ISO 15141-2:1998

Foodstuffs — Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products — Part 2: High performance liquid chromatographic method with bicarbonate clean up

Produits alimentaires — Dosage de l'ochratoxine A dans les céréales et produits dérivés — Partie 2: Méthode par chromatographie liquide haute performance comprenant une étape d'extraction par une solution de bicarbonate

La présente norme internationale décrit une méthode de dosage de l'ochratoxine A (OTA), pour des concentrations supérieures à 3 µg/kg. La méthode a été validée selon la norme ISO 5725:1986 [1] par des analyses interlaboratoires portant sur l'orge à des teneurs de 2,9 µg/kg, 3,0 µg/kg, 7,4 µg/kg et 14,4 µg/kg en ochratoxine A, sur du maïs à des teneurs de 8,2 µg/kg et 16,3 µg/kg en ochratoxine A et sur du son de blé à des teneurs de 3,8 µg/kg et 4,5 µg/kg d'ochratoxine A. NOTE : Plusieurs laboratoires ont montré que cette méthode peut être appliquée également sur de la farine de blé.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 21-Oct-1998
• Withdrawal Date: 21-Oct-1998
• ICS: 67.060 - Cereals, pulses and derived products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 4 - Cereals and pulses
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 4 - Cereals and pulses
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 24-Jul-2018

Relations

• Revised: ISO 15141:2018 - Cereals and cereal products — Determination of ochratoxin A — High performance liquid chromatographic method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection
• Effective Date: 14-Dec-2013
• Consolidates: ISO 7206-1:1985 - Implants for surgery — Partial and total hip joint prostheses — Part 1: Classification, designation of dimensions and requirements
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15141-2
First edition
1998-10-15
Foodstuffs — Determination of
ochratoxin A in cereals and cereal
products —
Part 2:
High performance liquid chromatographic
method with bicarbonate clean up
Produits alimentaires — Dosage de l’ochratoxine A dans les céréales et
produits dérivés —
Partie 2: Méthode par chromatographie liquide haute performance
comprenant une étape d’extraction par une solution de bicarbonate
A
Reference number
ISO 15141-2:1998(E)

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ISO 15141-2:1998(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 15141-2 was prepared by the European
Committee for Standardization (CEN) in collaboration with ISO Technical
Committee TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 4, Cereals
ans pulses, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Throughout the text of this standard, read “.this European Standard.” to
mean “.this International Standard.”.
ISO 15141 consists of the following parts, under the general title
Foodstuffs — Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products:
— Part 1: High performance liquid chromatographic method with silica
gel clean up
— Part 2: High performance liquid chromatographic method with
bicarbonate clean up
Annexes A and B of this part of ISO 15141 are for information only.
©  ISO 1998
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
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Printed in Switzerland
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ISO ISO 15141-2:1998(E)
Contents
Foreword .iii
1 Scope .1
2 Normative references.1
3 Principle .1
4 Reagents .1
5 Apparatus and equipment .3
6 Procedure .4
7 Calculation.6
8 Precision .7
9 Test report .8
Annex A (informative) Precision data .9
Annex B (informative) Bibliography.11
Foreword
The text of EN ISO 15141-2/1998 has been prepared by Technical Committee CEN/TC 275 "Food analysis -
Horizontal methods", the secretariat of which is held by DIN, in collaboration with Technical Committee
ISO/TC 34 "Agricultural food products".
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of an identical
text or by endorsement, at the latest by April 1999, and conflicting national standards shall be withdrawn at the
latest by April 1999.
This European Standard „Foodstuffs - Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products“
consists of two parts:
Part 1: High performance liquid chromatographic method with silica gel clean up
Part 2: High performance liquid chromatographic method with bicarbonate clean up
According to the CEN/CENELEC Internal Regulations, the national standards organizations of the following
countries are bound to implement this European Standard: Austria, Belgium, Czech Republic, Denmark,
Finland, France, Germany, Greece, Iceland, Ireland, Italy, Luxembourg, Netherlands, Norway, Portugal,
Spain, Sweden, Switzerland and the United Kingdom.
iii

