ISO 20166-3:2018

Molecular in vitro diagnostic examinations - Specifications for pre-examination processes for formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue - Part 3: Isolated DNA

This document gives guidelines on the handling, documentation, storage and processing of formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue specimens intended for DNA examination during the pre-examination phase before a molecular assay is performed. This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories. It is also intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory authorities. NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics covered in this document.

Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) — Partie 3: ADN extrait

Le présent document fournit des lignes directrices concernant la manipulation, la documentation, le stockage et le traitement de prélèvements de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) destinés à l'analyse de l'ADN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d'une analyse moléculaire. Le présent document s'applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les analyses développées en laboratoire, réalisées par des laboratoires de biologie médicale et des laboratoires de pathologie moléculaire. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des développeurs et fabricants de l'industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des autorités de réglementation. NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également s'appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 13-Dec-2018
• ICS: 11.100.10 - In vitro diagnostic test systems
• Technical Committee: ISO/TC 212 - Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems
• Drafting Committee: ISO/TC 212/WG 4 - Microbiology and molecular diagnostics
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Start Date: 12-Dec-2024
• Completion Date: 13-Dec-2025

Overview

ISO 20166-3:2018 - “Molecular in vitro diagnostic examinations - Specifications for pre‑examination processes for formalin‑fixed and paraffin‑embedded (FFPE) tissue - Part 3: Isolated DNA” provides standardized guidance for the pre‑analytical handling of FFPE tissue intended for DNA analysis. The document defines requirements and recommendations for specimen collection, fixation, processing, documentation, storage and DNA isolation to preserve DNA integrity prior to molecular in vitro diagnostic (IVD) testing.

Key topics and technical requirements

• Pre‑examination scope: Covers the full pre‑analytical workflow from clinician request through to the start of the analytical DNA assay (collection, transport, reception, processing, storage and isolation).
• Formalin fixation and NBF: Defines standard buffered formalin (NBF: 10 % formalin, ~3.7 % mass fraction formaldehyde, pH 6.8–7.2) and addresses fixation practices that influence DNA quality.
• Terminology and conditions: Includes terms such as cold ischemia, warm ischemia and room temperature (defined as 18 °C–25 °C) relevant to pre‑analytical control.
• Specimen handling & documentation: Requirements for accurate donor/patient and specimen information, chain‑of‑custody, transport conditions and reception records.
• Processing steps: Guidance on grossing, decalcification, paraffin embedding, tissue processing and post‑fixation of frozen samples to minimize artefacts affecting DNA.
• Isolation of DNA: Recommendations for DNA extraction from FFPE blocks, including use of commercial kits versus in‑house protocols and the need for validated methods.
• Quality control: Procedures for DNA quantity and quality assessment and appropriate storage conditions for isolated DNA.
• Risk factors: Addresses chemical modifications from fixation, fragmentation, methylation changes and potential impacts on downstream assays.
• Annex: Informative material on how storage temperature affects DNA integrity in FFPE blocks.

Practical applications

• Ensures reliable, reproducible molecular diagnostic results by minimizing pre‑analytical variability that affects DNA integrity.
• Guides laboratory SOP development for pathology, molecular diagnostics and biobank workflows.
• Supports validation and verification of laboratory‑developed tests and IVD kit performance on FFPE material.
• Useful for quality managers, clinical laboratory staff, molecular pathologists, biobank curators and regulatory reviewers.

Who should use this standard

• Medical laboratories and molecular pathology labs performing in‑house or commercial molecular tests
• IVD developers and manufacturers
• Biobanks, academic and commercial research organizations
• Regulatory authorities and accreditation bodies overseeing molecular testing quality

Related standards

• ISO 15189 (Medical laboratories - Requirements for quality and competence)
• ISO 15190 (Medical laboratories - Requirements for safety)
• Other parts of the ISO 20166 series addressing FFPE pre‑analytics for different analytes

