ISO 4973:2023

Cosmetics - Microbiology - Quality control of culture media and diluents used in cosmetics standards

This document specifies the minimum requirements for quality control of microbiological culture media and diluents in order to demonstrate their ability to detect microorganisms and to ensure reliability of the microbiological test methods described in the ISO cosmetics microbiology standards. This document describes mainly growth promotion and microbial control tests and is applicable to both commercially ready-to-use culture media and culture media prepared from dehydrated culture media or basic constituents in the user’s laboratory. Other methods can be substituted provided that their equivalence has been demonstrated.

Cosmétiques — Microbiologie — Contrôle qualité des milieux de culture et des diluants utilisés dans les normes relatives aux cosmétiques

Le présent document spécifie les exigences minimales relatives au contrôle qualité des milieux de culture microbiologique et des diluants afin de démontrer leur capacité à assurer la détection de micro-organismes et de garantir la fiabilité des méthodes d'essais microbiologiques décrites dans les normes ISO relatives à la microbiologie cosmétique. Le présent document décrit principalement des essais de fertilité et de contrôle microbien; il est applicable à la fois aux milieux de culture prêts à l'emploi disponibles dans le commerce et aux milieux de culture préparés à partir de milieux de culture déshydratés ou de constituants de base dans le laboratoire de l'utilisateur. D'autres méthodes peuvent être utilisées sous réserve que leur équivalence ait été démontrée.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 24-Sep-2023
• ICS: 07.100.40 - Cosmetics microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 217 - Cosmetics
• Drafting Committee: ISO/TC 217/WG 1 - Microbiological standards and limits
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 25-Sep-2023
• Due Date: 21-Apr-2023
• Completion Date: 25-Sep-2023

Relations

• Consolidates: ISO 15179:2022 - Hot-rolled twin-roll cast steel sheet of structural quality and high strength steel
• Effective Date: 06-Jun-2022

Overview

ISO 4973:2023 - Cosmetics - Microbiology - Quality control of culture media and diluents used in cosmetics standards defines the minimum requirements for verifying the quality and performance of microbiological culture media and diluents used in cosmetic microbiology. The standard focuses on demonstrating that media and diluents are fit for purpose in detecting microorganisms and ensuring the reliability of microbiological test methods referenced in ISO cosmetics microbiology standards.

Key features:

• Applies to ready-to-use media and media prepared from dehydrated powders or basic laboratory constituents.
• Emphasizes growth promotion, absence of contamination, and selective/indicative properties.
• Allows alternative methods if equivalence to the prescribed tests is demonstrated.

Key technical topics and requirements

ISO 4973:2023 covers the technical checkpoints laboratories must perform to validate culture media and diluents:

• Principle and general information: definitions (culture medium, diluent, strain, batch) and testing rationale.
• Physical and chemical checks: pH and physical characteristics relevant to performance.
• Absence of microbial growth: ensuring non-inoculated media and diluents are sterile or free from background flora.
• Growth promotion tests: use of specified strains to confirm media support target organism recovery.
• Selective and indicative properties: verification of inhibition for non-target organisms and appearance of characteristic colonies on indicative media.
• Strain management and preparation: guidance on reference strains, stock/working cultures and calibrated suspensions.
• Procedures, expression of results and acceptance criteria: standardized reporting, interpretation and minimum acceptance thresholds.
• Annexes: normative specifications for growth-promoting, inhibitory and indicative properties (Annex A) and an example quality control report (Annex B).

Practical applications

ISO 4973:2023 is used to:

• Validate and release batches of culture media and diluents for routine cosmetic microbiology testing.
• Support method performance verification and troubleshooting in microbiological laboratories.
• Document quality control during supplier qualification and internal audits.
• Ensure consistent recovery of bacteria, yeasts and moulds during microbiological examinations of cosmetics.

