ISO 13720:1995
(Main)Meat and meat products — Enumeration of Pseudomonas spp.
Meat and meat products — Enumeration of Pseudomonas spp.
Describes a method for the enumeration of Pseudomonas spp. in meat and meat products, including poultry, by means of a colony-count technique after aerobic incubation at 25 °C for 48 h.
Viande et produits à base de viande — Dénombrement de Pseudomonas spp.
General Information
Relations
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INTERNATIONAL IS0
STANDARD
13720
First edition
1995-l 2-l 5
Meat and meat products - Enumeration
of Pseudomonas spp.
Viande et produits ;i base de viande - Dknombrement des Pseudomonas
SPP-
Reference number
IS0 13720:1995(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
OS0 13720:1995(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). .The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 13720 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 6, Meat and
meat products.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1995
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 13720:1995(E)
INTERNATIONAL STANDARD 0 IS0
Meat and meat products - Enumeration of
Pseudomonas spp.
cetrimide, fucidin and cephaloridine (CFC) agar when
1 Scope
the test is carried out in accordance with this Inter-
national Standard.
This International Standard describes a method for the
enumeration of Pseudomonas spp. present in meat
and meat products, including poultry.
4 Principle
2 Normative references
4.1 Inoculation of the surface of a solid selective
culture medium, using duplicate plates, with a speci-
The following standards contain provisions which,
fied quantity of the test sample if the product is liquid,
through reference in this text, constitute provisions
or with a specified quantity of the initial suspension in
of this International Standard. At the time of publi-
the case of other products.
cation, the editions indicated were valid. All standards
are subject to revision, and parties to agreements
Inoculation, under the same conditions, using decimal
based on this International Standard are encouraged
dilutions of the test sample or of the initial suspen-
to investigate the possibility of applying the most re-
sion, with two plates per dilution.
cent editions of the standards indicated below.
Members of IEC and IS0 maintain registers of cur-
rently valid International Standards.
4.2 Aerobic incubation of the plates at 25 “C for
48 h.
IS0 3100-2:1988, Meat and meat products - Samp-
ling and preparation of test samples - Part 2: Prep-
4.3 Calculation of the number of Pseudomonas per
ara tion of test samples for microbiological
millilitre, or per gram, of sample from the number of
examination.
typical and/or atypical colonies obtained on plates at
dilution levels chosen so as to give a significant result,
IS0 6887: 1983, Microbiology - General guidance for
and confirmed by the oxidase test and growth on
the preparation of dilutions for microbiological exam-
Kligler’s agar.
ina tion.
IS0 7218: -l) Microbiology of food and animal feed-
5 Dilution fluid, culture media and
ing stuffs - ’ General rules for microbiological exam-
reagent
ina tions.
5.1 General
3 Definition
For current laboratory practice, see IS0 7218.
For the purposes of this International Standard, the
following definition applies.
5.2 Dilution fluid
3.1 Pseudomonas: Bacteria of the genus of
Pseudomonas which at 25 “C form colonies in See IS0 6887.
1) To be published. (Revision of IS0 7218:1985)
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0 IS0
IS0 13720:1995(E)
5.3.2.2 Fucidin solution: Solution B
5.3 Cetrimide, fucidin and cephaloridine (CFC)
agar [II
5.3.2.2.1 Composition
5.3.1 Basic medium
Fucidin (C,, H,,NaO,) 0’1 g
100 ml
Water
b
5.3.1 .I Composition
5.3.2.2.2 Preparation
X0 g
Gelatin peptone
10’0 g Dissolve the fucidin in the water.
Casein hydrolysate
10’0 g
Potassium sulfate &SO,)
Sterilize by filtration.
Magnesium chloride (MgCI,) 1,4 g
12,0 g to 18,O g 1)
Agar
5.3.2.3 Cephaloridine solution: Solution C
1 000 ml
Water
5.3.2.3.1 Composition
1) Depending on the gel strength of the agar.
I
Cephaloridine (C,9H,7N304S2)
0’1 g
100 ml
Water
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete
5.3.2.3.2 Preparation
medium in the water by boiling.
Dissolve the cephaloridine in the water.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
it is 7’2 + 0’2 at 25 “C.
