ISO/TS 22117:2010

Microbiology of food and animal feeding stuffs - Specific requirements and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison

ISO/TS 22117:2010 gives requirements and guidance for the organization of proficiency testing schemes for microbiological examinations of: a) food and beverages; b) animal feeding stuffs; c) food production environments and food handling; d) primary production stages. ISO/TS 22117:2010 is also potentially applicable to the microbiological examination of water where water is either used in food production or is regarded as a food in national legislation. ISO/TS 22117:2010 relates to the technical organization and the implementation of proficiency testing schemes, as well as the statistical treatment of the results of microbiological examinations. ISO/TS 22117:2010 is designed for use with ISO/IEC 17043 and ISO 13528, and deals only with areas where specific or additional details are necessary for proficiency testing schemes dealing with microbiological analyses for the areas specified in the first paragraph.

Microbiologie des aliments — Exigences spécifiques et lignes directrices pour les essais d'aptitude par comparaison interlaboratoires

L'ISO/TS 22117:2010 fournit des exigences et des recommandations relatives à l'organisation de programmes d'essai d'aptitude pour les examens microbiologiques concernant: a) les aliments et les boissons; b) les aliments pour animaux; c) les environnements de production des aliments et la manipulation de ces aliments; d) les étapes de production primaire. Éventuellement, l'ISO/TS 22117:2010 peut également s'appliquer à l'examen microbiologique de l'eau si celle-ci est utilisée dans la production alimentaire ou si la législation nationale la considère comme un aliment. L'ISO/TS 22117:2010 concerne l'organisation technique et la mise en œuvre de programmes d'essai d'aptitude et également le traitement statistique des résultats des examens microbiologiques. L'ISO/TS 22117:2010 est destinée à être utilisée avec l'ISO/CEI 17043 et l'ISO 13528 et ne traite que des domaines où des détails spécifiques ou supplémentaires sont nécessaires pour les programmes d'essai d'aptitude traitant des analyses microbiologiques pour les domaines spécifiés dans le premier alinéa.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 24-Oct-2010
• Withdrawal Date: 24-Oct-2010
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Start Date: 14-Feb-2019
• Completion Date: 13-Dec-2025

Relations

• Consolidates: ISO 15675:2001 - Cardiovascular implants and artificial organs - Cardiopulmonary bypass systems - Arterial line blood filters
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revised: ISO 22117:2019 - Microbiology of the food chain - Specific requirements and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison
• Effective Date: 26-Jul-2014

Standards Content (Sample)

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 22117
First edition
2010-11-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Specific requirements and
guidance for proficiency testing by
interlaboratory comparison
Microbiologie des aliments — Exigences spécifiques et lignes
directrices pour les essais d'aptitude par comparaison interlaboratoires

Reference number
©
ISO 2010
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

©  ISO 2010
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2010 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .2
4 Scheme design and purpose .2
4.1 General .2
4.2 Scheme objectives .2
4.3 Laboratory requirements for schemes.3
4.4 Choice of test matrices.3
4.5 Information on test methods used by the PT provider.3
4.6 Statistical design.3
5 Technical requirements and guidance for sample design and content .4
5.1 Target organisms level .4
5.2 Sources, characterization and traceability of organisms .4
5.3 Background and competitive flora .5
5.4 Matrix selection and effects .5
6 Sample verification by the provider .5
6.1 General .5
6.2 Sample homogeneity testing — General considerations.5
6.3 Homogeneity testing for quantitative (enumeration) samples .6
6.4 Homogeneity testing for qualitative methods .7
6.5 Stability testing by the provider.7
7 Sample handling.8
7.1 General .8
7.2 Instructions to participants .8
8 Performance evaluations.9
8.1 General .9
8.2 Preliminary considerations .9
8.3 Quantitative methods.9
8.4 Assessment of qualitative methods.16
Annex A (informative) Example of details to be included in a PT scheme plan.19
Annex B (informative) Methods of testing for variation between portions of test materials .21
Annex C (informative) A practical method to assess long-term performance of participants in PT
schemes using enumeration methods.24
Annex D (informative) Example of a safety data sheet .26
Bibliography.28

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
technical committee may decide to publish other types of document:
⎯ an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in
an ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members
of the parent committee casting a vote;
⎯ ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting
a vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed after three years in order to decide whether it will be confirmed for a
further three years, revised to become an International Standard, or withdrawn. If the ISO/PAS or ISO/TS is
confirmed, it is reviewed again after a further three years, at which time it must either be transformed into an
International Standard or be withdrawn.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 22117 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
iv © ISO 2010 – All rights reserved

Introduction
General requirements for organization of proficiency testing (PT) schemes of all types are given through
ISO/CASCO (Committee on Conformity Assessment) in ISO/IEC 17043; additionally, general guidance is
available from the International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC, see Reference [9]) and the
International Laboratory Accreditation Cooperation (ILAC, see Reference [8]). However, these
recommendations may not be directly applicable to all cases and should be interpreted specifically for different
laboratory sectors where PT schemes are organized. For this reason, a document is needed to establish the
criteria which a provider (and associated collaborators) of PT schemes shall meet in order to be recognized as
competent to provide PT schemes for microbiological analysis. This applies particularly to the specific
technical requirements necessary to deal with living microorganisms, such as sample homogeneity and
stability, as well as with the interpretation of presence/absence (detection) tests which is not covered by an
existing document.
Proficiency testing schemes for microbiology laboratories are mainly used to evaluate performance,
particularly trueness (bias) and in some cases precision, of food microbiological examinations in specific
laboratories.
Additionally, data from such PT schemes can be used:
a) to provide information to the organizations responsible for laboratory acceptance within an official control
framework and to allow continuous monitoring;
b) to aid laboratory accreditation in a general framework of quality management;
c) to inform those responsible for quality in the participating laboratories as part of the educative elements of
external quality assessment of trueness (bias).
Information from PT schemes may also be used for:
1) identification of the possible sources of errors, particularly the bias component of uncertainty, to
improve performance;
[6]
2) estimation of measurement uncertainty for enumeration methods (see ISO/TS 19036 ) and limits of
detection for presence/absence methods;
3) demonstration of staff competence to perform a specific microbiological examination;
4) evaluation or validation of a given method by the study of trueness and precision;
5) identification of variability between individual laboratories;
6) assignment of a “target” value for an analyte in a material in order to establish a reference material.
However, these aspects are not specifically covered in this Technical Specification.
Proficiency testing schemes are therefore organized to meet certain criteria and the testing programme
(frequency, number of samples, number of repeats, etc.) shall meet the requirements of the type of method
used and commodity analysed, to achieve the level of control desired by all parties involved.

TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 22117:2010(E)

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Specific
requirements and guidance for proficiency testing by
interlaboratory comparison
1 Scope
This Technical Specification gives requirements and guidance for the organization of proficiency testing
schemes for microbiological examinations of:
a) food and beverages;
b) animal feeding stuffs;
c) food production environments and food handling;
d) primary production stages.
This Technical Specification is also potentially applicable to the microbiological examination of water where
water is either used in food production or is regarded as a food in national legislation.
This Technical Specification relates to the technical organization and the implementation of proficiency testing
schemes, as well as the statistical treatment of the results of microbiological examinations.
This Technical Specification is designed for use with ISO/IEC 17043 and ISO 13528, and deals only with
areas where specific or additional details are necessary for proficiency testing schemes dealing with
microbiological analyses for the areas specified in the first paragraph.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 3534-1, Statistics — Vocabulary and symbols — Part 1: General statistical terms and terms used in
probability
ISO 3534-2, Statistics — Vocabulary and symbols — Part 2: Applied statistics
ISO 5725-1, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General
principles and definitions
ISO 5725-5, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 5: Alternative
methods for the determination of the precision of a standard measurement method
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 13528, Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons
ISO/IEC 17043:2010, Conformity assessment — General requirements for proficiency testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 3534-1, ISO 3534-2, ISO 5725-1,
ISO 13528, ISO/IEC 17043 and the following apply.
NOTE 1 Some terms used in the text have different meanings in microbiology and statistics, e.g. homogeneity,
heterogeneity, test, sample, distribution. The context clarifies whether the terms refer to microbiological test samples or
datasets used for statistical analysis.
NOTE 2 Some providers of proficiency testing use the term external quality assessment (EQA) to indicate schemes
with broader application to all areas of operation of a laboratory and a particular educational remit. The requirements of
this Technical Specification cover those EQA activities that meet the definition of proficiency testing.
3.1
target organism
microorganism which is the designated analyte for a proficiency testing sample
3.2
background flora
microorganisms included in a proficiency testing sample which can be introduced to compete with or mimic
the target microorganism
3.3
reference strain
microorganism obtained directly from an official culture collection and defined to at least the genus and
species level, catalogued and described according to its characteristics and preferably originating from food or
water as applicable
[3]
[ISO/TS 11133-1:2009 , 3.3.2]
3.4
recovery percentage
proportion of the assigned value of the target organism recovered by the participant
NOTE 1 The recovery percentage is calculated by multiplying by 100 the number of recovered colony forming units
(cfu) per volume or per mass.
NOTE 2 The recovery percentage can be significantly below 100 % when competitive flora and matrix effects are
present in a proficiency testing sample.
4 Scheme design and purpose
4.1 General
General requirements for designing PT schemes are given in ISO/IEC 17043; in this clause, only areas
requiring special consideration for microbiological PT schemes are discussed in the context of these general
principles.
4.2 Scheme objectives
The primary objective of any PT scheme is to provide information to enable laboratories to have confidence in
the reliability of their results.
The detailed requirements for a documented plan of a PT scheme are covered in ISO/IEC 17043:2010,
4.4.1.3, and the plan should also include reference to any relevant legislation. An example of a plan for a
typical microbiology food examination scheme is given in Annex A.
2 © ISO 2010 – All rights reserved

