ISO 3811:1979
(Main)Meat and meat products — Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria and presumptive Escherichia coli — (Reference method)
Meat and meat products — Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria and presumptive Escherichia coli — (Reference method)
Viande et produits à base de viande — Recherche et dénombrement des bactéries présumées coliformes et présumées Escherichia coli — (Méthode de référence)
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard 381 1
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*ME~YHAPOIIHAR OPrAHH3AUMR nO CTAHAAPTH3AUHM.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
e Meat and meat products - Detection and enumeration of
pres u n? p t ive co I if o r m bac te ria a nd p res u m p t ive Escherichia
di (Reference method)
Viandes et produits à base de viande - Recherche et dénombrement des bactéries présumées coliformes et présumées
Escherichia coli (Méthode de référence)
First edition - 1979-11-15
- UDC 637.5 : 576.851.48 Ref. No. IS0 3811-1979 (E)
I
O>
Descriptors : food products, meat products, microbiological analysis, counting, bacteria, coliform bacteria.
E
-
e
Price based on 5 pages
s
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing Interna-
tional Standards is carried out through IS0 technical committees. Every member body
interested in a subject for which a technical committee has been set up has the right to
be represented on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council.
International Standard IS0 381 1 was developed by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in May 1975.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Austria Germany, F. R. Poland
Brazil Ghana Romania
Canada
Hungary South Africa, Rep. of
Chile India Spain
Czechoslovakia
Iran Thailand
Denmark Ireland Turkey
Ethiopia
Mexico Yugoslavia
France Netherlands
a
The member bodies of the following countries expressed disapproval of the document
on technical grounds :
Australia
New Zealand
United Kingdom
0 International Organization for Standardization, 1979 O
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD IS0 3811-1979 (E)
Meat and meat products - Detection and enumeration of
p res u m p t ive co I if o r m bac ter ia a n d pres u m p tive Escherichia
cob (Reference method)
of application duction in the selective medium and indole production in the
1 Scope and field
tryptone water, determination of the most probable number of
presumptive E. coli by using the MPN table (see the annex).
This International Standard specifies a reference method for
the detection and enumeration of presumptive coliform
bacteria and of presumptive Escherichia coli (E. coli) in meat
and meat products. 5 Culture media, dilution fluid and reagent
5.1 Basic materials
2 References
In order to improve the precision of the results, it is recom-
IS0 3100, Meat and meat products - Sampling.
mended that either dehydrated culture medium components of
uniform quality and analytical grade chemicals, or dehydrated
IS0 3565, Meat and meat products - Detection of salmonellae
complete media, be used. The water used shall be distilled
(Reference method).
water or water of at least equivalent purity.
5.2 Culture media
3 Definitions
5.2.1 Lactose bile brilliant green broth (selective
3.1 presumptive coliform bacteria : Micro-organisms that
medium)
ferment lactose with the production of gas at 30 OC when the
test is carried out according to the method specified.
Composition
3.2 presumptive Escherichia coli : Presumptive coliform
ai b)
Double-strength Single-strength
bacteria that ferment lactose with the production of gas at
medium medium
44 OC and produce indole from tryptophane at 44 OC when the
test is carried out according to the method specified. peptone 20,o 9 loto g
*
lactose 20,o g 10,o g
3.3 count of presumptive coliform bacteria and
ox bile (dehydrated) 40,o g 20,o g
presumptive Escherichia coli : The number of presumptive
brilliant green, corre-
coliform bacteria and presumptive E. coli found per gram of
to the
sponding
meat or meat product when the test is carried out according to
specifications in
the method specified.
the annex
of IS0 3565 0,026 6 g 0,013 3 g
4 Principle
water 1 O00 ml 1 O00 ml
Mincing of a test sample and then maceration of a test portion
NOTE - Because the complete medium may not always produce the
with a sterile diluent in a mechanical blender. Preparation, from
expected result, its performance should be checked before use. (A
the macerate, of decimal dilutions, which are inoculated in
method for this purpose will form the subject of a future International
triplicate into a liquid selective medium. From the number of
Standard.)
tubes showing gas production after incubation at 30 OC, deter-
mination of the most probable number of presumptive
coliform bacteria per gram by using the MPN table (see the Preparation
annex).
Dissolve the components or the dehydrated complete
medium in the water by boiling.
For the enumeration of presumptive E, coli, inoculation of
tubes containing the liquid selective medium and tubes con-
Adjust the pH with sodium hydroxide solution or
taining tryptone water, from the positive coliform tubes, i.e.
hydrochloric acid solution of an appropriate strength so that
those tubes that show gas production, and incubation at
after sterilization it is 7,2 f 0,l at 25 OC.
