ISO 20186-1:2019

Molecular in vitro diagnostic examinations - Specifications for pre-examination processes for venous whole blood - Part 1: Isolated cellular RNA

This document gives guidelines on the handling, storage, processing and documentation of venous whole blood specimens intended for cellular RNA examination during the pre-examination phase before a molecular examination is performed. This document covers specimens collected in venous whole blood collection tubes. This document is applicable to any molecular in vitro diagnostic examination performed by medical laboratories. It is also intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory authorities. Different dedicated measures are taken for stabilizing blood cell free circulating RNA and RNA in exosomes circulating in blood. These are not described in this document. Different dedicated measures are taken for collecting, stabilizing, transporting and storing capillary blood as well as for collecting and storing blood by paper based technologies or other technologies generating dried blood. These are not described in this document. This document does not cover the isolation of specific blood cells and subsequent isolation of cellular RNA therefrom. RNA in pathogens present in blood is not covered by this document.

Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour le sang total veineux — Partie 1: ARN cellulaire extrait

Le présent document fournit des lignes directrices pour la manipulation, le stockage, le traitement et la documentation des prélèvements de sang total veineux destinés à l'analyse de l'ARN cellulaire durant la phase préanalytique précédant la réalisation d'un essai moléculaire. Le présent document concerne les échantillons primaires prélevés dans des tubes de prélèvement de sang total veineux. Le présent document s'applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro réalisées par des laboratoires de biologie médicale. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des développeurs et fabricants de l'industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des autorités de réglementation. Des mesures spécifiques différentes sont prises pour stabiliser l'ARN libre circulant dans le sang et l'ARN des exosomes du sang. Ces mesures ne sont pas décrites dans le présent document. Des mesures spécifiques différentes sont prises pour prélever, stabiliser, transporter et stocker le sang capillaire, et pour prélever et stocker le sang par des technologies à base de support papier ou d'autres technologies produisant du sang séché. Ces mesures ne sont pas décrites dans le présent document. Le présent document ne traite ni de l'extraction de cellules sanguines spécifiques ni de l'extraction de l'ARN cellulaire qu'elles contiennent. L'ARN des pathogènes présents dans le sang n'est pas couvert par le présent document.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 18-Feb-2019
• ICS: 11.100.10 - In vitro diagnostic test systems
• Technical Committee: ISO/TC 212 - Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems
• Drafting Committee: ISO/TC 212/WG 4 - Microbiology and molecular diagnostics
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Start Date: 12-Dec-2024
• Completion Date: 13-Dec-2025

Relations

• Consolidates: ISO 80601-2-13:2011/Amd 1:2015 - Medical electrical equipment - Part 2-13: Particular requirements for basic safety and essential performance of an anaesthetic workstation - Amendment 1
• Effective Date: 06-Jun-2022

Overview

ISO 20186-1:2019 - Molecular in vitro diagnostic examinations - Specifications for pre-examination processes for venous whole blood - Part 1: Isolated cellular RNA provides standardized guidance for the pre‑analytical handling of venous whole blood when the downstream goal is isolation and examination of cellular RNA. The standard focuses on the steps before the molecular test itself (collection, transport, storage, processing and documentation) to ensure blood cellular RNA profiles reflect the in vivo state rather than artifacts introduced after collection.

Key points:

• Applies to specimens collected in venous whole blood collection tubes.
• Intended for medical laboratories, laboratory customers, IVD developers and manufacturers, biobanks, research organizations and regulatory authorities.
• Excludes cell‑free circulating RNA, exosomal RNA, capillary/dried blood techniques, isolation of specific blood cell types, and pathogen RNA.

Key topics and requirements

ISO 20186-1 outlines practical pre‑examination controls and documentation, with clear normative language (e.g., shall = requirement, should = recommendation). Major technical topics covered include:

• Specimen collection
  • Information requirements about the donor/patient and specimen
  • Selection of appropriate venous whole blood collection tubes by the laboratory
  • Stabilization procedures during venepuncture
• Transport requirements
  • Conditions and documentation needed when moving samples from collection site to laboratory
• Inside‑laboratory processes
  • Specimen reception and traceability
  • Storage requirements for whole blood prior to RNA isolation
  • Isolation of cellular RNA, including guidance for:
    • Using collection tubes with RNA profile stabilizers
    • Using tubes without stabilizers (timing and handling considerations)
• RNA assessment and storage
  • Quantity and quality assessment of isolated cellular RNA
  • Storage recommendations for isolated RNA based on isolation method
• Supporting information
  • Annex A: Impact of pre‑examination steps on cellular RNA profiles
  • Annex B: Influence of storage temperature on blood cellular RNA

The standard references ISO 15189:2012 for laboratory quality and competence and is designed to support reproducible molecular IVD results.

Applications and who should use it

ISO 20186-1 is practical for organizations that need reliable, standardized pre‑analytical workflows for molecular diagnostics involving cellular RNA:

• Clinical and medical laboratories implementing RNA‑based assays
• IVD developers and manufacturers validating pre‑analytical device performance
• Biobanks and research institutions storing venous whole blood for RNA analysis
• Regulatory bodies and accreditation assessors reviewing pre‑examination procedures
• Laboratory customers and clinicians seeking specifications for sample collection and transport

Benefits include improved RNA integrity, reduced pre‑analytical variability, and stronger analytical traceability for molecular in vitro diagnostic examinations.

Related standards

• ISO 15189:2012 - Medical laboratories - Requirements for quality and competence (normative reference)
• ISO 20186 series - other parts available on the ISO website detailing related pre‑analytical requirements

Keywords: ISO 20186-1:2019, pre-examination processes, venous whole blood, cellular RNA, molecular in vitro diagnostics, RNA stabilization, specimen collection, storage, transport, RNA quality.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20186-1
First edition
2019-02
Molecular in vitro diagnostic
examinations — Specifications for
pre-examination processes for venous
whole blood —
Part 1:
Isolated cellular RNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour le sang total veineux —
Partie 1: ARN cellulaire extrait
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
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be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Fax: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 1
4 General considerations . 5
5 Outside the laboratory . 6
5.1 Specimen collection . 6
5.1.1 Information about the specimen donor/patient . 6
5.1.2 Selection of the venous whole blood collection tube by the laboratory . 6
5.1.3 Venous whole blood specimen collection from the donor/patient and
stabilization procedures . . 6
5.1.4 Information about the specimen and storage requirements at the blood
collection facility . 7
5.2 Transport requirements . 8
6 Inside the laboratory . 8
6.1 Specimen reception . 8
6.2 Storage requirements . 8
6.3 Isolation of the cellular RNA. 9
6.3.1 General. 9
6.3.2 Using blood collection tubes with RNA profile stabilizers . 9
6.3.3 Using blood collection tubes without RNA profile stabilizers .10
6.4 Quantity and quality assessment of isolated cellular RNA .10
6.5 Storage of isolated cellular RNA .11
6.5.1 General.11
6.5.2 Cellular RNA isolated with commercially available kits .11
6.5.3 Cellular RNA isolated with the laboratory's own protocols .11
Annex A (informative) Impact of pre-examination process steps on venous whole blood
cellular RNA profiles .12
Annex B (informative) Influence of blood storage temperature on blood cellular RNA profiles .16
Bibliography .19
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in
vitro diagnostic test systems.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
A list of all parts in the ISO 20186 series can be found on the ISO website.
iv © ISO 2019 – All rights reserved