Keywords: ISO 20166-3, FFPE, isolated DNA, pre‑analytical, pre‑examination, molecular diagnostics, DNA integrity, formalin fixation, sample handling.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20166-3
First edition
2018-12
Molecular in vitro diagnostic
examinations — Specifications for pre-
examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE)
tissue —
Part 3:
Isolated DNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour les tissus fixés au formol et inclus
en paraffine (FFPE) —
Partie 3: ADN extrait
Reference number
©
ISO 2018
ISO 20166-3:2018(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2018
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Fax: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-3:2018(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 1
4  General considerations . 4
5  Outside the laboratory . 5
5.1 Specimen collection . 5
5.1.1 General. 5
5.1.2 Information about the specimen donor/patient . 5
5.1.3 Information about the specimen . 5
5.1.4 Specimen processing . 6
5.2 Transport requirements . 6
6  Inside the laboratory . 7
6.1 Information about the reception of the specimen . 7
6.2 Formalin fixation of the specimen or sample(s) . 7
6.3 Evaluation of the pathology of the specimen and selection of the sample(s) . 8
6.4 Post-fixation of frozen samples . 9
6.5 Decalcification . 9
6.6 Processing and paraffin embedding . 9
6.7 Storage requirements .10
6.8 Isolation of DNA .10
6.8.1 General.10
6.8.2 General information for DNA isolation procedures .10
6.8.3 Using commercial kits .11
6.8.4 Using the laboratories’ own protocols .11
6.9 Quantity and quality assessment of isolated DNA .12
6.10 Storage of isolated DNA .12
Annex A (informative) Impact of the storage temperature on DNA Integrity in FFPE blocks
of tissue .14
Bibliography .16
ISO 20166-3:2018(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic
test systems.
A list of all parts in the ISO 20166 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-3:2018(E)
Introduction
Molecular in vitro diagnostics, including molecular pathology, has enabled significant progress in
medicine. Further progress is expected with new technologies analysing nucleic acids, proteins, and
metabolites in human tissues and body fluids. However, the profiles and/or integrity of these molecules
can change drastically during specimen collection, transport, storage and processing, thus making
the outcome from diagnostics or research unreliable or even impossible because the subsequent
examination assay will not determine the situation in the patient but an artificial molecular pattern
generated during the pre-examination process. Studies have been undertaken to determine the
influencing factors for the DNA examination from formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue.
These studies demonstrated that a standardization of the entire process from specimen collection to the
DNA examination is needed. This document draws upon such work to codify and standardize the steps
for FFPE tissue with regard to DNA examination in what is referred to as the pre-examination phase.
DNA integrity in tissues can change before, during and after formalin fixation, processing and storage.
Chemical modifications introduced into DNA during tissue fixation might lead to fragmentation and
sequence alterations, changes in the methylation status or even structural changes which can lead to,
for instance, spurious copy number changes in array-CGH profiles. These modifications of the DNA
molecules can impact the validity and reliability of the examination test results. Therefore, it is essential
to take special measures to minimize the described DNA changes and modifications for subsequent
examination.
In this document, the following verbal forms are used:
— "shall" indicates a requirement;
— "should" indicates a recommendation;
— "may" indicates a permission;
— "can" indicates a possibility or a capability.
INTERNATIONAL STANDARD  ISO 20166-3:2018(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue —
Part 3:
Isolated DNA
1 Scope
This document gives guidelines on the handling, documentation, storage and processing of formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue specimens intended for DNA examination during the pre-
examination phase before a molecular assay is performed.
This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory
developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories. It is also
intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers,
biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory
authorities.
NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
2  Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189:2012, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO 15190, Medical laboratories — Requirements for safety
3  Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 15189 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
aliquot
portion of a larger amount of homogeneous material, assumed to be taken with negligible sampling error
Note 1 to entry: The term is usually applied to fluids. Tissues are heterogeneous and therefore cannot be
aliquoted.
Note 2 to entry: The definition is derived from References [25], [26], and [27].
ISO 20166-3:2018(E)
3.2
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.3
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2, modified — EXAMPLE has been removed.]
3.4
analytical test performance
accuracy, precision, specificity and sensitivity of a test to measure the analyte (3.3) of interest
Note 1 to entry: Other test performance characteristics such as robustness, repeatability can apply as well.
3.5
cold ischemia
condition after removal of the tissue from the body until stabilization or fixation
3.6
diagnosis
identification of a health or disease state from its signs and/or symptoms, where the diagnostic process
can involve examinations (3.8) and tests for classification of an individual's condition into separate and
distinct categories or subclasses that allow medical decisions about treatment and prognosis to be made
3.7
DNA
deoxyribonucleic acid
polymer of deoxyribonucleotides occurring in a double-stranded (dsDNA) or single-stranded
(ssDNA) form
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.8
examination
analytical test
set of operations having the object of determining the value or characteristics of a property
Note 1 to entry: Processes that start with the isolated analyte and include all kinds of parameter testing or
chemical manipulation for quantitative or qualitative examination.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modified — Notes to entry 1 to 3 have been removed, Note 1 to entry has
been added and “analytical test” has been added as a preferred term.]
3.9
formalin
saturated aqueous formaldehyde solution which at 100 % contains 37 % formaldehyde by mass
(corresponding to 40 % by volume)
