ISO 6647-2:2020

Rice — Determination of amylose content — Part 2: Spectrophotometric routine method without defatting procedure and with calibration from rice standards

This document specifies two simplified routine methods for the determination of the amylose mass fraction of milled rice, non-parboiled. The main difference between the two methods is the dispersion procedure: method A specifies hot dispersion, and method B specifies cold dispersion. Both methods are applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %. NOTE These methods describe simplified procedures for the preparation of samples, which are frequently used in routine laboratories. The methods use the same reagents as the reference method (see ISO 6647-1), but omit the defatting step. Rice samples where the amylose mass fraction has been determined by the reference method are used as standards.

Riz — Détermination de la teneur en amylose — Partie 2: Méthode spectrophotométrique de routine sans mode opératoire de dégraissage et avec étalonnage à l'aide d'étalons de riz

Le présent document spécifie deux méthodes de routine simplifiées pour la détermination de la fraction massique d'amylose du riz usiné, non étuvé. La principale différence entre les deux méthodes est le mode opératoire de dispersion: la méthode A spécifie une dispersion à chaud et la méthode B spécifie une dispersion à froid. Les deux méthodes sont applicables au riz avec une fraction massique d'amylose supérieure à 5 %. NOTE Ces méthodes décrivent des modes opératoires simplifiés pour la préparation d'échantillons, qui sont fréquemment utilisés en routine par les laboratoires. Les méthodes utilisent les mêmes réactifs que la méthode de référence (voir l'ISO 6647-1), mais omettent l'étape de dégraissage. Les échantillons de riz pour lesquels la fraction massique d'amylose a été déterminée par la méthode de référence sont utilisés comme étalons.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 13-Jul-2020
• ICS: 67.060 - Cereals, pulses and derived products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 4 - Cereals and pulses
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 4/WG 4 - Amylose in rice
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 14-Jul-2020
• Due Date: 31-Jul-2020
• Completion Date: 14-Jul-2020

Relations

• Consolidates: ISO 12122-3:2016 - Timber structures — Determination of characteristic values — Part 3: Glued laminated timber
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 6647-2:2015 - Rice — Determination of amylose content — Part 2: Routine methods
• Effective Date: 06-May-2017

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6647-2
Third edition
2020-07
Rice — Determination of amylose
content —
Part 2:
Spectrophotometric routine method
without defatting procedure and with
calibration from rice standards
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 2: Méthode spectrophotométrique de routine sans mode
opératoire de dégraissage et avec étalonnage à l'aide d'étalons de riz
Reference number
ISO 6647-2:2020(E)
©
ISO 2020

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ISO 6647-2:2020(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved

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ISO 6647-2:2020(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Procedure. 3
8.1 Determination of moisture . 3
8.2 Preparation of test sample . 3
8.3 Test portion and preparation of the test solution . 3
8.4 Preparation of the blank solution . 3
8.5 Preparation of the calibration graph . 4
8.5.1 Preparation of the set of calibration solutions . 4
8.5.2 Colour development and spectrophotometric measurements . 4
8.5.3 Plotting the calibration graph . 4
8.6 Determination . 4
9 Expression of results . 4
10 Precision . 5
10.1 Interlaboratory test. 5
10.2 Repeatability . 5
10.3 Reproducibility . 5
11 Test report . 6
Annex A (informative) Results of an interlaboratory test for the routine method .7
Bibliography .11
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ISO 6647-2:2020(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4,
Cereals and pulses, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 338, Cereal and cereal products, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 6647-2:2015), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows.
— The set of calibration solutions in ISO 6647-2:2015 were made by rice samples analysed by size
exclusion chromatography. In this document, the set of calibration solutions are made by rice
samples analysed by spectrophotometer UV-VIS, without delipidization.
A list of all parts in the ISO 6647 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6647-2:2020(E)
Rice — Determination of amylose content —
Part 2:
Spectrophotometric routine method without defatting
procedure and with calibration from rice standards
1 Scope
This document specifies two simplified routine methods for the determination of the amylose mass
fraction of milled rice, non-parboiled. The main difference between the two methods is the dispersion
procedure: method A specifies hot dispersion, and method B specifies cold dispersion.
Both methods are applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %.
NOTE These methods describe simplified procedures for the preparation of samples, which are frequently
used in routine laboratories. The methods use the same reagents as the reference method (see ISO 6647-1), but
omit the defatting step. Rice samples where the amylose mass fraction has been determined by the reference
method are used as standards.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 712, Cereals and cereal products — Determination of moisture content — Reference method
ISO 6647-1:2020, Rice — Determination of Amylose content — Reference method — Part 1:
Spectrophotometric method with a defatting procedure by methanol and with calibration solutions of potato
amylose and waxy rice amylopectin
ISO 7301, Rice — Specification
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 6647-1 and ISO 7301 apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Principle
Rice is ground to a very fine flour to break up the endosperm structure in order to aid complete
dispersion and gelatinization. A test portion is dispersed in a sodium hydroxide solution. An aliquot
portion is taken to which is added an iodine solution. The absorbance, at 720 nm, of the colour complex
formed is then determined using a spectrophotometer.
© ISO 2020 – All rights reserved 1

