigneusement le polyéthylèneglycol éther et I’éthanol. Ajouter la solution de chlorure de sodium. Passer
le mélange sur un filtre approprié (5.6).
Effectuer les essais quotidiennement afin de déterminer le nombre de particules étrangères dans le mélange
électrolytique émulsifiant. Ce mélange, le plastique et la verrerie sont jugés suffisamment propres si le nombre de
particules est inférieur à 20 pour 0,l ml de mélange électrolytique émulsifiant.
Afin d’éviter la croissance bactérienne, 10 ml de solution de formaldéhyde à 35 % (mlm) peuvent être ajoutés au
mélange électrolytique émulsifiant (4.1).
NOTE - Un mélange électrolytique émulsifiant disponible dans le commerce peut être utilisé, par exemple le diluant
Somaton*).
4.2 Liquide fixatif
4.2.1 Composition
Éosine
Solution de formaldéhyde, à 35 % (mlm)')
1) La concentration en formaldéhyde de la formaline disponible dans le commerce varie entre
35 % (&,Y) et 40% (mlm). II convient d’en tenir compte lors de la préparation du liquide fixatif.
2) Somaton est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des
utilisateurs de la présente partie de I’ISO 13366 et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif
du produit ainsi désigné.
2
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@ ISO
ISO 13366-2: 1997(F)
4.2.2 Préparation
Transvaser I’éosine et la solution de formaldéhyde dans une fiole jaugée de 100 ml et mélanger. Compléter à
100 ml avec de l’eau et mélanger à nouveau. Filtrer ou centrifuger le liquide afin d’éliminer les particules.
NOTE - L’éosine est incluse dans le liquide fixatif afin de colorer les échantillons fixés.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
Avant utilisation, toute la verrerie doit être soigneusement nettoyée afin d’être, autant que possible, exempte de
particules.
5.1 Compteur électronique de particules, comportant un tube capillaire de 100 prn de diamètre et d’un volume
de dénombrement de 0,l ml ou 05 ml (par exemple les compteurs de modèle Coulter F ou FN). On peut également
utiliser un compteur automatique (par exemple un compteur de cellules du lait) dont le tube a une ouverture de
140 Km de diamètre et un volume de dénombrement de 0,3 ml.
AVERTISSEMENT - Lorsque le compteur est installé s’assurer qu’il n’y a pas d’interférence électro-
magnétique. Le tamis ainsi que le temps de comptage doivent être contrôlés en permanence.
Étalonner l’appareil avant de l’utiliser, afin de déterminer la relation entre le volume des particules à compter et le
seuil au-dessus duquel les comptages sont effectués. Réaliser l’étalonnage conformément aux instructions du
fabricant en utilisant une suspension de particules étalon.
Contrôler l’étalonnage à l’aide de comp
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13366-2
Première édition
1997-06-l 5
Lait
- Dénombrement des cellules
somatiques -
Partie 2:
Méthode au compteur électronique de
particules
Milk - Enumeration of somatic cells
Par? 2: Electronic particle counter method
Numéro de référence
ISO 13366-2: 1997(F)
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ISO 13366-2: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 13366-2 a été élaborée par le comité
technique ISORC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers en collaboration avec la Fédération internationale de
laiterie (FIL) et I’AOAC INTERNATIONAL, et sera également publiée par
ces organisations.
L’ISO 13366 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
Dénombrement des cellules somatiques:
général Lait -
Partie 1: Méthode au microscope
Partie 2: Méthode au compteur électronique de particules
- Partie 3: Méthode fluoro-opto-électronique
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 13366 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
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Lait - Dénombrement des cellules somatiques -
Partie 2:
Méthode au compteur électronique de particules
AVERTISSEMENT - L’utilisation de la présente Norme internationale implique l’intervention de produits,
d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale n’a pas la
prétention d’aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. II est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente Norme internationale de consulter et d’établir des règles de sécurité et d’hygiène
appropriées et de déterminer I’applicabilité des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d’application
La présente partie de I’ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois
dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques, à l’aide d’un compteur électronique de
particules’).
NOTE - II convient que l’utilisateur de la présente méthode soit conscient du fait qu’en raison du principe de dénombrement
(dénombrement de particules), le ou les résultat(s) ne sont pas toujours comparables à ceux obtenus par les méthodes des
parties 1 et 3 de I’ISO 13366.
2 Définition
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 13366, la définition suivante s’applique.
2.1 cellules somatiques: Cellules dénombrées par un compteur électronique de particules après qu’un seuil
limite minimal a été fixé et que l’on a éliminé les particules de matière grasse couvrant la plage des dimensions des
cellules somatiques.