3.10
formalin fixation
treatment of a sample (3.18) with standard buffered formalin solution (3.20) for stabilization
3.11
grossing
gross examination
inspection of pathology specimens with the bare eye to obtain diagnostic information, while being
processed for further microscopic examination
2 © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-3:2018(E)
3.12
interfering substances
endogenous substances of a specimen (3.15)/sample (3.18) or exogenous substances (e.g. stabilization
solution) that can alter an examination result
3.13
paraffin embedding
process in which a tissue sample is placed in paraffin to generate a hard surrounding matrix so that
thin microscopic sections can be cut
3.14
pre-examination process
pre-analytical phase
pre-analytical workflow
process that starts, in chronological order, from the clinician’s request and includes the examination
request, preparation and identification of the patient, collection of the primary sample(s) (3.15),
transportation to and within the medical or pathology laboratory, isolation of analytes (3.3), and ends
when the analytical examination begins
Note 1 to entry: The pre-examination phase includes preparative processes that influence the outcome of the
intended examination.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modified — “pre-analytical workflow” has been added as a preferred
term, Note 1 to entry has been added and the definition has been extended.]
3.15
primary sample
specimen
discrete portion of a body fluid, breath, hair or tissue taken for examination (3.8), study or analysis of
one or more quantities or properties assumed to apply for the whole
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.16, modified — Notes to entry 1 to 3 have been removed.]
3.16
proficiency test
evaluation of participant performance against pre-established criteria by means of inter-laboratory
comparisons
[SOURCE: ISO 17043:2010, 3.7, modified — Notes to entry 1 and 2 have been removed.]
3.17
room temperature
for the purposes of this document, temperature in the range of 18 °C to 25 °C
Note 1 to entry: Local or national regulations can have different definitions.
3.18
sample
one or more parts taken from a primary sample (3.15)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modified — EXAMPLE has been removed.]
3.19
stability
ability of a sample material, when stored under specified conditions, to maintain a stated property
value within specified limits for a specified period of time
Note 1 to entry: The analyte for the purpose of this document is isolated DNA.
[SOURCE: ISO Guide 30:2015, 2.1.15, modified — “reference material” has been replaced by “sample
material" and Note 1 to entry has been changed.]
ISO 20166-3:2018(E)
3.20
standard buffered formalin solution
neutral buffered formalin
NBF
10 % formalin (3.9) solution in water with a mass fraction of 3,7 % (corresponding to a volume fraction
of 4 %) formaldehyde, buffered to pH 6,8 to pH 7,2
Note 1 to entry: Standard buffered formalin solutions often contain small amounts of methanol to inhibit
oxidation and polymerisation of formaldehyde.
3.21
storage
prolonged interruption of the pre-analytical workflow (3.14) of a sample (3.18) or analyte (3.3)
respectively, or of their derivatives, such as stained sections or tissue blocks, under appropriate
conditions in order to preserve their properties
Note 1 to entry: Long-term storage typically occurs in laboratory archives or in biobanks.
3.22
tissue processor
automated instrument where tissue fixation, dehydration, clearing and paraffin infiltration occurs
3.23
validation
confirmation, throughout the provision of objective evidence, that the requirements for a specific
intended use or application have been fulfilled
Note 1 to entry: “Validated” is used to designate the corresponding status.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modified — Notes to entry 1 and 3 have been removed.]
3.24
warm ischemia
condition before the tissue is removed from the body, but where it is deprived of its normal blood supply
3.25
workflow
series of activities necessary to complete a task
3.26
homogeneous
uniform in structure and composition
4  General considerations
For general statements on medical laboratory quality management systems and in particular on
specimen collection and handling (including avoidance of cross contaminations) see ISO 15189:2012,
4.2, 5.4.4, 5.4.6 or ISO/IEC 17020:2012, clause 8 and 7.2. The requirements for laboratory equipment,
reagents, and consumables in accordance with ISO 15189:2012, 5.3 shall be followed; ISO 15189:2012,
5.5.1.2 and 5.5.1.3, and ISO/IEC 17020:2012, 6.2 can also apply.
All steps of a diagnostic workflow can influence the final analytical test result. Thus, the entire
workflow including biomolecule stability and sample storage conditions shall be verified and validated.
Workflow steps which cannot always be controlled (e.g. warm ischemia) shall be documented. A risk
assessment of non-controllable workflow steps including their potential impact on the analytical test
performance shall be performed and mitigation measures shall be established to enable the required
analytical test performance.
In contrast to RNA or proteins, DNA in tissue is relatively stable during warm and cold ischemia.
Changes of DNA sequence or copy numbers [e.g. comparative genomic hybridization (CGH) profiles] due
4 © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-3:2018(E)
[7]
to longer warm and cold ischemia durations are unknown . However, DNA methylation patterns may
[6]
change in response to ischemia . The duration until the specimen is placed into standard buffered
formalin solution should be kept as short as possible in order to avoid enzymatic degradation of DNA.
The duration before fixation shall be documented and the temperature before fixation should be
[5]
documented .
During the fixation, processing and storage, the DNA integrity can change depending on the kind
of fixative, fixation time and temperature, storage or archiving of the fixed paraffin-embedded
tissue as well as the method used for DNA isolation and purification. When using a fixative based on
formaldehyde, temperature and fixation duration have a significant impact on DNA integrity. The longer
the fixation duration and the higher the temperature, the more chemical modifications and crosslinks
[9][10][11][12][13][14]
are introduced, which can lead to degradation or sequence alterations . These effects
can limit the size of amplifiable target DNA and/or influence the target sequence of primers used for
amplification.
Safety instructions on specimen transport and handling shall be considered and followed in accordance
with ISO 15189:2012, 5.2.3 and 5.4.5 and ISO 15190.
During the whole pre-examination process precautions shall be taken to avoid cross contamination
between different specimens/samples, e.g. by using single-use material whenever feasible or