Who should use this standard

• Cosmetic manufacturers and formulators performing in-house microbiological testing
• Quality control (QC) and microbiology laboratories (in-house and contract)
• Suppliers of culture media and diluents
• Regulatory bodies and auditors assessing laboratory competency

Related standards

• ISO 21148 - Cosmetics - Microbiology - General instructions for microbiological examination
• Other ISO cosmetics microbiology standards (referenced for specific test methods and organism lists)

Keywords: ISO 4973:2023, cosmetics microbiology, culture media quality control, growth promotion, diluents, neutralizers, microbiological test methods, cosmetic QC.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4973
First edition
2023-09
Cosmetics — Microbiology — Quality
control of culture media and diluents
used in cosmetics standards
Cosmétiques — Microbiologie — Contrôle qualité des milieux
de culture et des diluants utilisés dans les normes relatives aux
cosmétiques
Reference number
© ISO 2023
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .v
Introduction . vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 3
4.1 General information. 3
4.2 pH . 3
4.3 Absence of microbiological growth . 3
4.4 Growth promotion. 3
4.5 Selective and indicative properties. 3
5 Diluents, neutralizers and culture media . 4
5.1 General . 4
5.2 Diluents and neutralizers . 4
5.3 Culture media . 4
6 Apparatus and glassware .4
7 Strains of microorganisms . 4
8 Procedure .6
8.1 General recommendation . 6
8.2 Preparation of strains . 6
8.2.1 General . 6
8.2.2 Preparation of bacterial and Candida albicans suspensions . 9
8.2.3 Preparation of Aspergillus brasiliensis spore stock suspension . 9
8.2.4 Control of the concentration of the calibrated suspension . 10
8.3 Absence of microbial growth . 10
8.3.1 Solid culture media . 10
8.3.2 Liquid culture media and diluents . 10
8.4 Growth promotion. 10
8.4.1 Solid culture media . 10
8.4.2 Liquid culture media . 11
8.5 Selective properties  . 11
8.5.1 Solid culture media — For indicative properties . 11
8.5.2 Solid culture media — For inhibition properties . 11
9 Expression of results .11
9.1 Absence of microbial growth . 11
9.1.1 Solid culture media . 11
9.1.2 Liquid culture media . 11
9.2 Growth promotion. 11
9.2.1 Solid culture media . 11
9.2.2 Liquid culture media . 11
9.3 Selective and indicative properties.12
9.3.1 Solid culture media — For indicative properties .12
9.3.2 Solid culture media — For inhibition properties .12
10 Interpretation and acceptance criteria .12
10.1 General .12
10.2 Absence of microbial growth .12
10.3 Growth promotion.12
10.3.1 Solid culture media .12
10.3.2 Growth promotion — Liquid media culture .13
10.4 Selective properties of solid culture media . 13
iii
10.4.1 For indicative properties . 13
10.4.2 For inhibition properties . . 13
Annex A (normative) Specifications for growth promoting, inhibitory and indicative
properties of culture media .14
Annex B (informative) Quality control report for culture media.19
Bibliography .21
iv
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use
of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed
patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received
notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are
cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent
database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all
such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics, in collaboration with
the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 392, Cosmetics, in
accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
v
Introduction
The quality of culture media used in the current standards for cosmetic microbiology is an essential
part of microbiological analysis reliability and needs to be verified.
Checking different parameters of culture media such as growth promotion, absence of microbial growth
for non-inoculated culture media, physical characteristics, can help to assess their quality.
This document is intended to provide methods to assess the quality of the media used in cosmetics
microbiology standards and define the minimum acceptance criteria required to ensure their
performance.
This applies to:
a) commercially ready-to-use culture media;
b) culture media prepared from dehydrated culture media plus additional ingredients, or only
ingredients.
vi
INTERNATIONAL STANDARD ISO 4973:2023(E)
Cosmetics — Microbiology — Quality control of culture
media and diluents used in cosmetics standards
1 Scope