Sterilize by filtration.
Dispense the medium in quantities of 100 ml to flasks
5.3.3 Complete medium
or bottles of appropriate capacity.
Sterilize the medium for 15 min in the autoclave (6.1)
5.3.3.1 Composition
set at 121 “C.
Basic medium 100 ml
Solution A I ml
5.3.2 Inhibitor solutions
Solution B 1 ml
Do not keep solutions for more than 7 days in the
Solution C 5 ml
refrigerator.
5.3.3.2 Preparation
5.3.2.1 Cetrimide solution: Solution A
Under aseptic conditions, add the inhibitor solutions
to the basic medium, melted and maintained at
5.3.2.1 .I Composition
47 “C, and mix carefully.
Cetrimidel) 0’1 g
5.3.4 Preparation of CFC agar plates
100 ml
Water
Pour approximately 15 ml of the complete medium
chiefly of tetradecyl-
Mixture consisting
1)
into sterile Petri dishes (6.9). Leave to set.
trimethylammonium bromide together with smaller
amounts of dodecyltrimethylammonium bromide and
Immediately before use, dry the agar plates, prefer-
cetrimonium bromide
ably with the lids removed and with the agar surfaces
facing downwards, in the oven (6.2) set at a tem-
perature between 35 “C and 55 “C, until the droplets
5.3.2.1.2 Preparation
have disappeared from the surface of the medium.
Do not dry them any further. The agar plates can also
Dissolve the cetrimide in the water.
be dried in a laminar-flow safety cabinet for 30 min
with half-open lids, or overnight with the lids in place.
Sterilize by filtration.
---------------------- Page: 4 ----------------------
5.5 Kligler’s agar
If prepared in advance, the undried agar plates shall
not be kept for longer than 1 month at 0 “C to 5 “C.
5.5.1 Composition
Beef extract
3,O g
Yeast extract
3,O g
Pancreatic casein peptone
2ao g
5.4 Nutrient agar
Sodium chloride (NaCI)
510 g
Lactose
10’0 g
Glucose
LO g
Ammonium iron sulfate hexahydrate
0,5 g
[(NH&SO,-FeS04-6H20]
5.4.1 Composition
Sodium thiosulfate pentahydrate
015 g
(Na,S,O,.5H,O)
Meat extract 3’0 g
Phenol red 0,025 g
Peptone 5,O g
Agar 12,0 g to 18,0 g 1)
580 9
Sodium chloride (NaCI)
1 000 ml
Water
12,0 g to 18,0 g 1)
Agar
I) Depending on the gel strength of the agar.
I 000 ml
Water
1) Depending on the gel strength of the agar.
I
5.5.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete
medium in the water by boiling.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
5.4.2 Preparation
it is 7’4 + 0,2 at 25 “C.
-
Dissolve the dehydrated components or the dehy- Dispense the medium in 10 ml amounts into test
drated complete medium in the water by boiling.
tubes (6.7).
Sterilize for 15 min in the autoclave (6.1) set at
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
121 “C.
it is 7,O + 0’2 at 25 “C.
-
Leave to set in a tilted position so as to obtain a butt
Dispense the culture medium into tubes or bottles of
about 2,5 cm deep.
capacity not more than 500 ml.
CAUTION - Do not prepare this medium more than
Sterilize for 20 min in the autoclave (6.1) set at
7 or 8 days before use. Otherwise it shall be melted
121 “C.
and reactivated in a boiling water bath, then allowed
to resolidify in the proper position.
5.6 Reagent for the detection of oxidase
5.4.3 Preparation of nutrient agar plates
5.6.1 Composition
Transfer portions of about 15 ml of the recently pre-
N, N,N’,N’- Tetramethyl-pphenylenediamine
pared culture medium to Petri dishes of diameter
1’0 g
dihydrochloride
90 mm (6.9) and allow to solidify.
Water 100 ml
Immediately before use, dry the agar plates, as de-
scribed in 5.3.4
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13720
Première édition
1995-I 2-l 5
Viande et produits à base de viande -
Dénombrement des Pseudomonas spp.
- Enumeration of Pseudomonas spp.