appropriate cleaning procedures between processing of different specimens/samples.
If a commercial product is not used in accordance with the manufacturers' instructions, responsibility
for its use and performance lies with the user.
5  Outside the laboratory
5.1  Specimen collection
5.1.1  General
For the collection of the specimen, the requirements (e.g. disease condition, specimen size) for intended
molecular examination (see also Clause 6) should be considered.
See also ISO 15189:2012, 5.4.4.
5.1.2  Information about the specimen donor/patient
The documentation shall include the ID of the specimen donor/patient, which can be in the form of a code.
The documentation should include, but is not limited to:
a) the relevant health status of the specimen donor/patient [e.g. healthy, disease type, concomitant
disease, demographics (e.g. age and gender)];
b) the information about routine medical treatment and special treatment prior to tissue collection
(e.g. anaesthetics, medications, surgical or diagnostic procedures);
c) the appropriate consent from the specimen donor/patient.
5.1.3  Information about the specimen
The documentation shall include, but is not limited to:
a) the start of ischemia within the body (warm ischemia) by documentation of the ischemia-relevant
vessel ligation/clamping time point (usually arterial clamping time);
b) the time and date when tissue is removed from the body and the method of removal (e.g. core-
needle biopsy, resection, biopsy device used for the collection);
ISO 20166-3:2018(E)
c) the description of tissue type and origin, tissue condition (e.g. diseased, unaffected by the disease),
including references to any marking applied in or outside the operating theatre made by surgeon,
radiologist or pathologist;
d) the documentation steps described under 6.2, if the formalin fixation starts outside the laboratory,
and also the documentation steps described under 6.3, if the evaluation of the pathology of the
specimen and selection of the sample(s) is also done outside the laboratory.
The documentation should also include the ID of the responsible person for collecting the specimen.
5.1.4  Specimen processing
The following steps shall be performed:
a) the documentation of any additions or modifications to the specimen after removal from the body
(e.g. labelling for the orientation of the specimen [e.g. ink-marking, stitches, incision(s)];
b) the selection and use of containers and packages (e.g. cooling box, box for storing and transportation,
vacuum packaging) according to applicable transport regulations;
c) the selection and use of stabilization procedures (e.g. cooling methods) for transport;
NOTE 1 Accidentally freezing the tissue (e.g. by using cool packs in a wrong manner) can lead to DNA
degradation when the tissue thaws thereafter. It can also impact the morphological characterization.
NOTE 2 This step can be omitted, if the specimen is transferred directly into standard buffered formalin
solution (see 6.2 and notice the importance of volume of fixative and tissue sectioning to allow adequate
penetration of fixative).
d) the labelling of the collection transport container (e.g. registration-number, barcode (1D or 2D),
specimen type, quantity, and organ tissue of origin) and additional documentation [information as
specified in 5.1.2, 5.1.3, 5.1.4 a) to c)].
Several specimens from the same patient/donor sharing similar features (macroscopic appearance,
tissue type, disease status and anatomical location) may be put into a single container/container
compartment.
Specimens should be transferred without delay into the transport container after the removal from
the body. The container should then be kept on wet-ice or at 2 °C to 8 °C in order to minimize DNA
degradation.
The temperatures of the transport container’s surroundings during cold ischemia (e.g. temperatures
in different rooms, transport) should be documented. If the temperature cannot be measured, the
temperature range should be estimated by classification as ambient temperature, room temperature,
or at 2 °C to 8 °C.
5.2  Transport requirements
The laboratory in collaboration with the clinical or surgery department shall establish a protocol for
the transport procedure of the specimen.
Temperature monitoring should be applied in a suitable manner.
If the specimen is not already placed into standard buffered formalin solution, it should be transported
on wet-ice or at 2 °C to 8 °C without delay in order to minimize changes to the DNA.
If the specimen is already placed into standard buffered formalin solution outside the laboratory, the
temperature during transport should not exceed room temperature.
The compliance with the protocol for the transport procedure shall be documented. Any deviations
from the protocol shall be described and documented.
6 © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-3:2018(E)
6  Inside the laboratory
6.1  Information about the reception of the specimen
The ID or name of the person receiving the specimen shall be documented. The specimen arrival
date and time, and conditions (e.g. labelling, transport conditions including temperature, tissue type
and quantity of the specimen, leaking/breaking of the container) of the received specimens shall be
documented. Any deviations from the established protocol for the transport procedure (see 5.2) shall
be documented.
The correct identity of the specimen shall be checked. This should include the clinical information
(see 5.1.2 and 5.1.3) of the specimen, hospital admission number and/or donor/patient ID, name of the
patient, date of birth of the patient.
6.2  Formalin fixation of the specimen or sample(s)
This procedure is applicable to the specimen, and, in the event that one or more parts are taken from a
specimen, to the resulting sample(s).
The fixative used shall be standard buffered formalin solution.
NOTE In some countries standard buffered formalin solution is referred to as neutral buffered formalin (NBF).
The pH-value of the standard buffered formalin solution should be checked at least once per week and
before use or with every new batch as formalin is not stable (e.g. formaldehyde has a tendency to be
[13]
oxidized to for
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20166-3
Première édition
2018-12
Analyses de diagnostic moléculaire
in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en
paraffine (FFPE) —
Partie 3:
ADN extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for
pre-examination processes for formalin-fixed and paraffin-embedded
(FFPE) tissue —
Part 3: Isolated DNA
Numéro de référence
©
ISO 2018
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© ISO 2018
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
Fax: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 4
5 Hors du laboratoire . 5
5.1 Recueil des prélèvements . 5
5.1.1 Généralités . 5