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ISO ISO 15141-2:1998(E)
1 Scope
This European Standard specifies a method for the determination of ochratoxin A (OTA) at levels
greater than 3 μg/kg.
The method has been successfully validated in interlaboratory studies according to ISO 5725:1986 [1]
on whole barley containing 2,9 μg/kg, 3,0 μg/kg, 7,4 μg/kg and 14,4 μg/kg of ochratoxin A, on whole
maize containing 8,2 μg/kg and 16,3 μg/kg of ochratoxin A as well as on wheat bran containing 3,8
μg/kg and 4,5 μg/kg of ochratoxin A.
NOTE: Numerous laboratory experiences have shown that this method is also applicable to
wheat flour.
2 Normative references
This European Standard incorporates by dated or undated reference, provisions from other publica-
tions. These normative references are cited at the appropriate places in the text and the publications
are listed hereafter. For dated references, subsequent amendments to or revisions of any of these
publications apply to this draft European Standard only when incorporated in it by amendment or re-
vision. For undated references the latest edition of the publication referred to applies.
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987)
3 Principle
Ochratoxin A is extracted from grains with chloroform-aqueous phosphoric acid and isolated by liq-
uid-liquid partitioning into aqueous bicarbonate solution. The solution is applied to a C cartridge, and
18
ochratoxin A is eluted with ethyl acetate-methanol-acetic acid. Ochratoxin A is separated by reversed
phase HPLC and identified and quantified by fluorescence. Chromatography of ochratoxin A methyl
ester derivative confirms the identification [2] to [5].
WARNING: Ochratoxin A causes kidney and liver damage and is a probable carcinogen. Ob-
serve appropriate safety precautions [6] for handling such compounds and in particular avoid
handling in dry form as the electrostatic nature can result in dispersion and inhalation. Glass-
ware can be decontaminated with 4 % sodium hypochlorite solution. Attention is drawn to the
statement made by the International Agency for Research on Cancer (WHO) [7], [8].
4 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
only distilled water or water of grade 1 according to EN ISO 3696. Solvent shall be of quality for HPLC
analysis.
4.1 Chloroform, stabilized with for example 2-methyl-2-butene or ethanol
4.2 Phosphoric acid, c(H PO ) ≈ 0,1 mol/l
3 4
4.3 Diatomaceous earth
1
Soak about 900 g of acid-washed diatomaceous earth e.g. Celite ® 545 ) overnight in methanol (4.7).
Filter through a double layer of paper in a Buchner funnel (5.6), wash with 8 l of water and dry for 12 h
at 150 °C.

1
) Celite® 545 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the
convenience of users of this standard and does not constitute an endorsement by CEN of these products.
1

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ISO 15141-2:1998(E) ISO
4.4 Sodium bicarbonate solution, ρ(NaHCO ) = 30 g/l
3
4.5 Ethyl acetate
4.6 Toluene
4.7 Methanol
4.8 Glacial acetic acid, ϕ(CH COOH) ≈ 98 %
3
4.9 Acetonitrile
4.10 Dichloromethane
4.11 Elution solution: ethyl acetate (4.5), methanol (4.7) and glacial acetic acid (4.8) 95+5+0,5
(V+V+V) .
4.12 Mobile phase: mix acetonitrile (4.9), water and glacial acetic acid (4.8) 99+99+2 (V+V+V) and de-
gas.
4.13 Solvent mixture: toluene (4.6) and glacial acetic acid (4.8) 99+1 (V+V).
4.14 Boron trifluoride
4.15 Boron trifluoride in methanol solution, ρ(BF ) = 14 g/100 ml
3
WARNING: Use a well maintained fume hood. Avoid contact with skin, eyes, and respiratory
tract.
4.16 Ochratoxin A, in crystal form or as film in ampoules.
4.17 Ochratoxin A stock solution
Dissolve 1 mg of the ochratoxin A (crystals) (4.16) or the contents of 1 ampoule (if ochratoxin A has
been obtained as a film) in solvent mixture (4.13) to give a solution containing approximately 20 μg/ml
to 30μg/ml of ochratoxin A.
To determine the exact concentration, record the absorption curve between a wavelength of 300 nm
and 370 nm in 5 nm steps in a 1 cm quartz cell (5.4) with solvent mixture as reference. Identify the
wavelength for maximum absorption by recording in 1 nm steps around the maximum as reference.
Calculate the mass concentration of ochratoxin A, ρ , in micrograms per millilitre using equation 1:
ota
M× 100
r =×A (1)
OTA max
kd×
where:
A is the absorption determined at the maximum of the absorption curve (here: at 333 nm)
max
M is the relative molecular mass of ochratoxin A (M = 403 g/mol);
κ is the relative molar absorption coefficient of ochratoxin A in solvent mixture, (here: 544
2
m /mol);
δ is the path length of the quartz cell in centimetres;
2

