Cereals and cereal products — Determination of ochratoxin A — High performance liquid chromatographic method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection

This document specifies a high performance liquid chromatographic method with immunoaffinity column cleanup for the determination of ochratoxin A in cereals and cereal products. The limit of quantification is 0,2 μg/kg. The method detection limit is dependent on the sample matrix as well as on the instrument.

Céréales et produits céréaliers — Dosage de l'ochratoxine A — Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance avec purification sur colonne d'immunoaffinité et détection par fluorescence

Le présent document expose en détail une méthode par chromatographie liquide à haute performance avec purification sur colonne d'immunoaffinité pour le dosage de l'ochratoxine A dans les céréales et les produits céréaliers. Le seuil de quantification est de 0,2 μg/kg. La limite de la méthode de détection dépend de la matrice de l'échantillon ainsi que de l'instrument.

General Information

Status
Published
Publication Date
23-Jul-2018
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
24-Jul-2018
Completion Date
24-Jul-2018
Ref Project

RELATIONS

Effective Date
06-Jun-2022

Buy Standard

Standard
ISO 15141:2018 - Cereals and cereal products -- Determination of ochratoxin A -- High performance liquid chromatographic method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection
English language
12 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview
Standard
ISO 15141:2018 - Céréales et produits céréaliers -- Dosage de l'ochratoxine A -- Méthode par chromatographie en phase liquide a haute performance avec purification sur colonne d'immunoaffinité et détection par fluorescence
French language
12 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview

Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15141
First edition
2018-07
Cereals and cereal products —
Determination of ochratoxin A — High
performance liquid chromatographic
method with immunoaffinity column
cleanup and fluorescence detection
Céréales et produits céréaliers — Dosage de l'ochratoxine A —
Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance
avec purification sur colonne d'immunoaffinité et détection par
fluorescence
Reference number
ISO 15141:2018(E)
ISO 2018
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 15141:2018(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2018

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 15141:2018(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 1

5 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 2

6 Apparatus and equipment .......................................................................................................................................................................... 3

7 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 5

7.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 5

7.2 Sampling ....................................................................................................................................................................................................... 5

7.3 Preparation of the test samples ................................................................................................................................................ 5

7.4 Extraction of ochratoxin A from the sample .................................................................................................................. 5

7.4.1 Extraction ............................................................................................................................................................................... 5

7.4.2 Dilution..................................................................................................................................................................................... 5

7.5 Immunoaffnity column cleanup ............................................................................................................................................... 5

7.6 HPLC operating conditions ........................................................................................................................................................... 6

7.7 Calibration graph .................................................................................................................................................................................. 6

7.8 Identification ............................................................................................................................................................................................ 6

7.9 Determination ......................................................................................................................................................................................... 6

7.10 Confirmation ............................................................................................................................................................................................. 6

8 Calculation .................................................................................................................................................................................................................. 7

9 Precision ....................................................................................................................................................................................................................... 7

9.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 7

9.2 Repeatability ............................................................................................................................................................................................. 8

9.3 Reproducibility ....................................................................................................................................................................................... 8

10 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 8

Annex A (informative) Results of interlaboratory tests.................................................................................................................... 9

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................12

© ISO 2018 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 15141:2018(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following

URL: www .iso .org/iso/foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4,

Cereals and pulses.

This first edition cancels and replaces ISO 15141-1:1998 and ISO 15141-2:1998, which have been

technically revised.

The main change compared to the previous edition is that the principle of the extraction and purification

has been changed.
iv © ISO 2018 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 15141:2018(E)
Cereals and cereal products — Determination of
ochratoxin A — High performance liquid chromatographic
method with immunoaffinity column cleanup and
fluorescence detection
1 Scope

This document specifies a high performance liquid chromatographic method with immunoaffinity

column cleanup for the determination of ochratoxin A in cereals and cereal products.

The limit of quantification is 0,2 μg/kg. The method detection limit is dependent on the sample matrix

as well as on the instrument.
2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
4 Principle

Ochratoxin A (OTA) is extracted by acetonitrile-water. The extract is purified using an immunoaffinity

column and ochratoxin A is determined by high performance liquid chromatography (HPLC) on a

reverse-phase column and fluorescence detection. The result is verified, if required, by derivatization

with boron trifluoride in methanolic solution.