Introduction
Molecular in vitro diagnostics has enabled significant progress in medicine. Further progress is
expected by new technologies analysing profiles of nucleic acids, proteins, and metabolites in human
tissues and body fluids. However, the profiles of these molecules can change drastically during the
pre-examination process, including the specimen collection, transport, storage, and processing.
Consequently, this makes the outcome from diagnostics or research unreliable or even impossible,
because the subsequent examination might not determine the real situation in the patient but an
artificial profile generated during the pre-examination process.
Blood cellular RNA profiles can change significantly after blood collection. Therefore, special measures
need to be taken to secure good quality blood samples for cellular RNA examination and storage.
Standardization of the entire workflow from specimen collection to the cellular RNA examination is
needed. Studies have been undertaken to determine the important influencing factors. This document
draws upon such work to codify and standardize the steps for venous whole blood cellular RNA
examination in what is referred to as the pre-examination phase.
In this document, the following verbal forms are used:
— “shall” indicates a requirement;
— “should” indicates a recommendation;
— “may” indicates a permission;
— “can” indicates a possibility or a capability.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20186-1:2019(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for venous
whole blood —
Part 1:
Isolated cellular RNA
1 Scope
This document gives guidelines on the handling, storage, processing and documentation of venous
whole blood specimens intended for cellular RNA examination during the pre-examination phase
before a molecular examination is performed. This document covers specimens collected in venous
whole blood collection tubes.
This document is applicable to any molecular in vitro diagnostic examination performed by medical
laboratories. It is also intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and
manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research,
and regulatory authorities.
Different dedicated measures are taken for stabilizing blood cell free circulating RNA and RNA in
exosomes circulating in blood. These are not described in this document.
Different dedicated measures are taken for collecting, stabilizing, transporting and storing capillary
blood as well as for collecting and storing blood by paper based technologies or other technologies
generating dried blood. These are not described in this document.
This document does not cover the isolation of specific blood cells and subsequent isolation of cellular
RNA therefrom.
RNA in pathogens present in blood is not covered by this document.
2  Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189:2012, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
3  Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.2
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2]
3.3
backflow
flow of a liquid opposite to the usual or desired direction
3.4
blood cellular RNA
cellular RNA
RNA molecules present in blood cells
3.5
blood cellular RNA profile
amounts of different RNA molecules, that are present in blood cells and that can be measured in the
absence of any losses, inhibition and interference
3.6
blood cellular RNA profile stabilizers
compounds, solutions or mixtures that are designed to minimize changes of the blood cellular RNA
profile (3.5)
3.7
blood collection set
intravenous device specialized for venepuncture consisting of a stainless steel beveled needle and tube
(tubing) with attached plastic wings and fitting connector
Note 1 to entry: The connector attaches to an additional blood collection device, such as a blood collection tube (3.8).
3.8
blood collection tube
tube used for blood collection, usually in a vacuum which forces blood from the vein through the needle
into the tube
3.9
closed system
non-modifiable system provided by the vendor including all necessary components for the examination
(i.e. hardware, software, procedures and reagents)
3.10
deoxyribonucleic acid
DNA
polymer of deoxyribonucleotides occurring in a double-stranded (dsDNA) or single-stranded
(ssDNA) form
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.11
deoxyribonuclease
DNase
enzyme that catalyzes the degradation of DNA into smaller components
2 © ISO 2019 – All rights reserved

3.12
examination
analytical test
set of operations having the object of determining the value or characteristics of a property
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modified — Term and definition are used here without the original
notes; an additional term was added.]
Note 1 to entry: Processes that start with the isolated analyte (3.2) and include all kinds of parameter testing or
chemical manipulation for quantitative or qualitative examination.
3.13
examination performance
analytical test performance
analytical performance
ability of an examination procedure to measure or detect a particular analyte (3.2)
Note 1 to entry: Analytical performance is determined from analytical performance studies used to assess the
ability of an in vitro diagnostic examination procedure to measure or detect a particular analyte.
Note 2 to entry: Analytical performance includes such characteristics as analytical sensitivity, detection limit,
analytical specificity (interference and cross-reactivity), trueness, precision and linearity.
[SOURCE: ISO/TS 17822-1:2014, 3.2, modified — Two terms have been added.]
3.14
examination provider
analytical test provider
entity that provides the specific analytical test
3.15
interfering substance
endogenous or exogenous substances in clinical specimens (3.18)/samples (3.24) that can alter an
examination (3.12) result
Note 1 to entry: Examples of endogenous substances are blood components and acidic polysaccharides.
Note 2 to entry: Examples of exogenous substances are talc and anticoagulant.
3.16
needle holder
barrel used in routine venepuncture procedures to hold the blood collection tube (3.8) in place and to
protect the phlebotomist from direct contact with blood
3.17
pre-examination processes
preanalytical phase
preanalytical workflow
processes that start, in chronological order, from the clinician’s request and include the examination
request, preparation and identification of the patient, collection of the primary sample(s) (3.18),
transportation to and within the medical laboratory, isolation of analytes, and end when the analytical
examination begins
Note 1 to entry: The pre-examination phase includes preparative processes, e.g. RNA isolation procedures, which
influence the outcome of the intended examination.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modified — An additional term was added and more detail was
included.]
3.18
primary sample
specimen
discrete portion of a body fluid, breath, hair or tissue taken for examination, study or analysis of one or
more quantities or properties assumed to apply for the whole
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.16, modified — Notes to entry have been omitted.]
3.19
primary sample collection device
apparatus specifically intended by an IVD manufacturer to obtain, contain and preserve a body fluid or
tissue for in vitro diagnostic examination
Note 1 to entry: Includes devices intended to store a specimen prior to examination.
Note 2 to entry: Includes both vacuum and non-vacuum specimen collection devices.
[SOURCE: ISO 18113-1:2009, 3.55]
3.20
proficiency testing
evaluation of participant performance against pre-established criteria by means of interlaboratory
comparisons
[SOURCE: ISO 17043:2010, 3.7, modified — Notes to entry have been omitted.]
3.21
ribonucleic acid
RNA
polymer of ribonucleotides occurring in a double-stranded or single-stranded form
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.3]
3.22
ribonuclease
RNase
enzyme that catalyses the degradation of RNA into smaller components
3.23
room temperature
temperature in the range of 18 °C to 25 °C
Note 1 to entry: The definition is given for the purposes of this document. Local or national regulations can have
different definitions.
3.24
sample
one or more parts taken from a primary sample (3.18)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modified — The example has been omitted.]
3.25
stability
ability of a sample material, when stored under specified conditions, to maintain a stated property
value within specified limits for a specified period of time
[SOURCE: ISO Guide 30:2015, 2.1.15, modified — The phrase “reference material” has been replaced by
“sample material”.]
4 © ISO 2019 – All rights reserved