The studies required to establish a new PT scheme are extensive and shall be clearly defined in the scheme
objectives. These should include, as a minimum, the requirements listed in Clause 5. Requirements for
checking individual rounds of testing, including homogeneity and stability testing, should also be established in
the scheme design and be appropriate for the scheme objectives.
4.3 Laboratory requirements for schemes
General requirements for appropriate laboratory facilities to handle all aspects of PT schemes are given in
ISO/IEC 17043:2010, 4.3.1, and safety requirements are covered in ISO/IEC 17043:2010, 4.6.2.4.
For microbiology schemes, providers shall have a documented policy to bring hazards to the attention of
participants and ensure that relevant safety advice is given (see Clause 7). For example, food microbiology
laboratories shall have facilities for dealing with microorganisms of risk categories 1, 2, and 3, as appropriate
(see ISO 7218:2007, 3.2).
4.4 Choice of test matrices
General requirements to document test matrices in the scheme plan are given in ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3,
and choice of the matrices to reflect routine sample types in ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3.
The reasons for the choice of matrix type should be stated, e.g. to provide levels of sample stability and
homogeneity that are fit for the intended purpose of the scheme.
The description of the test items shall specify the sample matrix (natural or simulated); whether artificially or
naturally contaminated; the source and country of origin to comply with international transport regulations; and
any method of preservation used, e.g. freeze-dried, air dried.
4.5 Information on test methods used by the PT provider
The general requirements for methods to be used by the PT provider are given in ISO/IEC 17043:2010,
4.4.1.3.
If the scheme is targeted at one or more tests specified in or required by legislation, the routine quality control
tests on the scheme samples (e.g. homogeneity and stability) shall be undertaken in accordance with the
methods stipulated in that legislation and this shall be stated (ISO/IEC 17043:2010, 4.5.1).
Participants shall be encouraged to use their routine methods but, where they are undertaking tests in
accordance with legislation, some degree of guidance shall be given, e.g. reference to ISO methods,
legislative texts, or peer-reviewed publications (ISO/IEC 17043:2010, 4.5.1).
4.6 Statistical design
General requirements for statistical design are given in ISO/IEC 17043:2010, 4.4.4.
An outline of the statistical design for PT schemes for microbiology shall indicate that the statistical tests to be
used are influenced by the level of homogeneity of the test material which, in turn, is influenced by the random
variation in distribution of the microorganisms.
Except for low numbers, a log-normal distribution is usually expected in quantitative testing data and suitable
statistical analysis methods shall be used for such data [ISO/IEC 17043:2010, B.3.1.4 d)]. Where low numbers
are required in quantitative test items (e.g. water or beverage examination), a random Poisson model is more
applicable, as the variation in numbers of organisms between different units of material becomes relatively
large and can mask variations in performance.
Sample homogeneity shall normally be such that it does not significantly influence the observed variation
between laboratories.
Semi-quantitative enumeration tests and qualitative detection tests require different statistical methods to
analyse data and these are discussed further in 8.3 and 8.4.
The scheme plan shall clarify distinctions between performance testing for methods for detection and those for
enumeration of target microorganisms.
5 Technical requirements and guidance for sample design and content
5.1 Target organisms level
The target organisms shall be provided at levels suitable to show that examination methods are fit-for-purpose
and to reflect levels likely to be found in the sample matrices being tested (ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3).
Where pathogenic bacteria are the target, the levels should also take account of and reflect the levels likely to
cause hazard to human health and, if appropriate, any limits specified in microbiological criteria.
NOTE The level causing hazard to human health is not always known with accuracy and depends on the
susceptibility of individuals. The aim of examination for pathogens is to prevent illness, and also to detect pathogens at a
very low level, before those pathogens can grow to a higher level.
For quantitative (enumeration) methods, the target level shall be appropriate for the levels routinely found in
and any statutory specifications applicable to the sample matrices used. The target level should also
sometimes be used near the limit of quantification of routine methods to challenge the performance of the
participants across the applicable range of the method. However, samples should not be dispatched with
organism levels so low that, when using routine dilutions, the expected mean number of organisms in a
sample is fewer than 10 colonies per plate.
For qualitative (detection) methods, the target organisms shall generally be required to be at a sufficiently low
level to provide a valid challenge to the methodology and to contribute data for validation exercises to
establish or verify limits of detection for individual participant laboratories.
5.2 Sources, characterization and traceability of organisms
The characteristics of the target organisms shall be established before use in order reliably to assess
performance, especially in schemes where participants are permitted to use different methodologies.
Both typical and atypical strains should be considered and included in the scheme programme to challenge
laboratory performance.
Recognized reference strains from international collections should be used where they are most suitable for
the scheme purpose; however, laboratory isolates or “wild” strains isolated from the matrices used by PT
schemes are useful to reflect routine situations more closely. Where these are used, they should be
sufficiently characterized according to the appropriate International Standard reference methods, to ensure
that any atypical reactions are apparent to the organizers before use.
In all cases, the organisms used in PT scheme samples should be traceable to the relevant culture collection
or to valid characterization data held by the organizers.
Under certain circumstances, it is not possible to use reference cultures or materials from internationally
recognized collections or cultured laboratory strains, e.g. for PT schemes for non-cultivable organisms such
as human noroviruses. In such circumstances, clinical material can be used to contaminate a test matrix
artificially, either through immersion, spraying or, in the case of bivalve shellfish, through bioaccumulation. The
method of artificial contamination should be as close to the “natural” route of contamination as possible.
Extreme care should be used when manipulating human clinical material, faecal or vomitus samples and
these should be screened for additional pathogens before use. Target viruses should be fully characterized to
strain level by conventional polymerase chain reaction followed by sequencing.
4 © ISO 2010 – All rights reserved

5.3 Background and competitive flora
The total flora of the samples, either naturally or artificially contaminated, shall be chosen to assess the ability
of participants to detect and/or enumerate target organisms in the presence of non-target background flora
(typical of the sample matrix) and presumptive target organisms which, without appropriate confirmation tests,
can lead to false positive results.
Any strains used to simulate background flora shall meet the requirements of 5.2 for characterization and
traceability. In naturally contaminated samples, the effects of any background flora on the target organisms
shall be determined.
5.4 Matrix selection and effects
All matrices shall be evaluated before use to check for any effects on the target and background floras, e.g.
where the matrices reduce the recovery of spiked organisms.
Participants shall be alerted to the nature of the food matrix where such matrices are known to affect recovery
of microorganisms adversely (e.g. those which bind and retain cells, such as fatty materials) or have
bactericidal or bacteriostatic properties. Suitable and validated preparation procedures shall be included for
the information of participants.
Sample matrices used for microbiology PT schemes are often, but not necessarily, sterilized before use.
Where natural, unsterilized samples are distributed, the organizers shall determine the effect of the
background microflora of the samples.
6 Sample verification by the provider
6.1 General
General requirements for sample verification are given in ISO/IEC 17043 and ISO 13528 (for information, see
also Reference [9]); this clause expands the specific requirements and problems for homogeneity and stability
testing in materials containing living microorganisms.
6.2 Sample homogeneity testing — General considerations
(See also ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 and B.5.)
Proficiency tests may involve the preparation of a bulk test material, which is then subdivided into individual
portions, as similar as possible to each other, for distribution to participants. Alternatively, test portions may be
individually inoculated for distribution.
Whatever preparation method is used, the test material shall be assessed for homogeneity, usually prior to but
also at the time of testing for unstable fresh materials.
A homogeneity test should be performed on each batch of samples, based on relevant statistical principles
(ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.2 and B.5). Such tests are given in ISO 13528 or, as an alternative, Annex B.
It is also necessary to test for homogeneity if materials are to be stored for longer periods of time to ensure
criteria are still met before use. The number of samples to be tested from each batch should also be sufficient
to obtain ongoing information on the homogeneity of the batch; 10 samples (tested in duplicate if required) is
suggested.
A test material which is less than sufficiently homogenous may still be used in a proficiency test round
(ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.1 Note 3), provided suitable statistical principles are used to take account of the
greater variance between samples (see ISO 13528). A statistical plan for heterogeneous materials, including
replicate analysis of several samples (see ISO 5725-5), should be used to minimize the effects of lack of
homogeneity on the evaluation of participant performance.
6.3 Homogeneity testing for quantitative (enumeration) samples
General requirements and procedures for testing homogeneity of quantitative proficiency test materials are
given in ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 and B.5 and ISO 13528.
Materials that show between-unit variation large enough to affect the assessment of laboratory performance
significantly should not be used in interlaboratory studies, unless special requirements and methods of data
analysis apply, e.g. low numbers of microorganisms in drinking water and other samples.
The criterion for “sufficiently homogenous” is defined by the requirements of the interlaboratory comparison
(see ISO 13528 and Annex B). However, in general, a material for which the between-unit standard deviation
(on the appropriately transformed scale) is u 0,3σ , where σ is the target standard deviation used to assess
p p
the performance of laboratories, is considered sufficiently homogenous (see ISO 13528).
Any alternative homogeneity test should meet the following criteria (reproduced from Reference [9]):
a) the probability of rejecting a sufficiently homogenous test material should be u 5 %;
b) the probability of rejecting a test material where between-unit variation is 1,5σ , in which σ is the
p p
acceptable between-laboratory variation (expressed as a target standard deviation), is W 80 %.
An 80 % probability of rejecting a material where between-unit variation is 1,5 σ is based on simulation
p
studies of the duplicate analysis of 10 test units using a method with an analytical standard deviation of 0,5σ
p
(i.e. 0,125 log units) and a critical value for T (see Annex B) that meets criterion a) in the previous paragraph.
It represents what is achievable with a reasonable amount of analytical effort.
Homogeneity tests are based upon estimations of between-unit variance and analytical (repeatability)
variance obtained under repeatability conditions. Suitable methods of testing for such variation are given in
Annex B.
The analytical (repeatability) variance should be estimated from replicate analyses of the initial suspensions
obtained from test portions (References [15][16]). This analytical variance can also be calculated from the
number of counted colonies and the precision of analytical materials in use (Reference [10]).
In microbiology, the between-unit variance shall be estimated under repeatability conditions (in one run). If
that is impossible, the between-unit variance includes the within-laboratory reproducibility and can perhaps
lead to the false rejection of a satisfactory material.
When the number of counted colonies is sufficiently high (more than 35 to 40 colonies per plate), the
analytical standard deviation, σ , generally satisfies
an
σ
an
< 0,5
σ
p
where σ is the target standard deviation, and the test for sufficient homogeneity proposed in Reference [11]
p
should be used (see Annex B). If the number of counted colonies is low (fewer than 35 to 40 colonies per
plate), the T − T test is recommended (see Annex B).
1 2
When replicated test units are provided to participating laboratories, the between-unit variability obtained by
participants should be examined by the provider to assess the homogeneity of the material. Although this
variability includes within-laboratory reproducibility, the higher number of participating laboratories increases
the statistical power of the analysis and can be a good indicator for successive rounds.
When the number of counted colonies is low (say fewer than 20), the analytical (repeatability) variance is high.
In that case, the provider should recommend that participating laboratories replicate enumerations of test
portions to satisfy the condition (see ISO 13528):
6 © ISO 2010 – All rights reserved

σ
r
u 0, 3 σ
p
n
where
σ is the repeatability standard deviation;
r
σ is the target standard deviation;
p
n is the number of replicates.
If that is impossible, the laboratory performance should be assessed cautiously.
Where the PT material contains low numbers of cfu (say fewer than 20), the between unit (i.e. between
replicate samples) variation shall be measured to demonstrate that it does not exceed random (Poisson)
variation in order to provide a meaningful assessment. The index of dispersion test on n samples (where n is a
χ value at 0,05 probability.
minimum of 10) should not exceed the
n−1
6.4 Homogeneity testing for qualitative methods
Similar principles apply to homogeneity testing for qualitative (presence/absence) methods, but special
consideration is required where the level of spike is low (see 8.4).
The homogeneity of qualitative samples may be tested by enumerating the spike. It may also be possible to
determine the contamination level by using a most probable number (MPN) technique. If enumeration is
possible, the homogeneity tests detailed in 6.3 may be used, depending on how the samples are artificially
contaminated and on how the spike is enumerated.
6.5 Stability testing by the provider
6.5.1 General
Samples to be used for proficiency testing shall be stable, at least for the period from preparation (by the
provider) to the date of the study or the end of the time period allowed (see ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3).
If the same type of sample with the same test strain(s) is always used, it is sufficient only to perform a
verification (e.g. by checking after preparation and at the date of the study) on subsequent samples. The
provider should also examine results obtained by the participating laboratories to check the stability of the
material during the period allowed for the study.
6.5.2 Stability during storage conditions
For stable samples which are always stored at low temperatures (e.g. −70 °C, −20 °C, +5 °C), the stability
shall be determined by checking the level of the analyte and the homogeneity of each batch at regular
intervals during storage. The minimum period for stability testing should be the time between preparation of
the materials and the specified date or time period of analysis.
Frequency of testing depends on the information already available for the batch of samples and the total
period of time over which stability information is required. If the total storage time is, for instance, only
two weeks, it may be necessary to test every two days, but if storage is required for one year, it may be
sufficient to test monthly. For large batches of samples, a minimum of three samples should be tested on each
occasion in order to show ongoing stability across the whole batch (ISO 13528:2005, Annex B). Whatever
frequency of testing is used, this shall be justified and validated as acceptable by the scheme organizers.
6.5.3 Stability during transport conditions
In addition to information on stability during storage conditions gathered during validation studies for a new
scheme, it is also important to test the effect of “abuse conditions” on the samples, e.g. long transport times at
elevated temperatures (see ISO/IEC 17043:2010, 4.6.3.2).
A stability test using different temperatures to reflect “worst case” transport conditions and maximum expected
delays, shall be performed initially to test the effect of such abuse on test samples. For example, samples of
one batch are stored at the specified storage temperature (e.g. −20 °C), but also at +5 °C, +15 °C and +25 °C.
Every day, five samples held at each storage temperature are analysed for a total period of one or two weeks.
The design of such stability experiments is variable but should be appropriate to obtain information on the
effect of different storage temperatures on the samples and to establish any upper temperature limit for receipt
by the laboratory. The information obtained can be used to choose the optimal distribution conditions for the
scheme samples, e.g. whether it is necessary to cool the samples during transport using dry ice or ice packs,
or whether ambient distribution is acceptable.
For temperature-critical distributions requiring controlled refrigeration with strict sample acceptance criteria,
such as schemes in support of legislative testing for E.coli in bivalve shellfish, inclusion of individual
temperature loggers in each sample box to record the sample temperature in transit is recommended.
Checking the temperature data may enable the scheme provider to explain anomalous results returned by
participants.
7 Sample handling
7.1 General
Requirements for general sample handling are detailed in ISO/IEC 17043:2010, 4.6.1 and 4.6.2, and only
additional information relevant to microbiological samples is given in this clause.
7.2 Instructions to participants
For each study, each participating laboratory shall receive a clear set of instructions covering:
a) storage conditions for samples of all types, particularly information on the storage temperature, which
should also appear on the outside of the transport packaging;
b) maximum temperature of the samples on receipt at the participant laboratory, if appropriate;
c) instructions on how to handle the samples — if reconstitution, dilution or other processing of the samples
is required, this should be described clearly for each set and type of samples;
d) appropriate safety data sheets, which should be included with each distribution (an example of the detail
required is given in Annex D);
e) other supplementary instructions, such as:
1) the latest dates when the examinations should be performed and results sent to the organizers,
2) the method(s) of examination (prescribed or participant choice, as required),
3) how to report the results to the organizers, particularly the units of measurement,
4) the organizers may request details on materials, methods, incubation conditions, etc., in report
proformas — if this is the case, instructions for completing such proformas should be provided.
8 © ISO 2010 – All rights reserved