WARNING — Ochratoxin A causes kidney and liver damage and is a probable carcinogen. Observe

[1]

appropriate safety precautions for handling such compounds and in particular avoid handling

in dry form as the electrostatic nature can result in dispersion and inhalation. Glassware can

be decontaminated with 4 % sodium hypochlorite solution. Attention is drawn to the statement

[2][3]
made by the International Agency for Research on Cancer (WHO) .
© ISO 2018 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 15141:2018(E)
5 Reagents

During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and only

distilled water or water of grade 1 in accordance with ISO 3696. Solvents shall be of quality for HPLC

analysis.
5.1 Acetonitrile.
5.2 Methanol.
5.3 Sodium chloride (NaCl).
5.4 Glacial acetic acid, φ(CH COOH) ≥ 98 %.
5.5 Tween-20.
5.6 Sodium bicarbonate (NaHCO ).
5.7 Disodium hydrogen phosphate (Na HPO ).
2 4
5.8 Potassium dihydrogen phosphate (KH PO ).
2 4
5.9 Potassium chloride (KCl).
5.10 Hydrochloric acid, c(HCl) = 12 mol/l.
5.11 Ochratoxin A, in crystal form or as a film in ampoules.

5.12 Extraction solvent, mix 60 volume parts of acetonitrile (5.1) and 40 volume parts of water.

5.13 Phosphate buffered saline (PBS), dissolve 8 g NaCl (5.3), 1,2 g Na HPO (5.7), 0,2 g KH PO (5.8)

2 4 2 4

and 0,2 g KCl (5.9) in about 990 ml water. Adjust pH to 7 with HCl (5.10) and dilute to 1 l with water.

5.14 Washing solution, dissolve 25 g NaCl (5.3), 5 g NaHCO (5.6) and 0,1 ml Tween-20 (5.5) in 1 l water.

5.15 Mobile phase, mix 48 volume parts of acetonitrile (5.1) with 51 volume parts of water and 1

volume parts of glacial acetic acid (5.4) and degas this solution before use.
5.16 Toluene.

5.17 Solvent mixture, mix 99 volume parts of toluene (5.16) with 1 volume parts of glacial acetic

acid (5.4).
5.18 Ochratoxin A stock solution.

Dissolve 1 mg of the ochratoxin A (crystals) (5.11) or the contents of 1 ampoule (if ochratoxin A has

been obtained as a film) (5.11) in solvent mixture (5.17) to give a solution containing approximately

20 μg/ml to 30 μg/ml of ochratoxin A.

To determine the exact concentration, record the absorption curve between a wavelength of 300 nm

and 370 nm in 5 nm steps in a 1 cm quartz cell (6.12) with solvent mixture (5.17) as reference. Identify

the wavelength for maximum absorption by recording in 1 nm steps around the maximum as reference.

2 © ISO 2018 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 15141:2018(E)

Calculate the mass concentration of ochratoxin A, ρ , in micrograms per millilitre of solution using

OTA
Formula (1):
M×100
ρ =×A (1)
OTAmax
κδ×
where
A is the absorption determined at the maximum of the absorption curve
max
(here: at 333 nm);
M is the relative molecular mass of ochratoxin A (M = 403 g/mol);
κ is the molar absorption coefficient of ochratoxin A, in solvent mixture
(here: 544 m /mol);
δ is the path length of the cell in centimetres.

Store this solution at approximately −18 °C. A solution stored in this way is usually stable for 12 months.

Check the concentration of the solution if it is older than 6 months.
5.19 Ochratoxin A standard solution, ρ = 1 μg/ml.
OTA

Evaporate under a nitrogen flow 1 ml of the stock solution (5.18) or the aliquot portion which is

equivalent to an absolute amount of 100 μg of ochratoxin A to dryness and dilute to 100 ml with the

mobile phase (5.15).

This solution can be stored in a refrigerator at 4 °C. Stability shall be checked.