This document specifies the minimum requirements for quality control of microbiological culture
media and diluents in order to demonstrate their ability to detect microorganisms and to ensure
reliability of the microbiological test methods described in the ISO cosmetics microbiology standards.
This document describes mainly growth promotion and microbial control tests and is applicable to
both commercially ready-to-use culture media and culture media prepared from dehydrated culture
media or basic constituents in the user’s laboratory.
Other methods can be substituted provided that their equivalence has been demonstrated.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 21148, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
culture medium
mixture of ingredients, in liquid or solid form, prepared according to a formula and intended to support
the growth of microorganisms under specific conditions
Note 1 to entry: There are different types of culture media suitable for growing different types of microorganisms
depending on different included nutrients and chemicals present in the formulation.
3.1.1
batch of culture medium
lot of culture medium
homogenous and fully traceable unit of culture medium referring to a defined amount of bulk, which
has been produced within one defined production period, having been assigned the same batch number
3.1.2
ready-to-use culture medium
sterile liquid culture medium (3.1.3) or solid culture medium (3.1.4) that is supplied in plates, tubes, or
other containers in ready-to-use form
3.1.3
liquid culture medium
culture medium (3.1) consisting in aqueous solution of one or more constituents, such as peptone water
or nutrient broth
Note 1 to entry: Liquid culture media in tubes, flasks or bottles are commonly called “broths”.
Note 2 to entry: Enrichment culture media are generally liquid media which, due to their composition, provide
favourable conditions for microorganisms’ multiplication.
3.1.4
solid culture medium
culture medium (3.1) containing solidifying substances (e.g. agar, gelatin) in different concentrations
3.1.5
selective culture medium
liquid culture medium (3.1.3) or solid culture medium (3.1.4) which allows specifically the growth of
a selected microorganism while inhibiting partially or totally the growth of different, non-target
microorganisms which can be in the product to be tested
Note 1 to entry: It may have indicative properties with growth of characteristic aspect of colonies if this is a solid
culture medium.
3.2
diluent
liquid phase designed to separate microorganisms from a solid culture medium (3.1.4) and/or to reduce
their concentration by dilution without multiplication or inhibition during the time of contact
Note 1 to entry: Diluent can contain neutralizing agent to inactivate the antimicrobial properties of the product.
3.3
strain
test microorganism used for quality control of the culture medium (3.1)
3.3.1
reference strain
test microorganism provided by a reference culture collection centre
3.3.2
reference stock culture
stored reference strain
set of separate identical cultures obtained by a single subculture from the reference strain (3.3.1)
Note 1 to entry: The reference stock culture or stored reference strain can be stored in a seed lot system (e.g.
single-use vials or beads) to maintain reference strains in the laboratory.
3.3.3
stock culture
subculture from a reference stock culture (3.3.2)
3.3.4
working culture
subculture from a reference stock culture (3.3.2) or stock culture (3.3.3) and is often kept as slants or
plates, used for preparation of calibrated microbial suspension
3.3.5
subculture
passage, i.e. transfer of organisms from a viable culture to fresh medium with growth of the
microorganisms
Note 1 to entry: Any form of subculturing is considered to be a transfer/passage.
4 Principle
4.1 General information
The quality control of culture media refers to different parameters such as:
— pH;
— absence of microbial growth;
— growth promotion;
— selective and indicative properties (when relevant).
These are the key parameters to ensure and control the quality of the culture media. However,
particular attention should also be paid to:
— the manufacturer’s instructions;
— preparing conditions (volume, weighing, water quality);
— sterilization conditions (cycle time, temperature, pressure, packaging);
— storage conditions (temperature, duration).
Failure to comply with these instructions and conditions can affect appearance and functional
characteristics provided in the manufacturer’s guidance such as colour, gel consistency, clarity and
homogeneity.