Meat and meat products
Numéro de référence
ISO 13720: 1995(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 13720:1995(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 13720 a été élaborée par le comité technique
lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 6, Viande et
produits à base de viande.
L .‘annexe A de la présen te Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’informati on.
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE 0 BO ISO 13720:1995(F)
Viande et produits à base de viande - Dénombrement
des Pseudomonas spp.
3.1 Pseudomonas: Bactéries du
genre
1 Domaine d’application
Pseudomonas, qui, à 25 “C, forment des colonies
dans un milieu gélosé à la cétrimide, fucidine et à la
La présente Norme internationale décrit une méthode
céphaloridine (CFC) lorsque l’essai est effectué
pour le dénombrement des Pseudomonas spp. pré-
conformément à la méthode prescrite dans la pré-
sents dans la viande et les produits à base de viande,
sente Norme internationale.
et les volailles.
2 Références normatives
4 Principe
Les normes suivantes contiennent des dispositions
4.1 Ensemencement en surface d’un milieu sélectif
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
solide, coulé dans deux séries de boîtes, avec une
tuent des dispositions valables pour la présente
quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le
Norme internationale. Au moment de la publication,
produit concerné est liquide, ou de la suspension
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
mère dans le cas d’autres produits.
norme est sujette à révision et les parties prenantes
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
Dans les mêmes conditions, ensemencement des di-
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
lutions décimales obtenues à partir de l’échantillon
quer les éditions les plus récentes des normes
pour essai ou de la suspension mère, à raison de deux
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
boîtes par dilution.
possèdent le registre des Normes internationales en
vigueur à un moment donné.
4.2 Incubation aérobie des boîtes à 25 “C pendant
48 h.
ISO 31 OO-2:1988, Viandes et produits à base de
viande - Échantillonnage et préparation des échan-
tillons pour essai - Partie 2: Préparation des échan-
4.3 Calcul du nombre de Pseudomonas par millilitre
tillons pour essai en vue de l’examen
ou par gramme d’échantillon, à partir du nombre de
microbiologique.
colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques
obtenues dans des boîtes choisies aux niveaux de di-
ISO 6887: 1983, Microbiologie - Directives générales
lution donnant un résultat significatif, et confirmées
pour la préparation des dilutions en vue de l’examen
par la recherche de l’oxydase et par le développement
microbiologique.
sur la gélose de Kligler.
ISO 7218: -i)l Microbiologie des aliments - Règles
générales pour les examens microbiologiques.
5 Diluant, milieu de culture et réactif
3 Définition
5.1 Généralités
Pour les besoins de la présente Norme internationale, Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
la définition suivante s’applique. I’ISO 7218.
1) À publier. (Révision de I’ISO 7218:1985)
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 13720:1995(F)
5.3.2.2 Solution de fucidine: solution B
5.2 Diluant
Voir NS0 6887.
5.3.2.2.1 Composition
5.3 Milieu gélosé à la cétrimide, fucidine et à la
Fucidine (C3, H,,Na06)
QI g
céphaloridine (CFC) [Il
Eau 100 ml
5.3.1 Milieu de base
5.3.2.2.2 Préparation
5.3.1 .l Composition
Dissoudre la fucidine dans l’eau.
Peptone de gélatine
X0 g
Stériliser par filtration.
Hydrolysat de caséine lOtO g
5.3.2.3 Solution de céphaloridine: solution C
Sulfate de potassium (K+O,)
lO,O g
Chlorure de magnésium (Mg&) 14 g
5.3.2.3.1 Composition
12,O g à 18,0 g 1)
Agar-agar
1 000 ml
Eau
Céphaloridine (C,SH,,NsO,S,)
QI g
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Eau 100 ml
5.3.1.2 Préparation
5.3.2.3.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet dés-
Dissoudre la céphaloridine dans l’eau.
hydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Stériliser par filtration.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,2 & 0,2 à 25 “C.
5.3.3 Milieu complet
Répartir le milieu par quantités de 100 ml dans des
5.3.3.1 Composition
flacons de capacité appropriée.
Stériliser le milieu à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C
Milieu de base
100 ml
pendant 15 min.
Solution A
1 ml
Solution 6 1 ml
5.3.2 Solutions d’inhibiteur
Solution C 5 ml
Ne pas conserver les solutions plus de 7 jours au ré-
frigérateur.