5.1.2 Informations relatives au donneur/patient . 5
5.1.3 Informations relatives au prélèvement . 6
5.1.4 Traitement du prélèvement . . 6
5.2 Exigences de transport . 7
6 Dans le laboratoire . 7
6.1 Informations relatives à la réception des prélèvements . 7
6.2 Fixation au formol du prélèvement ou de l’échantillon . 7
6.3 Évaluation de la pathologie du prélèvement et sélection du ou des échantillons . 9
6.4 Post-fixation d’échantillons congelés .10
6.5 Décalcification .10
6.6 Traitement et inclusion en paraffine .10
6.7 Exigences relatives au stockage .10
6.8 Extraction de l’ADN .11
6.8.1 Généralités .11
6.8.2 Informations générales relatives aux protocoles d’extraction de l’ADN .11
6.8.3 Utilisation de kits commerciaux .12
6.8.4 Utilisation des protocoles propres aux laboratoires .12
6.9 Évaluation quantitative et qualitative de l’ADN extrait .13
6.10 Stockage de l’ADN extrait .14
Annexe A (informative) Influence de la température de stockage sur l’intégrité de l’ADN
dans les blocs de tissus FFPE .15
Bibliographie .17
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20166 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
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Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro, y compris la pathologie moléculaire, a permis de faire considérablement
progresser la médecine. D’autres avancées sont attendues avec les nouvelles technologies d’analyse des
acides nucléiques, des protéines et des métabolites dans les tissus humains et les fluides corporels.
Toutefois, les profils et/ou l’intégrité de ces molécules peuvent varier considérablement au cours du
prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du traitement, et engendrer
ainsi un résultat de diagnostic ou de recherche peu fiable, voire impossible, car l’analyse subséquente
ne déterminera pas l’état du patient, mais un motif moléculaire artificiel généré pendant le processus
préanalytique. Des études ont été réalisées afin de définir les facteurs ayant un impact sur l’analyse de
l’ADN des tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE). Ces études ont établi qu’une normalisation
de l’ensemble du processus allant du prélèvement des échantillons primaires jusqu’à l’analyse de l’ADN,
est nécessaire. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et normaliser les étapes des
processus dits de la phase préanalytique pour tissus FFPE au regard de l’analyse de l’ADN.
L’intégrité de l’ADN dans les tissus peut changer avant, pendant et après la fixation au formol, le
traitement et le stockage. Les modifications chimiques apportées à l’ADN durant la fixation des tissus
peuvent entraîner une fragmentation et une modification de séquence, des changements de l’état de
méthylation ou même des changements structuraux susceptibles de conduire, par exemple, à de fausses
variations du nombre de copies dans les profils des puces à ADN d’hybridation génomique comparative
(CGH array). Ces modifications des molécules d’ADN peuvent avoir un impact sur la validité et la fiabilité
des résultats d’analyse. Il est donc essentiel de prendre des mesures particulières afin de réduire le plus
possible les changements et modifications de l’ADN décrits pour l’analyse ultérieure.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une autorisation;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
NORME INTERNATIONALE ISO 20166-3:2018(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) —
Partie 3:
ADN extrait
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices concernant la manipulation, la documentation, le
stockage et le traitement de prélèvements de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) destinés
à l’analyse de l’ADN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les analyses
développées en laboratoire, réalisées par des laboratoires de biologie médicale et des laboratoires
de pathologie moléculaire. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des
développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des
institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des
autorités de réglementation.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 15189:2012, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO 15190, Laboratoires de médecine — Exigences pour la sécurité
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions de l’ISO 15189 ainsi que les suivants,
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1
aliquote
partie d’une quantité plus importante d’un matériau homogène, prélevée avec une erreur
d’échantillonnage supposée négligeable
Note 1 à l'article: Le terme s’applique généralement à des fluides. Les tissus sont hétérogènes et ne peuvent donc
pas être aliquotés.
Note 2 à l'article: La définition est issue des Références [25], [26] et [27].
3.2
température ambiante
température non régulée de l’air environnant
3.3
analyte
composant représenté sous la forme d’une grandeur mesurable
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2, modifiée — L’EXEMPLE a été supprimé.]
3.4
performance analytique
l’exactitude, la précision, la spécificité et la sensibilité d’une analyse pour mesurer l’analyte (3.3)
concerné
Note 1 à l'article: D’autres caractéristiques de performance d’analyse, telles que la robustesse ou la répétabilité,
peuvent également s’appliquer.
3.5
ischémie froide
état d’un tissu suite à son prélèvement de l’organisme jusqu’à sa stabilisation ou sa fixation
3.6
diagnostic
identification d’un état de santé sain ou pathologique à partir de ses signes et/ou symptômes, dans
laquelle le processus de diagnostic peut impliquer des analyses (3.8) et essais pour la classification
de l’état d’un individu en catégories ou sous-classes distinctes, laquelle permet la prise de décisions
médicales concernant le traitement et le pronostic à établir
3.7
ADN
acide désoxyribonucléique
polymère de désoxyribonucléotides se présentant sous la forme de double brin (ADNdb) ou de simple
brin (ADNsb)
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.8
analyse
phase analytique
ensemble des opérations destinées à déterminer la valeur ou les caractéristiques d’une propriété
Note 1 à l'article: Les processus débutent avec l’analyte extrait et comprennent toutes sortes d’essais
paramétriques ou une manipulation chimique en vue de réaliser l’analyse quantitative ou qualitative.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modifiée — Les Notes à l’Article 1 à 3 ont été supprimées, la Note 1 à
l’article a été ajoutée, le terme «examen» a été remplacé par «analyse» et «phase analytique» a été
ajouté comme terme privilégié.]
3.9
formol
solution aqueuse saturée en formaldéhyde qui, à 100 %, contient 37 % de formaldéhyde en masse
(correspondant à 40 % en volume)
3.10
fixation au formol
traitement d’un échantillon (3.18) avec une solution de formol tamponnée standard (3.20) à des fins de
stabilisation
2 © ISO 2018 – Tous droits réservés