NOTE For sterilization conditions and/or other conditions, see ISO 21148 and ISO 11133.
The user’s laboratory should ensure its own preparation process is accurate.
4.2 pH
pH is an essential physical parameter of all culture media.
The target pH value should be reached after autoclaving when culture media are prepared from
dehydrated media or basic constituents in the user’s laboratory.
4.3 Absence of microbiological growth
The purpose of this test is to check that the medium does not contain any microbiological contamination
which can interfere with microbial tests results.
4.4 Growth promotion
The purpose of this test is to ensure the ability of microorganisms to grow on the culture media.
NOTE Growth promotion is also called ‘productivity’ of culture medium.
4.5 Selective and indicative properties
The purpose of this test is to verify the ability of the culture medium to allow the growth of target
microorganisms and/or to confirm its colony morphology within the range of incubation time and
temperature.
An additional purpose of this test is to ensure that there is no growth of the target inhibited
microorganism(s).
5 Diluents, neutralizers and culture media
5.1 General
The diluents, neutralizers and culture media suitable for enumeration and detection of microorganisms
are described in ISO 11930, ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416, ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322,
ISO 22717 and ISO 22718. Other diluents, neutralizers and culture media may be used if they have been
demonstrated to be suitable for use.
Use the general instructions given in ISO 21148. When water is mentioned in this international
standard, use water as specified in ISO 21148.
5.2 Diluents and neutralizers
Diluents may be used for preparation and dilutions of calibrated microbial suspensions and to disperse
the samples. In this case, it is required that a diluent contains neutralizers if the sample to be tested
has antimicrobial properties or contains preservatives. Diluents and neutralizers are described in
ISO 11930, ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416, ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322, ISO 22717 and ISO 22718.
5.3 Culture media
Culture media for enumeration and/or detection of microorganisms are described in ISO 11930,
ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416, ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322, ISO 22717 and ISO 22718.
Culture media may be prepared from dehydrated culture media using specific standards instructions
or the instructions provided by the manufacturer of the culture media.
Already prepared commercially manufactured ready-to-use culture media in liquid or solid form may
also be used if they meet the criteria described in this document.
6 Apparatus and glassware
The laboratory equipment, apparatus and glassware are described in ISO 21148.
7 Strains of microorganisms
The culture should be reconstituted according to the procedures provided by the supplier of the
reference strain. The strains may be stored as described in EN 12353 or according to another suitable
method.
The following strains are used for the growth promotion test. The relationship between the medium to
be checked and the test microorganisms to be used is described in Annex A.
® TM1) ® TM2) ® TM3)
— Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (equivalent strain: CIP 82.118 or NCIMB 8626
® TM4) ® TM5) 6)
or NBRC 13275 or KCTC 2513 or WDCM 00026 or other equivalent national collection
strain);
® TM ® TM ® TM
— Staphylococcus aureus ATCC 6538 (equivalent strain: CIP 4.83 or NCIMB 9518 or
® TM ® TM ® TM7)
NBRC 13276 or KCTC 1916 or NCTC 10788 or WDCM 00032 or other equivalent national
collection strain);
® TM ® TM ® TM ® TM
— Escherichia coli ATCC 8739 (equivalent strain: CIP 53.126 or NCIMB 8545 or NBRC 3972
® TM ® TM
or KCTC 2571 or NCTC 12923 or WDCM 00012 or other equivalent national collection strain);
® TM TM ® TM8) ® TM
— Candida albicans ATCC 10231 (equivalent strain: IP 48.72 or NCPF 3179 or NBRC 1594
® TM
or KCTC 7965 or WDCM 00054 or other equivalent national collection strain);
® TM ® TM9)
— Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 (equivalent strain: IP 1431 or IMI 149007 or
® TM ® TM
NBRC 9455 or KCTC 6196 or WDCM 00053 or other equivalent national collection strain).
Other relevant strains or in-house isolates can be used as needed to supplement the strains cited in this
clause.
® TM TM TM TM TM
1) ATCC 6538 , 9027 , 8739 , 10231 and 16404 are trademarks of the American Type Culture