5.3.3.2 Préparation
5.3.2.1 Solution de cétrimide: solution A
Dans des conditions aseptiques, ajouter les solutions
d’inhibiteur au milieu de base fondu et maintenu à
5.3.2.1.1 Composition
47 “C et mélanger soigneusement.
Cétrimidel)
OfI g
5.3.4 Préparation des boîtes de gélose CFC
Eau 100 ml
Répartir le milieu complet par quantités d’environ
15 ml dans des boîtes de Petri stériles (6.9). Laisser
1) Mélange consistant principalement en bromure de
tétradécyltriméthylammonium et de petites quantités de
se solidifier.
bromure de dodécyltriméthylammonium et de bromure
de cétrimonium. Immédiatement avant l’emploi, sécher les boîtes de
milieu gélosé, de préférence avec le couvercle enlevé
et avec la surface de la gélose tournée vers le bas, à
5.3.2.1.2 Préparation
l’étuve (6.2) réglée entre 35 “C et 55 “C, jusqu’à dis-
parition des gouttelettes à la surface du milieu. Ne pas
Dissoudre la cétrimide dans l’eau.
les sécher davantage. Le séchage des boîtes conte-
Stériliser par filtration. nant le milieu de culture gélosé peut aussi être réalisé
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 13720:1995(F)
0 ISO
5.5 Milieu de Kligler
sous hotte à flux laminaire pendant 30 min avec cou-
vercle entrouvert, ou toute une nuit avec couvercle
en place.
5.5.1 Composition
Si elles ont été préparées à l’avance, les boîtes de
Extrait de viande de boeuf
3,O g
milieu gélosé non séchées ne doivent pas être
Extrait de levure
310 g
conserw Ses plus d’l mois entre 0 “C et 5 “C.
Peptone pancréatique de caséine
mo g
Chlorure de sodium (NaCI)
5,O g
Lactose
IQO g
Glucose
18 g
5.4 Gé ilose nutritive
Sulfate de fer(II) ammoniacal hexahydraté
0,5 g
[(NH,),SO,,FeSO,,6H,O]
Thiosulfate de sodium pentahydraté
0,5 g
(Na,S,0,,5H,O)
5.4.1 Composition
Rouge de phénol 0,025 g
Agar-agar 12,O g à 18,O g 1)
Extrait de viande 3,O g
Eau 1 000 ml
Peptone 510 g
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Chlorure de sodium (NaCI) 5,O g
12,0 g à 18,O g 1)
Agar-agar
1 000 ml
Eau
5.5.2 Préparation
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Dissoudre les composants ou le milieu complet dés-
hydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,4 + 0,2 à 25 “C.
-
5.4.2 Préparation
Répartir le milieu par quantités de 10 ml dans des tu-
bes (6.7).
Dissoudre les composants déshydratés ou le milieu
complet déshydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C pendant
15 min.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,0 + 0,2 à 25 “C.
-
Laisser reposer en position inclinée de façon à obtenir
un culot d’environ 2,5 cm de profondeur.
Répartir le milieu de culture dans des tubes ou des
flacons de 500 ml de capacité maximale.
ATTENTION - Ce milieu ne doit pas avoir été pré-
paré plus de 7 à 8 jours avant emploi. Sinon, il doit
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C pendant
être fondu et régénéré dans un bain d’eau bouillante,
20 min.
puis solidifié à nouveau en bonne position.
5.6 Réactif pour la recherche de l’oxydase
Préparation des boîtes de gélose nutritive
5.4.3
5.6.1 Composition
Répartir le milieu récemment préparé, par quantités
d’environ 15 ml, dans des boîtes de Petri de 90 mm
Dichlorhydrate de N, N,N’,N’
de diamètre (6.9) et laisser se solidifier. tétraméthyl-p-phénylènediamine
LO g
Eau 100 ml
Immédiatement avant l’emploi, sécher les boîtes de
m
...
NORME
ISO
INTERNATIONALE
13720
Première édition
1995-I 2-l 5
Viande et produits à base de viande -
Dénombrement des Pseudomonas spp.
