Infant formula and adult nutritionals -- Determination of vitamin C by (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)

This document specifies a method for the determination of vitamin C (L-ascorbic acid) present in all forms of infant and adult formulas (powders, ready-to-feed liquids and liquid concentrates), using (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (U)HPLC-UV. The application range runs from 2,5 mg/100 g (limit of quantification) to 50 mg/100 g expressed in the product as consumed. The method is able to distinguish between D-ascorbic acid (isoascorbic- or erythorbic acid) and L-ascorbic acid.

Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes -- Détermination de la teneur en vitamine C par chromatographie liquide à (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet ((CL(U)HP-UV)

Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en vitamine C (acide L‑ascorbique) dans toutes les formes de formules infantiles et pour adultes (poudres, liquides pręts ŕ consommer et concentrés liquides), par chromatographie en phase liquide ŕ (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet CL(U)HP-UV. Le domaine d'application de la méthode est compris entre 2,5 mg/100 g (limite de quantification) et 50 mg/100 g dans le produit tel qu'il est consommé. La méthode fait la distinction entre l'acide D-ascorbique (acide isoascorbique ou acide érythorbique) et l'acide L-ascorbique.

General Information

Status
Published
Publication Date
01-Jul-2018
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
19-Jun-2018
Completion Date
02-Jul-2018
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ISO 20635:2018 - Infant formula and adult nutritionals -- Determination of vitamin C by (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)
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ISO 20635:2018 - Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes -- Détermination de la teneur en vitamine C par chromatographie liquide a (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet ((CL(U)HP-UV)
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20635
First edition
2018-07
Infant formula and adult
nutritionals — Determination of
vitamin C by (ultra) high performance
liquid chromatography with
ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en vitamine C par chromatographie
liquide à (ultra) haute performance avec détection dans l'ultraviolet
((CL(U)HP-UV)
Reference number
ISO 20635:2018(E)
ISO 2018
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 20635:2018(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2018

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

below or ISO’s member body in the country of the requester.
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 20635:2018(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 1

5 Reagents and materials ................................................................................................................................................................................. 2

5.1 Reagents and standards .................................................................................................................................................................. 2

5.2 Preparation of solutions ................................................................................................................................................................. 2

6 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 3

7 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 4

7.1 Sample preparation ............................................................................................................................................................................ 4

7.1.1 General...................................................................................................................................................................................... 4

7.1.2 Powder samples ............................................................................................................................................................... 4

7.1.3 Liquid samples ................................................................................................................................................................... 4

7.2 Extraction .................................................................................................................................................................................................... 4

7.3 Analysis.......................................................................................................................................................................................................... 5

7.3.1 Chromatographic conditions for UHPLC ..................................................................................................... 5

7.3.2 Chromatographic conditions for HPLC ......................................................................................................... 5

7.3.3 System suitability test ................................................................................................................................................. 5

7.3.4 Calibration ............................................................................................................................................................................. 5

7.3.5 Analysis .................................................................................................................................................................................... 6

7.3.6 Identification ....................................................................................................................................................................... 6

8 Calculations................................................................................................................................................................................................................ 6

9 Precision ....................................................................................................................................................................................................................... 6

9.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 6

9.2 Repeatability ............................................................................................................................................................................................. 6

9.3 Reproducibility ....................................................................................................................................................................................... 7

Annex A (informative) Typical chromatograms ........................................................................................................................................ 9

Annex B (informative) Precision data ..............................................................................................................................................................12

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................13

© ISO 2018 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 20635:2018(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso

.org/iso/foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, in collaboration

with AOAC INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL.

The method described in this document is equivalent to the AOAC Official Method 2012.22: Vitamin

C in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula, Ultra-Performance Liquid Chromatography

(UPLC) with Ultraviolet Detection.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20635:2018(E)
Infant formula and adult nutritionals — Determination
of vitamin C by (ultra) high performance liquid
chromatography with ultraviolet detection ((U)HPLC-UV)
1 Scope

This document specifies a method for the determination of vitamin C (L-ascorbic acid) present in all

forms of infant and adult formulas (powders, ready-to-feed liquids and liquid concentrates), using

(ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (U)HPLC-UV. The application

range runs from 2,5 mg/100 g (limit of quantification) to 50 mg/100 g expressed in the product as

consumed. The method is able to distinguish between D-ascorbic acid (isoascorbic- or erythorbic acid)

and L-ascorbic acid.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
adult nutritional

nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the

sole source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein,

starch and amino acids, with and without intact protein
3.2
infant formula

breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of

infants during the first months of life up to the introduction of appropriate complementary feeding

[SOURCE: CODEX STAN 72-1981]
4 Principle

Ascorbic acid is extracted from the sample using trichloroacetic acid (TCA) in the presence of tris

[2-carboxyethyl]phosphine (TCEP) as a reducing agent and to protect ascorbic acid from oxidation.