8 Performance evaluations
8.1 General
Wherever possible, the statistical principles used to evaluate performance in PT schemes should be based on
those given in standards, such as ISO/IEC 17043:2010, 4.7 and ISO 13528 (for information, see also
Reference [9]), although microbiology PT schemes may adopt procedures which differ from those commonly
used in other sectors if they are appropriate to their particular schemes.
8.2 Preliminary considerations
Proficiency testing involves the regular distribution of test materials to participating laboratories for them to
examine the test materials for specific measurands (in most cases microorganisms). The results of
examination are then compared against those of other participants. Proficiency testing therefore provides an
independent means of testing and comparing individual performance.
Ongoing satisfactory performance in proficiency test rounds can provide reassurance to participants of their
laboratory processes, including methods of examination, analyst training, equipment, reagents, quality control
procedures, interpretation of results, and reporting techniques.
However, unsatisfactory results imply that the performance of the individual participant was weak compared
with the consensus value and this can raise a number of questions. These include: were the test samples all
the same, how did other participants perform, could the methodology have biased results and have the results
been interpreted correctly? The scheme organizers should therefore use suitable systems of performance
evaluation to aid participants in answering such questions.
There are many different ways to interpret data from proficiency testing but methods for interpretation shall be
objective.
The majority of participants taking part in microbiological PT schemes are not familiar with statistics and shall
have confidence that the procedures used by the PT scheme organizers are sound.
The following considerations about the statistical principles applied shall be addressed:
a) validity;
b) explanatory information for participants;
c) reasons for selection;
d) consistency.
Clear and unbiased information shall be provided to participants to allow self-assessment and interpretation of
results and to maximize the benefit from participation.
8.3 Quantitative methods
8.3.1 General
The statistical design for PT schemes for microbiological enumeration methods is influenced by the level of
homogeneity of the test material, which in turn is influenced by the random variation in distribution of
organisms. In addition, there are likely to be substantial differences between the participants in the precision
required or expected of a test.
The choice of statistical method shall take into account the factors outlined in 8.1 and 8.2, together with other
considerations such as the number of participants in a particular scheme. Parameters that contribute to
deciding which statistical tests are to be used for analysing results should be stated. For example, specialized
schemes may have fewer than 30 participants; results from 30 participants may be analysed in a different way
from larger schemes with, for example, more than 100 participants.
The chosen method of statistical analysis shall be appropriate for not only the number of participants
undertaking an examination but also the method used. For example, results for an examination using colony
count methods are analysed in a different way to those where determination of the MPN is required. This is
because the inherent variation in the MPN method tends to be greater than that for colony count methods.
Indeed, different statistical parameters may be needed to assess participants' performance for different tests
within a single scheme (see ISO/IEC 17043:2010, 4.5.2). This shall be stated in the scheme design
documents and generally accepted microbiological criteria shall be referenced in the scheme plan.
Suitable statistical analyses and allocation of scores to participants are covered in ISO/IEC 17043:2010,
Annex B.
8.3.2 Distribution of data
When an enumeration test is repeated several times, under repeatability conditions, the frequency distribution
of the results would be expected to form a bell-shaped curve, called a normal distribution.
Microbiological counts usually follow a log-normal distribution and the data are converted to logarithm to the
base 10 values to produce a normal distribution curve. However, for low bacterial numbers, actual counts may
be used, or a square-root transformation may be applied.

Key
f frequency
μ mean
σ standard deviation
Figure 1 — Diagram of a normal distribution
Although it is the same material under test, the results are not all identical, as numerous small, independent
variations are expected to occur during the different manipulations involved in performing the tests.
10 © ISO 2010 – All rights reserved

In proficiency testing, the tests are not usually performed under repeatability, or even reproducibility conditions.
Tests are performed by different analysts, at different test locations and at different times, using a variety of
equipment, media, reagents and analytical methods and this results in further variability which could be
described as “super-reproducibility” or “over-reproducibility” conditions because the term reproducibility is
usually used in the context of a single method only.
Despite such variations in test conditions, a (l
...

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 22117
Première édition
2010-11-01
Microbiologie des aliments — Exigences
spécifiques et lignes directrices pour les
essais d'aptitude par comparaison
interlaboratoires
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Specific requirements
and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison

Numéro de référence
©
ISO 2010
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2010
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2010 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .2
4 Conception du programme et application .2
4.1 Généralités .2
4.2 Objectifs du programme.3
4.3 Exigences en termes de laboratoires pour les programmes.3
4.4 Choix des matrices d'essai .3
4.5 Informations sur les méthodes d'essais utilisées par les fournisseurs d'essai d'aptitude .3
4.6 Modèle statistique .4
5 Exigences techniques et recommandations pour la conception et la teneur des
échantillons.4
5.1 Niveau d'organismes cible .4
5.2 Sources, caractérisation et traçabilité des organismes.5
5.3 Flore annexe et compétitive .5
5.4 Sélection de la matrice et effets de matrice .5
6 Vérification des échantillons par le fournisseur .6
6.1 Généralités .6
6.2 Essai d'homogénéité d'échantillons — considérations générales .6
6.3 Essai d'homogénéité pour des échantillons quantitatifs (de dénombrement).6
6.4 Essai d'homogénéité pour des méthodes qualitatives .8
6.5 Essai de stabilité par le fournisseur.8
7 Manipulation des échantillons .9
7.1 Généralités .9
7.2 Instruction pour les participants .9
8 Évaluations des performances .9
8.1 Généralités .9
8.2 Considérations préliminaires.10
8.3 Méthodes quantitatives.10
8.4 Évaluation de méthodes qualitatives .18
Annexe A (informative) Exemple de détails à inclure dans une planification de programme d'essai
d'aptitude.21
Annexe B (informative) Méthodes de test des variations entre les parties aliquotes de matériaux
d'essai.23
Annexe C (informative) Une méthode pratique pour évaluer les performances à long terme des
participants dans des programmes d'essai d'aptitude utilisant des méthodes de
dénombrement.26
Annexe D (informative) Exemple de fiche de données de sécurité .28
Bibliographie.30

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité
technique peut décider de publier d'autres types de documents:
⎯ une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans
un groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des
membres votants du comité dont relève le groupe de travail;
⎯ une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique
et est acceptée pour publication si elle est approuvée par 2/3 des membres votants du comité.
Une ISO/PAS ou ISO/TS fait l'objet d'un examen après trois ans afin de décider si elle est confirmée pour trois
nouvelles années, révisée pour devenir une Norme internationale, ou annulée. Lorsqu'une ISO/PAS ou
ISO/TS a été confirmée, elle fait l'objet d'un nouvel examen après trois ans qui décidera soit de sa
transformation en Norme internationale soit de son annulation.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 22117 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
iv © ISO 2010 – Tous droits réservés

Introduction
Les exigences générales d'organisation des programmes d'essai d'aptitude de tout type sont précisées par
l'ISO/CASCO (Comité pour l'évaluation de la conformité) dans l'ISO/CEI 17043 et une recommandation
générale est également disponible auprès de l'UICPA (Union internationale de chimie pure et appliquée, voir
Référence [9]) et l'ILAC (Coopération internationale sur l'agrément des laboratoires d'essais, voir
Référence [8]). Toutefois, ces recommandations peuvent ne pas être directement applicables à tous les cas et
il convient de les interpréter spécifiquement pour les différents secteurs de laboratoire où les programmes
d'essai d'aptitude sont organisés. De ce fait, il est nécessaire d'établir un document définissant les critères
auxquels un fournisseur (et collaborateurs associés) de programmes d'essai d'aptitude doit satisfaire afin de
reconnaître ses compétences à fournir des programmes d'essai d'aptitude pour des analyses
microbiologiques. Cela s'applique notamment aux exigences techniques spécifiques nécessaires au
traitement de micro-organismes vivants, telles que l'homogénéité et la stabilité des échantillons, ainsi qu'à
l'interprétation des essais de présence/absence (détection) qui n'est actuellement couverte par aucun
document.
Les programmes d'essai d'aptitude pour les laboratoires de microbiologie servent principalement à évaluer les
performances, notamment la justesse (biais) et, dans certains cas, la fidélité des examens microbiologiques
des aliments dans des laboratoires spécifiques.
En outre, les données provenant de tels programmes d'essai d'aptitude peuvent servir à:
a) fournir des informations aux organisations responsables de l'acceptation de laboratoires dans un cadre
de contrôle officiel ou à permettre une surveillance en continu;
b) contribuer à l'accréditation des laboratoires dans un cadre général de management de la qualité;
c) informer les personnes en charge de la qualité dans les laboratoires participants, en tant qu'éléments de
formation sur l'évaluation qualité externe de la justesse (biais).
Les informations provenant des programmes d'essai d'aptitude peuvent également être utilisées afin:
1) d'identifier les sources d'erreurs éventuelles, notamment la composante de biais de l'incertitude, pour
améliorer les performances;
[6]
2) d'estimer l'incertitude de mesure pour des méthodes de dénombrement (voir l'ISO/TS 19036 ) et les
limites de détection des méthodes de présence/absence;
3) de démontrer la compétence du personnel à procéder à un examen microbiologique spécifique;
4) d'évaluer et de valider une méthode donnée par l'étude de justesse et de fidélité;
5) d'identifier la variabilité entre les différents laboratoires;
6) d'assigner une valeur «cible» à un analyte dans un matériau afin d'établir un matériau de référence.
Cependant, ces aspects ne sont pas spécifiquement couverts par la présente Spécification technique.
Les programmes d'essai d'aptitude sont, par conséquent, organisés de sorte à satisfaire à certains critères et
le programme d'essai (fréquence, nombre d'échantillons, nombre de répétitions, etc.) doit satisfaire aux
exigences du type de méthode utilisée et de produit analysé, afin de parvenir au niveau de contrôle souhaité
par toutes les parties impliquées.

SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 22117:2010(F)

Microbiologie des aliments — Exigences spécifiques et lignes
directrices pour les essais d'aptitude par comparaison
interlaboratoires
1 Domaine d'application
La présente Spécification technique fournit des exigences et des recommandations relatives à l'organisation
de programmes d'essai d'aptitude pour les examens microbiologiques concernant:
a) les aliments et les boissons;
b) les aliments pour animaux;
c) les environnements de production des aliments et la manipulation de ces aliments;
d) les étapes de production primaire.
Éventuellement, la présente Spécification technique peut également s'appliquer à l'examen microbiologique
de l'eau si celle-ci est utilisée dans la production alimentaire ou si la législation nationale la considère comme
un aliment.
La présente Spécification technique concerne l'organisation technique et la mise en œuvre de programmes
d'essai d'aptitude et également le traitement statistique des résultats des examens microbiologiques.
La présente Spécification technique est destinée à être utilisée avec l'ISO/CEI 17043 et l'ISO 13528 et ne
traite que des domaines où des détails spécifiques ou supplémentaires sont nécessaires pour les
programmes d'essai d'aptitude traitant des analyses microbiologiques pour les domaines spécifiés dans le
premier alinéa.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 3534-1, Statistique — Vocabulaire et symboles — Partie 1: Termes statistiques généraux et termes
utilisés en calcul des probabilités
ISO 3534-2, Statistique — Vocabulaire et symboles — Partie 2: Statistique appliquée
ISO 5725-1, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 1: Principes
généraux et définitions
ISO 5725-5, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 5: Méthodes
alternatives pour la détermination de la fidélité d'une méthode de mesure normalisée
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 13528, Méthodes statistiques utilisées dans les essais d'aptitude par comparaisons interlaboratoires
ISO/CEI 17043:2010, Évaluation de la conformité — Exigences générales concernant les essais d'aptitude
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l'ISO 3534-1, l'ISO 3534-2,
l'ISO 5725-1, l'ISO 13528, l'ISO/CEI 17043, ainsi que les suivants s'appliquent.
NOTE 1 Certains termes utilisés dans le texte ont des significations différentes en microbiologie et statistique, par
exemple: homogénéité; hétérogénéité; essai; échantillon; distribution. Le contexte indique si les termes se rapportent aux
échantillons d'essais microbiologiques ou aux ensembles de données utilisés pour l'analyse statistique.
NOTE 2 Certains fournisseurs d'essais d'aptitude utilisent le terme «évaluation externe de la qualité» pour désigner
des programmes plus larges s'appliquant à tous les domaines d'intervention d'un laboratoire et à une attribution éducative
particulière. Les exigences de la présente Spécification technique couvrent celles des activités d'évaluation externe de la
qualité qui satisfont à la définition de l'essai d'aptitude.
3.1
organisme cible
micro-organisme qui est l'analyte désigné pour un échantillon d'essai d'aptitude
3.2
flore annexe
micro-organismes inclus dans un échantillon d'essai d'aptitude qui peuvent être introduits pour entrer en
compétition avec le micro-organisme cible ou pour l'imiter
3.3
souche de référence
micro-organisme obtenu directement auprès d'une collection officielle de cultures, défini au moins par son
genre et son espèce, classé et décrit selon ses caractères et issu, de préférence, de produits alimentaires ou
d'eau, selon le cas échéant
[3]
[ISO/TS 11133-1:2009 , 3.3.2]
3.4
pourcentage de récupération
proportion de la valeur attribuée à l'organisme cible retrouvée par le participant
NOTE 1 Le pourcentage de récupération est calculé en multipliant par 100 le nombre d'unités formant colonie (ufc)
récupérées par volume ou par masse.
NOTE 2 Le pourcentage de récupération peut être bien inférieur à 100 % quand une flore compétitive et des effets de
matrice sont présents dans un échantillon d'essai d'aptitude.
4 Conception du programme et application
4.1 Généralités
Des exigences générales de conception des programmes d'essai d'aptitude sont données dans
l'ISO/CEI 17043; dans le présent article, seuls les domaines nécessitant des considérations spécifiques pour
les programmes d'essai d'aptitude relatifs à la microbiologie sont évoqués dans le contexte de ces principes
généraux.
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

4.2 Objectifs du programme
En premier lieu, un programme d'essai d'aptitude vise à fournir des informations permettant aux laboratoires
d'avoir confiance en la fiabilité de leurs résultats.
Les exigences détaillées requises pour un plan documenté d'un programme d'essai d'aptitude sont couvertes
par l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.1.3 et il convient que le plan fasse également référence à toute législation
pertinente. L'Annexe A donne un exemple de plan pour un programme d'examen typique des aliments en
microbiologie.
Les études nécessaires à la mise en œuvre d'un nouveau programme d'essai d'aptitude sont nombreuses et
doivent être clairement définies dans les objectifs du programme. Il convient qu'elles comprennent au moins
les exigences répertoriées dans l'Article 5. Il convient également que les exigences en termes de vérification
des différents cycles d'essai, comprenant l'essai d'homogénéité et de stabilité, soient également définies dans
la conception du programme et soient appropriées aux objectifs du programme.
4.3 Exigences en termes de laboratoires pour les programmes
Les exigences générales en matière d'installations de laboratoire appropriées pour le traitement de tous les
aspects des programmes d'essai d'aptitude sont données dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.3.1 et
l'ISO/CEI 17043:2010, 4.6.2.4 couvre les exigences en matière de sécurité.
Pour les programmes en microbiologie, les fournisseurs doivent disposer d'une politique documentée attirant
l'attention des participants sur les risques et garantissant qu'un conseil avisé en matière de sécurité est
dispensé (voir Article 7). Par exemple, les laboratoires en microbiologie alimentaire doivent disposer
d'installations permettant de traiter des micro-organismes appartenant aux catégories de risque 1, 2 et 3, le
cas échéant (voir l'ISO 7218:2007, 3.2).
4.4 Choix des matrices d'essai
Les exigences générales concernant la documentation du choix des matrices d'essai dans le plan du
programme sont données dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.1.3 et le choix des matrices destinées à refléter les
types d'échantillons de routine dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.2.3.
Il convient que les raisons motivant le choix du type de matrice soient explicitées, par exemple permettre des
niveaux de stabilité et d'homogénéité d'échantillons satisfaisant aux objectifs annoncés par le programme.
La description des échantillons d'essai doit spécifier la matrice d'échantillon (naturelle ou simulée); s'il s'agit
de contamination artificielle ou naturelle; la source et le pays d'origine pour la conformité aux législations
internationales sur le transport; ainsi que toute méthode de conservation utilisée, par exemple lyophilisation,
produit sec.
4.5 Informations sur les méthodes d'essais utilisées par les fournisseurs d'essai d'aptitude
Les exigences générales relatives aux méthodes à utiliser par le fournisseur d'essai d'aptitude sont données
dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.1.3.
Si le programme est orienté sur un ou plusieurs essais spécifiés dans ou imposés par la législation, les essais
de contrôle qualité de routine sur les échantillons du programme (par exemple homogénéité et stabilité)
doivent être entrepris conformément aux méthodes stipulées dans cette législation et il doit en être fait
mention (ISO/CEI 17043:2010, 4.5.1).
Les participants doivent être encouragés à utiliser leurs méthodes de routine, mais s'ils entreprennent
des essais conformément à la législation, un certain niveau de recommandation doit être donné, par exemple
faire référence à des méthodes ISO, à des textes législatifs, à des publications revues par les pairs
(ISO/CEI 17043:2010, 4.5.1).
4.6 Modèle statistique
Les exigences générales du modèle statistique sont données dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.4.
Les grandes lignes du modèle statistique concernant les programmes d'essai d'aptitude en microbiologie
doivent faire mention de l'incidence du niveau d'homogénéité du matériau d'essai sur les tests statistiques à
utiliser, lequel matériau est, à son tour, influencé par la variation aléatoire dans la distribution des micro-
organismes.
Excepté pour des faibles dénombrements, une distribution log-normale est généralement attendue dans les
données d'essai quantitatives et des méthodes d'analyse statistique appropriées doivent être utilisées pour de
telles données [ISO/CEI 17043:2010, B.3.1.4 d)]. Si des faibles dénombrements sont nécessaires dans les
échantillons d'essais quantitatifs (par exemple examen de l'eau ou d'une boisson), un modèle de Poisson
aléatoire est plus applicable, la variation en nombres d'organismes entre les différentes unités de matériau
devenant relativement importante et pouvant masquer des variations de performance.
L'homogénéité de l'échantillon doit normalement être telle qu'elle n'influence pas de manière significative les
variations observées entre laboratoires.
Les essais de dénombrement semi-quantitatifs et les essais de détection qualitatifs impliquent des procédés
statistiques différents pour analyser les données, lesquels sont plus amplement évoqués en 8.3 et 8.4.
La planification du programme doit clarifier les distinctions entre essais de performance pour des méthodes
de détection et ceux pour le dénombrement des micro-organismes cible.
5 Exigences techniques et recommandations pour la conception et la teneur
des échantillons
5.1 Niveau d'organismes cible
Les organismes cible doivent être fournis à des niveaux permettant de démontrer que les méthodes d'examen
répondent aux besoins et qu'elles reflètent des niveaux susceptibles de survenir dans des matrices
d'échantillons soumises à l'essai (ISO/CEI 17043:2010, 4.4.2.3). Si des bactéries pathogènes sont la cible, il
convient que leurs niveaux prennent en compte et reflètent les niveaux susceptibles de présenter des risques
pour la santé humaine et, le cas échéant, toute limite spécifiée dans les critères microbiologiques.
NOTE Le niveau représentant un danger pour la santé de l'homme n'est pas toujours connu précisément et dépend
de la sensibilité des individus. L'objectif d'un examen des pathogènes consiste à prévenir la maladie et également à
détecter des pathogènes à un très faible niveau avant qu'ils puissent atteindre un stade de développement supérieur.
Pour des méthodes quantitatives (dénombrement), le niveau cible doit être approprié aux niveaux trouvés
traditionnellement dans les matrices d'échantillons utilisées et aux spécifications réglementaires applicables
aux matrices d'échantillons utilisées. Il convient également quelquefois d'utiliser le niveau cible à proximité de
la limite de quantification de méthodes de routine afin de mettre à l'épreuve les performances des participants
dans la plage applicable de la méthode. Cependant, il convient que l'échantillon ne soit pas distribué avec des
niveaux d'organismes si faibles qu'avec les dilutions habituelles, le nombre moyen attendu d'organismes dans
l'échantillon soit inférieur à 10 colonies par boîte.
Pour des méthodes qualitatives (détection), les organismes cible doivent généralement être d'un niveau
suffisamment faible pour fournir une épreuve valide pour la méthodologie et pour fournir des données pour
des exercices de validation permettant de définir ou de vérifier les limites de détection pour différents
laboratoires participants.
4 © ISO 2010 – Tous droits réservés