3.26
validation
confirmation, through the provision of objective evidence, that the requirements for a specific intended
use or application have been fulfilled
Note 1 to entry: The term “validated” is used to designate the corresponding status.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modified — Note 1 and Note 3 have been omitted.]
3.27
venous whole blood
blood collected after directly puncturing a vein, usually with a needle and syringe, or other
collection device
3.28
verification
confirmation, through the provision of objective evidence, that specified requirements have been
fulfilled
Note 1 to entry: The term “verified” is used to designate the corresponding status.
Note 2 to entry: Confirmation can comprise activities such as:
— performing alternative calculations;
— comparing a new design specification with a similar proven design specification;
— undertaking tests and demonstrations;
— reviewing documents prior to issue.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.12, modified — Note 1 and Note 2 were not taken over.]
3.29
workflow
series of activities necessary to complete a task
4 General considerations
For general statements on medical laboratory quality management systems and in particular on
specimen collection, reception and handling (including avoidance of cross contaminations), see
ISO 15189:2012, 4.2, 5.4.4, 5.4.6 or ISO/IEC 17020:2012, 7.2 and Clause 8. The requirements on
laboratory equipment, reagents, and consumables according to ISO 15189:2012, 5.3 shall be followed;
ISO 15189:2012, 5.5.1.2 and 5.5.1.3 and ISO/IEC 17020:2012, 6.2 can also apply.
All steps of a diagnostic workflow can influence the final examination result. Thus, the entire workflow,
including specimen/sample storage and transport conditions, and its impact on the stability of
biomolecules intended to be examined shall be verified and validated. Workflow steps which cannot
always be controlled shall be documented and their impact on the examination performance shall
be investigated and mitigation measures shall be established to enable the required examination
performance. In these cases, risk assessment is recommended.
Cellular RNA profiles can change significantly after blood collection, for example by gene induction, gene
[8][9][10][11]
down regulation or RNA degradation . These changes can vary individually in blood from
[8][12][13][14][15]
different donors or patients , and can impact the validity and reliability of examination
results.
Before or during the design of an examination, it should therefore be investigated and ensured that the
specific blood cellular RNA profile(s) intended to be analysed is/are not compromised by the envisioned
pre-examination process in a manner impacting the examination performance. This can, for example,
be done by performing time-course studies examining the post collection stability of the specific RNA
profile intended to by analysed.
Safety procedures for handling and transport shall be in place. Safety regulations on transport and
handling shall be considered (see ISO 15189:2012, 5.2.3 and 5.4.5 and ISO 15190).
During the whole pre-examination process, precautions shall be taken to avoid cross contamination
between different samples/specimens, for example by using single-use material whenever feasible or
appropriate cleaning procedures between processing of different specimens/samples.
If a commercial product is not used in accordance with the manufacturer's instructions, responsibility
for its validation, verification, use and performance lies with the user.
NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
5 Outside the laboratory
5.1 Specimen collection
5.1.1  Information about the specimen donor/patient
The documentation shall include the ID of the specimen donor/patient, which can be in the form of a code.
The documentation should include, but is not limited to:
a) the relevant health status of the specimen donor or patient [e.g. healthy, disease type, concomitant
disease, demographics (e.g. age and gender)];
b) the information about medical treatment and special treatment prior to blood collection (e.g.
anaesthetics, medications, fasting status);
c) the type and purpose of the proposed examination requested;
d) the appropriate consent from the specimen donor/patient.
See also ISO 15189:2012, 5.4.4.
5.1.2  Selection of the venous whole blood collection tube by the laboratory
Due to the high instability of blood cellular RNA profiles in specimens collected from individual
[8][12][13][14][15]
patients/donors commercially available venous whole blood collection tubes containing
[12][13][15][16][17]
blood cellular RNA profile stabilizers should be used and their catalogue and lot
number should be documented. See also Figure A.1.
Blood collection tubes not containing any blood cellular RNA profile stabilizer should only be used, if
the specific blood cellular RNA molecule or the blood cellular RNA profile to be examined is stable after
blood draw during the entire pre-examination process (see Figure A.2) or if the requested examination
allows the use of such tubes.
5.1.3  Venous whole blood specimen collection from the donor/patient and stabilization
procedures
a) The identity of the person collecting the specimen and the date and time of blood collection
according to ISO 15189:2012, 5.4.4.3, f) shall be documented.
b) For the labelling (sample/specimen identification) of the blood collection tube, a routine procedure
[ISO 15189:2012, 5.4.4.3, e)] or a procedure with additional information (e.g. 2D-barcode) shall
be used.
6 © ISO 2019 – All rights reserved