5.20 Ochratoxin A calibration solutions.

Pipette suitable volumes of ochratoxin A standard solution (5.19), e.g. 0,05 ml, 0,1 ml, 0,25 ml, 0,5 ml

and 1 ml into, for example, a 100 ml volumetric flask (6.15) and dilute to the mark with the mobile

phase (5.15). The amount of ochratoxin A in the calibration solutions should cover the range of 0,05 ng

to 1,0 ng per 100 μl injection volume. The calibration solutions should be freshly prepared from

ochratoxin A standard solution (5.19) before each HPLC analysis.
5.21 Sodium hypochlorite solution, ρ(NaOCl) = 4 g/100 ml.
5.22 Boron trifluoride.
5.23 Boron trifluoride in methanol solution, ρ(BF ) = 14 g/100 ml.
5.24 Dichloromethane.
5.25 Sodium sulfate, anhydrous.

5.26 Elution solvent, mix 98 volume parts of methanol (5.2) and 2 volume parts of glacial acetic

acid (5.4).

WARNING — Use a well maintained fume hood. Avoid contact with skin, eyes, and respiratory tract.

6 Apparatus and equipment
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, accurate to 10 mg.
© ISO 2018 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 15141:2018(E)
6.2 Blender, 1 l jar and cover, explosion-proof.
6.3 Filter paper,
a) folded filter paper, or
b) glass microfibre filter.
6.4 Centrifuge tube, 50 ml.

6.5 Membrane filter for aqueous solutions, made of polytetrafluoroethylene (PTFE), with a diameter

of 25 mm and a pore size of 0,2 μm.
6.6 Immunoaffinity column, which shall contain antibodies ra
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15141
Première édition
2018-07
Céréales et produits céréaliers —
Dosage de l'ochratoxine A — Méthode
par chromatographie en phase liquide
à haute performance avec purification
sur colonne d'immunoaffinité et
détection par fluorescence
Cereals and cereal products — Determination of ochratoxin A — High
performance liquid chromatographic method with immunoaffinity
column cleanup and fluorescence detection
Numéro de référence
ISO 15141:2018(F)
ISO 2018
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 15141:2018(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2018

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 15141:2018(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 1

5 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 2

6 Appareillage et équipement ..................................................................................................................................................................... 4

7 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 5

7.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 5

7.2 Échantillonnage ...................................................................................................................................................................................... 5

7.3 Préparation des échantillons pour essai .......................................................................................................................... 5

7.4 Extraction de l'ochratoxine A de l'échantillon ............................................................................................................. 5

7.4.1 Extraction ............................................................................................................................................................................... 5

7.4.2 Dilution..................................................................................................................................................................................... 5

7.5 Purification sur colonne d’immunoaffinité .................................................................................................................... 5

7.6 Conditions de fonctionnement de la CLHP ..................................................................................................................... 6

7.7 Courbe d’étalonnage .......................................................................................................................................................................... 6

7.8 Identification ............................................................................................................................................................................................ 6

7.9 Détermination ......................................................................................................................................................................................... 6

7.10 Confirmation ............................................................................................................................................................................................. 7

8 Calculs .............................................................................................................................................................................................................................. 7

9 Fidélité ............................................................................................................................................................................................................................ 8

9.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 8

9.2 Répétabilité ................................................................................................................................................................................................ 8

9.3 Reproductibilité ..................................................................................................................................................................................... 8

10 Rapport d'essai ...................................................................................................................................................................................................... 8

Annexe A (informative) Résultats des essais interlaboratoires ............................................................................................... 9

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................12

© ISO 2018 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 15141:2018(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos .html.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, Sous-

comité SC 4, Céréales et légumineuses.

Cette première édition annule et remplace l'ISO 15141-1:1998 et l'ISO 15141-2:1998 qui ont fait l’objet

d'une révision technique.

Le principal changement par rapport à l’édition précédente réside dans le fait que le principe de

l’extraction et de la purification a été modifié.
iv © ISO 2018 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 15141:2018(F)
Céréales et produits céréaliers — Dosage de l'ochratoxine
A — Méthode par chromatographie en phase liquide
à haute performance avec purification sur colonne
d'immunoaffinité et détection par fluorescence
1 Domaine d’application

Le présent document expose en détail une méthode par chromatographie liquide à haute performance

avec purification sur colonne d’immunoaffinité pour le dosage de l’ochratoxine A dans les céréales et les

produits céréaliers.