5.2 Sources, caractérisation et traçabilité des organismes
Les caractéristiques des organismes cible doivent être établies avant d'en faire usage afin d'évaluer de
manière fiable les performances, notamment dans des programmes où les participants sont autorisés à
utiliser différentes méthodologies.
Il convient que les souches typiques et atypiques soient considérées et incluses dans le programme pour
mettre à l'épreuve les performances des laboratoires.
Il convient que les souches de référence reconnues provenant de collections internationales soient utilisées si
elles conviennent mieux aux objectifs du programme; cependant, les isolats de laboratoire ou les souches
«sauvages» isolées à partir des matrices utilisées dans les programmes d'essai d'aptitude sont utiles pour
refléter plus précisément des situations de routine. Si elles sont utilisées, il convient qu'elles soient
suffisamment caractérisées selon les méthodes de référence appropriées décrites dans des Normes
internationales pour garantir le fait que toute réaction atypique soit manifeste pour les organisateurs avant
utilisation.
Il convient dans tous les cas que les organismes utilisés dans les échantillons de programmes d'essai
d'aptitude puissent être tracés pour remonter à la collection de culture concernée ou pour valider des données
de caractérisation détenues par les organisateurs.
Dans certaines circonstances, il peut ne pas être possible d'utiliser les matériaux et cultures de référence
provenant des collections internationalement reconnues ou des souches de laboratoire cultivées, par exemple
pour des programmes d'essai d'aptitude relatifs à des organismes non cultivables tels que les norovirus
humains. Dans de telles circonstances, le matériau clinique peut être utilisé pour contaminer une matrice
d'essai artificiellement, soit par immersion, pulvérisation ou, dans le cas d'un mollusque bivalve, par
bioaccumulation. Il convient que la méthode de contamination artificielle se rapproche le plus possible de la
voie naturelle de contamination. Il convient d'apporter un soin extrême à la manipulation d'échantillons de
matériau clinique humain, de vomi ou de déchet fécal et il convient d'y dépister des pathogènes
supplémentaires avant utilisation. Il convient que les virus cible soient caractérisés intégralement pour les
niveaux de souche par réaction de polymérisation en chaîne puis par séquençage.
5.3 Flore annexe et compétitive
La flore totale des échantillons, contaminés naturellement ou artificiellement, doit être choisie pour évaluer la
capacité des participants à détecter et/ou à dénombrer des organismes cible en présence d'une flore annexe
non ciblée (typique des matrices d'échantillons) et des organismes cible présumés qui, sans essais de
confirmation appropriés, peuvent générer des résultats faussement positifs.
Toute souche utilisée pour simuler la flore annexe doit satisfaire aux exigences de 5.2 pour la caractérisation
et la traçabilité. Dans des échantillons naturellement contaminés, les effets de toute flore annexe sur
l'organisme cible doivent être déterminés.
5.4 Sélection de la matrice et effets de matrice
Toutes les matrices doivent être évaluées avant l'utilisation afin de contrôler tout effet sur la flore cible et
annexe, par exemple si les matrices réduisent la récupération des organismes artificiellement contaminés.
Les participants doivent connaître la nature de la matrice alimentaire si de telles matrices sont connues pour
influer négativement sur la récupération de micro-organismes, par exemple celles qui se lient et retiennent
des cellules telles que les matières grasses ou celles qui ont des propriétés bactériostatiques ou bactéricides.
Des modes opératoires de préparation validés et appropriés doivent être inclus pour en informer les
participants.
Les matrices d'échantillons utilisées pour des programmes d'essai d'aptitude en microbiologie sont souvent,
mais pas nécessairement, stérilisées avant utilisation. Si des échantillons naturels non stérilisés sont
distribués, les organisateurs doivent déterminer l'effet de la microflore annexe des échantillons.
6 Vérification des échantillons par le fournisseur
6.1 Généralités
Les exigences générales de vérification des échantillons sont données dans l'ISO/CEI 17043 et l'ISO 13528
(pour information, voir également la Référence [9]); le présent article détaille les exigences spécifiques et les
problèmes d'essai d'homogénéité et de stabilité dans les matériaux contenant des micro-organismes vivants.
6.2 Essai d'homogénéité d'échantillons — considérations générales
(Voir également l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.3 et B.5.)
Les essais d'aptitude peuvent impliquer la préparation d'un matériau d'essai en vrac qui est ensuite sous-
divisé en prises d'essai individuelles aussi similaires que possible pour une distribution aux participants.
Alternativement, ces prises d'essai peuvent être inoculées individuellement avant distribution.
Indépendamment de la méthode de préparation utilisée, le matériau d'essai doit être évalué en termes
d'homogénéité, normalement avant, mais également au moment des essais pour des matériaux frais
instables.
Il convient qu'un essai d'homogénéité soit réalisé sur chaque lot d'échantillons, reposant sur des principes
statistiques appropriés (ISO/CEI 17043:2010, 4.4.3.2 et B.5). De tels essais sont donnés dans l'ISO 13528 ou,
en alternative, en Annexe B.
Il est également nécessaire de procéder à un essai d'homogénéité si les matériaux doivent être stockés
durant des périodes de temps plus longues afin de s'assurer du respect des critères avant utilisation. Il
convient que le nombre d'échantillons soumis à essai pour chaque lot soit également suffisant pour obtenir
des informations continues sur l'homogénéité du lot; 10 échantillons (soumis à des essais en double si
nécessaire) est le nombre suggéré.
Un matériau d'essai ne présentant pas une homogénéité suffisante peut encore être utilisé dans un cycle
d'essai d'aptitude (ISO/CEI 17043:2010, 4.4.3.1, Note 3), à condition que les principes statistiques appropriés
soient utilisés pour tenir compte de la plus grande variance entre les échantillons (voir l'ISO 13528). Pour
réduire au minimum les effets du manque d'homogénéité sur l'évaluation de la performance des participants, il
convient d'utiliser un plan statistique pour des matériaux hétérogènes comprenant une analyse en double de
plusieurs échantillons (voir l'ISO 5725-5).
6.3 Essai d'homogénéité pour des échantillons quantitatifs (de dénombrement)
Les exigences générales et modes opératoires permettant de soumettre des matériaux d'essai d'aptitude
quantitatifs à des essais d'homogénéité sont donnés dans l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.3 et B.5) et l'ISO 13528.
Dans les essais interlaboratoires, il convient de ne pas utiliser de matériaux présentant une variation inter-
unités suffisamment importante pour interférer de manière significative sur l'évaluation des performances des
laboratoires, sauf si des exigences et des méthodes d'analyse de données spécifiques s'appliquent, par
exemple de faibles nombres de micro-organismes dans de l'eau potable et autres échantillons.
Le critère «suffisamment homogène» est défini par les exigences de comparaison interlaboratoires (voir
l'ISO 13528 et l'Annexe B). Cependant, en général, un matériau pour lequel un écart-type inter-unités (sur
l'échelle transformée de manière appropriée) est u 0,3 σ , où σ est l'écart-type cible utilisé pour évaluer la
p p
performance des laboratoires, est considéré comme suffisamment homogène (voir l'ISO 13528).
Il convient que tout autre essai d'homogénéité satisfasse aux critères suivants (repris de la Référence [9]):
a) il convient que la probabilité de rejet d'un matériau d'essai suffisamment homogène soit u 5 %;
b) la probabilité de rejeter un matériau d'essai dans lequel la variation inter-unités représente 1,5 σ , où σ
p p
est la variation interlaboratoires acceptable (exprimée comme un écart-type cible) est W 80 %.
6 © ISO 2010 – Tous droits réservés

Une probabilité de 80 % de rejet d'un matériau quand la variation inter-unités représente 1,5 σ repose sur
p
des études de simulation de l'analyse en double de 10 unités d'essais en utilisant une méthode dont l'écart-
type analytique est 0,5 σ (à savoir 0,125 unité logarithmique) et la valeur critique pour T (voir l'Annexe B)
p 2
satisfaisant au critère a) dans l'alinéa précédent. Elle indique ce qui est atteignable avec une quantité
raisonnable d'effort analytique.
Les essais d'homogénéité reposent sur des estimations de variance inter-unités et de variance analytique
(répétabilité) obtenues dans des conditions de répétabilité. Des méthodes appropriées pour estimer de telles
variations sont données dans l'Annexe B.
Il convient que la variance analytique (répétabilité) soit estimée à partir de la répétition des analyses des
suspensions mères obtenues à partir de prises d'essais (Références [15] et [16]). Cette variance analytique
peut également être calculée à partir du nombre de colonies comptées et la fidélité des matériaux analytiques
utilisés (Références [10]).
En microbiologie, la variance inter-unités doit être estimée dans des conditions de répétabilité (sur un cycle).
Si cela est impossible, la variance inter-unités comprend la reproductibilité intralaboratoire et peut peut-être
mener au rejet à tort d'un matériau satisfaisant.
Quand le nombre de colonies comptées est suffisamment élevé (supérieur à 35 à 40 colonies par boîte),
l'écart-type analytique, σ , satisfait généralement à
an
σ
an
< 0,5
σ
p
où σ est l'écart-type cible et il convient d'utiliser l'essai pour une homogénéité suffisante proposé dans la
p
Référence [11] (voir l'Annexe B). Si le nombre de colonies comptées est faible (inférieur à 35 à 40 colonies
par boîte), le test T − T est recommandé (voir l'Annexe B).
1 2
Quand des unités d'essais répliquées sont fournies aux laboratoires participants, il convient que le fournisseur
examine la variabilité inter-unités obtenue par les participants afin d'évaluer l'homogénéité du matériau. Bien
que cette variabilité comprenne la reproductibilité intralaboratoire, le nombre élevé de laboratoires participants
augmentera la puissance statistique de l'analyse et peut être un bon indicateur pour des cycles successifs.
Si le nombre de colonies compté est faible (admettons inférieur à 20), la variance analytique (répétabilité) est
élevée. Dans ce cas, il convient que le fournisseur recommande aux laboratoires participants de répliquer les
dénombrements des prises d'essai afin de satisfaire à la condition (voir l'ISO 13528):
σ
r
u 0,3σ
p
n
où
σ est l'écart-type de répétabilité;
r
σ est l'écart-type cible;
p
n est le nombre de répétitions.
Si cela est impossible, il convient que la performance du laboratoire soit évaluée avec précaution.
Si le matériau des essais d'aptitude contient de faibles nombres d'unités formant colonies (admettons
inférieurs à 20), la variation inter-unités (à savoir entre les échantillons répétés) doit être mesurée pour
démontrer qu'elle n'excède pas la variation aléatoire (Poisson) afin de fournir une évaluation satisfaisante. Il
convient que l'indice du test de dispersion sur n échantillons (avec n au minimum de 10) n'excède pas la
valeur du χ pour une probabilité de 0,05.
n−1
6.4 Essai d'homogénéité pour des méthodes qualitatives
Des principes similaires s'appliquent à l'essai d'homogénéité pour des méthodes qualitatives
(présence/absence), mais une considération spécifique est requise si le niveau de contamination artificielle
est bas (voir 8.4)
L'homogénéité d'échantillons qualitatifs peut être testée en dénombrant des échantillons artificiellement
contaminés. Il est également possible de déterminer le niveau de contamination en utilisant une technique
NPP (nombre le plus probable). Si le dénombrement est possible, les essais d'homogénéité détaillés en 6.3
peuvent être utilisés en fonction de la manière dont les échantillons sont contaminés artificiellement et dont
les échantillons artificiellement contaminés sont dénombrés.
6.5 Essai de stabilité par le fournisseur
6.5.1 Généralités
Les échantillons devant être utilisés pour des essais d'aptitude doivent être stables au moins durant la période
allant de la préparation (par le fournisseur) jusqu'à la date de l'étude ou à la fin de la période autorisée (voir
l'ISO/CEI 17043:2010, 4.4.3).
Si le même type d'échantillons avec la ou les mêmes souches d'essai est toujours utilisé, il est suffisant de
procéder à une vérification (par exemple en vérifiant après la préparation et à la date de l'étude) sur les
échantillons suivants. Il convient que le fournisseur examine également les résultats obtenus par les
laboratoires participants pour vérifier la stabilité du matériau durant la période allouée à l'étude.
6.5.2 Stabilité durant les conditions de stockage
Pour des échantillons stables qui sont toujours stockés à basses températures (par exemple −70 °C, −20 °C,
+5 °C), la stabilité doit être déterminée en vérifiant le niveau de l'analyte et l'homogénéité de chaque lot à
intervalles réguliers durant le stockage. Il convient que la période minimale d'essai de stabilité soit équivalente
au temps entre la préparation du matériau et la date spécifiée ou la période de temps de l'analyse.
La fréquence d'essai dépend des informations déjà disponibles pour le lot d'échantillons et la période de
temps totale pendant laquelle l'information de stabilité est nécessaire. Si le temps de stockage total n'est, par
exemple, que de deux semaines, il peut être nécessaire d'effectuer des essais tous les deux jours mais, si le
stockage est requis pour une année, il peut être suffisant de procéder à des essais tous les mois. Pour des
lots importants d'échantillons, il convient de soumettre à essai un minimum de trois échantillons à chaque
occasion afin de montrer la stabilité permanente sur l'ensemble du lot (ISO 13528:2005, Annexe B). Quelle
que soit la fréquence des essais adoptée, elle doit être justifiée et validée comme acceptable par les
organisateurs du programme.
6.5.3 Stabilité durant les conditions de transport
En plus des informations de stabilité durant les conditions de stockage collectées au cours des études de
validation pour un nouveau programme, il est également important de soumettre à essai l'effet de «conditions
abusives» sur les échantillons, par exemple de longs temps de transport et des températures élevées (voir
l'ISO/CEI 17043:2010, 4.6.3.2).
Un essai de stabilité à différentes températures pour reproduire les «pires conditions» de transport et les
délais maximums attendus doit être réalisé initialement pour soumettre à essai l'effet de tels abus sur des
échantillons d'essais. Par exemple, des échantillons d'un lot sont conservés à une température de stockage
spécifiée (par exemple −20 °C), mais également à +5 °C, +15 °C et +25 °C. Chaque jour, cinq échantillons
maintenus à chacune des températures de stockage sont analysés durant toute une période d'une à deux
semaines.
Le modèle de telles expériences de stabilité est variable, mais il convient qu'il soit adapté à l'obtention
d'informations sur l'effet de différentes températures de stockage sur les échantillons et à la détermination de
toute limite supérieure de température pour la réception par le laboratoire. Les informations obtenues peuvent
8 © ISO 2010 – Tous droits réservés