3.11
macroscopie
analyse macroscopique
contrôle de prélèvements pathologiques à l’œil nu, au cours de leur traitement à des fins d’analyse
microscopique ultérieure, en vue d’obtenir des informations de diagnostic
3.12
substances interférentes
substances endogènes d’un prélèvement (3.15)/échantillon (3.18) ou substances exogènes (par exemple,
solution de stabilisation) susceptibles d’altérer le résultat d’une analyse
3.13
inclusion en paraffine
processus dans lequel un échantillon de tissu est placé dans de la paraffine en vue de produire une
matrice rigide environnante permettant le découpage de fines coupes microscopiques
3.14
processus préanalytique
phase préanalytique
flux de travail préanalytique
processus commençant chronologiquement par la prescription des analyses par le clinicien, comprenant
la demande d’analyse, la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon
primaire (3.15), son acheminement jusqu’au laboratoire et au sein du laboratoire médical ou de
pathologie, l’extraction des analytes (3.3), et finissant au début de l’analyse
Note 1 à l'article: La phase préanalytique comprend des processus de préparation qui influencent le résultat de
l’analyse prévue.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modifiée — «Flux de travail préanalytique» a été ajouté comme terme
privilégié, la Note 1 à l’article a été ajoutée et la définition a été complétée.]
3.15
échantillon primaire
prélèvement
spécimen
partie discrète d’un liquide corporel, d’une haleine, d’un cheveu ou d’un tissu prélevé à des fins
d’examens (3.8), d’étude ou d’analyse d’une ou plusieurs grandeurs ou propriétés pour déterminer le
caractère de l’ensemble
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.16, modifiée — Les Notes à l’Article 1 à 3 ont été supprimées.]
3.16
essai d’aptitude
évaluation de la performance d’un participant par rapport à des critères préétablis au moyen de
comparaisons interlaboratoires
[SOURCE: ISO 17043:2010, 3.7, modifiée — Les Notes à l’Article 1 et 2 ont été supprimées.]
3.17
température de laboratoire
pour les besoins du présent document, température dans la plage de 18 °C à 25 °C
Note 1 à l'article: Des réglementations locales ou nationales peuvent stipuler des définitions différentes.
3.18
échantillon
une ou plusieurs parties prélevées à partir d’un échantillon primaire (3.15)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modifiée — L’EXEMPLE a été supprimé.]
3.19
stabilité
capacité d’un échantillon, lorsqu’il est entreposé dans des conditions spécifiées, à conserver une valeur
de propriété spécifiée dans des limites spécifiées pendant une période de temps spécifiée
Note 1 à l'article: L’analyte pour les besoins du présent document est composé d’ADN extrait.
[SOURCE: Guide ISO 30:2015, 2.1.15, modifiée — L’expression «matériau de référence» a été remplacée
par «échantillon» et la Note 1 à l’article a été modifiée.]
3.20
solution de formol tamponnée standard
formol neutre tamponné
NBF
solution de formol (3.9) à 10 % dans l’eau, avec une fraction massique de 3,7 % (correspondant à une
fraction volumique de 4 %) de formaldéhyde, tamponnée entre un pH 6,8 et un pH 7,2
Note 1 à l'article: Les solutions de formol tamponnées standards contiennent souvent de petites quantités de
méthanol pour inhiber l’oxydation et la polymérisation du formaldéhyde.
3.21
stockage
interruption prolongée du flux de travail préanalytique (3.14) d’un échantillon (3.18), d’un analyte (3.3)
ou de leurs dérivés, tels que des coupes colorées ou des blocs de tissus, dans des conditions appropriées
afin de préserver leurs propriétés
Note 1 à l'article: Le stockage à long terme a généralement lieu dans les sites d’archivage des laboratoires ou dans
les biobanques.
3.22
appareil de préparation des tissus
instrument automatisé où la fixation, la déshydratation, le nettoyage et l’infiltration de paraffine des
tissus sont opérés
3.23
validation
confirmation, par des preuves tangibles, que les exigences pour une utilisation spécifique ou une
application prévue ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «validé» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modifiée — Les Notes à l’Article 1 et 3 ont été supprimées.]
3.24
ischémie chaude
situation avant que le tissu soit prélevé de l’organisme, mais dans laquelle il est privé de son apport
sanguin normal
3.25
flux de travail
série d’activités nécessaires à la réalisation d’une tâche
3.26
homogène
de structure et de composition uniformes
4 Considérations générales
Pour les instructions générales relatives aux systèmes de management de la qualité de laboratoire
de biologie médicale et portant en particulier sur le prélèvement et la manipulation d’échantillons
primaires (y compris la prévention des contaminations croisées), voir l’ISO 15189:2012, 4.2, 5.4.4,
4 © ISO 2018 – Tous droits réservés