- Enumeration of Pseudomonas spp.
Meat and meat products
Numéro de référence
ISO 13720: 1995(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 13720:1995(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 13720 a été élaborée par le comité technique
lSO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 6, Viande et
produits à base de viande.
L .‘annexe A de la présen te Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’informati on.
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE 0 BO ISO 13720:1995(F)
Viande et produits à base de viande - Dénombrement
des Pseudomonas spp.
3.1 Pseudomonas: Bactéries du
genre
1 Domaine d’application
Pseudomonas, qui, à 25 “C, forment des colonies
dans un milieu gélosé à la cétrimide, fucidine et à la
La présente Norme internationale décrit une méthode
céphaloridine (CFC) lorsque l’essai est effectué
pour le dénombrement des Pseudomonas spp. pré-
conformément à la méthode prescrite dans la pré-
sents dans la viande et les produits à base de viande,
sente Norme internationale.
et les volailles.
2 Références normatives
4 Principe
Les normes suivantes contiennent des dispositions
4.1 Ensemencement en surface d’un milieu sélectif
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
solide, coulé dans deux séries de boîtes, avec une
tuent des dispositions valables pour la présente
quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le
Norme internationale. Au moment de la publication,
produit concerné est liquide, ou de la suspension
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
mère dans le cas d’autres produits.
norme est sujette à révision et les parties prenantes
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
Dans les mêmes conditions, ensemencement des di-
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
lutions décimales obtenues à partir de l’échantillon
quer les éditions les plus récentes des normes
pour essai ou de la suspension mère, à raison de deux
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
boîtes par dilution.
possèdent le registre des Normes internationales en
vigueur à un moment donné.
4.2 Incubation aérobie des boîtes à 25 “C pendant
48 h.
ISO 31 OO-2:1988, Viandes et produits à base de
viande - Échantillonnage et préparation des échan-
tillons pour essai - Partie 2: Préparation des échan-
4.3 Calcul du nombre de Pseudomonas par millilitre
tillons pour essai en vue de l’examen
ou par gramme d’échantillon, à partir du nombre de
microbiologique.
colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques
obtenues dans des boîtes choisies aux niveaux de di-
ISO 6887: 1983, Microbiologie - Directives générales
lution donnant un résultat significatif, et confirmées
pour la préparation des dilutions en vue de l’examen
par la recherche de l’oxydase et par le développement
microbiologique.
sur la gélose de Kligler.
ISO 7218: -i)l Microbiologie des aliments - Règles
générales pour les examens microbiologiques.
5 Diluant, milieu de culture et réactif
3 Définition
5.1 Généralités
Pour les besoins de la présente Norme internationale, Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
la définition suivante s’applique. I’ISO 7218.
1) À publier. (Révision de I’ISO 7218:1985)
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ISO 13720:1995(F)
5.3.2.2 Solution de fucidine: solution B
5.2 Diluant
Voir NS0 6887.
5.3.2.2.1 Composition
5.3 Milieu gélosé à la cétrimide, fucidine et à la
Fucidine (C3, H,,Na06)
QI g
céphaloridine (CFC) [Il
Eau 100 ml
5.3.1 Milieu de base
5.3.2.2.2 Préparation
5.3.1 .l Composition
Dissoudre la fucidine dans l’eau.
Peptone de gélatine
X0 g
Stériliser par filtration.
Hydrolysat de caséine lOtO g
5.3.2.3 Solution de céphaloridine: solution C
Sulfate de potassium (K+O,)
lO,O g
Chlorure de magnésium (Mg&) 14 g
5.3.2.3.1 Composition
12,O g à 18,0 g 1)
Agar-agar
1 000 ml
Eau
Céphaloridine (C,SH,,NsO,S,)
QI g
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Eau 100 ml
5.3.1.2 Préparation
5.3.2.3.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet dés-
Dissoudre la céphaloridine dans l’eau.
hydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Stériliser par filtration.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,2 & 0,2 à 25 “C.
5.3.3 Milieu complet
Répartir le milieu par quantités de 100 ml dans des
5.3.3.1 Composition
flacons de capacité appropriée.
Stériliser le milieu à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C
Milieu de base
100 ml
pendant 15 min.