Ascorbic acid is then determined by Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC) or High

Performance Liquid Chromatography (HPLC) with UV detection at 265 nm. Separation takes place

on a C column using decylamine as ion-pairing agent in a sodium acetate buffer solution (pH = 5,4)

containing TCEP.
© ISO 2018 – All rights reserved 1
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ISO 20635:2018(E)
5 Reagents and materials

During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and

distilled or demineralized water or water of equivalent purity.

SAFETY PRECAUTIONS — Refer to material safety data sheets prior to use of chemicals. Use

appropriate personal protective equipment when performing testing.
5.1 Reagents and standards
5.1.1 Acetonitrile, HPLC grade.
5.1.2 Ascorbic acid, purity > 99 %.
5.1.3 Decylamine.
5.1.4 Phosphoric acid, 85 %.
5.1.5 Ultra pure water, resistivity > 18 MΩ/cm.
5.1.6 Sodium acetate trihydrate.
5.1.7 Trichloroacetic acid (TCA).
5.1.8 Tris [2-carboxyethyl]phosphine (TCEP).
5.1.9 Isoascorbic acid.
5.1.10 Orotic acid.
5.2 Preparation of solutions

IMPORTANT — Vitamin C is sensitive to light and oxygen. Conduct operations under subdued

light, or use amber glassware. Keep all solutions away from direct light.

5.2.1 Sodium acetate solution, substance concentration c = 0,500 mol/l (pH = 5,4).

Into a 500 ml volumetric flask, weigh 34,0 g of sodium acetate trihydrate (5.1.6), add about 400 ml of

water and dissolve well. Adjust pH to 5,4 with phosphoric acid 85 % (5.1.4) and make up to volume

with water.
5.2.2 TCA solution, 15 %.

Into a 500 ml volumetric flask, weigh 75,0 g of TCA (5.1.7), dissolve and make up to volume with water.

5.2.3 TCEP solution, mass concentration ρ = 250 µg/ml.

Into a 500 ml volumetric flask, weigh 125 mg of TCEP (5.1.8), dissolve and make up to volume with water.

2 © ISO 2018 – All rights reserved
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ISO 20635:2018(E)
5.2.4 Mobile phase for UHPLC.

Into a 250 ml flask, mix 0,4 g of decylamine (5.1.3), 2,5 ml of acetonitrile (5.1.1), 25 ml of sodium acetate

solution (5.2.1) and 205 ml of water. Do not make up to volume. Adjust pH to pH = 5,4 with phosphoric

acid 85 % (5.1.4). Add 10 mg of TCEP (5.1.8).

NOTE Mobile phases are hazy during preparation, but they become clear after pH adjustment.

5.2.5 Mobile phase for HPLC.

Into a 1 000 ml flask, mix 1,6 g of decylamine (5.1.3), 80 ml of acetonitrile (5.1.1), 100 ml of sodium

acetate solution (5.2.1) and 820 ml of water. Do not make up to volume. Adjust pH to pH = 5,4 with

phosphoric acid 85 % (5.1.4). Add 50 mg of TCEP (5.1.8).
5.2.6 Ascorbic acid stock solution, ρ = 500 µg/ml.