Le seuil de quantification est de 0,2 μg/kg. La limite de la méthode de détection dépend de la matrice de

l’échantillon ainsi que de l’instrument.
2 Références normatives

Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des

exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai

3 Termes et définitions
Aucun terme n'est défini dans le présent document.

L'ISO et l'IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l'adresse http: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l'adresse http: //www .electropedia .org/
4 Principe

L'ochratoxine A (OTA) est extraite par un mélange acétonitrile/eau. L'extrait est purifié en utilisant

une colonne d’immunoaffinité, et l'ochratoxine A est déterminée par chromatographie liquide à haute

performance sur colonne en phase inverse, avec détection par fluorescence. Le résultat peut être vérifié,

si nécessaire, par dérivation avec du trifluorure de bore en solution dans du méthanol.

AVERTISSEMENT — L'ochratoxine A provoque des lésions au niveau des reins et du foie, et elle

[1]

est probablement cancérigène. Il est nécessaire de respecter les précautions de sécurité lors

des manipulations de ce produit et d’éviter notamment toute manipulation du produit sous

forme déshydratée du fait de sa nature électrostatique qui peut occasionner une dispersion

et une inhalation. Il est possible de décontaminer la verrerie avec une solution d'hypochlorite

de sodium à 4 %. L’attention du lecteur est attirée sur la déclaration formulée par l'Agence

[2][3]
Internationale de Recherche sur le Cancer (OMS) .
© ISO 2018 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 15141:2018(F)
5 Réactifs

Au cours de cette analyse et sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité

analytique reconnue et de l'eau distillée de qualité 1, conformément à l'ISO 3696. Les solvants doivent

être de qualité pour analyse CLHP.
5.1 Acétonitrile.
5.2 Méthanol.
5.3 Chlorure de sodium (NaCI).
5.4 Acide acétique glacial, φ(CH3COOH) ≥ 98 %.
5.5 Tween 20.
5.6 Bicarbonate de sodium (NaHCO ).
5.7 Hydrogénophosphate de sodium (Na HPO ).
2 4
5.8 Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ).
2 4
5.9 Chlorure de potassium (KCI).
5.10 Acide chlorhydrique, c(HCl) =12 mol/l.
5.11 Ochratoxine A, sous forme de cristaux ou de film en ampoule.

5.12 Solvant d'extraction, mélanger 60 volumes d’acétonitrile (5.1) et 40 volumes d’eau.

5.13 Tampon phosphate salin (tampon PBS), dissoudre 8 g de NaCl (5.3), 1,2 g de Na HPO (5.7),

2 4

0,2 g de KH PO (5.8) et 0,2 g de KCl (5.9) dans environ 990 ml d’eau. Ajuster le pH à 7 avec du HCI (5.10)

2 4
et compléter à 1 l avec de l'eau.

5.14 Solution de lavage, dissoudre 25 g de NaCl (5.3), 5 g de NaHCO (5.6) et 0,1 ml de Tween 20 (5.5)

dans 1 l d’eau.

5.15 Phase mobile, mélanger 48 volumes d’acétonitrile (5.1), 51 volumes d’eau et 1 volume d’acide

acétique glacial (5.4). Dégazer cette solution avant utilisation.
5.16 Toluène.

5.17 Mélange de solvants, mélanger 99 volumes de toluène (5.16) avec 1 volume d'acide acétique

glacial (5.4).
5.18 Solution-mère d'ochratoxine A

Dissoudre 1 mg d'ochratoxine A (cristaux) (5.11) ou le contenu d’une ampoule (si l’ochratoxine A est

sous forme de film) (5.11) dans le mélange de solvants (5.17) pour obtenir une solution contenant

environ 20 μg/ml à 30 μg/ml d’ochratoxine A.