Solution A
1 ml
Solution 6 1 ml
5.3.2 Solutions d’inhibiteur
Solution C 5 ml
Ne pas conserver les solutions plus de 7 jours au ré-
frigérateur.
5.3.3.2 Préparation
5.3.2.1 Solution de cétrimide: solution A
Dans des conditions aseptiques, ajouter les solutions
d’inhibiteur au milieu de base fondu et maintenu à
5.3.2.1.1 Composition
47 “C et mélanger soigneusement.
Cétrimidel)
OfI g
5.3.4 Préparation des boîtes de gélose CFC
Eau 100 ml
Répartir le milieu complet par quantités d’environ
15 ml dans des boîtes de Petri stériles (6.9). Laisser
1) Mélange consistant principalement en bromure de
tétradécyltriméthylammonium et de petites quantités de
se solidifier.
bromure de dodécyltriméthylammonium et de bromure
de cétrimonium. Immédiatement avant l’emploi, sécher les boîtes de
milieu gélosé, de préférence avec le couvercle enlevé
et avec la surface de la gélose tournée vers le bas, à
5.3.2.1.2 Préparation
l’étuve (6.2) réglée entre 35 “C et 55 “C, jusqu’à dis-
parition des gouttelettes à la surface du milieu. Ne pas
Dissoudre la cétrimide dans l’eau.
les sécher davantage. Le séchage des boîtes conte-
Stériliser par filtration. nant le milieu de culture gélosé peut aussi être réalisé
2
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ISO 13720:1995(F)
0 ISO
5.5 Milieu de Kligler
sous hotte à flux laminaire pendant 30 min avec cou-
vercle entrouvert, ou toute une nuit avec couvercle
en place.
5.5.1 Composition
Si elles ont été préparées à l’avance, les boîtes de
Extrait de viande de boeuf
3,O g
milieu gélosé non séchées ne doivent pas être
Extrait de levure
310 g
conserw Ses plus d’l mois entre 0 “C et 5 “C.
Peptone pancréatique de caséine
mo g
Chlorure de sodium (NaCI)
5,O g
Lactose
IQO g
Glucose
18 g
5.4 Gé ilose nutritive
Sulfate de fer(II) ammoniacal hexahydraté
0,5 g
[(NH,),SO,,FeSO,,6H,O]
Thiosulfate de sodium pentahydraté
0,5 g
(Na,S,0,,5H,O)
5.4.1 Composition
Rouge de phénol 0,025 g
Agar-agar 12,O g à 18,O g 1)
Extrait de viande 3,O g
Eau 1 000 ml
Peptone 510 g
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Chlorure de sodium (NaCI) 5,O g
12,0 g à 18,O g 1)
Agar-agar
1 000 ml
Eau
5.5.2 Préparation
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Dissoudre les composants ou le milieu complet dés-
hydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,4 + 0,2 à 25 “C.
-
5.4.2 Préparation
Répartir le milieu par quantités de 10 ml dans des tu-
bes (6.7).
Dissoudre les composants déshydratés ou le milieu
complet déshydraté dans l’eau, en portant à ébullition.
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C pendant
15 min.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérili-
sation il soit de 7,0 + 0,2 à 25 “C.
-
Laisser reposer en position inclinée de façon à obtenir
un culot d’environ 2,5 cm de profondeur.
Répartir le milieu de culture dans des tubes ou des
flacons de 500 ml de capacité maximale.
ATTENTION - Ce milieu ne doit pas avoir été pré-
paré plus de 7 à 8 jours avant emploi. Sinon, il doit
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 “C pendant
être fondu et régénéré dans un bain d’eau bouillante,
20 min.
puis solidifié à nouveau en bonne position.
5.6 Réactif pour la recherche de l’oxydase
Préparation des boîtes de gélose nutritive
5.4.3
5.6.1 Composition
Répartir le milieu récemment préparé, par quantités
d’environ 15 ml, dans des boîtes de Petri de 90 mm
Dichlorhydrate de N, N,N’,N’
de diamètre (6.9) et laisser se solidifier. tétraméthyl-p-phénylènediamine
LO g
Eau 100 ml
Immédiatement avant l’emploi, sécher les boîtes de
m
...
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