3 Principe
Addition d’une solution de formaldéhyde (formaline) à l’échantillon à examiner afin de fixer les cellules somatiques.
Dilution par un mélange électrolytique émulsifiant, puis chauffage suffisant pour décomposer les globules de
1) Le compteur Coulter, distribué par Coulter Electronics Ltd., Northwell Drive, Luton LV3 3RH, Bedfordshire, Angleterre, est
un exemple d’appareil approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs de la
présente partie de I’ISO 13366 et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif de l’appareil ainsi
désigné.
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ISO 13366-2: 1997(F) @ ISO
matière grasse couvrant la plage des dimensions des cellules. Lecture directe du nombre de cellules somatiques en
milliers par millilitre.
NOTE - Dans un compteur électronique de particules, le lait passe par une ouverture située entre des électrodes.
Lorsqu’une particule passe par l’ouverture, elle déplace son propre volume de liquide très conducteur par un volume de
moindre conductivité. La résistance accrue augmente la tension, provoquant une impulsion en tension proportionnelle au
volume de la particule. Le nombre d’impulsions indique le nombre de particules qui passent. Seules les impulsions se situant
au-dessus d’un seuil déterminé sont comptées.
4 Réactifs
AVERTISSEMENT
- Le formaldéhyde est un poison. La préparation et l’application du mélange
électrolytique émulsifiant doivent être effectuées sous hotte fermée.
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou déionisée ou de pureté
équivalente.
4.1 Mélange électrolytique émulsifiant
4.1 .l Composition
Éthanol à 95 % (WV)
Polyéthylèneglycol mono-p(tétraméthyl-1 ,1,3,3 butyle)
Chlorure de sodium, solution à 0,9 g/lOO ml
1) Par exemple, Triton X-100 concentré.
I
4.1.2 Préparation
Mélanger soigneusement le polyéthylèneglycol éther et I’éthanol. Ajouter la solution de chlorure de sodium. Passer
le mélange sur un filtre approprié (5.6).
Effectuer les essais quotidiennement afin de déterminer le nombre de particules étrangères dans le mélange
électrolytique émulsifiant. Ce mélange, le plastique et la verrerie sont jugés suffisamment propres si le nombre de
particules est inférieur à 20 pour 0,l ml de mélange électrolytique émulsifiant.
Afin d’éviter la croissance bactérienne, 10 ml de solution de formaldéhyde à 35 % (mlm) peuvent être ajoutés au
mélange électrolytique émulsifiant (4.1).
NOTE - Un mélange électrolytique émulsifiant disponible dans le commerce peut être utilisé, par exemple le diluant
Somaton*).
4.2 Liquide fixatif
4.2.1 Composition
Éosine
Solution de formaldéhyde, à 35 % (mlm)')
1) La concentration en formaldéhyde de la formaline disponible dans le commerce varie entre
35 % (&,Y) et 40% (mlm). II convient d’en tenir compte lors de la préparation du liquide fixatif.
2) Somaton est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des
utilisateurs de la présente partie de I’ISO 13366 et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif
du produit ainsi désigné.
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ISO 13366-2: 1997(F)
4.2.2 Préparation
Transvaser I’éosine et la solution de formaldéhyde dans une fiole jaugée de 100 ml et mélanger. Compléter à
100 ml avec de l’eau et mélanger à nouveau. Filtrer ou centrifuger le liquide afin d’éliminer les particules.
NOTE - L’éosine est incluse dans le liquide fixatif afin de colorer les échantillons fixés.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
Avant utilisation, toute la verrerie doit être soigneusement nettoyée afin d’être, autant que possible, exempte de
particules.
5.1 Compteur électronique de particules, comportant un tube capillaire de 100 prn de diamètre et d’un volume
de dénombrement de 0,l ml ou 05 ml (par exemple les compteurs de modèle Coulter F ou FN). On peut également
utiliser un compteur automatique (par exemple un compteur de cellules du lait) dont le tube a une ouverture de
140 Km de diamètre et un volume de dénombrement de 0,3 ml.
AVERTISSEMENT - Lorsque le compteur est installé s’assurer qu’il n’y a pas d’interférence électro-
magnétique. Le tamis ainsi que le temps de comptage doivent être contrôlés en permanence.
Étalonner l’appareil avant de l’utiliser, afin de déterminer la relation entre le volume des particules à compter et le
seuil au-dessus duquel les comptages sont effectués. Réaliser l’étalonnage conformément aux instructions du
fabricant en utilisant une suspension de particules étalon.
Contrôler l’étalonnage à l’aide de comp
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