c) Standard venepuncture technique can be used. Steps for preventing possible backflow into the
donor's/patient’s body can be required. The manufacturer's instructions for using the blood
collection tubes shall be followed. A blood collection set and needle holder can be required when
using blood cellular RNA profile stabilizer containing tubes. In this case, the instructions of the
collection set and needle holder manufacturer shall be followed.
NOTE 1 There is no known specific effect of venous whole blood draw procedure on cellular RNA profiles.
Routine procedures can therefore be used.
d) Blood collection tubes shall be filled in accordance to the manufacturer's instructions and attention
should be drawn to the correct positioning of the collection tube during the blood draw as well as
the required blood volume.
NOTE 2 Underfilling of blood collection tubes containing cellular RNA profile stabilizers can compromise
the function of the stabilizers due to an unfavourable blood to stabilizer ratio. This can in itself compromise
the blood cellular RNA profile, which can impact the validity and reliability of the examination results.
e) The blood collection tube manufacturer's instructions, for mixing or inverting the tube
immediately after blood collection, shall be followed. Mixing or inverting the blood collection tube
shall be done gently.
NOTE 3 Wrong and/or insufficient mixing can be one of the most important pre-examination variables.
Unless additives in the blood collection tubes are homogenously mixed with the specimen, the blood cellular
RNA profile quality and quantity of individual cellular RNA molecules can be compromised, which can
impact the validity and reliability of the examination results.
f) Any tampering with and/or additions to the specimen shall be documented.
5.1.4  Information about the specimen and storage requirements at the blood collection facility
5.1.4.1 General
As blood cellular RNA profiles can change significantly after blood collection and can thereby affect
[8][16][18][19]
the validity and reliability of the examination result , the documentation regarding the
[8][19][20][21]
specimen shall include the date and time of blood collection .
In case of specimens for long-term storage in a biobank, it is usually not known which individual cellular
RNA profiles will be examined after the long-term storage. Therefore, blood collection tubes without
blood cellular RNA profile stabilizers should not be used for biobanking.
The storage conditions (duration and temperature, etc.) shall be documented.
The temporary storage duration in the blood collection facility contributes to the total duration for
storage.
5.1.4.2  Using blood collection tubes with stabilizers
Blood tubes with cellular RNA profile stabilizers should be used. For storing the specimens collected in
blood collection tubes with blood cellular RNA profile stabilizers, the dedicated blood collection tube
manufacturer's instructions on storage conditions shall be followed (e.g. temperature, freezing and
duration). Where the examination provider’s instructions are more stringent, these shall be followed.
5.1.4.3  Using blood collection tubes without stabilizers
5.1.4.3.1 Blood collection tubes without blood cellular RNA profile stabilizers should only be used, if
the ordered examination specifications allow the usage of such tubes. In these cases, the examination
provider's instructions on storage conditions (temperature and duration, etc.) shall be followed.
5.1.4.3.2 When using blood collection tubes without blood cellular RNA profile stabilizers and no
requirements on the storage conditions are available, the specimens should be transferred immediately
[13][19][20][21]
to 2 °C to 8 °C or on wet ice in order to minimize blood cellular RNA profile changes (see
Figure B.1). The storage duration allowed at 2 °C to 8 °C or on wet ice is highly dependent on the stability
of the individual blood cellular RNA profile to be analysed in the examination. This stability can vary
between several minutes and over 24 h.
NOTE Under these conditions, blood cellular RNA profile changes can still occur when no blood cellular RNA
profile stabilizers are used (see Figure B.1).
5.2  Transport requirements
The required transport conditions shall be documented including any deviations therefrom.
Temperature monitoring should be applied in a suitable manner.
When using blood collection tubes with blood cellular RNA profile stabilizers, the dedicated tube's
manufacturer's instructions on transport conditions shall be followed (duration and temperature,
etc.). Where the examination provider's
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20186-1
Première édition
2019-02
Analyses de diagnostic moléculaire in
vitro — Spécifications relatives aux
processus préanalytiques pour le sang
total veineux —
Partie 1:
ARN cellulaire extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-
examination processes for venous whole blood —
Part 1: Isolated cellular RNA
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Tél.: [phone]
Fax: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3  Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 5
5 Hors du laboratoire . 6
5.1 Recueil des prélèvements . 6
5.1.1 Informations relatives au donneur/patient . 6
5.1.2 Choix du tube de prélèvement de sang total veineux par le laboratoire . 6
5.1.3 Protocoles de prélèvement de sang total veineux primaire du donneur/
patient et méthodes de stabilisation . 7
5.1.4 Informations sur les échantillons primaires et exigences de stockage dans
le centre de prélèvement . 7
5.2 Exigences de transport . 8
6 Dans le laboratoire . 9
6.1 Informations relatives à la réception des prélèvements . 9
6.2 Exigences relatives au stockage . 9
6.3 Extraction de l’ARN cellulaire .10
6.3.1 Généralités .10
6.3.2 Utilisation de tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs
de profil d’ARN .10
6.3.3 Utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateurs de profil
d’ARN .10
6.4 Évaluation quantitative et qualitative de l’ARN cellulaire extrait .11
6.5 Stockage de l’ARN cellulaire extrait .11
6.5.1 Généralités .11
6.5.2 ARN cellulaire extrait à l’aide de kits disponibles dans le commerce .12
6.5.3 ARN cellulaire extrait selon les propres protocoles du laboratoire .12
Annexe A (informative) Impact des étapes du processus préanalytique sur les profils de
l’ARN cellulaire du sang total veineux .13
Annexe B (informative) Influence de la température de stockage du sang sur les profils
d’ARN cellulaire sanguin .18
Bibliographie .20
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20186 se trouve sur le site web de l’ISO.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés

Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro a permis de faire considérablement progresser la médecine. D’autres
avancées sont attendues avec les nouvelles technologies d’analyse des profils des acides nucléiques, des
protéines et des métabolites dans les tissus humains et les fluides corporels. Toutefois, les profils de
ces molécules peuvent changer radicalement au cours des processus préanalytiques, notamment lors
du prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du traitement. Le résultat du
diagnostic ou de la recherche est donc peu fiable, voire impossible à obtenir, car l’analyse subséquente
pourrait ne pas déterminer l’état réel du patient, mais un profil artificiel généré pendant les processus
préanalytiques.
Les profils d’ARN cellulaire sanguin peuvent varier de manière significative après le prélèvement
sanguin. Par conséquent, il est nécessaire de prendre des mesures spécifiques pour assurer la bonne
qualité des échantillons de sang en vue de l’analyse de l’ARN cellulaire et de son stockage.
Une normalisation de l’ensemble du processus, allant du prélèvement des échantillons primaires jusqu’à
l’analyse de l’ARN cellulaire, est nécessaire. Des études ont été réalisées afin de définir les facteurs
ayant un impact important. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et normaliser
les étapes des processus dits de la phase préanalytique pour l’ARN cellulaire du sang total veineux.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une autorisation;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
NORME INTERNATIONALE ISO 20186-1:2019(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
le sang total veineux —
Partie 1:
ARN cellulaire extrait
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices pour la manipulation, le stockage, le traitement et la
documentation des prélèvements de sang total veineux destinés à l’analyse de l’ARN cellulaire durant la
phase préanalytique précédant la réalisation d’un essai moléculaire. Le présent document concerne les
échantillons primaires prélevés dans des tubes de prélèvement de sang total veineux.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro réalisées par des
laboratoires de biologie médicale. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires,
des développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des
institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des
autorités de réglementation.
Des mesures spécifiques différentes sont prises pour stabiliser l’ARN libre circulant dans le sang et
l’ARN des exosomes du sang. Ces mesures ne sont pas décrites dans le présent document.
Des mesures spécifiques différentes sont prises pour prélever, stabiliser, transporter et stocker le sang
capillaire, et pour prélever et stocker le sang par des technologies à base de support papier ou d’autres
technologies produisant du sang séché. Ces mesures ne sont pas décrites dans le présent document.
Le présent document ne traite ni de l’extraction de cellules sanguines spécifiques ni de l’extraction de
l’ARN cellulaire qu’elles contiennent.
L’ARN des pathogènes présents dans le sang n’est pas couvert par le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 15189:2012, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
3  Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1
température ambiante
température non régulée de l’air environnant
3.2
analyte
composant indiqué dans le nom d’une grandeur mesurable
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2]
3.3
reflux
écoulement d’un liquide dans la direction opposée à la direction d’écoulement habituelle ou souhaitée
3.4
ARN cellulaire sanguin
ARN cellulaire
molécules d’ARN présentes dans les cellules sanguines
3.5
profil d’ARN cellulaire sanguin
quantités de molécules d’ARN individuelles qui sont présentes dans les cellules sanguines et qui peuvent
être mesurées en l’absence de toute perte, inhibition et interférence
3.6
stabilisateurs de profil d’ARN cellulaire sanguin
composés, solutions ou mélanges qui sont conçus pour limiter les modifications du profil d’ARN cellulaire
sanguin (3.5)
3.7
kit de prélèvement sanguin
dispositif intraveineux conçu spécifiquement pour la ponction veineuse, constitué d’une aiguille
biseautée en acier inoxydable et d’un tube doté d’ailettes en plastique et d’un raccord
Note 1 à l'article: Le raccord se fixe sur un dispositif de prélèvement sanguin supplémentaire, par exemple un
tube de prélèvement sanguin (3.8).
3.8
tube de prélèvement sanguin
tube utilisé pour prélever du sang, généralement sous un vide entraînant le sang de la veine à pénétrer
dans l’aiguille pour venir remplir le tube
3.9
système fermé
système non modifiable, fourni par le fournisseur, incluant tous les composants nécessaires à l’analyse
(c’est-à-dire le matériel, les logiciels, les protocoles et les réactifs)
3.10
acide désoxyribonucléique
ADN
polymère de désoxyribonucléotides se présentant sous la forme de double brin (ADNdb) ou de brin
simple (ADNsb)
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.2]
3.11
DNase
désoxyribonucléase
enzyme catalysant la dégradation de l’ADN en composants plus petits
2 © ISO 2019 – Tous droits réservés