5.4.6 ou l’ISO/IEC 17020:2012, Article 8 et 7.2. Les exigences relatives aux équipements de laboratoire,
aux réactifs et aux consommables conformément à l’ISO 15189:2012, 5.3 doivent être respectées;
l’ISO 15189:2012, 5.5.1.2 et 5.5.1.3 et l’ISO/IEC 17020, 2012, 6.2 peuvent également s’appliquer.
Toutes les étapes d’un flux de travail de diagnostic peuvent influencer le résultat final de l’analyse.
Par conséquent, le flux de travail complet, y compris la stabilité des biomolécules et les conditions de
stockage des échantillons, doit être vérifié et validé. Les étapes du flux de travail qui ne peuvent pas
toujours être contrôlées (par exemple, l’ischémie chaude) doivent être documentées. Une évaluation des
risques des étapes non contrôlables du flux de travail, incluant leur impact potentiel sur la performance
analytique, doit être réalisée et des mesures d’atténuation doivent être mises en place pour obtenir la
performance analytique requise.
Contrairement à l’ARN ou aux protéines, l’ADN est relativement stable dans le tissu durant les ischémies
chaude et froide. Les modifications de l’ADN, des séquences et des nombres de copies (par exemple,
profils d’hybridation génomique comparative (CGH)) dues à de longues durées d’ischémies froide et
[7]
chaude sont inconnues . Cependant, les profils de méthylation de l’ADN peuvent varier en réponse à
[6]
l’ischémie . Il convient d’écourter autant que possible le délai jusqu’à l’introduction du prélèvement
dans la solution de formol tamponnée standard afin d’éviter une dégradation enzymatique de l’ADN.
La durée avant la fixation doit être consignée et il convient de documenter la température avant la
[5]
fixation .
Pendant la fixation, le traitement et le stockage, l’intégrité de l’ADN peut varier en fonction du type de
fixateur, de la durée et de la température de fixation, du stockage ou de l’archivage des tissus fixés et
inclus en paraffine, ainsi que de la technique utilisée pour l’extraction et la purification de l’ADN. Lors de
l’utilisation d’un fixateur à base de formaldéhyde, la température et la durée de fixation ont un impact
significatif sur l’intégrité de l’ADN. Plus la durée de fixation est longue et plus la température est élevée,
plus il se produit de modifications chimiques et de pontages qui peuvent mener à une dégradation ou
[9][10][11][12][13][14]
à des modifications de séquences . Ces effets peuvent limiter la taille de l’ADN cible
amplifiable et/ou influencer la séquence des amorces utilisées pour l’amplification de la cible.
Les instructions en matière de sécurité pour le transport et la manipulation des prélèvements doivent
être prises en considération et respectées conformément à l’ISO 15189:2012, 5.2.3 et 5.4.5, et à
l’ISO 15190.
Des précautions doivent être prises au cours de l’ensemble du processus préanalytique afin d’éviter
toute contamination croisée entre les différents prélèvements/échantillons, par exemple en utilisant,
dans la mesure du possible, du matériel à usage unique ou en mettant en place des méthodes de
nettoyage appropriées entre les traitements des différents prélèvements/échantillons.
Si un produit commercial n’est pas utilisé selon les instructions du fabricant, la responsabilité de son
utilisation et de sa performance incombe à l’utilisateur.
5 Hors du laboratoire
5.1 Recueil des prélèvements
5.1.1 Généralités
Pour le recueil du prélèvement, il convient de prendre en compte les exigences (par exemple, pathologie,
taille du prélèvement) applicables à l’analyse moléculaire prévue (voir également l’Article 6).
Voir également l’ISO 15189:2012, 5.4.4.
5.1.2 Informations relatives au donneur/patient
La documentation doit inclure l’identifiant du donneur/patient, lequel peut se présenter sous la forme
d’un code.
Il convient que la documentation comprenne, sans toutefois s’y limiter:
a) l’état de santé correspondant du donneur/patient (par exemple, sain, type de maladie, maladie
concomitante, données démographiques [âge et sexe, par exemple]);
b) les informations concernant le traitement médical de routine et le traitement particulier avant le
prélèvement du tissu (par exemple, anesthésiques, médicaments, protocoles chirurgicaux ou de
diagnostic);
c) le consentement approprié du donneur/patient.
5.1.3 Informations relatives au prélèvement
La documentation doit mentionner, sans toutefois s’y limiter:
a) le début d’ischémie dans l’organisme (ischémie chaude) établi par une documentation de l’heure
de la ligature/du clampage du vaisseau concerné par l’ischémie (généralement l’heure du clampage
artériel);
b) l’heure et la date auxquelles le tissu est prélevé sur l’organisme, ainsi que la méthode de prélèvement
(par exemple, microbiopsie au trocart, résection, dispositif de biopsie utilisé pour le prélèvement);
c) la description du type et de l’origine du tissu, de l’état du tissu (par exemple, pathologique, exempt
de la maladie), y compris les références de tout marquage réalisé par le chirurgien, le radiologue ou
le pathologiste à l’intérieur ou à l'extérieur du bloc opératoire;
d) les étapes de documentation décrites en 6.2, si la fixation au formol commence hors du laboratoire,
ainsi que les étapes de documentation décrites en 6.3, si l’évaluation de la pathologie du prélèvement
et la sélection du ou des échantillons sont également effectuées en dehors du laboratoire.
Il convient que la documentation inclue l’identifiant de la personne responsable du prélèvement de
l’échantillon primaire.
5.1.4 Traitement du prélèvement
Les étapes suivantes doivent être suivies:
a) la documentation de tout ajout ou changement apporté au à l’échantillon primaire après le
prélèvement sur l’organisme (par exemple, étiquetage pour l’orientation du prélèvement [tel que
marquage à l’encre, points de suture(s), incision(s)]);
b) la sélection et l’utilisation de récipients et d’emballages (par exemple, boîte réfrigérante, boîte pour
stockage et transport, emballage sous vide), conformément aux réglementations de transport en
vigueur;
c) la sélection et l’utilisation de méthodes de stabilisation (par exemple, techniques de réfrigération)
en vue du transport;
NOTE 1 Une congélation accidentelle du tissu (dues par exemple à l’utilisation à mauvais escient de blocs
réfrigérants) peut mener à une dégradation de l’ADN lorsque le tissu se décongèle par la suite. Elles peuvent
également avoir un impact sur la caractérisation morphologique.
NOTE 2 Cette étape peut être omise si le prélèvement est transféré directement dans une solution de
formol tamponnée standard (voir 6.2 et observer l’importance du volume de fixateur et de coupe de tissus
pour permettre une pénétration adéquate du fixateur).
d) l’étiquetage du récipient de transport des prélèvements (par exemple, numéro d’enregistrement,
code-barres (1D ou 2D), type de prélèvement, quantité et organe d’origine du tissu) et une
documentation supplémentaire (informations spécifiées en 5.1.2, 5.1.3, 5.1.4, a) à c)).
6 © ISO 2018 – Tous droits réservés