44 OC. From the number of incubated tubes showing gas pro-
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 3811-1979 (E)
Transfer 10 ml portions to culture tubes (6.2.1)
5.4 Indole reagent (Kovacs reagent)
(16 mm x 160 mm, containing Durham tubes, for single-
strength medium, or 20 mm x 200 mm for double-strength Composition
medium), or screw-cap bottles of similar capacity.
p-dimethylaminobenzaldehyde 5-0 g
Sterilize the medium at 121 f 1 OC for 15 min. amyl alcohol 75,O ml
hydrochloricacid 1,18 to 1,19g/ml) 25,O ml
At least 1 cm of the Durham tubes shall be visible above the
liquid. Preparation
If bubbles are present, remove them if possible by tilting and Dissolve the aldehyde in the alcohol by gently warming in a
tapping the tubes. Do not use tubes which contain gas bub- water bath (about 50 to 55 OC).
bles.
Cool and add the acid.
Protect from light and store at about 4 OC.
5.2.2 Tryptone water
The reagent shall be light yellow to light brown.
Composition
tryptone 10,o 9 6 Apparatus and glassware
sodium chloride 5,O
water 9 O00 ml 6.1 Apparatus
Preparation 6.1.1 Mechanical meat mincer, laboratory size, sterile, fit-
ted with a plate with holes of diameter not exceeding 4 mm.
Dissolve the components or the dehydrated complete
medium in the water by boiling.
6.1.2 Mechanical blender, operating at a rotational frequen-
cy of not less than 8 O00 min-1 and not more than
Adjust the pH with sodium hydroxide solution or
45 O00 min-1, with glass or metal blending jars of an ap-
hydrochloric acid solution of an appropriate strength so that
propriate capacity and resistant to the conditions of steriliza-
after sterilization it is 7,3 f 0,2 at 25 OC.
tion.
Transfer the medium, in 5 to 10 ml portions, to culture
6.1.3 Apparatus for sterilization of glassware, blender jars,
tubes (6.2.1) or to screw-cap bottles of similar capacity.
culture media, etc.
Sterilize the medium at 121 f 1 OC for 15 min.
6.1.4 Incubator for maintaining the inoculated tubes at
30 f 1 OC.
5.3 Dilution fluid
6.1.5 Water bath for maintaining the inoculated tubes at
44 * 0,l OC.
Composition
6.2 Glassware
peptone 1,o 9
sodium chloride 83 8
The glassware shall be resistant to repeated sterilization.
water 1 O00 ml
6.2.1 Flasks and culture tubes (16 mm x 160 mm, and
Preparation
20 mm x 200 mm). Alternatively, screw-cap bottles of similar
capacity may be used.
Dissolve the components or the dehydrated complete
medium in the water by boiling.
6.2.2 Graduated pipettes, calibrated for bacteriological use
Adjust the pH with sodium hydroxide solution or
only, with a nominal capacity of 1,0 ml and of 10,O ml, sub-
hydrochloric acid solution of an appropriate strength so that
divided in 0,l ml and 1 ml respectively, and with an outflow
after sterilization it is 7,O 4 0,l at 25 OC.
opening of diameter 2 to 3 mm.
Transfer part of the dilution fluid, in quantities of 100 to
6.3 Sterilization of glassware, etc.
300 ml, to flasks or screw-cap bottles whose capacity is
approximately twice the volume dispensed. Transfer the
Sterilize the glassware by one of the following methods :
remainder of the fluid to tubes, or to small flasks or small
screw cap bottles, so that after sterilization each contains
- wet sterilization at 121 f 1 OC for not less than 20 min;
9,0 ml.
- dry sterilization at not less than 170 OC for not less than
Sterilize the dilution fluid at 121 f 1 OC for 15 min. 1 h.
---------------------- Page: 4 -------------
...
Norme internationale 381 I
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON*MEXAYHAPO~HAR OPrAHH3ALlHR fl0 CTAHLlAPTH3AUHH.ORGANlSATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Viandes et produits à base de viande - Recherche et
O
dénombrement des bactéries présumées coliformes et
présumées Escherichia coli (Méthode de référence)
Meat and meat products - Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria and predmptive Escherichia coli
(Reference method)
Première édition - 1979-11-15
Réf. no : IS0 3811-1979 (FI
CDU 637.5 : 576.851,48
Descripteurs : produit alimentaire, produit à base de viande, analyse microbiologique, comptage, bactérie, bactérie coliforme.