3.12
analyse
phase analytique
ensemble des opérations destinées à déterminer la valeur ou les caractéristiques d’une propriété
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.7, modifiée — Le terme et la définition sont repris ici sans les notes
d’origine; ajout d’un terme supplémentaire.]
Note 1 à l'article: Les processus débutent avec l’analyte (3.2) extrait et comprennent toutes sortes d’essais
paramétriques ou de manipulations chimiques en vue de réaliser l’analyse quantitative ou qualitative.
3.13
performance analytique
capacité d’un dispositif de déceler ou mesurer correctement un analyte (3.2) donné
Note 1 à l'article: La performance analytique est déterminée à partir des études de performance analytique
servant à évaluer la capacité d’un dispositif de diagnostic in vitro de déceler ou mesurer correctement un analyte
particulier.
Note 2 à l'article: La performance analytique englobe des caractéristiques telles que la sensibilité analytique,
la limite de détection, la spécificité analytique (interférences et réactivité croisée), la justesse, la fidélité et la
linéarité.
[SOURCE: ISO/TS 17822‑1:2014, 3.2, modifiée — Deux termes ont été ajoutés.]
3.14
prestataire d’analyse
entité fournissant une analyse spécifique
3.15
substance interférente
substances endogènes ou exogènes présentes dans les prélèvements (3.18) cliniques/échantillon (3.24)
et pouvant altérer le résultat d’une analyse (3.12)
Note 1 à l'article: Les constituants du sang et les polysaccharides acides sont des exemples de substances
endogènes.
Note 2 à l'article: Le talc et les anticoagulants sont des exemples de substances exogènes.
3.16
porte-aiguille
corps de seringue utilisé dans les protocoles de ponction veineuse de routine pour maintenir en place le
tube de prélèvement sanguin (3.8) et protéger le phlébotomiste d’un contact direct avec le sang
3.17
processus préanalytiques
phase préanalytique
flux de travail préanalytique
processus commençant chronologiquement par la prescription des analyses par le clinicien, comprenant
la demande d’analyse, la préparation et l’identification du patient, le prélèvement de l’échantillon
primaire (3.18), son acheminement jusqu’au laboratoire de biologie médicale et au sein du laboratoire
de biologie médicale, l’extraction des analytes, et finissant au début de l’analyse
Note 1 à l'article: La phase préanalytique comprend des processus de préparation, par exemple des protocoles
d’extraction d’ARN, qui influencent le résultat de l’analyse prévue.
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.15, modifiée — Un terme supplémentaire a été ajouté et des détails
supplémentaires ont été inclus.]
3.18
échantillon primaire
spécimen
prélèvement
partie discrète d’un liquide corporel, d’une haleine, d’un cheveu ou d’un tissu prélevée à des fins
d’examens, d’étude ou d’analyse d’une ou plusieurs grandeurs ou propriétés pour déterminer le
caractère de l’ensemble
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.16, modifiée — Les Notes à l’article ont été omises.]
3.19
dispositif de collecte d’échantillon primaire
dispositif de collecte d’un prélèvement
appareillage spécifiquement désigné par le fabricant d’un dispositif médical de DIV pour obtenir,
contenir et conserver un fluide ou un tissu corporel pour l’analyse de diagnostic in vitro
Note 1 à l'article: Sont inclus les dispositifs destinés à conserver un échantillon primaire avant l’analyse.
Note 2 à l'article: Sont inclus les dispositifs de collecte d’échantillon primaire sous vide et sans vide.
[SOURCE: ISO 18113-1:2009, 3.55]
3.20
essai d’aptitude
évaluation de la performance d’un participant par rapport à des critères préétablis au moyen de
comparaisons interlaboratoires
[SOURCE: ISO 17043:2010, 3.7, modifiée — Les Notes à l’article ont été omises.]
3.21
acide ribonucléique
ARN
polymère de ribonucléotides se présentant sous la forme de double brin ou de brin simple
[SOURCE: ISO 22174:2005, 3.1.3]
3.22
RNase
ribonucléase
enzyme catalysant la dégradation de l’ARN en composants plus petits
3.23
température de laboratoire
température dans la plage de 18 °C à 25 °C
Note 1 à l'article: Cette définition est donnée aux fins du présent document. Des réglementations locales ou
nationales peuvent stipuler des définitions différentes.
3.24
échantillon
une ou plusieurs parties prélevées à partir d’un échantillon primaire (3.18)
[SOURCE: ISO 15189:2012, 3.24, modifiée — L’exemple a été omis.]
3.25
stabilité
caractéristique d’un échantillon, lorsqu’il est entreposé dans des conditions spécifiées, à conserver une
valeur de propriété spécifiée dans des limites spécifiées pendant une période de temps spécifiée
[SOURCE: Guide ISO 30:2015, 2.1.15, modifiée — L’expression «matériau de référence» a été remplacée
par «échantillon».]
4 © ISO 2019 – Tous droits réservés