Plusieurs prélèvements issus du même patient/donneur et partageant des caractéristiques communes
(aspect macroscopique, type de tissu, état pathologique et emplacement anatomique) peuvent être
placés dans un même récipient/compartiment de récipient.
Il convient de transférer sans délai les prélèvements dans le récipient de transport après l’ablation sur
l’organisme. Il convient ensuite de conserver le récipient sur un bain de glace ou entre 2 °C et 8 °C afin
de réduire le plus possible la dégradation de l’ADN.
Il convient de consigner les températures de l’environnement du récipient de transport durant
l’ischémie froide (par exemple, les températures dans les différents locaux, pendant le transport). Si
la température ne peut pas être mesurée, il convient d’évaluer la plage de températures en la classant
comme température ambiante, température de laboratoire ou entre 2 °C et 8 °C.
5.2 Exigences de transport
Le laboratoire partenaire du service clinique ou chirurgical doit établir un protocole pour la méthode
de transport du prélèvement.
Il convient de mettre en œuvre une surveillance de la température de manière appropriée.
Si le prélèvement n’est pas déjà placé dans la solution de formol tamponnée standard, il convient de
l’acheminer sans délai sur un bain de glace ou entre 2 °C et 8 °C afin de réduire le plus possible les
modifications de l’ADN.
Si le prélèvement a déjà été placé dans la solution de formol tamponnée standard hors du laboratoire, il
convient de ne pas dépasser la température de laboratoire au cours du transport.
La conformité au protocole de la méthode de transport doit être consignée. Tout écart au protocole doit
être décrit et documenté.
6 Dans le laboratoire
6.1 Informations relatives à la réception des prélèvements
L’identifiant ou le nom de la personne réceptionnant le prélèvement doit être consigné. La date et l’heure
d’arrivée du prélèvement, ainsi que les conditions (par exemple, étiquetage, conditions de transport
incluant la température, le type et la quantité de tissu du prélèvement, fuite/bris du récipient) des
prélèvements reçus doivent être consignées. Tout écart au protocole établi pour la méthode de transport
(voir 5.2) doit être consigné.
L’identité correcte du prélèvement doit être vérifiée. Il convient que cela comprenne les informations
cliniques (voir 5.1.2 et 5.1.3) du prélèvement, du numéro d’admission à l’hôpital et/ou de l’identifiant du
donneur/patient, le nom du patient et la date de naissance du patient.
6.2 Fixation au formol du prélèvement ou de l’échantillon
Cette méthode s’applique aux prélèvements et, dans le cas où une ou plusieurs pièces sont prélevées à
partir d’un prélèvement, à l’échantillon ou aux échantillons en résultant.
Le fixateur utilisé doit être une solution de formol tamponnée standard.
NOTE Dans certains pays, la solution de formol tamponnée standard est appelée formol neutre
tamponné (NBF).
Il convient de vérifier le pH de la solution de formol tamponnée standard au moins une fois par semaine
avant utilisation ou à chaque nouveau lot, étant donné que le formol n’est pas stable (le formaldéhyde a
[13]
par exemple tendance à s’oxyder en acide formique) .
Les étapes suivantes doivent être suivies:
a) la consultation de la fiche de données de sécurité fournie par le fabricant (FDS) avant la
manipulation de la solution de formol tamponnée standard;
NOTE Le formaldéhyde est un composé cancérigène et dangereux qui pénètre dans le tissu et modifie
chimiquement les biomolécules. Cependant, il existe potentiellement différentes classifications locales.
b) la documentation de l’heure d’introduction de l’échantillon de tissu dans la solution de formol
tamponnée standard;
NOTE La durée totale de la fixation au formol peut avoir un impact sur les analyses subséquentes, telles
que les techniques immunohistochimiques et les analyses moléculaires basées sur l’utilisation des acides
[16]
nucléiques ; voir également A.2. La durée optimale de la fixation au formol peut varie
...