être utilisées pour choisir les conditions de distribution optimales pour les échantillons du programme, par
exemple s'il est nécessaire de refroidir les échantillons durant le transport en utilisant de l'azote ou des packs
de glace ou si la distribution à température ambiante est acceptable.
Pour des distributions à des températures critiques requérant la réfrigération contrôlée avec des critères
d'acceptation d'échantillon stricts, par exemple dans des programmes en soutien d'essais dans un cadre légal
pour E.coli dans des mollusques bivalves, il est recommandé d'inclure un enregistreur chronologique
individuel de température dans chaque boîte d'échantillons pour enregistrer la température de l'échantillon
durant le transport. La vérification des données de température peut permettre au fournisseur du programme
d'expliquer des résultats anormaux renvoyés par des participants.
7 Manipulation des échantillons
7.1 Généralités
Les exigences générales concernant la manipulation des échantillons sont données dans
l'ISO/CEI 17043:2010, 4.6.1 et 4.6.2 et seules des informations supplémentaires appropriées pour les
échantillons microbiologiques sont stipulées dans le présent article.
7.2 Instruction pour les participants
Pour chaque étude, chaque laboratoire participant doit recevoir un jeu d'instructions claires couvrant:
a) les conditions de stockage des échantillons de tout type, notamment les informations sur la température
de stockage qu'il convient de faire apparaître sur l'extérieur de l'emballage de transport;
b) la température maximale des échantillons lors de la réception au laboratoire participant, le cas échéant;
c) des instructions sur la manière de manipuler les échantillons — si une reconstitution, une dilution ou un
autre traitement des échantillons est requis, il convient de le décrire clairement pour chaque jeu et type
d'échantillons;
d) des fiches de données de sécurité appropriées qu'il convient d'inclure avec chaque distribution (un
exemple de détail requis est donné en Annexe D);
e) d'autres instructions co
...

ТЕХНИЧЕСКИЕ ISO/TS
УСЛОВИЯ 22117
Первое издание
2010-11-01
Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Специальные
требования и руководство по проверке
квалификации лабораторий с
помощью межлабораторных
сравнительных испытаний
Microbiology of food and animal feeding stuffs – Specific requirements
and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison

Ответственность за подготовку русской версии несѐт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьѐй 18.1 Устава ISO

Ссылочный номер
©
ISO 2010
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

©  ISO 2010
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
разрешения в письменной форме от ISO или IDF, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного
по адресу, приведенному ниже.
ISO copyright office
Case postale 56 CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2010 – Все права сохраняются

Содержание Страница
Предисловие. iv
Введение . v
1 Область применения . 1
2 Нормативные ссылки . 1
3 Термины и определения . 2
4 Разработка программ проверки квалификации и их цель . 3
4.1 Общие положения . 3
4.2 Цели программы . 3
4.3 Требования к лабораториям, участвующим в программе . 3
4.4 Выбор матрицы . 3
4.5 Информация по методам испытания, используемым провайдером проверки
квалификации . 3
4.6 Статистическое планирование . 4
5 Технические требования и руководство по матрице образца и содержанию . 4
5.1 Концентрация целевых микроорганизмов . 4
5.2 Источники, характеризация и прослеживаемость микроорганизмов . 5
5.3 Фоновая и конкурентная флора . 5
5.4 Выбор матрицы и матричные эффекты . 5
6 Верификация образца провайдером . 6
6.1 Общие положения . 6
6.2 Испытание образцов на однородность. Общие проблемы . 6
6.3 Испытание на однородность образцов для количественного анализа (подсчета) . 6
6.4 Определение однородности материала для качественных методов . 8
6.5 Испытание на стабильность, выполняемое провайдером . 8
7 Обращение с образцами . 9
7.1 Общие положения . 9
7.2 Инструкции для участников . 9
8 Оценки показателей лабораторий, участвующих в программе проверки
квалификации . 10
8.1 Общие положения . 10
8.2 Предварительная оценка . 10
8.3 Количественные методы . 11
8.4 Оценка качественных методов . 18
Приложение A (информативное) Пример деталей, которые необходимо включить в план
программы проверки квалификации лабораторий . 23
Приложение B (информативное) Методы определения изменчивости анализируемых проб
испытуемого материала . 25
Приложение С (информативное) Практический метод оценки долгосрочных показателей
участников программы проверки квалификации с использованием методом
подсчета . 28
Приложение D (информативное) Пример справочного листка по безопасности . 30
Библиография . 32

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. ISO тесно сотрудничает с Международной
электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не
менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
При других обстоятельствах, особенно при наличии настоятельных требований рынка, технический
комитет может решить опубликовать другие типы нормативных документов:
─ общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS), представляющие собой соглашение между
техническими экспертами рабочей группы ISO, и публикуемые при условии получения одобрения
более чем 50% голосов членов головного технического комитета, принимавших участие в голосовании;
─ технические условия ISO (ISO/TS), представляющие собой соглашение между членами технического
комитета и публикуемые при условии утверждения 2/3 голосов членов комитета, принимавших участие в
голосовании.
Документы ISO/PAS или ISO/TS пересматриваются через три года с целью принятия решения либо о
продлении их действия на следующие три года, либо о пересмотре и публикации в качестве
международного стандарта, либо прекращении действия. Если принимается решение о продлении
действия ISO/PAS и ISO/TS, они должны быть пересмотрены через следующие три года, когда они
должны быть либо преобразованы в международный стандарт, либо отменены.
Следует учитывать возможность того, что некоторые элементы настоящего документа могут быть
предметом патентного права. ISO не несет ответственности за идентификацию любого из таких
патентных прав.
ISO/TS 22117 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом
SC 9, Микробиология.
iv © ISO 2010 – Все права сохраняются

Введение
Общие требования к организации программ проверки квалификации (лабораторий) (РТ) всех типов
описываются Комитетом ISO/CASCO (Комитет по оценке соответствия) в ISO/IEC 17043; кроме того, общее
руководство можно получить в Международном союзе теоретической и прикладной химии (International Union
of Pure and Applied Chemistry = IUPAC, см Ссылку [9]) и Международной организации по аккредитации
лабораторий (Laboratory Accreditation Cooperation = ILAC, см Ссылку [8]). В то же время эти рекомендации
можно применять напрямую не во всех случаях, и их следует толковать конкретно в каждом лабораторном
секторе, где организуются программы PT. По этой причине возникла необходимость в разработке документа,
в котором устанавливаются критерии, которым провайдер (и его коллеги) программ PT должны следовать,
чтобы их признали компетентными в составлении программ PT по микробиологическому анализу. Это
применимо, в частности, к конкретным техническим требованиям, необходимым для работы с живыми
микроорганизмами, оперирования такими понятиями, как однородность и стабильность пробы, а также
толкования тестов на присутствие /отсутствие (выявление), которые не описываются в данном документе.
Программы проверки квалификации лабораторий для микробиологических лабораторий fиспользуется,
главным образом, для оценки показателей лабораторий-участниц (участников (программы)), в частности
правильности (систематической погрешности) и, в некоторых случаях прецизионности, микробиологических
исследований пищевых продуктов в конкретных микробиологических лабораториях.
Кроме того, данные таких программ PT можно использовать, чтобы:
a) обеспечить информацию организациям, ответственным за лабораторную приемку в рамках
официального контроля, и дать возможность проведения непрерывного мониторинга;
b) содействовать аккредитации лабораторий в рамках общего менеджмента качества;
c) информировать сотрудников, ответственных за качество, в лабораториях-участницах, в порядке
обучения выполнению внешней оценки правильности (систематической погрешности).
Информацию, полученную в ходе выполнения программ, можно также использовать для:
1) идентификации возможных источников погрешностей, особенно составляющей
систематической погрешности - неопределенности, с целью повышения результативности;
[6]
2) оценки неопределенности измерений для методов подсчета (см. ISO/TS 19036 ) и пределы
обнаружения для методов испытания на присутствие/отсутствие;
3) демонстрации компетентности персонала в выполнении специальных микробиологических
исследований;
4) оценки или валидации данного метода путем изучения правильности и прецизионности;
5) идентификации изменчивости между отдельными лабораториями;
6) предписание ―целевого‖ значения аналиту (анализируемому микроорганизму) в материале,
чтобы создать стандартный образец (референтный материал).
Однако настоящие Технические условия специально этими аспектами не занимается.
Программы проверки квалификации, поэтому, чтобы выполнить критерии и программы испытаний
(частота, количество образцов, число повторов, и т.д.) должны выполнять требования используемого
метода и анализируемой продукции, чтобы достичь уровня контроля, желательного для всех
участвующих сторон.
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ ISO/TS 22117:2010(R)

Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных. Специальные требования и руководство по
проверке квалификации лабораторий с помощью
межлабораторных сравнительных испытаний
1 Область применения
Настоящие Технические условия устанавливают требования и руководство по организации программ
проверки квалификации (лабораторий) для микробиологических исследований:
a) пищевых продуктов и напитков;
b) кормов для животных;
c) окружающей среды при производстве пищевых продуктов и обращении с ними;
d) первичных стадий производства.
Настоящие Технические условия также потенциально применимы к микробиологическому
исследованию воды, которая используется либо в производстве пищевых продуктов, либо сама
считается пищевым продуктом по национальному законодательству.
Настоящие Технические условия касаются технической организации и осуществления программ
проверки квалификации, а также статистической обработки результатов микробиологических
исследований.
Настоящие Технические условия разработаны для использования совместно с ISO/IEC 17043 и
ISO 13528, и относятся только к областям, где необходимо конкретные или дополнительные детали,
необходимые для проверки квалификации и обработки микробиологических анализов для областей,
установленных в первом абзаце.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для
датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок
применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).
ISO 3534-1, Статистика. Словарь и условные обозначения. Часть 1. Общие термины и термины,
используемые в теории вероятности
ISO 3534-2, Статистика. Словарь и условные обозначения. Часть 2. Прикладная статистика
ISO 5725-1, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть
1. Общие принципы и определения
ISO 5725-5, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть
5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям
ISO 13528, Статистические методы для проверки квалификации методом межлабораторных
сличений
ISO/IEC 17043:2010, Оценка соответствия. Общие требования к проверке квалификации
лабораторий
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используются термины и определения, приведенные в ISO 3534-
1, ISO 3534-2, ISO 5725-1, ISO 13528, ISO/IEC 17043 а также следующие.
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Некоторые термины, используемые в тексте, имеют разные значения в микробиологии и
статистике, например, гомогенность, гетерогенность, тест, проба (образец), распределение. Контекст поясняет,
относятся ли данн7ые термины к микробиологическим пробам для испытания или наборам данных, используемых
для статистического анализа.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Некоторые провайдеры проверки квалификации лабораторий используют термин «Внешняя
оценка качества (EQA)» для указания программ с более широким применением во всех областях работы
лаборатории и конкретно в образовательной сфере. Требования настоящего Международного стандарта
охватывают только ту деятельность EQA, которая соответствует определению проверки квалификации
лабораторий.
3.1
целевой микрорганизм
target organism
микроорганизм, который является назначенным аналитом для образца, используемого в проверке
квалификации
3.2
background flora
микроорганизмы, включенные в образцы для проверки квалификации, которые могут быть введены
для конкуренции или имитации целевого микроорганизма
3.3
контрольный штамм
reference strain
микроорганизм, полученный непосредственно из официального банка культур и определенный на
уровне рода и вида, каталогизированный и описанный в соответствии со своими характеристиками и
предпочтительно выделенный из воды или пищевого продукта, в зависимости от рассматриваемого
случая
[3]
[ISO/TS 11133-1:2009 , 3.3.2]
3.4
выделенный процент
recovery percentage
доля предписанного значения целевого микроорганизма, выделенного в лаборатории-участнице
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Выделенный процент рассчитывают путем умножения на 100 количества выделенных колоний,
образующих единицы (КОЕ- колониеобразующие единицы) на объем или на массу.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Выделенный процент может быть значительно ниже 100 %, если в образце для проверки
квалификации присутствует конкурирующая флора и матричные эффекты.
2 © ISO 2010 – Все права сохраняются