Collection. This information is given for the convenience of users of this document and does not constitute an
endorsement by ISO of the product named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the
same results.
® TM TM TM
2) CIP 82.118 , 4.83 and 53.126 are trademarks of the Collection de l’Institut Pasteur. This information
is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of the product
named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
® TM TM TM
3) NCIMB 8626 , 9518 and 8545 are trademarks of the National Collection of Industrial Marine Bacteria.
This information is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by
ISO of the product named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
® TM TM TM TM TM
4) NBRC 13275 , 13276 , 3972
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 4973
Première édition
2023-09
Cosmétiques — Microbiologie —
Contrôle qualité des milieux de
culture et des diluants utilisés dans
les normes relatives aux cosmétiques
Cosmetics — Microbiology — Quality control of culture media and
diluents used in cosmetics standards
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2023
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant propos .v
Introduction . vi
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 3
4.1 Informations générales . 3
4.2 pH . 3
4.3 Absence de croissance microbienne . 3
4.4 Fertilité . 4
4.5 Propriétés sélectives et indicatives . 4
5 Diluants, neutralisants et milieux de culture . 4
5.1 Généralités . 4
5.2 Diluants et neutralisants . 4
5.3 Milieux de culture . 4
6 Appareillage et verrerie. 4
7 Souches de microorganismes .5
8 Mode opératoire . 6
8.1 Recommandations générales . 6
8.2 Préparation des souches . 7
8.2.1 Généralités . 7
8.2.2 Préparation des suspensions de bactéries et de Candida albicans . 9
8.2.3 Préparation de la suspension mère de spores d'Aspergillus brasiliensis . 9
8.2.4 Contrôle de la concentration de la suspension calibrée . 10
8.3 Absence de croissance microbienne . 10
8.3.1 Milieux de culture solides . 10
8.3.2 Milieux de culture liquides et diluants . 10
8.4 Fertilité . 10
8.4.1 Milieux de culture solides . 10
8.4.2 Milieux de culture liquides . 11
8.5 Propriétés sélectives . 11
8.5.1 Milieux de culture solides — Pour les propriétés indicatives . 11
8.5.2 Milieux de culture solides — Pour les propriétés inhibitrices . 11
9 Expression des résultats .11
9.1 Absence de croissance microbienne . 11
9.1.1 Milieux de culture solides . 11
9.1.2 Milieux de culture liquides . 11
9.2 Fertilité .12
9.2.1 Milieux de culture solides .12
9.2.2 Milieux de culture liquides .12
9.3 Propriétés sélectives et indicatives .12
9.3.1 Milieux de culture solides — Pour les propriétés indicatives .12
9.3.2 Milieux de culture solides — Pour les propriétés inhibitrices .12
10 Interprétation et critères d'acceptation .12
10.1 Généralités .12
10.2 Absence de croissance microbienne .12
10.3 Fertilité .12
10.3.1 Milieux de culture solides .12
10.3.2 Fertilité — Milieux de culture liquides .13
10.4 Propriétés sélectives des milieux de culture solides. 13
iii
10.4.1 Pour les propriétés indicatives . 13
10.4.2 Pour les propriétés inhibitrices . 13
Annexe A (normative) Spécifications relatives à la fertilité et aux propriétés inhibitrices et
indicatives des milieux de culture .14
Annexe B (informative) Rapport de contrôle qualité des milieux de culture .19
Bibliographie .22
iv
Avant propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner
l’utilisation d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité
et à l’applicabilité de tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent
document, l’ISO n’avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa
mise en application. Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent
document que des informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de
brevets, disponible à l'adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié tout ou partie de tels droits de brevet.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www.iso.org/iso/foreword.html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques, en collaboration
avec le comité technique CEN/TC 392, Cosmétiques, du Comité européen de normalisation (CEN)
conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/members.htm.
v
Introduction
La qualité des milieux de culture utilisés dans les normes actuelles relatives à la microbiologie
cosmétique contribue de manière essentielle à la fiabilité des analyses microbiologiques et doit être
contrôlée.
L'examen de différents paramètres associés à ces milieux de culture, tels que la fertilité, l'absence de