Prix basé sur 5 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
I
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
I'ISO). L'élaboration
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une &ude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS0 381 1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimntaires, et a été soumise aux comités membres en mai 1975.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d' Éthiopie Pays-Bas
Allemagne, R. F. France Pologne
Ghana Roumanie
Autriche
Brésil Hongrie Tchécoslovaquie
Inde Thailande
Canada
Chili Iran Turquie
Danemark Irlande Yougoslavie
Espagne Mexique
Les comités membres des pays suivants l'ont désapprouvée pour des raisons techni-
ques :
Australie
Nouvelle-Zélande
Royaume-Uni
@ Organisation internationale de normalisation, 1979 O
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORM E INTER NATIONALE IS0 3811-1979 (F)
Viandes et produits à base de viande - Recherche et
dénombrement des bactéries présumées coliformes et
présumées Escherichia coli (Méthode de référence)
à partir des tubes positifs pour le dénombrement des bactéries
1 Objet et domaine d'application
présumées coliformes, c'est-à-dire ceux qui ont présenté un
dégagement gazeux. Détermination du nombre le plus proba-
La présente Norme internationale spécifie une méthode de réfé-
rence pour la recherche et le dénombrement des bactéries pré- ble de bactéries présumées E. coli au moyen de la table NPP
sumées coliformes et présumées Escherichia Coli (E. Coli) dans (voir l'annexe), d'apres le nombre de tubes incubés pour les-
quels il y a production de gaz dans le milieu sélectif, et produc-
les viandes et les produits à base de viande.
tion d'indole dans l'eau tryptonée.
2 Références
5 Milieux de culture, diluant et réactif
IS0 3100, Viandes et produits à base de viande - Echantillon-
nage.
5.1 Composants de base
IS0 3565, Viandes et produits à base de viande - Recherche
Pour améliorer la fidélité des résultats, il est recommandé d'uti-
des salmonellae (Méthode de référence).
liser des composants de base désyhdratés de qualité constante
et des produits chimiques de pureté analytique, ou des milieux
3 Définitions complets déshydratés. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée
ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
3.1 bactéries présumées coliformes : Micro-organismes
qui, à 30 OC, provoquent la fermentation du lactose avec pro-
5.2 Milieux de culture
duction de gaz, lorsque l'essai est effectué selon la méthode
spécifiée.
Bouillon lactose bilié au vert brillant (milieu
5.2.1
sélectif i
3.2 bactéries présumées Escherichia Coli : Bactéries présu-
mées coliformes qui, à 44 OC, provoquent la fermentation du
Composition
lactose avec production de gaz et qui, à 44 OC, produisent de
I'indole à partir du tryptophane, lorsque l'essai est effectué
ai
b)
selon la méthode spécifiée.
Milieu double Milieu simple
concentration concentration
3.3 dénombrement des bactéries présumées coliformes
peptone 20,o 9 10,o 9
et présumées Escherichia Coli : Nombre de bactéries présu-
lactose
-a0 g 10,o g
mées coliformes et présumées E. Coli trouvé par gramme de
viande ou de produit à base de viande, lorsque l'essai est effec-
bile de bœuf
tué selon la méthode spécifiée.
déshydratée %O 9 20,o g
vert brillant répon-
dant aux spécifica-
4 Principe
tions de l'annexe
de I'ISO 3565 0,026 6 g 0,013 3 g
Hachage d'un échantillon pour essai, puis macération d'une
eau 1 O00 ml
1 O00 ml
prise d'essai avec un diluant stérile dans un homogénéisateur
mécanique. À partir de la macération, préparation de dilutions
NOTE - Étant donné que le milieu complet ne donne pas toujours les
décimales qui sont ensemencées en triple dans un milieu sélec-
résultats attendus, il est nécessaire de contrôler ses propriétés avant
tif liquide. D'après le nombre de tubes présentant une produc-
utilisation. (A cet effet, une méthode fera l'objet d'une Norme interna-
tion de gaz après incubation à 30 OC, détermination du nombre
tionale ultérieure.)
le plus probable (NPP) de bactéries présumées coliformes par
gramme au moyen de la table NPP (voir l'annexe).
Préparation
Pour le dénombrement des bactéries présumées E. Coli. ense-
mencement, puis incubation à 44 OC, de tubes contenant le Dissoudre dans l'eau les composants ou le milieu complet
milieu sélectif liquide et de tubes contenant de l'eau tryptonée, désyhdraté, en portant à l'ébullition.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 3811-1979 (F)
Ajuster le pH au moyen d'une solution d'hydroxyde de rer le reste dans des tubes, ou dans des petits flacons ou des
sodium ou d'acide chlorhydrique de sorte qu'après stérilisa- petites bouteilles munis de bouchons à vis, en quantité telle
tion, il soit de 7,2 f 0,l à 25 OC. qu'après stérilisation, ils en contiennent 9,0 ml.