3.26
validation
confirmation, par des preuves objectives, que les exigences pour une utilisation ou une application
spécifiques prévues ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «validé» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 3.8.13, modifiée — Les Notes 1 et 3 ont été omises.]
3.27
sang total veineux
sang prélevé après perforation directe d’une veine, généralement avec une aiguille et une seringue ou
tout autre dispositif de prélèvement
3.28
vérification
confirmation par des preuves objectives que les exigences spécifiées ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Le terme «vérifié» est utilisé pour désigner l’état correspondant.
Note 2 à l'article: La confirmation peut couvrir des activités telles que:
— réalisation de calculs alternatifs;
— comparaison d’une spécification de conception nouvelle avec une spécification de conception similaire
éprouvée;
— réalisation d’essais et de démonstrations;
— revue des documents avant diffusion.
[SOURCE: ISO 9000:2015, 03/08/2012, modifiée — Les Notes 1 et 2 n’ont pas été reprises.]
3.29
flux de travail
série d’activités nécessaires à la réalisation d’une tâche
4 Considérations générales
Pour les instructions générales relatives aux systèmes de management de la qualité de laboratoire
de biologie médicale et portant en particulier sur le prélèvement, la réception et la manipulation
d’échantillons primaires (y compris la prévention des contaminations croisées), voir l’ISO 15189:2012,
4.2, 5.4.4, 5.4.6 ou l’ISO/IEC 17020:2012, 7.2 et Article 8. Les exigences relatives aux équipements
de laboratoire, aux réactifs et aux consommables conformément à l’ISO 15189:2012, 5.3 doivent
être respectées; l’ISO 15189:2012, 5.5.1.2 et 5.5.1.3 et l’ISO/IEC 17020:2012, 6.2 peuvent également
s’appliquer.
Toutes les étapes d’un flux de travail de diagnostic peuvent influencer le résultat analytique final.
Par conséquent, le flux de travail complet, y compris les conditions de stockage et de transport des
échantillons/prélèvements, ainsi que son impact sur la stabilité des biomolécules destinées à être
analysées, doit être vérifié et validé. Les étapes du flux de travail qui ne peuvent pas toujours être
contrôlées doivent être documentées, leur impact sur la performance analytique doit être étudié et des
mesures d’atténuation doivent être mises en place pour garantir la performance analytique requise.
Dans pareils cas, une évaluation des risques est recommandée.
Les profils d’ARN cellulaire peuvent changer de manière significative après le prélèvement sanguin, par
[8][9][10][11]
exemple par induction génique, régulation génique à la baisse ou dégradation de l’ARN. Ces
[8]
changements peuvent varier différemment dans le sang provenant de différents donneurs ou patients
[12][13][14][15]
et peuvent influer sur la validité et la fiabilité des résultats d’analyse.
Avant ou pendant la conception de l’analyse, il convient donc d’étudier et de s’assurer que le ou les
profils d’ARN cellulaire sanguin spécifiques destinés à être analysés ne sont pas compromis par le
processus préanalytique envisagé d’une manière susceptible d’influer sur la performance de l’analyse.
Cela peut être réalisé, par exemple, en réalisant des études cinétiques visant à évaluer la stabilité après
prélèvement du profil d’ARN spécifique destiné à être analysé.
Des protocoles de sécurité doivent être en mis en œuvre pour la manipulation et le transport. Les
réglementations en matière de sécurité pour le transport et la manipulation doivent être prises en
considération (voir l’ISO 15189:2012, 5.2.3 et 5.4.5 et l’ISO 15190).
Des précautions doivent être prises au cours de l’ensemble du processus préanalytique afin d’éviter
toute contamination croisée entre les différents échantillons/prélèvements, par exemple en utilisant,
dans la mesure du possible, du matériel à usage unique ou en mettant en place des méthodes de
nettoyage appropriées entre les traitements des différents prélèvements/échantillons.
Si un produit commercial n’est pas utilisé selon les instructions du fabricant, la responsabilité de sa
validation, de sa vérification, de son utilisation et de sa performance incombe à l’utilisateur.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
5 Hors du laboratoire
5.1  Recueil des prélèvements
5.1.1 Informations relatives au donneur/patient
La documentation doit inclure l’identifiant du donneur/patient, lequel peut se présenter sous la forme
d’un code.
Il convient que la documentation comprenne, sans toutefois s’y limiter:
a) l’état de santé correspondant du donneur/patient [par exemple, sain, type de maladie, maladie
concomitante, données démographiques (âge et sexe, par exemple)];
b) les informations concernant le traitement médical de routine et le traitement particulier avant le
prélèvement de sang (par exemple anesthésiques, médicaments, sujet à jeun);
c) le type et la finalité de l’analyse spécifiée;
d) le consentement approprié du donneur/patient.
Voir également l’ISO 15189:2012, 5.4.4.
5.1.2  Choix du tube de prélèvement de sang total veineux par le laboratoire
En raison de la forte instabilité des profils d’ARN cellulaire sanguin dans les échantillons primaires
[8][12][13][14][15]
prélevés sur des patients/donneurs individuels, il convient d’utiliser des tubes de
prélèvement de sang total veineux disponibles dans le commerce contenant des stabilisateurs de profil
[12][13][15][16][17]
d’ARN cellulaire sanguin et de documenter leur numéro de référence et de lot. Voir
également la Figure A.1.
Il convient de n’utiliser des tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur de profil d’ARN cellulaire
sanguin que si la molécule spécifique d’ARN cellulaire sanguin ou si le profil d’ARN cellulaire sanguin à
analyser est stable après la prise de sang pendant la totalité du processus préanalytique (voir Figure A.2)
ou si l’analyse spécifiée permet l’utilisation de tels tubes.
6 © ISO 2019 – Tous droits réservés