Pour déterminer la concentration exacte, enregistrer la courbe d’absorption entre une longueur d’onde

de 300 nm et 370 nm par pas de 5 nm dans une cuve en quartz de 1 cm (6.12) avec le mélange de

2 © ISO 2018 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 15141:2018(F)

solvants (5.17), comme référence. Identifier la longueur d'onde de l'absorption maximale en effectuant

un enregistrement par palier de 1 nm autour du maximum comme référence. Calculer la concentration

massique d’ochratoxine A, ρ , exprimée en microgrammes par millilitre de solution, à l'aide de la

OTA
Formule (1):
M×100
ρ =×A (1)
OTAmax
K×δ

A est l'absorbance déterminée au maximum de la courbe d'absorption (ici: à 333 nm);

max
M est la masse moléculaire relative de l'ochratoxine A (M = 403 g/mol);

κ est le coefficient d'absorption moléculaire de l'ochratoxine A, dans le mélange de solvants

(ici: 544 m /mol);
δ est la longueur du trajet optique de la cellule, en centimètres.

Stocker cette solution à une température d’environ -18 °C. Une solution stockée dans ces conditions

peut généralement rester stable pendant 12 mois. Contrôler la concentration de la solution si celle-ci

date de plus de 6 mois.
5.19 Solution étalon d’ochratoxine A, ρ =1 μg/ml.
OTA

Évaporer jusqu’à siccité sous courant d'azote 1 ml de la solution-mère (5.18) ou la portion aliquote qui

est équivalente à 100 μg d'ochratoxine A en valeur absolue, puis diluer jusqu’à 100 ml avec la phase

mobile (5.15).

Cette solution peut être stockée dans un réfrigérateur à 4 °C. La stabilité doit être vérifiée.

5.20 Solutions d'étalonnage d'ochratoxine A

Pipeter des volumes adéquats de la solution étalon d’ochratoxine A (5.19), par exemple 0,05 ml, 0,1 ml,

0,25 ml, 0,5 ml et 1 ml dans une fiole jaugée de 100 ml par exemple (6.15), et diluer en complétant

jusqu'au trait de jauge avec de la phase mobile (5.15). Il convient que la teneur en ochratoxine A des

solutions d'étalonnage couvre la gamme de 0,05 ng à 1,0 ng pour 100 µl de volume d'injection. Il est

recommandé de préparer les solutions d’étalonnage extemporanément à partir de la solution étalon

d’ochratoxine A (5.19) avant chaque analyse CLHP.
5.21 Solution d'hypochlorite de sodium, ρ(NaOCl) = 4 g/100 ml.
5.22 Trifluorure de bore.
5.23 Trifluorure de bore en solution dans le méthanol, ρ(BF ) = 14 g/100 ml.
5.24 Dichlorométhane
5.25 Sulfate de sodium, anhydre.

5.26 Solvant d'élution, mélanger 98 volumes de méthanol (5.2) et 2 volumes d’acide acétique

glacial (5.4).

AVERTISSEMENT — Utiliser une hotte d'extraction en bon état de fonctionnement. Éviter le

contact avec la peau, les yeux et les voies respiratoires.
© ISO 2018 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 15141:2018(F)
6 Appareillage et équipement
Appareillage courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit:
6.1 Balance analytique, d’une précision de 10 mg.
6.2 Mixeur, avec un bol de 1 l et un couvercle, antidéflagrant.
6.3 Papier filtre,
a) Papier filtre plissé, ou
b) Filtre en microfibres de verre.
6.4 Tube à centrifuger, de 50 ml.

6.5 Filtre à membrane pour solutions aqueuses, en polytétrafluoroéthylène (PTFE), de 25 mm de

diamètre et de 0,2 µm de porosité.

6.6 Colonne d’immunoaffinité, qui doit contenir des anticorps dirigés contre l’ochratoxine A,

ToxinFast colonne d’immunoaffinité d’ochratoxine A (Huaan Magnech) ou l'équivalent.

6.7 Seringue en verre, de 10 ml.
6.8 Pompe à vide.

6.9 Évaporateur rotatif, avec bain-marie, pouvant être régulé entre 20 °C et 50 °C.

6.10 Broyeur de laboratoire, prévu pour broyer jusqu'à 1 mm.

6.11 Spectromètre UV, pouvant effectuer des mesurages dans les longueurs d'onde comprises entre

300 nm et 370 nm, d'une largeur de bande spectrale ne dépassant pas ± 2 nm.

6.12 Cuves en quartz, d'une longueur de trajet optique de 1 cm et sans absorption significative entre

les longue
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.