4 Разработка программ проверки квалификации и их цель
4.1 Общие положения
Общие требования к разработке программ PT приводятся в ISO/IEC 17043; в данном случае
обсуждаются только области, требующие специального рассмотрения для программ проверки
квалификации микробиологических лабораторий в контексте общих принципов.
4.2 Цели программы
Первоочередная цель программы проверки квалификации любой лаборатории заключается в
получении информации для приобретения доверия к надежности результатов, полученных в этой
лаборатории.
Детальные требования к документированному плану проведения программы проверки описаны в
ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3, этот план должен включать ссылку на соответствующие законы. Пример
плана для типичной программы микробиологического исследования продуктов питания приведен в
ПриложенииA.
Исследования, необходимые для разработки новой программы проверки квалификации, являются
пространными и требуют чет кого определения целей программы. Сюда должны быть включены, как
минимум, требования, приведенные в Разделе 5. Требования проверки отдельных раундов
тестирования, включая тесты на однородность и стабильность, также должны быть установлены в
плане программы и должны соответствовать целям программы.
4.3 Требования к лабораториям, участвующим в программе
Общие требования в отношении соответствия средств и оборудования лабораторий для участия в
программе проверки квалификации приведены в ISO/IEC 17043:2010, 4.3.1, а требования к
безопасности описаны в ISO/IEC 17043:2010, 4.6.2.4.
Для программ проверки микробиологических лабораторий, провайдеры должны иметь
документированные правила доведения до сведения участников опасностей и обеспечения
соответствующих рекомендаций по безопасности (см. Раздел 7). Например, лаборатории по
микробиологии пищевых продуктов должны иметь помещения, средства и оборудование для работы с
микроорганизмами категорий риска 1, 2, и 3, в зависимости от рассматриваемого случая (см.
ISO 7218:2007, 3.2).
4.4 Выбор матрицы
Общие требования по документированию порядка проведения испытаний в плане программы проверки
квалификации приведены в ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3, а выбор таких матриц образцов испытания,
которые отражают типы образцов рутинных испытаний ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3.
Следует установить причины и смысл выбора матрицы именно такого типа, например, чтобы обеспечить
уровни стабильности и однородности образца в соответствии с предполагаемой целью программы.
Описание объектов испытания должно задавать матрицу образца (природную или имитированную);
зараженную искусственно или естественным образом; источник и страну происхождения в
соответствии с регламентом по международным перевозкам; и используемый метод сохранения,
например, с помощью сублимационной сушки или сушки на воздухе.
4.5 Информация по методам испытания, используемым провайдером проверки
квалификации
Общие требования по методам, используемым провайдером проверки квалификации, приведены в
ISO/IEC 17043:2010, 4.4.1.3.
Если программа нацелена на одно или несколько установленных в технических условиях испытаний
или требуемых нормативами испытаний, то повседневные испытания по контролю качества образцов,
используемых в программе проверки (например, на однородность и стабильность) должны
выполняться по методам, установленным нормативами, и это должно быть заявлено
(ISO/IEC 17043:2010, 4.5.1).
Участники должны поощряться в использовании своих повседневных методов но, там где они
выполняют испытания в соответствии с нормами, необходимо дать руководящие указания, например,
ссылку на методы ISO, тексты нормативных документов или публикаций, написанных специалистами
той же области (ISO/IEC 17043:2010, 4.5.1).
4.6 Статистическое планирование
Общие требования к статистическому планированию приведены в ISO/IEC 17043:2010, 4.4.4.
Принципы статистического планирования в отношении программ проверки квалификации лабораторий
в области микробиологии должны указывать, что на статистические испытания, которые
предполагается использовать, будет влиять уровень однородности испытуемого материала, на
который, в сою очередь, будет влиять случайная вариация в распределении микроорганизмов.
За исключением случаев низких концентраций, распределение количественных результатов испытаний
обычно происходит по логарифмически-нормальному закону, и необходимо использовать подходящие
методы статистического анализа для таких данных [ISO/IEC 17043:2010, B.3.1.4 d)]. Там где требуются
низкие уровни концентрации в количественных определениях (например, при исследовании воды или
напитков), более часто применяется случайная модель Пуассона, поскольку вариация количеств
организмов между различными образцами материала становится относительно большой и может
скрыть вариации в показателях лабораторий-участниц.
Однородность образца обычно должна быть такой, чтобы не влиять заметным образом на
наблюдаемую вариацию между лабораториями.
Испытания по полуколичественному подсчету и качественному обнаружению требуют различных
статистических методов анализа данных, что обсуждается далее, в 8.3 и 8.4.
План программы проверки квалификации должен разъяснить различия между испытанием
результативности методов выявления и методов подсчета целевых микроорганизмов.
5 Технические требования и руководство по матрице образца и содержанию
5.1 Концентрация целевых микроорганизмов
Целевые микроорганизмы должны предоставляться в концентрациях, удобных для демонстрации того, что
методы испытания пригодны для данной цели, и таких, чтобы их можно было обнаружить в анализируемых
матрицах образца (ISO/IEC 17043:2010, 4.4.2.3). Если целевыми являются патогенные микроорганизмы, то
концентрации необходимо учитывать с точки зрения опасности для здоровья человека и, при определенных
обстоятельствах, пределов, устанавливаемых в микробиологических критериях.
ПРИМЕЧАНИЕ Концентрация, представляющая опасность для здоровья человека, невсегда известна точно и
зависит от восприимчивости отдельных людей. Цель исследования патогенности заключается в предотвращении
заболевания, а также в выявлении патогенных микроорганизмов в очень малых концентрациях, пока они не
выросли до более высокого уровня.
Для количественных методов (методов подсчета) целевая концентрация должна соответствовать
концентрациям, выявляемым повседневно, и любые установленные законом спецификации должны
применяться к используемым матрицам образцов. Целевая концентрация также иногда может
использоваться близко к пределу применения количественных рутинных методов, чтобы проверить
результативность участников а применяемом диапазоне метода. Однако не следует применять
образцы, концентрация микроорганизмов в которых так низка, что при использовании рутинных
4 © ISO 2010 – Все права сохраняются

разведений ожидаемое среднее количество организмов в образце будет меньше 10 колоний на чашку.
Для качественных методов (методов выявления) обычно достаточно присутствия целевых
микроорганизмов в низких концентрациях, чтобы обеспечить действительное заражение в данной
методологии и получить для валидации, чтобы установить или проверить пределы обнаружения для
отдельных лабораторий-участниц.
5.2 Источники, характеризация и прослеживаемость микроорганизмов
Характеристики целевых микроорганизмов должны быть установлены перед их использованием,
чтобы надежно оценить результативность, особенно в программах, где всем участникам разрешается
использовать различные методологии.
Как типичные, так и атипичные штаммы следует рассмотреть и включить в программу контроля
результативности лаборатории.
Признанные контрольные штаммы, полученные из международных банков, следует использовать там
где они наиболее всего подходят для цели программы; однако, для более близкого отражения
повседневных ситуаций используют полученные в лаборатории изоляты или ―дикие‖ штаммы,
выделенные из матриц, используемых в программах проверки квалификации лабораторий. Там где
они применяются, они должны быть достаточно охарактеризованы в соответствии со стандартными
методами соответствующего международного стандарта, чтобы обеспечить очевидность для
организаторов всех атипичных реакций до применения таких штаммов.
В любом случае микроорганизмы, используемые в образцах программ проверки квалификации,
должны прослеживаться до соответствующего фонда культур или до достоверных данных, имеющихся
у организаторов.
В определенных обстоятельствах невозможно использовать контрольные культуры или стандартные
образцы (референтные материалы) из признанных на международном уровне банков или выращенных
в лаборатории штаммов, например, для программ проверки квалификации в отношении
некультивируемых организмов, таких как норовирусы человека. В таких обстоятельствах клинический
материал можно использовать для искусственного заражения испытуемой матрицы, при погружении,
распылении, в случае двустворчатого моллюска, или посредством бионакопления. Метод
искусственного заражения должен быть максимально приближен к ―естественному‖ пути заражения.
Особое внимание необходимо уделить при работе с клиническим материалом человека, пробами
фекальных или рвотных масс, которые необходимо обеспечить защитой от сторонних патогенных
организмов перед использованием. Целевые вирусы должны быть полностью описаны с точки зрения
концентрации штамма с помощью стандартной цепной полимеразной реакции с последующим
секвенированием.
5.3 Фоновая и конкурентная флора
Общая флора образцов, искусственно привнесенная или полученная естественным образом, должны
быть выбрана для оценки способности участников обнаружить и/или подсчитать целевые
микроорганизмы в присутствии нецелевой флоры (типичной для матрицы образца) и презумптивных
целевых микроорганизмов, которые, без соответствующих подтверждений, могут привести к ложным
положительным результатам.
Любые штаммы, используемые для имитации фоновой флоры, должны соответствовать требованиям
5.2 в отношении описания и прослеживаемости. В образцах, зараженных естественным образом,
влияние фоновой флоры на целевые микроорганизмы необходимо определить.
5.4 Выбор матрицы и матричные эффекты
Все матрицы необходимо оценить, прежде чем использовать их для проверки на какое-либо влияние
на целевые микроорганизмы и фоновую флору, например, когда матрицы уменьшают восстановление
введенных микроорганизмов.
Участники должны быть внимательны к природе матрицы пищевого продукта, если известно, что такие
матрицы неблагоприятно влияют на восстановление микроорганизмов (например, те, которые
связывают и удерживают клетки, например, жирные материалы) или обладают бактерицидными или
бактериостатическими свойствами. Для информации участников необходимо включить подходящие и
подтвержденные методики подготовки матриц.
Матрицы образцов, используемые для программ проверки квалификации микробиологических
лабораторий, зачастую, но необязательно, стерилизуют перед применением. Там где распределяют
натуральные, нестерилизованные, образцы, организаторам необходимо определить влияние фоновой
микрофлоры образцов.
6 Верификация образца провайдером
6.1 Общие положения
Общие требования к верификации образца приведены в ISO/IEC 17043 и ISO 13528 (для
дополнительной информации также см. Ссылку [9]); в данном разделе описаны конкретные требования
и проблемы испытаний на однородность и стабильность материалов, содержащих живые
микроорганизмы.
6.2 Испытание образцов на однородность. Общие проблемы
(См. также ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 и B.5.)
Проверка квалификации лабораторий может включать подготовку массу материала для испытания,
которая затем будет разделена на отдельные порции, максимально подобные друг другу, для
распределения по участникам. В другом случае такие порции можно до распределения по участникам
засеять культурой.
Независимо от того, какой метод подготовки был использован, испытуемый материал необходимо
оценить на однородность, обычно для нестабильных свежих материалов это выполняют до или во
время испытаний.
Испытание на однородность следует выполнять на каждой партии образцов, на основе
соответствующих статистических принципов (ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.2 и B.5). такие испытания
приводятся в ISO 13528 или как альтернатива в Приложении B.
Испытание на однородность также необходимо выполнить в том случае, если материалы необходимо
хранить в течение длительного периода, чтобы обеспечить соответствие критериям до начала
испытаний. Количество образцов для испытания от каждой партии также должно быть достаточным,
чтобы получить достаточную информацию об однородности партии; предлагается испытать 10
образцов (в параллельных определениях, если требуется ).
Материал для испытания, который является недостаточно однородным, они всѐ же могут
использоваться как образцы для проверки квалификации лабораторий, (ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3.1
ПРИМЕЧАНИЕ 3), при условии использования соответствующих статистических принципов, чтобы
учесть большее расхождение между образцами (см. ISO 13528). Статистический план для
гетерогенных материалов, включая анализ повторных проб нескольких образцов (см. ISO 5725-5),
следует использовать для минимизации влияния недостатка однородности на оценку показателей
лаборатории- участницы.
6.3 Испытание на однородность образцов для количественного анализа (подсчета)
Общие требования и методы испытания на однородность образцов для проверки квалификации
лабораторий в количественном анализе приведены в ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3 и B.5, а также в
ISO 13528.
6 © ISO 2010 – Все права сохраняются