5.1.3  Protocoles de prélèvement de sang total veineux primaire du donneur/patient et
méthodes de stabilisation
a) L’identité de la personne qui prélève l’échantillon primaire et l’heure et la date du prélèvement
doivent être documentées conformément à l’ISO 15189:2012, 5.4.4.3, f).
b) Pour l’étiquetage (identification de l’échantillon/prélèvement) du tube de prélèvement sanguin, une
procédure de routine [ISO 15189:2012, 5.4.4.3, e)] ou une procédure comportant des informations
supplémentaires (par exemple, codes à barres en 2D) doit être utilisée.
c) La technique de ponction veineuse standard peut être utilisée. Des mesures peuvent être requises
pour empêcher un reflux éventuel dans le corps du donneur/patient. Les instructions du fabricant
sur l’utilisation des tubes de prélèvement sanguin doivent être suivies. Un kit de prélèvement
sanguin et un porte-aiguille peuvent être requis en cas d’utilisation de tubes contenant un
stabilisateur de profil d’ARN cellulaire sanguin. Dans ce cas, les instructions du fabricant du kit de
prélèvement et du porte-aiguille doivent être suivies.
NOTE 1 Il n’existe aucun effet spécifique connu du protocole de prise de sang total veineux sur les profils
d’ARN cellulaire. Les protocoles de routine peuvent donc être utilisés.
d) Les tubes de prélèvement sanguin doivent être remplis selon les instructions du fabricant et il
convient de veiller à positionner correctement le tube pendant la prise de sang et à prélever le
volume de sang requis.
NOTE 2 Ne remplir que partiellement des tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs
de profil d’ARN cellulaire peut compromettre la fonction des stabilisateurs en raison d’un rapport sang/
stabilisateur défavorable. Cela peut en soi compromettre le profil d’ARN cellulaire sanguin, ce qui peut avoir
un impact sur la validité et la fiabilité des résultats analytiques.
e) Les instructions du fabricant du tube de prélèvement sanguin concernant le mélange ou l’agitation/
l’inversion du tube juste après le prélèvement de sang doivent être suivies. Le mélange ou
l’agitation/l’inversion du tube de prélèvement sanguin doit être réalisé(e) avec modération.
NOTE 3 Un mélange incorrect et/ou insuffisant peut constituer l’une des variables préanalytiques les
plus critiques. Si les additifs ne sont pas mélangés de manière homogène avec l’échantillon primaire dans les
tubes de prélèvement sanguin, la qualité du profil d’ARN cellulaire sanguin et la quantité de chaque molécule
d’ARN cellulaire peuvent être compromises, ce qui peut avoir un impact sur la validité et la fiabilité des
résultats analytiques.
f) Toute ouverture du tube de prélèvement et/ou tout ajout dans l’échantillon primaire doit être
documenté(e).
5.1.4  Informations sur les échantillons primaires et exigences de stockage dans le centre de
prélèvement
5.1.4.1 Généralités
Comme les profils d’ARN cellulaire peuvent évoluer de façon significative après le prélèvement
[8][16][18][19]
sanguin et qu’ils peuvent donc affecter la validité et la fiabilité du résultat d’analyse, la
[8]
documentation relative à l’échantillon primaire doit inclure la date et l’heure du prélèvement sanguin
[19][20][21]
.
Pour les échantillons primaires destinés à être stockés à long terme dans une biobanque, il est
généralement impossible de savoir quels profils d’ARN cellulaire seront analysés après le stockage
à long terme. Par conséquent, il convient de ne pas utiliser de tubes de prélèvement sanguin sans
stabilisateurs de profil d’ARN cellulaire sanguin pour la conservation en biobanques.
Les conditions de stockage (durée et température par exemple) doivent être documentées.
La durée de stockage temporaire dans le centre de prélèvement contribue à la durée totale de stockage.
5.1.4.2  Utilisation de tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs
Il convient d’utiliser des tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs de profil d’ARN
cellulaire. Pour le stockage des échantillons primaires prélevés dans des tubes de prélèvement sanguin
contenant des stabilisateurs de profil d’ARN cellulaire sanguin, les instructions du fabricant du tube
concernant les conditions de stockage doivent être suivies (température, congélation et durée par
exemple). Lorsque les instructions du prestataire d’analyse sont plus strictes, elles doivent être suivies.
5.1.4.3  Utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur
5.1.4.3.1 Il convient de n’utiliser des tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur de profil d’ARN
cellulaire sanguin que si les spécifications de l’analyse spécifiée permettent l’utilisation de tels tubes.
Dans ce cas, les instructions du prestataire d’analyse concernant les conditions de stockage (température
et durée par exemple) doivent être suivies.
5.1.4.3.2 En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur de profil d’ARN
cellulaire sanguin et en l’absence d’exigences concernant les conditions de stockage, il convient que les
échantillons primaires soient transférés immédiatement entre 2 °C et 8 °C ou sur un bain de glace afin
[13][19][20][21]
de limiter les modifications du profil d’ARN cellulaire sanguin (Figure B.1). La durée de
stockage autorisée entre 2 °C et 8 °C ou sur un bain de glace dépend fortement de la stabilité du profil
d’ARN cellulaire sanguin individuel à analyser. Cette stabilité peut aller de quelques minutes à plus de 24 h.
NOTE Dans ces conditions, des modifications du profil d’ARN cellulaire sanguin peuvent encore se produire
lorsqu’aucun stabilisateur de profil d’ARN cellulaire sanguin n’est utilisé (Figure B.1).
5.2  Exigences de transport
Les conditions requises pour le transport doivent être documentées, ainsi que tout écart par rapport à
ces conditions.
Il convient de surveiller la température de manière appropriée.
En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs d’ARN cellulaire
sanguin, les instructions du fabricant des tubes concernant les conditions de transport (par exemple
la durée et la température) doivent être suivies. Lorsque les instructions du prestataire d’analyse sont
plus strictes, elles doivent être suivies. Les conditions de transport (durée et température par exemple)
doivent être documentées.
En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur d’ARN cellulaire sanguin, les
instructions du prestataire d’analyse concernant les conditions de transport doivent être suivies. Une
documentation des conditions de transport (durée et température par exemple) peut alors être requise.
En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateur de profil d’ARN cellulaire
sanguin et en l’absence d’instructions du prestataire d’analyse, il convient que l’échantillon primaire
soit transporté sans délai entre 2 °C et 8 °C ou sur un bain de glace afin de limiter les modifications
[21]
du profil d’ARN cellulaire sanguin. Les conditions de transport (durée et température par exemple)
doivent être documentées.
NOTE Dans ces conditions, des modifications du profil d’ARN cellulaire sanguin peuvent encore se produire
lorsqu’aucun stabilisateur de profil d’ARN cellulaire sanguin n’est utilisé (Figure B.1).
Voir également l’ISO 15189:2012, 5.4.5.
La durée de transport jusqu’au laboratoire contribue à la durée totale de stockage.
8 © ISO 2019 – Tous droits réservés