Into a 25 ml amber glass volumetric flask (6.2), weigh 12,5 mg of ascorbic acid (5.1.2). Dissolve and

make up to volume with TCEP solution (5.2.3). This solution can be kept for 3 months if stored at 4 °C

away from light.
5.2.7 Ascorbic acid intermediate standard solution, ρ = 50 µg/ml.
Into a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20635
Première édition
2018-07
Formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en
vitamine C par chromatographie
liquide à (ultra) haute performance
avec détection dans l'ultraviolet
((CL(U)HP-UV)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of vitamin C
by (ultra) high performance liquid chromatography with ultraviolet
detection ((U)HPLC-UV)
Numéro de référence
ISO 20635:2018(F)
ISO 2018
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ISO 20635:2018(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2018

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés
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ISO 20635:2018(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

1 Domaine d'application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 1

5 Réactifs et matériel ............................................................................................................................................................................................ 2

5.1 Réactifs et étalons ................................................................................................................................................................................. 2

5.2 Préparation des solutions .............................................................................................................................................................. 2

6 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 3

7 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 4

7.1 Préparation des échantillons ...................................................................................................................................................... 4

7.1.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 4

7.1.2 Échantillons de poudre .............................................................................................................................................. 4

7.1.3 Échantillons liquides .................................................................................................................................................... 4

7.2 Extraction .................................................................................................................................................................................................... 4

7.3 Analyse ........................................................................................................................................................................................................... 5

7.3.1 Conditions chromatographiques pour CLUHP ....................................................................................... 5

7.3.2 Conditions chromatographiques de CLHP................................................................................................. 5

7.3.3 Test d'adéquation du système analytique .................................................................................................. 5

7.3.4 Étalonnage ............................................................................................................................................................................. 5

7.3.5 Analyse ..................................................................................................................................................................................... 6

7.3.6 Identification ....................................................................................................................................................................... 6

8 Calculs .............................................................................................................................................................................................................................. 6

9 Fidélité ............................................................................................................................................................................................................................ 6

9.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 6

9.2 Répétabilité ................................................................................................................................................................................................ 7

9.3 Reproductibilité ..................................................................................................................................................................................... 8

Annex A (informative) Chromatogrammes types .................................................................................................................................... 9

Annex B (informative) Données de fidélité .................................................................................................................................................12

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................13

© ISO 2018 – Tous droits réservés iii
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ISO 20635:2018(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34 Produits alimentaires,

en collaboration avec AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l'ISO et séparément par AOAC

INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la Méthode officielle

AOAC 2012.22: Vitamin C in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula, Ultra-Performance

Liquid Chromatography (UPLC) with Ultraviolet Detection.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2018 – Tous droits réservés
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NORME INTERNATIONALE ISO 20635:2018(F)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en vitamine C par
chromatographie liquide à (ultra) haute performance avec
détection dans l'ultraviolet ((CL(U)HP-UV)
1 Domaine d'application

Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en vitamine C (acide

L-ascorbique) dans toutes les formes de formules infantiles et pour adultes (poudres, liquides prêts à

consommer et concentrés liquides), par chromatographie en phase liquide à (ultra) haute performance

avec détection dans l'ultraviolet CL(U)HP-UV. Le domaine d'application de la méthode est compris

entre 2,5 mg/100 g (limite de quantification) et 50 mg/100 g dans le produit tel qu'il est consommé.

La méthode fait la distinction entre l'acide D-ascorbique (acide isoascorbique ou acide érythorbique) et

l'acide L-ascorbique.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
3.1
produit nutritionnel pour adultes

aliment complet sur le plan nutritionnel, spécialement formulé, consommé sous forme liquide, pouvant

constituer la seule source d’alimentation, constitué de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,

lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte

3.2
formule infantile

substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire à lui seul les besoins nutritionnels

des nourrissons pendant les premiers mois de leur vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation

complémentaire appropriée

[SOURCE: CODEX STAN 72-1981, modifié – Le terme de la source est devenu “formule infantile”.]

4 Principe

Extraction de l'acide ascorbique contenu dans l'échantillon au moyen d'acide trichloroacétique (TCA)

en présence de tris [2-carboxyéthyl]phosphine (TCEP) comme agent réducteur et pour protéger l'acide

D-ascorbique de l'oxydation. L'acide ascorbique est ensuite dosé par chromatographie en phase liquide

à ultra haute performance (CLUHP) ou par chromatographie en phase liquide à haute performance

(CLHP) avec détection dans l’ultraviolet à 265 nm. La séparation se produit sur une colonne C en

© ISO 2018 – Tous droits réservés 1
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ISO 20635:2018(F)

utilisant de la décylamine comme agent d'appariement d'ions, dans une solution tampon d'acétate de

sodium (pH = 5,4) contenant du TCEP.
5 Réactifs et matériel

Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique

reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.