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ISO ISO 15141-2:1998(E)
4.18 Ochratoxin A standard solution
Dilute the stock solution (4.17) with solvent mixture (4.13) to obtain a standard solution with a mass
concentration of ochratoxin A of 4 μg/ml.
This solution can be stored in a refrigerator at 4 °C. Stability shall be checked.
4.19 Ochratoxin A calibration solutions
Dispense 5 μl, 10 μl, 25 μl, 50 μl and 100 μl aliquot portions of standard solution (4.18) into separate
4 ml to 5 ml vials (5.15) using fixed-volume syringes (5.16). Evaporate just to dryness under nitrogen.
Add 1,0 ml of the mobile phase (4.12) to each vial for final ochratoxin A mass concentrations of
0,5 ng/25 μl, 1 ng/25 μl, 2,5 ng/25 μl, 5 ng/25 μl and 10 ng/25 μl.
4.20 Sodium hypochlorite solution, ρ(NaOCl) = 4 g/100 ml
5 Apparatus and equipment
Usual laboratory equipment and, in particular, the following:
5.1 Laboratory mill and a sieve with a 1 mm aperture size
5.2 High-speed blender. 1250 ml jar with cover
5.3 Spectrometer, for measurements of wavelengths between 300 nm and 370 nm, having a spec-
tral band width of not more than ± 2 nm
5.4 Quartz cells, with 1 cm optical path length and no significant absorption between wavelengths
of 300 nm and 370 nm
5.5 Glass fibre filters, 0,3 mm thickness, 1,5 μm pore retention, 9,0 cm diameter (or equivalent)
5.6 Buchner funnels, of suitable diameters, e. g. of 9 cm and 25 cm
5.7 Fluted filter paper
5.8 Separation funnels, 25 ml and 100 ml
5.9 Centrifuge, with 100 ml tubes or flasks
5.10 Adsorption cartridge, disposable 3 ml polypropylene tube containing 500 mg of 40 μm C sil-
18
ica
5.11 Vacuum manifold with stopcocks at each port for holding C columns. May be replaced by a
18
syringe (5 ml to 10 ml) with a suitable adapter (Luer)
5.12 Test tubes, e.g. 10 ml with polytetrafluoroethylene (PTFE)-lined screw cap
5.13 Membrane filter, of pore size of approximately 0,45 μm
5.14 HPLC apparatus comprising the following
3

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ISO 15141-2:1998(E) ISO
5.14.1 High performance liquid chromatograph, eluent reservoir, pump with adjustable flow from
0,5 ml/min to 5 ml/min, injection valve with e.g. 25 μl loop, fluorescence detector, compatible
recorder or integrator.
2
5.14.2 HPLC reverse phase analytical column, e.g. from Supelco ).
- length: 250 mm
- inner diameter:4,6 mm
- packing: spherical 5 μm C material or equivalent
18
NOTE: Shorter columns can also be used (e.g. a column with a length of 120 mm to 150 mm).
5.15 Vials, approximately 5 ml, with PTFE-lined screw cap, or appropriate sealable container
5.16 Fixed-volume syringe
6 Procedure
6.1 General
The whole analytical procedure should be performed in one working day. If several samples are proc-
essed at the same time all samples should be analysed during the following night using an automatic
sample injector.
6.2 Preparation of the test sample
Grind the sample and mix it thoroughly until it passes a 1 mm sieve (5.1) using a laboratory mill (5.1)
or mixer and mix thoroughly.
6.3 Extraction of ochratoxin A from the sample
Weigh, to the nearest 0,1 g, a 50 g test portion prepared as in 6.2 into a blender jar (5.2) and add first
250 ml of chloroform (4.1) and then 25 ml of phosphoric acid (4.2). Blend for 3 min at medium speed.
Near the end of blending add 10 g (45 ml) of diatomaceous earth (4.3). Filter the extract through glass
fibr
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15141-2
Première édition
1998-10-15
Produits alimentaires — Dosage de
l’ochratoxine A dans les céréales et
produits dérivés —
Partie 2:
Méthode par chromatographie liquide haute
performance comprenant une étape
d’extraction par une solution de bicarbonate
Foodstuffs — Determination of ochratoxin A in cereals and cereal
products —
Part 2: High performance liquid chromatographic method with bicarbonate
clean up
A
Numéro de référence
ISO 15141-2:1998(F)