6 Dans le laboratoire
6.1  Informations relatives à la réception des prélèvements
La date et l’heure de réception du prélèvement, ainsi que le nom de la personne qui l’a réceptionné,
doivent être documentés. Les non-conformités au niveau de l’étiquetage, des conditions de transport,
du volume sanguin reçu par rapport aux spécifications, les fuites et bris de tubes, etc. doivent être
documentés.
NOTE Cette documentation peut par exemple prendre la forme d’une note indiquant que les échantillons
primaires expédiés entre 2 °C et 8 °C ou sur un bain de glace ne sont plus froids ou que les conteneurs de transport
ne contiennent pas de carboglace contrairement à ce qui était prévu par l’expéditeur.
En cas de non-conformités au niveau de l’étiquetage, des conditions de transport, du stockage en général
et de la durée de transport ou du volume sanguin, qui pourraient avoir un impact sur la validité et la
fiabilité des résultats d’analyse, il convient de se procurer un nouvel échantillon primaire.
L’identité correcte du prélèvement doit être vérifiée. Il convient que cela comprenne les informations
cliniques (voir 5.1.1 et 5.1.3) du prélèvement, du numéro d’admission à l’hôpital et/ou de l’identifiant du
donneur/patient, le nom du patient et la date de naissance du patient.
6.2  Exigences relatives au stockage
La température de stockage et l’intervalle de temps entre la réception de l’échantillon primaire et son
traitement pour l’extraction de l’ARN cellulaire doivent être documentés. La température de stockage
et la durée totale de stockage ne doivent pas dépasser les spécifications identifiées en 5.1.4 et 5.2.
La durée totale de stockage de l’échantillon primaire doit inclure la durée de stockage dans le centre
de prélèvement (voir 5.1.4), la durée de transport jusqu’au laboratoire (voir 5.2) et la durée de stockage
supplémentaire dans le laboratoire ou dans d’autres institutions.
La stabilité des profils d’ARN cellulaire sanguin spécifiques peut varier en fonction des différentes
molécules d’ARN, de différents donneurs/patients et de différentes conditions de stockage et
transport. La durée de stockage maximale spécifiée par le fabricant du tube de prélèvement sanguin
ou le prestataire d’analyse ne doit pas être dépassée. En l’absence de telles spécifications, la durée de
stockage maximale doit être vérifié et généralement réduite le plus possible.
Voir également le Tableau 1.
Tableau 1 — Récapitulatif des conditions de stockage des tubes de prélèvement de sang total
veineux avec ou sans stabilisateurs de profil d’ARN cellulaire sanguin
Prélèvement, transport et stockage du sang
Tube de prélèvement sanguin
Durée Température
Avec stabilisateur de profil d’ARN — Instructions du fabricant des tubes de prélèvement sanguin
cellulaire sanguin
a
— Instructions du prestataire d’analyse
Sans stabilisateur de profil d’ARN — Instructions du prestataire — Instructions du prestataire
cellulaire sanguin d’analyse d’analyse
— Sur un bain de glace ou entre
b
2 °C et 8 °C
a
Si plus strictes que les instructions du fabricant du tube de prélèvement sanguin.
b
En l’absence d’instructions du prestataire d’analyse. Dans ces conditions, des modifications du profil d’ARN cellulaire
sanguin peuvent encore se produire (Figure B.1).
6.3  Extraction de l’ARN cellulaire
6.3.1 Généralités
Pour éviter toute contamination croisée avec le matériel amplifié, il convient de ne pas effectuer
l’extraction de l’ARN cellulaire dans la même zone que les étapes d’amplification du processus
analytique, à moins d’utiliser un système fermé, conçu pour éviter les contaminations croisées.
6.3.2  Utilisation de tubes de prélèvement sanguin contenant des stabilisateurs de profil d’ARN
Lors du traitement du sang provenant de tubes contenant des stabilisateurs de profil d’ARN cellulaire
sanguin, il convient d’utiliser les kits spécifiés par le fabricant du tube de prélèvement sanguin pour
l’extraction de l’ARN cellulaire. Les instructions du fabricant du tube de prélèvement sanguin et du kit
concernant l’extraction de l’ARN cellulaire doivent être suivies.
Si les spécifications du prestataire d’analyse requièrent d’utiliser un kit spécifique disponible dans le
commerce, alors celui-ci doit être utilisé à la place, selon les instructions du prestataire d’analyse.
D’autres protocoles d’extraction peuvent être employés s’il n’existe aucune instruction du prestataire
d’analyse et s’il a été vérifié qu’ils répondent aux mêmes exigences et s’ils ont été validés pour le même
usage prévu. Dans ce cas, les instructions relatives au protocole alternatif validé d’extraction de l’ARN
cellulaire doivent être suivies.
NOTE 1 En cas d’utilisation d’autres protocoles d’extraction, des mesures et des technologies spécifiques
peuvent s’avérer nécessaires pour éviter la contamination par des molécules de stabilisation de l’ARN cellulaire
dans l’éluat d’ARN final. La contamination par des molécules de stabilisation peut conduire à une inhibition de la
réaction lors de l’analyse.
NOTE 2 Les instructions du fabricant du kit d’extraction d’ARN ou du prestataire d’analyse peuvent inclure
des procédures spécifiques pour le traitement d’échantillons/prélèvements congelés.
6.3.3  Utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans stabilisateurs de profil d’ARN
6.3.3.1 En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin ne contenant pas de stabilisateur de profil
d’ARN cellulaire sanguin, les instructions du prestataire d’analyse pour l’extraction de l’ARN cellulaire
doivent être suivies.
6.3.3.2 En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin ne contenant pas de stabilisateur de profil
d’ARN cellulaire sanguin, et en l’absence d’instruction de la part du prestataire d’analyse, il convient
d’utiliser un kit d’extraction de l’ARN cellulaire disponible dans le commerce. Les instructions du
fabricant du kit concernant l’extraction de l’ARN cellulaire doivent être suivies.
D’autres protocoles d’extraction peuvent également être employés s’il a été vérifié qu’ils répondent
aux mêmes exigences et s’ils ont été validés pour le même usage prévu. Dans ce cas, les instructions
relatives au protocole alternatif validé d’extraction de l’ARN cellulaire doivent être suivies.
La mise au point, la vérification et la validation en laboratoire de ce protocole d’extraction de l’ARN
cellulaire sanguin alternatif doivent spécifiquement inclure la vérification et validation de l’ensemble
du processus d’extraction de l’ARN cellulaire, y compris la compatibilité des réactifs et des substances
utilisés. Le laboratoire doit également vérifier s’il est nécessaire de transférer l’échantillon de sang
primaire dans un tampon de lyse (par exemple une solution à base d’isothiocyanate de guanidine)
immédiatement après la réception de l’échantillon primaire pour éviter toute modification du profil
d’ARN d’intérêt.
Il convient d’inclure une étape de traitement à la DNase dans le protocole d’extraction de l’ARN cellulaire
[22][23]
lorsque l’analyse implique une sensibilité de l’éluat d’ARN à une contamination par de l’ADN .
La DNase, les autres réactifs et les consommables entrant en contact avec l’ARN cellulaire doivent être
exempts de RNase.
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Il convient de maintenir l’ARN extrait entre 2 °C et 8 °C (bloc réfrigérant, par exemple) ou sur un bain de
glace et de l’analyser immédiatement. Pour le stockage prolongé et à long terme, voir 6.5.
6.3.3.3 En cas d’utilisation de tubes de prélèvement sanguin sans aucun stabilisateur de profil
d’ARN cellulaire sanguin et si les tubes contiennent des prélèvements congelés, il convient d’éviter
toute décongélation pouvant conduire à une dégradation immédiate de l’ARN cellulaire. Pour limiter
la dégradation de l’ARN cellulaire, il convient de transférer le sang congelé directement du tube de
prélèvement sanguin dans un tampon d’extraction stabilisateur du profil d’ARN cellulaire sanguin, et de
l’homogénéiser immédiatement.
Pour l’extraction de l’ARN cellulaire présent dans l’échantillon homogénéisé, un protocole validé doit
être utilisé.
Il convient de maintenir l’ARN extrait entre 2 °C et 8 °C (bloc réfrigérant, par exemple) ou sur un bain de
glace et de l’analyser immédiatement. Pour le stockage prolongé et à long terme, voir 6.5.
6.4  Évaluation quantitative et qualitative de l’ARN cellulaire extrait
Il convient de vérifier la quantité et la qualité de l’ARN conformément aux instructions du prestataire
d’analyse ou conformément à des procédures validées par des techniques physiques, chimiques
[18][24][25][26]
et biochimiques communément admises. Cette vérification peut faire appel à une ou
plusieurs des techniques suivantes:
a) quantification par mesures d’absorbance (A ) ou spectrofluorimétrie;
b) essai de pureté par mesures d’absorbance (par exemple balayage de longueurs d’onde, rapport
A /A , rapport A /A );
260 280 260 230
EXEMPLE L’ARN pur a un rapport A /A de 1,9 à 2,1 dans 10 mM de Tris·Cl à pH 7,5 (qui peut
260 280
s’écrire également sous la forme Tris-HCl 10 mM à pH 7,5).
c) essai d’intégrité de l’ARN (par exemple, par électrophorèse, chromatographie, techniques
[26][27]
moléculaires telles que l’essai 3’/5’ ou le rapport d’amplicons de longueurs différentielles, ou
par des méthodes électrophorétiques de détermination d’un indice d’intégrité de l’ARN (RIN));
d) essai de détection de substances interférentes (à l’aide de contrôles exogènes [introduits dans des
...