croissance microbienne pour les milieux de culture non inoculés, les caractéristiques physiques, peut
contribuer à l'évaluation de leur qualité.
Le présent document a pour objet de fournir des méthodes permettant d'évaluer la qualité des milieux
utilisés dans les normes relatives à la microbiologie cosmétique et de définir les critères d’acceptation
minimaux requis pour garantir leur performance.
Il s'applique:
a) aux milieux de culture prêts à l’emploi disponibles dans le commerce;
b) aux milieux de culture préparés à partir de milieux de culture déshydratés auxquels sont ajoutés
des ingrédients, ou uniquement à partir d'ingrédients.
vi
NORME INTERNATIONALE ISO 4973:2023(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Contrôle qualité des
milieux de culture et des diluants utilisés dans les normes
relatives aux cosmétiques
1 Domaine d'application
Le présent document spécifie les exigences minimales relatives au contrôle qualité des milieux de
culture microbiologique et des diluants afin de démontrer leur capacité à assurer la détection de
micro-organismes et de garantir la fiabilité des méthodes d'essais microbiologiques décrites dans les
normes ISO relatives à la microbiologie cosmétique.
Le présent document décrit principalement des essais de fertilité et de contrôle microbien; il est
applicable à la fois aux milieux de culture prêts à l'emploi disponibles dans le commerce et aux milieux
de culture préparés à partir de milieux de culture déshydratés ou de constituants de base dans le
laboratoire de l'utilisateur.
D'autres méthodes peuvent être utilisées sous réserve que leur équivalence ait été démontrée.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 21148, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
milieu de culture
mélange d'ingrédients, sous forme liquide ou solide, préparé conformément à une formule et permettant
la croissance des micro-organismes dans des conditions spécifiques
Note 1 à l'article: Il existe différents types de milieux de culture adaptés à la croissance de toutes sortes de micro-
organismes, en fonction des divers nutriments et substances chimiques présents dans la formulation.
3.1.1
lot de milieu de culture
unité de milieu de culture homogène et conforme aux exigences de traçabilité, correspondant à une
quantité définie de produit en vrac qui a été produite au cours d'une période définie et identifiée sous
un même numéro de lot
Note 1 à l'article: Au terme français «lot de milieu de culture» correspondent deux termes anglais synonymes:
«batch of culture medium» et «lot of culture medium». (Ne concerne que la version française.)
3.1.2
milieu de culture prêt à l'emploi
milieu de culture liquide (3.1.3) ou milieu de culture solide (3.1.4) stérile fourni dans des boîtes, tubes ou
autres contenants sous forme de produit prêt à l'emploi
3.1.3
milieu de culture liquide
milieu de culture (3.1) consistant en une solution aqueuse d'un ou de plusieurs constituants, tel que l'eau
peptonée ou un bouillon nutritif
Note 1 à l'article: Les milieux de culture liquides répartis dans des tubes, des fioles ou des flacons sont
couramment appelés «bouillons».
Note 2 à l'article: Les milieux de culture d'enrichissement se présentent en général sous forme de milieux liquides
qui, de par leur composition, créent des conditions favorables à la multiplication des micro-organismes.
3.1.4
milieu de culture solide
milieu de culture (3.1) contenant des produits gélifiants (par exemple, gélose, gélatine) à différentes
concentrations
3.1.5
milieu de culture sélectif
milieu de culture liquide (3.1.3) ou milieu de cuture solide (3.1.4) permettant la croissance d'un micro-
organisme spécifique sélectionné tout en inhibant, partiellement ou totalement, la croissance de micro-
organismes différents, non cibles, pouvant être présents dans le produit à soumettre à essai
Note 1 à l'article: Ce milieu de culture, s’il est solide, peut posséder des propriétés indicatives permettant de
mettre en évidence des aspects caractéristiques des colonies lors de leur croissance.
3.2
diluant
phase liquide étudiée pour séparer les micro-organismes d'un milieu de culture solide (3.1.4) et/ou pour
réduire leur concentration par dilution, sans multiplication ou inhibition pendant le temps de contact
Note 1 à l'article: Le diluant peut contenir un agent neutralisant pour inactiver les propriétés antimicrobiennes
du produit.
3.3
souche
micro-organisme d’essai utilisé pour le contrôle qualité du milieu de culture (3.1)
3.3.1
souche de référence