PRÉCAUTIONS DE SÉCURITÉ — Se référer aux fiches techniques de sécurité relatives aux

matériaux avant de faire usage des produits chimiques. Utiliser les équipements de protection

individuelle appropriés lors des essais.
5.1 Réactifs et étalons
5.1.1 Acétonitrile, de qualité CLHP.
5.1.2 Acide ascorbique, de pureté > 99 %.
5.1.3 Décylamine.
5.1.4 Acide phosphorique, à 85 %.
5.1.5 Eau ultra-pure, ayant une résistivité > 18 MΩ/cm.
5.1.6 Acétate de sodium trihydraté.
5.1.7 Acide trichloroacétique (TCA).
5.1.8 Tris [2-carboxyéthyl]phosphine (TCEP).
5.1.9 Acide isoascorbique.
5.1.10 Acide orotique.
5.2 Préparation des solutions

IMPORTANT — La vitamine C est sensible à la lumière et à l'oxygène. Effectuer les différentes

opérations sous éclairage atténué ou utiliser de la verrerie ambrée. Tenir toutes les solutions à

l'abri de la lumière directe.
5.2.1 Solution d'acétate de sodium, concentration c = 0,500 mol/l (pH = 5,4)

Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 34,0 g d'acétate de sodium trihydraté (5.1.6), ajouter environ

400 ml d'eau et homogénéiser. Ajuster le pH à 5,4 avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4) et

compléter au volume avec de l'eau.
5.2.2 Solution de TCA , à 15 %.

Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 75,0 g de TCA (5.1.7), dissoudre et compléter au volume avec

de l'eau.
2 © ISO 2018 – Tous droits réservés
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ISO 20635:2018(F)
5.2.3 Solution de TCEP, concentration massique ρ = 250 µg/ml.

Dans une fiole jaugée de 500 ml, peser 125 mg de TCEP (5.1.8), dissoudre et compléter au volume avec

de l'eau.
5.2.4 Phase mobile pour CLUHP.

Dans un récipient de 250 ml, mélanger 0,4 g de décylamine (5.1.3), 2,5 ml d'acétonitrile (5.1.1), 25 ml de

la solution d'acétate de sodium (5.2.1) et 205 ml d'eau. Ne pas compléter au volume. Ajuster le pH à 5,4

avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4). Ajouter 10 mg de TCEP (5.1.8).

NOTE Les phases mobiles sont troubles pendant la préparation mais elles deviennent limpides après

l'ajustement du pH.
5.2.5 Phase mobile pour CLHP.

Dans un récipient de 1000 ml, mélanger 1,6 g de décylamine (5.1.3), 80 ml d'acétonitrile (5.1.1), 100 ml

de la solution d'acétate de sodium (5.2.1) et 820 ml d'eau. Ne pas compléter au volume. Ajuster le pH à

5,4 avec de l'acide phosphorique à 85 % (5.1.4). Ajouter 50 mg de TCEP (5.1.8).
5.2.6 Solution mère d'acide ascorbique, ρ = 500 µg/ml.

Dans une fiole jaugée (6.2) en verre ambré de 25 ml, peser 12,5 mg d'acide ascorbique (5.1.2). Dissoudre

et compléter au volume avec la solution de TCEP (5.2.3). Cette solution peut être conservée pendant 3

mois si elle est stockée à 4 °C à l'abri de la lumière.
5.2.7 Solution étalon intermédiaire d'acide ascorbique, ρ = 50 µg/ml.

Dans une fiole jaugée (6.2) en verre ambré de 10 ml, introduire à la pipette 1 ml de solution mère (5.2.6).

Compléter au volume avec la solution de TCEP (5.2.3). Cette solution peut être utilisée pendant 1 mois si

elle est stockée à 4 °C à l'abri de la lumière.

5.2.8 Solutions étalons d'acide ascorbique pour étalonnage, ρ = 0,5 µg/ml, ρ = 1,0 µg/ml,

ρ = 2,0 µg/ml, ρ = 3,0 µg/ml, ρ = 5,0 µg/ml, ρ = 7,5 µg/ml et ρ = 10 µg/ml.

Dans des fioles jaugées (6.2) en verre ambré de 10 ml, introduire à la pipette 0,1 ml, 0,2 ml, 0,4 ml,

0,6 ml, 1,0 ml
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.