ISO 15302:2017

Animal and vegetable fats and oils — Determination of benzo[a]pyrene — Reverse-phase high performance liquid chromatography method

ISO 15302:2017 specifies a method for the determination of benzo[a]pyrene in crude or refined edible oils and fats by reverse-phase high performance liquid chromatography (HPLC) using fluorimetric detection in the range 0,1 µg/kg to 50 µg/kg. Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this document.

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination du benzo[a]pyrène — Méthode par chromatographie liquide à haute performance à polarité de phase inversée

ISO 15302:2017 spécifie une méthode de détermination du benzo[a]pyrène dans les corps gras comestibles bruts ou raffinés, par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) à polarité de phase inversée, à l'aide d'une détection fluorimétrique dans la gamme de 0,1 µg/kg à 50 µg/kg. Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du domaine d'application du présent document.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 28-Mar-2017
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 08-Nov-2022

Relations

• Revises: ISO 15302:2007 - Animal and vegetable fats and oils — Determination of benzo[a]pyrene — Reverse-phase high performance liquid chromatography method
• Effective Date: 19-Mar-2016

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15302
Third edition
2017-03
Animal and vegetable fats and oils
— Determination of benzo[a]pyrene
— Reverse-phase high performance
liquid chromatography method
Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination du
benzo[a]pyrène — Méthode par chromatographie liquide à haute
performance à polarité de phase inversée
Reference number
ISO 15302:2017(E)
©
ISO 2017

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ISO 15302:2017(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2017, Published in Switzerland
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
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written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
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ISO 15302:2017(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure. 4
10 Expression of results . 6
10.1 Calculation of relative response factors . 6
10.2 Calculation of benzo[a]pyrene content . 7
11 Precision . 7
11.1 Repeatability . 7
11.2 Reproducibility . 7
12 Test report . 7
Annex A (informative) Results of interlaboratory tests. 8
Bibliography . 9
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ISO 15302:2017(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: w w w . i s o .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 15302:2007), of which it constitutes a
minor revision. The scope of this document has been revised to exclude its application to milk and milk
products and their derivatives.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 15302:2017(E)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
benzo[a]pyrene — Reverse-phase high performance liquid
chromatography method
1 Scope
This document specifies a method for the determination of benzo[a]pyrene in crude or refined edible
oils and fats by reverse-phase high performance liquid chromatography (HPLC) using fluorimetric
detection in the range 0,1 µg/kg to 50 µg/kg.
Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this
document.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www.e lectropedia. org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www. iso. org/o bp
3.1
benzo[a]pyrene content
mass fraction of benzo[a]pyrene in the test portion, as determined using the method specified in this
document
Note 1 to entry: The content is expressed in micrograms per kilogram.
4 Principle
A test portion is dissolved in light petroleum and benzo[b]chrysene is added as internal standard. A
suitable amount of sample is adsorbed on an alumina column and eluted with light petroleum to remove
any benzo[a]pyrene present.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified. Where analytical grade
solvents other than the recommended ones are used, a full blank analysis shall be carried out and the
results of this blank analysis reported.
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SAFETY PRECAUTIONS — Attention is drawn to regulations which specify handling procedures
for dangerous substances. Users should be aware of and comply with technical, organizational,
and personal safety measures.
5.1 Water, double distilled, filtered through a membrane filter of pore size 0,45 µm; deionized water
obtained by purifying demineralized water systems may also be used.
5.2 Light petroleum, (boiling point range 40 °C to 60 °C), or hexane, redistilled over potassium
hydroxide pellets (4 g/l).
5.3 Acetonitrile, suitable for HPLC.
5.4 Tetrahydrofuran, suitable for HPLC.
5.5 Acetonitrile-tetrahydrofuran mixture, prepared by mixing 90 ml acetonitrile (5.3) and 10 ml
tetrahydrofuran (5.4).
5.6 Toluene, suitable for HPLC.
5.7 Sodium sulfate, granular, anhydrous.
1)
5.8 Alumina activity grade 4, prepared from neutral aluminium oxide, activity grade super 1 ,
deactivated by the addition of 10 ml water (5.1) to 90 g of alumina.
Due to the differences in activity of alumina of various brands, a check is recommended to confirm that
the deactivation procedure is appropriate for total benzo[a]pyrene recovery from a reference sample.
CAUTION — THE DEACTIVATION REACTION IS EXOTHERMIC AND PRESSURE CAN BUILD UP.
Shake the container for about 15 min and allow the contents to equilibrate for 24 h. Store the alumina in
a closed vessel at ambient temperature.
2)
5.9 Benzo[a]pyrene , of purity 99,0 % by mass.
CAUTION — BENZO[a]PYRENE IS A KNOWN CARCINOGEN. CARRY OUT ALL WORK WITH IT IN A
FUME HOOD, WEARING GLOVES TO MINIMIZE EXPOSURE.
5.9.1 Benzo[a]pyrene stock solution in toluene, 0,5 mg/ml.
Weigh, to the nearest 0,1 mg, about 12,5 mg of benzo[a]pyrene in a 25 ml graduated flask. Dissolve it in
toluene (5.6) and make up to the mark with that solvent.
Store the solution in the dark at 4 °C where it is stable for at least 6 months.
5.9.2 Benzo[a]pyrene standard solutions.
Prepare two standard solutions containing approximately 0,2 µg/ml and 0,01 µg/ml of benzo[a]pyrene,
respectively, by diluting aliquots of the stock solution (5.9.1) with acetonitrile.
1) “Aluminium oxide 90 active neutral” is an example of a suitable product available commercially. This information
is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
2) A suitable reference material is available from the Joint Research Centre of the Europ
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15302
Troisième édition
2017-03
Corps gras d’origines animale
et végétale — Détermination du
benzo[a]pyrène — Méthode par
chromatographie liquide à haute
performance à polarité de phase
inversée
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
benzo[a]pyrene — Reverse-phase high performance liquid
chromatography method
Numéro de référence
ISO 15302:2017(F)
©
ISO 2017