micro-organisme d’essai fourni par une collection de cultures de référence
3.3.2
culture mère de référence
souche de référence stockée
ensemble de cultures individuelles identiques issues d’une unique subculture de la souche de référence
(3.3.1)
Note 1 à l'article: La culture mère de référence ou la souche de référence stockée peut être conservée dans une
banque de stockage (par exemple, sous forme de flacons à usage unique ou de billes) pour garder des souches de
référence disponibles au laboratoire.
3.3.3
culture mère
subculture obtenue à partir d'une culture mère de référence (3.3.2)
3.3.4
culture de travail
subculture issue d'une culture mère de référence (3.3.2) ou d’une culture mère (3.3.3), se présentant
souvent sous forme de culture en pente ou de boîte, utilisée pour la préparation d'une suspension
microbienne calibrée
3.3.5
subculture
passage, c’est-à-dire transfert d'organismes d'une culture viable à un milieu frais avec croissance des
micro-organismes
Note 1 à l'article: Toute forme de repiquage est considérée comme un transfert/passage.
4 Principe
4.1 Informations générales
Le contrôle qualité des milieux de culture porte sur différents paramètres, tels que:
— le pH;
— l’absence de croissance microbienne;
— la fertilité;
— les propriétés sélectives et indicatives (le cas échéant).
Les paramètres ci-dessus sont essentiels pour garantir et contrôler la qualité des milieux de culture. Il
convient cependant de prêter une attention particulière aux éléments suivants:
— les instructions du fabricant;
— les conditions de préparation (volume, pesée, qualité de l'eau);
— les conditions de stérilisation (durée du cycle, température, pression, conditionnement);
— les conditions de conservation (température, durée).
Le non-respect de ces instructions et conditions peut nuire aux caractéristiques visuelles et
fonctionnelles indiquées dans les recommandations du fabricant, comme par exemple la couleur, la
consistance du gel, la limpidité et l'homogénéité.
NOTE Concernant les conditions de stérilisation et/ou autres conditions, voir l’ISO 21148 et l’ISO 11133.
Il convient que le laboratoire de l'utilisateur garantisse l'exactitude de son processus de préparation en
interne.
4.2 pH
Le pH est un paramètre physique essentiel de tout milieu de culture.
Il convient que la valeur cible de pH soit atteinte après l'autoclavage lorsque les milieux de culture sont
préparés à partir de milieux déshydratés ou de constituants de base dans le laboratoire de l'utilisateur.
4.3 Absence de croissance microbienne
L'objectif de cet essai est de vérifier que le milieu est exempt de toute contamination microbienne
pouvant influer sur les résultats des essais microbiens.
4.4 Fertilité
L'objectif de cet essai est de s'assurer de la capacité des micro-organismes à se développer sur les
milieux de culture.
NOTE Le terme «productivité» est également utilisé pour désigner la fertilité du milieu de culture.
4.5 Propriétés sélectives et indicatives
L'objectif de cet essai est de vérifier la capacité du milieu de culture à permettre la croissance de micro-
organismes cibles et/ou de confirmer la morphologie des colonies qui s'y sont développées dans les
plages de temps et de température d'incubation.
Un autre objectif de cet essai est de s’assurer de l’absence de croissance du ou des micro-organismes
inhibés cibles.
5 Diluants, neutralisants et milieux de culture
5.1 Généralités
Les diluants, les neutralisants et les milieux de culture appropriés pour le dénombrement et la détection
des micro-organismes sont décrits dans les normes ISO 11930, ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416,
ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322, ISO 22717 et ISO 22718. D'autres diluants, neutralisants et milieux de
culture peuvent être utilisés si leur aptitude à l'emploi a été démontrée.
Suivre les instructions générales données dans l'ISO 21148. Lorsque de l'eau est mentionnée dans la
présente Norme internationale, utiliser de l'eau telle que spécifiée dans l'ISO 21148.
5.2 Diluants et neutralisants
L'utilisation de diluants est admise pour la préparation de suspensions microbiennes calibrées et
de leurs dilutions ainsi que pour la dispersion des échantillons. Dans ce cas, il est nécessaire que le
diluant contienne des neutralisants si l'échantillon devant être soumis à essai possède des propriétés
antimicrobiennes ou contient des conservateurs. Les diluants et les neutralisants sont décrits dans les
normes ISO 11930, ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416, ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322, ISO 22717 et