Répartir le milieu, par quantités de 10 ml, dans des tubes de Stériliser le diluant à 121 f 1 OC durant 15 min.
culture (6.2.1) (16 mm x 160 mm contenant des cloches
de Durham dans le cas du milieu simple concentration, ou
5.4 Réactif pour la recherche de I'indole (réactif
20 mm x 200 mm dans le cas du milieu double concentra-
de Kovacs)
tion) ou dans des flacons avec bouchon à vis, de même
capacité.
Composition
f 1 OC durant 15 min.
Stériliser le milieu à 121
p-diméthylaminobenzaldéhyde 5,O g
alcool amylique 75,O ml
Les cloches de Durham doivent émerger d'au moins 1 cm
acide chlorhydrique (Q~~ 1,18 à 1,19 g/ml) 250 ml
au-dessus du niveau du liquide.
Préparation
S'il y a des bulles, les éliminer si possible en secouant ou en
tapant légèrement sur les tubes. Ne pas utiliser les tubes
Dissoudre l'aldéhyde dans l'alcool en chauffant doucement
renfermant des bulles de gaz.
au bain d'eau (environ 50 à 55 OC).
Refroidir et ajouter l'acide.
5.2.2 Eau tryptonée
Mettre à l'abri de la lumière et conserver à 4 OC environ.
Composition
Le réactif doit être jaune clair à brun clair.
tryptone 10,o 9
chlorure de sodium 5,O g
eau 1 O00 ml
6 Appareillage et verrerie
Préparation
6.1 Appareillage
Dissoudre dans l'eau les composants ou le milieu complet
déshydraté, en portant à l'ébullition.
6.1.1 Hachoir mécanique à viande, type de laboratoire,
stérile, muni d'une plaque perforée dont les trous ont un diamè-
Ajuster le pH au moyen d'une solution d'hydroxyde de
tre ne dépassant pas 4 mm.
sodium ou d'acide chlorhydrique de sorte qu'après stérilisa-
tion, il soit de 7,3 f 0,2 à 25 OC.
6.1.2 Homogénéisateur mécanique, ayant une fréquence
de rotation comprise entre 8 O00 et 45 O00 min-', avec bols en
Répartir le milieu, par quantités de 5 à 10 mi, dans des tubes
verre ou en métal, de capacité convenable, résistant aux condi-
de culture (6.2.1) ou dans des flacons avec bouchons à vis,
tions de stérilisation.
de même capacité.
f 1 OC durant 15 min.
Stériliser le milieu à 121 6.1.3 Appareillage pour la stérilisation de la verrerie, des
bols de I'homogénéisateur, des milieux de culture, etc.
5.3 Diluant
6.1.4 Incubateur, pour maintenir les tubes ensemencés à
30 f 1 OC.
Composition
6.1.5 Bain d'eau, pour maintenir les tubes ensemencbs à
peptone 1,o 9
44 * 0,l OC.
chlorure de sodium 8,5 9
1 O00 ml
eau
6.2 Verrerie
Préparation
La verrerie doit résister à des stérilisations répétées.
Dissoudre dans l'eau les composants ou le milieu complet
déshydraté, en portant à l'ébullition.
6.2.1 Fioles et tubes de culture (16 mm x 160 mm et
II est également possible d'utiliser des
20 mm x 200 mm).
Ajuster le pH au moyen d'une solution d'hydroxyde de
petites bouteilles munies de bouchons à vis, de même capacité.
sodium ou d'acide chlorhydrique de sorte qu'après stérilisa-
tion, il soit de 7,O f 0,l à 25 OC.
6.2.2 Pipettes graduées, étalonnées spécialement pour
l'usage bactériologique, d'une capacité nominale de 1.0 ml et
Répartir le diluant, par quantités de 100 à 300 ml, dans des
flacons ou des bouteilles munis de bouchons à vis, ayant de 10,O ml, graduées respectivement en 0,l ml et 1 ml avec
2 à 3 mm de diamètre.
une capacité voisine du double du volume réparti. Transfé- une ouverture d'écoulement de
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
150 3811-1979 (FI
8.4 Bactéries présumées coliformes
6.3 Stérilisation de la verrerie, etc.
8.4.1 Ensemencement
Stériliser la verrerie selon l'une des méthodes suivantes :
Transférer, avec une nouvelle pipette stérile, six fractions de
- stérilisation en chaleur humide à 121 k 1 OC durant au
1 ml de la macération (8.3.1) (en les divisant en deux groupes
moins 20 min;
de trois) et transférer trois fractions de 1 ml de chacune des
- stérilisation en chaleur sèche à 170 OC minimum durant cinq dilutions suivantes (8.3.3,8.3.4 et 8.3.5) des deux séries de
dilutions, dans des t
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.