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ISO 15302:2017(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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ISO 15302:2017(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 1
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Récupération de l’échantillon . 4
9.2 Chromatographie liquide à haute performance . 5
9.3 Analyse de l’échantillon . 5
10 Expression des résultats. 6
10.1 Calcul des facteurs de réponse relatifs . 6
10.2 Calcul de la teneur en benzo[a]pyrène . 7
11 Fidélité . 7
11.1 Répétabilité . 7
11.2 Reproductibilité . 7
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Résultats des essais interlaboratoires . 8
Bibliographie . 9
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ISO 15302:2017(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: w w w . i s o .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, Sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 15302:2007), dont elle constitue
une révision mineure. Le domaine d’application du présent document a été révisé pour exclure son
application au lait et aux produits laitiers et leurs dérivés.
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NORME INTERNATIONALE ISO 15302:2017(F)
Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination
du benzo[a]pyrène — Méthode par chromatographie
liquide à haute performance à polarité de phase inversée
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination du benzo[a]pyrène dans les corps gras
comestibles bruts ou raffinés, par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) à polarité de
phase inversée, à l’aide d’une détection fluorimétrique dans la gamme de 0,1 µg/kg à 50 µg/kg.
Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du
domaine d’application du présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www.e lectropedia. org/
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http:// www. iso. org/o bp
3.1
teneur en benzo[a]pyrène
fraction massique de benzo[a]pyrène dans la prise d’essai, déterminée par la méthode spécifiée dans le
présent document
Note 1 à l’article: La teneur est exprimée en microgrammes par kilogramme.
4 Principe
Une prise d’essai est dissoute dans de l’éther de pétrole et du benzo[b]chrysène est ajouté en tant
qu’étalon interne. Une quantité appropriée d’échantillon est adsorbée sur une colonne d’alumine, puis
éluée avec de l’éther de pétrole afin d’éliminer toute présence de benzo[a]pyrène.
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, sauf spécification contraire. Lors de
l’utilisation de solvants ayant une qualité analytique autre que celle recommandée, effectuer un essai à
blanc et consigner les résultats de cet essai.
© ISO 2017 – Tous droits réservés 1

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ISO 15302:2017(F)

PRÉCAUTIONS DE SÉCURITÉ — L’attention est attirée sur les réglementations qui spécifient les
règles relatives à la manipulation des substances dangereuses. Il convient que les utilisateurs
connaissent les mesures de sécurité relatives au personnel, à la technique et à l’organisation, et
qu’ils s’y conforment.
5.1 Eau, ayant fait l’objet d’une double distillation, filtrée à travers une membrane filtrante de
porosité 0,45 µm. Il est également possible d’utiliser de l’eau désionisée obtenue à partir de systèmes de
déminéralisation d’eau.
5.2 Éther de pétrole, (point d’ébullition se situant dans une plage de 40 °C à 60 °C), ou hexane,
redistillé sur des pastilles d’hydroxyde de potassium (4 g/l).
5.3 Acétonitrile, pour CLHP.
5.4 Tétrahydrofurane, pour CLHP.
5.5 Mélange acétonitrile-tétrahydrofurane, préparé en mélangeant 90 ml d’acétonitrile (5.3) et
10 ml de tétrahydrofurane (5.4).
5.6 Toluène, pour CLHP.
5.7 Sulfate de sodium, anhydre, en grains.
5.8 Alumine, degré d’activité 4, préparée à partir d’oxyde d’aluminium neutre, degré d’activité
1)
supérieure à 1 , désactivée par l’ajout de 10 ml d’eau (5.1) à 90 g d’alumine.
Étant donné les différences d’activité des différentes marques d’alumine, il est recommandé d’effectuer
un contrôle afin de confirmer que le mode opératoire de désactivation est approprié à la récupération
totale du benzo[a]pyrène à partir d’un échantillon de référence.
ATTENTION — LA RÉACTION DE DÉSACTIVATION EST EXOTHERMIQUE ET IL PEUT Y AVOIR
ACCUMULATION DE PRESSION.
Agiter le conteneur pendant environ 15 min et laisser le contenu parvenir à l’équilibre pendant 24 h.
Conserver l’alumine dans un récipient fermé à température ambiante.
2)
5.9 Benzo[a]pyrène , pur à 99,0 % en masse.
ATTENTION — LE BENZO[a]PYRÈNE EST UN CARCINOGÈNE BIEN CONNU. L’UTILISER SOUS
HOTTE POUR TOUS LES TRAVAUX, EN PORTANT DES GANTS AFIN DE RÉDUIRE L’EXPOSITION AU
MINIMUM.
5.9.1 Solution mère de benzo[a]pyrène dans du toluène, 0,5 mg/ml.
Peser, à 0,1 mg près, environ 12,5 mg de benzo[a]pyrène dans une fiole jaugée de 25 ml. Dissoudre cette
quantité dans le toluène (5.6) et remplir jusqu’au trait avec ce solvant.
Conserver la solution à l’abri de la lumière à 4 °C où elle reste stable pendant au moins 6 mois.

1) «L’oxyde d’aluminium 90 activé neutre» est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce.
Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés
s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes résultats.

2) Un matériau de référence approprié peut être obtenu auprès du Centre commun de recherche (JRC) de la
Commission européenne, Institut des matériaux et mesures de référence (IRMM). Cette information est donnée
à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signif
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