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ISO 15141-2:1998(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 15141-2 a été élaborée par le Comité
européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 4,
Céréales et légumineuses, conformément à l'Accord de coopération
technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Tout au long du texte de la présente partie de l'ISO 15141, lire «.la
présente norme européenne.» avec le sens de «.la présente partie de
l'ISO 15141.».
L'ISO 15141 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général
Produits alimentaires — Dosage de l'ochratoxine A dans les céréales et
produits dérivés:
—
Partie 1: Méthode par chromatographie liquide haute performance
comprenant une étape d'extraction par chromatographie sur gel de
silice
— Partie 2: Méthode par chromatographie liquide haute performance
comprenant une étape d'extraction par une solution de bicarbonate
Les annexes A et B de la présente partie de l’ISO 15141 sont données
uniquement à titre d’information.
©  ISO 1998
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord
écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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Internet [e-mail]
Imprimé en Suisse
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ISO ISO 15141-2:1998(F)
Sommaire
Avant-propos.iii
1 Domaine d'application.1
2 Références normatives.1
3 Principe .1
4 Réactifs.1
5 Appareillage .4
6 Mode opératoire.5
7 Calculs.8
8 Fidélité.8
9 Rapport d'essai .9
Annexe A (informative)  Données de fidélité .10
Annexe B (informative)  Bibliographie .12
Avant-propos
Le texte du EN ISO 15141-2:1998:1998 a été élaboré par le Comité Technique CEN/TC 275
"Analyse des produits alimentaires - Méthodes horizontales"dont le secrétariat est tenu par le DIN,
en collaboration avec le Comité Technique ISO/TC 34 "Produits agricoles alimentaires".
Cette norme européenne devra recevoir le statut de norme nationale, soit par publication d'un
texte identique, soit par entérinement, au plus tard en avril 1999, et toutes les normes nationales
en contradiction devront être retirées au plus tard en avril 1999.
La présente norme européenne „Produits alimentaires - Dosage de l'ochratoxine A dans les
céréales et produits dérivés“ se compose de deux parties:
Partie 1: Méthode par chromatographie liquide haute performance comprenant une étape
d'extraction par chromatographie sur gel de silice
Partie 2: Méthode par chromatographie liquide haute performance comprenant une étape
d'extraction par une solution de bicarbonate
Selon le Règlement Intérieur du CEN/CENELEC, les instituts de normalisation nationaux des pays
suivants sont tenus de mettre cette norme européenne en application: Allemagne, Autriche,
Belgique, Danemark, Espagne, Finlande, France, Grèce, Irlande, Islande, Italie, Luxembourg,
Norvège, Pays-Bas, Portugal, République Tchèque, Royaume-Uni, Suède et Suisse.
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ISO ISO 15141-2:1998(F)
1 Domaine d'application
La présente norme européenne décrit une méthode de dosage de l'ochratoxine A (OTA), pour des
concentrations supérieures à 3 μg/kg.
La méthode a été validée selon la norme ISO 5725:1986 [1] par des analyses interlaboratoires
portant sur l'orge à des teneurs de 2,9 μg/kg, 3,0 μg/kg, 7,4 μg/kg et 14,4 μg/kg en ochratoxine A,
sur du maïs à des teneurs de 8,2 μg/kg et 16,3 μg/kg en ochratoxine A et sur du son de blé à des
teneurs de 3,8 μg/kg et 4,5 μg/kg d'ochratoxine A.
NOTE : Plusieurs laboratoires ont montré que cette méthode peut être appliquée également
sur de la farine de blé.
2 Références normatives
Cette norme européenne comporte par référence datée ou non datée des dispositions d'autres
publications. Ces références normatives sont citées aux endroits appropriés dans le texte et les
publications sont énumérées ci-après. Pour les références datées, les amendements ou révisions
ultérieurs de l'une quelconque de ces publications ne s'appliquent à cette norme européenne que
s'ils y ont été incorporés par amendement ou révision. Pour les références non datées, la dernière
édition de la publication à laquelle il est fait référence s'applique.
EN ISO 3696 Eau pour laboratoire à usage analytique - Spécification et méthodes
d'essai (ISO 3696:1987)
3 Principe
L'ochratoxine A est extraite des grains par une solution d'acide phosphorique-chloroforme puis
transférée par partage liquide-liquide dans une solution aqueuse de bicarbonate. La solution est
appliquée à une cartouche C18 et l'ochratoxine A est éluée avec de l'acétate d'éthyle-méthanol-
acide acétique. L'ochratoxine A est séparée puis identifiée par chromatographie liquide à phase
inversée puis quantifiée par fluorescence. La chromatographie du dérivé ester de méthyle de
l'ochratoxine A confirme l'identification [2] à [5].
AVERTISSEMENT: L'ochratoxine A provoque des lésions au niveau des reins et du foie et
elle est probablement cancérigène. Respecter les précautions de sécurité lors des
manipulations de ces composants ; éviter notamment toute manipulation du produit sous
une forme sèche, du fait de sa nature électrostatique qui peut occasionner une dispersion
et une inhalation. Il convient de décontaminer la verrerie avec une solution d'hypochlorite
de sodium à 4 %. Considérer avec attention les conseils prodigués par l'Agence
Internationale de Recherche sur le Cancer (OMS) [7], [8].
4 Réactifs
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de
l'eau de qualité 1, conformément à l'EN ISO 3696. Les solvants doivent être de qualité pour CLHP.
4.1 Chloroforme, stabilisé par exemple avec du méthyl 2-butène 2, ou de l'éthanol.
1