ISO 22718.
5.3 Milieux de culture
Les milieux de culture utilisés pour le dénombrement et/ou la détection des micro-organismes sont
décrits dans les normes ISO 11930, ISO 16212, ISO 18415, ISO 18416, ISO 21149, ISO 21150, ISO 21322,
ISO 22717 et ISO 22718.
Les milieux de culture peuvent être préparés à partir de milieux de culture déshydratés en suivant
les instructions fournies dans les normes spécifiques ou celles fournies par le fabricant des milieux de
culture.
L’utilisation de milieux de culture sous forme liquide ou solide, déjà fabriqués, prêts à l’emploi et
disponibles dans le commerce, est également admise sous réserve que ces milieux respectent les
critères décrits dans le présent document.
6 Appareillage et verrerie
L'équipement, l'appareillage et la verrerie de laboratoire sont décrits dans l'ISO 21148.
7 Souches de microorganismes
Il convient de reconstituer la culture conformément aux modes opératoires indiqués par le fournisseur
de la souche de référence. Les souches peuvent être conservées conformément à l'EN 12353 ou à une
autre méthode appropriée.
Les souches suivantes sont utilisées pour l'essai de fertilité. La relation entre les milieux à soumettre à
essai et les micro-organismes à utiliser est décrite à l'Annexe A.
® TM1) ® TM2) ® TM3)
— Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (souche équivalente: CIP 82.118 , NCIMB 8626 ,
® TM4) ® TM5) 6)
NBRC 13275 , KCTC 2513 , WDCM 00026 ou autre souche équivalente d’une collection
nationale);
® TM ® TM ® TM
— Staphylococcus aureus ATCC 6538 (souche équivalente: CIP 4.83 , NCIMB 9518 ,
® TM ® TM ® TM7)
NBRC 13276 , KCTC 1916 , NCTC 10788 , WDCM 00032 ou autre souche équivalente d’une
collection nationale);
® TM ® TM ® TM ® TM
— Escherichia coli ATCC 8739 (souche équivalente: CIP 53.126 , NCIMB 8545 , NBRC 3972 ,
® TM ® TM
KCTC 2571 , NCTC 12923 , WDCM 00012 ou autre souche équivalente d’une collection
nationale);
® TM TM ® TM8) ® TM
— Candida albicans ATCC 10231 (souche équivalente: IP 48.72 , NCPF 3179 , NBRC 1594 ,
® TM
KCTC 7965 , WDCM 00054 ou autre souche équivalente d’une collection nationale);
® TM TM TM TM TM
1) ATCC 6538 , 9027 , 8739 , 10231 et 16404 sont des marques commerciales de l’American Type
Culture Collection (Collection américaine de cultures types). Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs
du présent document et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi
désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils aboutissent aux mêmes résultats.
® TM TM TM
2) CIP 82.118 , 4.83 et 53.126 sont des marques commerciales de la Collection de l’Institut Pasteur.
Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l'ISO
approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés
s'il est démontré qu'ils aboutissent aux mêmes résultats.
® TM TM TM
3) NCIMB 8626 , 9518 et 8545 sont des marques commerciales de la National Collection of Industrial
Marine Bacteria (Collection nationale de bactéries industrielles et marines). Cette information est donnée à l'intention
des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif
du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils aboutissent aux
mêmes résultats.
® TM TM TM TM TM
4) NBRC 13275 , 13276 , 3972 , 1594 et 9455 sont des marques commerciales du NITE Biological
Resource Center (Centre de ressources biologiques du NITE) (Japon). Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du
produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils aboutissent aux mêmes
résultats.
® TM TM TM TM TM
5) KCTC 2513 , 1916 , 2571 , 7965 et 6196 sont des marques commerciales de la Korean Collection
for Type Cultures (Collection coréenne de cultures types). Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs
du présent document et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi
désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils aboutissent aux mêmes résultats.
6) WDCM: World Data Center for Microorganisms (Centre de données mondial sur les micro-organismes).
® TM TM
7) NCTC 10788 et 12923 sont des marques commerciales de la National Collection of Type Cultures
(Collection nationale de cultures types). Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs du présent
document et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné.
Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils aboutissent aux mêmes résultats.
® TM
8) NCPF 3179 est une marque commerciale de la National Collection of Pathogenic Fungi (Collection nationale
de champignons path
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