Материалы, которые показывают достаточно большую изменчивость между параметрами образцов,
значительно влияющую на оценку показателей лабораторий-участниц, не следует использовать в
межлабораторных исследованиях, если только не применяются специальные требования и методы
анализа данных, например, низкое количество микроорганизмов в питьевой воде и других образцах.
Критерий для оценки ―достаточно однородный (материал)‖ определяется требованиями
межлабораторного сравнения (см. ISO 13528 и Приложение B). В то же время, в общем, достаточно
однородным считается материал, для которого стандартное отклонение между образцами (на
соответствующим образом модифицированной шкале) будет u 0,3 , где – целевое стандартное
p p
отклонение, используемое для оценки показателей лабораторий (см. ISO 13528).
Любое альтернативное испытание на однородность должно удовлетворять следующим критериям
(взято из Ссылки [9]):
a) вероятность браковки достаточно однородного материала должна быть 5 %;
b) вероятность браковки испытуемого материала, для которого вариация между образцами
составляет 1,5 , а является приемлемой межлабораторной изменчивостью (выраженной как
p p
целевое стандартное отклонение), будет W 80 %.
Вероятность браковки материала, равная 80 %, там где изменчивость образцов составляет 1,5 ,
p
основана на исследовании с помощью моделирования параллельного анализа 10 tобразцов методом,
имеющим аналитическое стандартное отклонение 0,5 (т.е. 0,125 логарифмических единиц), и
p
критическое значение для T (см. Приложение B), которое удовлетворяет критерию a) предыдущего
абзаца. Она представляет то, чего можно достичь при целесообразном анализе
Испытания на однородность основаны на оценках дисперсии образцов и дисперсии анализа
(повторяемости), полученных в условиях повторяемости. Подходящие методы измерения
изменчивости приведены в Приложении B.
Дисперсию анализа (повторяемость) следует оценивать по анализам повторных образцов исходных
суспензий, полученных из анализируемых проб (Ссылки [15][16]). Такую аналитическую дисперсию
можно также рассчитать по количеству подсчитанных колоний и прецизионности используемых
аналитических материалов (Ссылка [10]).
В микробиологии, изменчивость образцов должна оцениваться в условиях повторяемости (за один раз).
Если это невозможно, дисперсия между образцами включит внутрилабораторную воспроизводимость
и может привести к ложной браковке удовлетворительного материала.
Если число подсчитанных колоний достаточно высоко (более 35 - 40 колоний на чашку), аналитическое
стандартное отклонение, , обычно удовлетворяет неравенству
an
an
0,5
p
где целевое стандартное отклонение, и следует использовать испытание на достаточную
p
однородность, предложенное в Ссылке [11] (см. Приложение B). Если число подсчитанных колоний
меньше (меньше 35 - 40 колоний на чашку), то рекомендуется измерить разность T T (см.
1 2
Приложение B).
Если для лабораторий-участниц предусмотрены повторные образцы, то изменчивость образцов,
полученная участниками подлежит изучению провайдером, чтобы оценить однородность материала.
Хотя такая изменчивость включает внутрилабораторную воспроизводимость, большее число
лабораторий-участниц увеличивает статистическую мощность анализа и может стать хорошим
индикатором успешных этапов исследования.
Если число подсчитанных колоний совсем невелико (скажем, меньше 20), аналитическая дисперсия
(повторяемость) будет высокой. В этом случае провайдеру следует рекомендовать лабораториям-
участницам повторять подсчеты колоний на анализируемых пробах, чтобы выполнить следующее
условие (см. ISO 13528):
r
u0,3
p
n
где
стандартное отклонение повторяемости;
r
целевое стандартное отклонение;
p
n число повторных проб.
Если это невозможно выполнить, следует оценивать показатели лабораторий очень тщательно.
Если материал образцов для проверки квалификации лабораторий содержит небольшое число КОЕ
(скажем, меньше 20), то необходимо измерить изменчивость образцов (т.е. изменчивость повторных
проб), чтобы продемонстрировать. Что она не превышает случайные изменения (Пуассона), чтобы
гарантировать значимую оценку. Показатель дисперсии испытания n образцов (где n равно минимум
10) не должен превышать значение при вероятности 0,05.
n 1
6.4 Определение однородности материала для качественных методов
Аналогичные принципы применяются к испытаниям на однородность для качественных
(присутствие/отсутствие) методов, но требуется особое внимание, если концентрация введенных
микроорганизмов низкая (см. 8.4).
Однородность образцов для качественного анализа можно определить подсчетом введенных
организмов. Также можно определить уровень заражения, используя метод наиболее вероятного
числа (НВЧ=MPN). Если возможет подсчет, можно использовать испытания на однородность,
описанные в 6.3, в зависимости от того, как образцы искусственно заражаются и как введенные
микроорганизмы подсчитывают.
6.5 Испытание на стабильность, выполняемое провайдером
6.5.1 Общие положения
Образцы, применяемые для проверки квалификации, должны быть стабильны, как минимум, в течение
периода с момента приготовления (провайдером) до начала изучения или до конца установленного
периода (см. ISO/IEC 17043:2010, 4.4.3).
Если всегда использовать образец одного и того же типа с одним и тем же штаммом (штаммами),
достаточно будет выполнить только проверку (например, после приготовления образца и
непосредственно перед датой проведения исследования) на последовательных образцах. Провайдеру
также следует изучить результаты, полученные лабораториями-участницами по проверке
стабильности материала в течение времени, отпущенного на исследование.
6.5.2 Стабильность в условиях хранения
Для стабильных образцов, которые всегда хранятся при низких температурах (например, 70 °C,
20 °C, 5 °C), стабильность должна определяться проверкой уровня аналита и однородности в
каждой партии через установленные интервалы в процессе хранения. Минимальный период для
стабильности должен составлять время от подготовки материалов до установленной даты или
периода проведения анализа.
Частота испытаний зависит от уже имеющейся информации для партии образцов и общего периода
8 © ISO 2010 – Все права сохраняются

времени, в течение которого требуется информация о стабильности. Если общее время хранения,
например, составляет только две недели, может потребоваться измерять ее каждые два дня, но если
требуется хранение в течение одного года, достаточно будет измерять стабильность один раз в месяц.
Для больших партий образцов следует испытывать не менее трех образцов в каждом отдельном
случае, чтобы показать непрерывную стабильность по всей партии (ISO 13528:2005, Приложение B).
Какая бы частота испытаний не использовалась, она должна быть обоснована и подтверждена как
приемлемая организаторами программы.
6.5.3 Стабильность в процессе транспортирования
В дополнение к информации по стабильности в условиях хранения, собранной в процессе валидаций
для новой программы, важно испытать влияние ―неправильных условий‖ на образцы, например,
длительное время транспортирования при повышенных температурах (см. ISO/IEC 17043:2010, 4.6.3.2).
Сначала необходимо выполнить испытание на стабильность, используя разные температуры для
отображения условий ―наиболее неблагоприятного случая перевозки‖ и максимальных ожидаемых
задержек, чтобы определить влияние такого плохого обращения с образцами. Например, часть
образцов из одной партии хранят при установленной температуре хранения (например, при 20 °C), а
другую часть – при 5 °C, 15 °C и 25 °C. Каждый день по пять образцов, хранящихся при каждой из
указанных температур, анализируют в течение одной или двух недель.
План такого эксперимента на стабильность можно менять, но он должен подходить для получения
информации о влиянии различных температур хранения на образцы и для установления верхнего
предела температуры для получения лабораторией. Полученную информацию можно использовать
для выбора оптимальных условий распространения образцов по программе проверки квалификации,
например, требуется ли охлаждать образцы в процессе транспортирования, используя сухой лед или
хладоэлементы, либо возможно рассылка образцов при условиях окружающей среды.
Для рассылки в тех случаях, когда температура является критическим параметром, требуется
контроль охлаждения и строгие критерии приемки образцов, такие как программы нормативных
испытаний на E.coli в двустворчатых моллюсках, рекомендуется при перевозке поместить отдельные
приборы, регистрирующие температуру, в каждую коробку с образцами. Проверка данных по
температуре может помочь провайдеру программы проверки квалификации лабораторий объяснить
аномальные результаты, полученные участниками программы.
7 Обращение с образцами
7.1 Общие положения
Общие требования по обращению с образцами описаны в ISO/IEC 17043:2010, 4.6.1 и 4.6.2, а в данном
разделе приводится только дополнительная информация, непосредственно касающаяся
микробиологических образцов.
7.2 Инструкции для участников
Для каждого исследования каждая лаборатория-участница должна получить четкие инструкции,
касающиеся:
a) условий хранения образцов всех типов, в частности, информации о температуре хранения,
которая также должна быть промаркирована на внешней стороне упаковки;
b) максимальной температуре образцов по получении лабораторией-участницей, в зависимости от
рассматриваемого случая;
c) инструкций по обращению с образцами — если требуется восстановление, разбавление или
другая обработка образцов, это следует четко описать для каждого комплекта и типа образцов;
d) соответствующих карт безопасности, которые следует включать в каждую отправку (например,
требуемые детали приведены в Приложении D);
e) других дополнительных инструкций, например:
1) предельный срок для выполнения испытаний по программе и отсылке результатов
организаторам,
2) метод(ы) исследования (предписанные или на усмотрение участников, по обстоятельствам),
3) типы отчетов о результатах для организаторов, особенно в отношении единиц измерения,
4) организаторы могут потребовать подробное описание материалов, методов, условий
инкубирования, и т.д., в отчетах по форме — в этом случае следует предоставить инструкции
по заполнению таких форм.
8 Оценки показателей лабораторий, участвующих в программе проверки
квалификации
8.1 Общие положения
Там где возможно, статистические принципы, используемые для оценки результативности программ
проверки квалификации, следует основывать на приведенных в стандартах, например, в
ISO/IEC 17043:2010, 4.7 и ISO 13528 (для дополнительной информации см. также Ссылку [9]), хотя
программы проверки квалификации микробиологических лабораторий могут принять процедуры,
которые отличаются обычно используемых в других секторах, если они подходят к их конкретным
программам.
8.2 Предварительная оценка
Проверка квалификации включает регулярное распределение образцов для испытания по
лабораториям-участницам для измерения конкретных величин (в большинстве случаев -
микроорганизмов). Результаты затем сравнивают с результатами, полученными другими участниками.
Проверка квалификации, следовательно, обеспечивает независимые средства испытания и сравнения
отдельных показателей.
Постоянные удовлетворительные показатели на этапах проверки квалификации могут обеспечить
подтверждение для лабораторий-участниц надежности проводимых в их лабораториях процессов,
включая методы исследования, обучение аналитиков, оборудование, реактивы, методы контроля
качества, интерпретацию результатов и способы составления отчетов.
Однако, неудовлетворительные результаты предполагают, что результативность отдельного участника
оказалась слабой по сравнению с согласованным значением, и здесь может возникнуть целый ряд
вопросов, включая следующие: все ли образцы были одинаковы, как работали другие участники, могла
ли методология иметь смещенные результаты и прав
...