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ISO 15141-2:1998(F) ISO
à c(H PO ) ≈ 0,1 mol/l
4.2 Solution d'acide phosphorique,
3 4
4.3 Terre de diatomées
1)
Laisser tremper une nuit dans du méthanol (4.7) environ 900 g de Celite 545 lavé à l'acide.
Filtrer au travers d'une double couche de papier dans un entonnoir Büchner (5.6) puis laver
avec 8 l d'eau et sécher pendant 12 h à 150 °C.
4.4 Bicarbonate de sodium, ρ(Na HCO ) = 30 g/l.
3
4.5 Acétate d'éthyle
4.6 Toluène
4.7 Méthanol

ϕ
4.8 Acide acétique glacial, (CH - COOH) ~ 98 %.
3
4.9 Acétonitrile.
4.10 Dichlorométhane
4.11 Solution d'élution
Ajouter 95 volumes d'acétate d'éthyle (4.5), 5 volumes de méthanol (4.7) et 0,5 volumes d'acide
acétique glacial (4.8).
4.12 Phase mobile pour CLHP
Mélanger de l'acétonitrile (4.9), de l'eau et de l'acide acétique glacial (4.8), 99 + 99 + 2 (V + V + V)
et dégazer.
4.13 Mélange toluène/acide acétique
Toluène (4.6) et acide acétique glacial (4.8), 99 + 1 (V + V).
4.14 Trifluorure de bore

1) 
Célite 545 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à
l'intention des utilisateurs de la présente norme et ne signifie nullement que le CEN recommande l'emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
2

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ISO ISO 15141-2:1998(F)
ρ(BF ) : 14 g/100 ml.
4.15 Trifluorure de bore en solution méthanolique,
3
AVERTISSEMENT : Utiliser une hotte d'extraction en bon état de marche. Éviter le contact
avec la peau, les yeux et les voies respiratoires.
4.16 Ochratoxine A, sous forme de cristaux, ou de film en ampoule.
4.17 Solution mère d'ochratoxine A
Dissoudre 1 mg d’ ochratoxine A (cristaux) (4.16) ou le contenu d’une ampoule (si l’ ochratoxine A
est sous forme de film) dans le mélange de solvants (4.13) pour obtenir une solution contenant
environ 20 μg/ml à 30 μg/ml d’ ochratoxine A. Pour déterminer la concentration précise,
enregistrer la courbe d'absorption entre 300 nm et 370 nm tous les 5 nm dans une cellule en
quartz d'1 cm (5.4) avec le mélange de solvants (4.13), comme référence. Identifier la longueur
d'onde de l'absorption maximale en enregistrant tous les nm autour du maximum comme
référence. Calculer la teneur en ochratoxine ρ , exprimée en microgrammes par millilitre, à
OTA
l'aide de l'équation (1) :
M×
100
r =×A (1)
OTA max
kd×
où :
A est l'absorbance déterminée au maximum de la courbe d'absorption (ici à : 333 nm) ;
max
M est la masse moléculaire de l'ochratoxine A (M = 403 g/mol) ;
est le coefficient d'absorption moléculaire de l'ochratoxine A, dans le mélange de
k
2
solvants (ici : 544 m /mol) ;
δ est la longueur du trajet optique, en centimètres.
4.18 Solution étalon d'ochratoxine A
Diluer la solution mère (4.17) dans le mélange de solvants (4.13) pour obtenir une solution étalon
de concentration d’ ochratoxine A 4 μg/ml.
Cette solution peut être stockée dans un réfrigérateur à 4 °C. La stabilité doit être vérifiée.
4.19 Solutions d'étalonnage d'ochratoxine A
Transférer dans des petits flacons de 4 ml à 5 ml (5.15) des volumes de 5 μl, 10 μl, 25 μl, 50 μl et
100 μl de solution étalon d'ochratoxine A (4.18) en utilisant des pipettes à volume fixe (5.16).
Évaporer à sec sous azote. Ajouter 1,0 ml de phase mobile (4.12) dans chaque flacon afin
d'obtenir les concentrations finales en ochratoxine suivantes : 0,5 ng/25 nl, 1 ng/25 μl,
2,5 ng/25 μl, 5 ng/25 μl et 10 ng/25 μl.
4.20 Solution d'hypochlorite de sodium, ρ (NaOCl) = 4 g/100 ml.
3

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ISO 15141-2:1998(F) ISO
5 Appareillage
Appareillage courant de laboratoire et, en particulier :
5.1 Broyeur de laboratoire et tamis d'une ouverture de maille d'1 mm.
5.2 Mixeur à grande vitesse
Bol de 1 250 ml avec couvercle.
adapté pour des mesures entre 300 nm et 370 nm, d'une largeur de bande
5.3 Spectromètre,
ne dépassant pas ± 2 nm.
5.4 Cuves en quartz, d'une longueur de trajet optique d'1 cm et sans absorption significative
entre 300 nm et 370 nm.
5.5 Filtres en fibre de verre, de 0,3 mm d'épaisseur, de porosité 1,5 μm et d'un diamètre
de 9,0 cm, ou équivalent.
5.6 Entonnoirs Büchner, par exemple de 9 cm et 25 cm de diamètre.
5.7 Papier filtre plissé.
5.8 Ampoule à décanter, de 25 ml et 100 ml.
5.9 Centrifugeuse, avec pots ou flacons de 100 ml.
à usage unique, avec tube en polypropylène de 3 ml,
5.10 Cartouche d'adsorption,
contenant 500 mg de silice greffée en C de 40 μm.
18
5.11 Extracteur sous vide, avec robinet d'arrêt à chaque sortie pour maintenir les colonnes C .
18
Peut être remplacé par une seringue (de 5 ml à 10 ml) avec adaptateur (Luer) adéquat.
5.12 Tubes à essai, par exemple de 10 ml, avec bouchon à vis en PTFE.
5.13 Membrane filtrante, d'une grosseur de pore de 0,45 μm.
4

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ISO ISO 15141-2:1998(F)
5.14 Chaîne de CLHP, comprenant les éléments suivants :
5.14.1 Chromatographie liquide haute performance, réservoir d'éluants, pompe à débit réglable
de 0,5 ml/min à 5 ml/min, vanne d'injection munie par exemple d'une boucle de 25 μl, détecteur de
fluorescence, enregistreur ou intégrateur compatible.
2)
5.14.2 Colonne analytique CLHP à phase inversée, par exemple Supelco :
- longueur : 250 mm ;
- diamètre interne : 4,6 mm ;
- support : particules sphériques de 5 μm, de silice greffée en C , ou équivalent.
18
NOTE : Des colonnes plus courtes peuvent aussi être employées (par exemple de
120 mm à 150 mm de long).
5.15 Flacons, d'environ 5 ml avec bouchon à vis, en PTFE, ou flacons similaires.
5.16 Pipettes à volume fixe.
6 Mode opératoire
6.1 Il convient d'appliquer l'ensemble du mode opératoire analytique en une journée de travail.
Si plusieurs échantillons sont traités en même temps, il convient de les analyser tous la nuit
suivante en utilisant un injecteur automatique d'échantillons.
6.2 Préparation des échantillons
Moudre l'échantillon jusqu'à ce qu'il passe par un tamis d'1 mm (5.1) en utilisant u
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