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ISO 6647-2:2020(E)

Measurement wavelengths of 620 nm or 680 nm can also be used.
The amylose mass fraction of the sample is then read from a calibration graph, which is prepared by using
rice samples of known amylose mass fraction, determined using the reference method specified above.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Ethanol, a volume fraction of 95 %.
5.2 Sodium hydroxide:
a) 1 mol/l solution, for method A.
b) 2 mol/l solution, for method B.
5.3 Sodium hydroxide for blank solution:
a) 0,09 mol/l solution, for method A.
b) 0,18 mol/l solution, for method B.
5.4 Acetic acid, 1 mol/l solution.
5.5 Iodine solution.
Weigh (6.8), to the nearest 5 mg, 2,000 g of potassium iodide in a weighing bottle fitted with a stopper.
Add sufficient water to form a saturated solution. Add 0,200 g of iodine, weighed to the nearest 1 mg.
When all the iodine has dissolved, transfer the solution quantitatively to a 100 ml volumetric flask (6.4),
make up to volume with water and mix.
Prepare a fresh solution on each day of use and protect it from light.
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Grinder, capable of reducing uncooked milled rice to flour that will pass through a 150 µm to
180 µm (100 mesh to 80 mesh) sieve. A cyclone mill with 0,5 mm screen is recommended.
6.2 Sieve, size 150 µm to 180 µm (100 mesh to 80 mesh).
6.3 Spectrophotometer, with matching cells, usually of path length 1 cm, capable of measuring
absorbance at 720 nm (or 620 nm or 680 nm).
6.4 Volumetric flasks, 100 ml.
6.5 Boiling water bath, for method A only
6.6 Magnetic stirrer, capable of stirring at 950 r/min to 1 000 r/min, for method B only.
6.7 Conical flasks, 100 ml.
2 © ISO 2020 – All rights reserved

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6.8 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,000 1 g.
6.9 Pipettes, of capacity 1 ml, 2 ml, 5 ml and 10 ml.
7 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this document. A recommended sampling method is
given in ISO 24333.
8 Procedure
8.1 Determination of moisture
On a separate portion of the laboratory sample and the standard samples, carry out a moisture
determination in accordance with ISO 712.
8.2 Preparation of test sample
In the grinder (6.1), grind at least 4 g of milled rice that will pass through the sieve (6.2).
8.3 Test portion and preparation of the test solution
8.3.1 Weigh (6.8) 100 mg ± 0,5 mg of the test sample (see 8.2) into a 100 ml conical flask (6.7). To this
test portion, carefully add 1 ml of ethanol (5.1) using a pipette, washing down any of the test portion
adhering to the side of the flask. Shake slightly in order to wet the entire sample.
8.3.2 Method A
Pipette (6.9)
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 6647-2
Troisième édition
2020-07
Riz — Détermination de la teneur en
amylose —
Partie 2:
Méthode spectrophotométrique de
routine sans mode opératoire de
dégraissage et avec étalonnage à l'aide
d'étalons de riz
Rice — Determination of amylose content —
Part 2: Spectrophotometric routine method without defatting
procedure and with calibration from rice standards
Numéro de référence
ISO 6647-2:2020(F)
©
ISO 2020

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ISO 6647-2:2020(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
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ISO 6647-2:2020(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Détermination de l’humidité . 3
8.2 Préparation de l’échantillon pour essai . 3
8.3 Prise d’essai et préparation de la solution d’essai . 3
8.4 Préparation de la solution à blanc . 4
8.5 Élaboration de la courbe d’étalonnage. 4
8.5.1 Préparation du jeu de solutions d’étalonnage . 4
8.5.2 Développement de la couleur et mesurages spectrophotométriques . 4
8.5.3 Tracé de la courbe d’étalonnage . 4
8.6 Détermination . 4
9 Expression des résultats. 5
10 Fidélité . 5
10.1 Essai interlaboratoires . 5
10.2 Répétabilité . 5
10.3 Reproductibilité . 5
11 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires pour la méthode de routine .7
Bibliographie .12
© ISO 2020 – Tous droits réservés iii

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ISO 6647-2:2020(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 4, Céréales et légumineuses, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 338, Céréales
et produits céréaliers, du Comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 6647-2:2015), qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— Les jeux de solutions d’étalonnage dans l’ISO 6647-2:2015 étaient constitués par d’échantillons de
riz analysés par chromatographie par exclusion stérique. Dans le présent document, les jeux de
solutions d’étalonnage sont constitués d’échantillons de riz analysés par un spectrophotomètre UV-
VIS, sans délipidation.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 6647 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés

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NORME INTERNATIONALE ISO 6647-2:2020(F)
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 2:
Méthode spectrophotométrique de routine sans mode
opératoire de dégraissage et avec étalonnage à l'aide
d'étalons de riz
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie deux méthodes de routine simplifiées pour la détermination de la fraction
massique d’amylose du riz usiné, non étuvé. La principale différence entre les deux méthodes est le
mode opératoire de dispersion: la méthode A spécifie une dispersion à chaud et la méthode B spécifie
une dispersion à froid.
Les deux méthodes sont applicables au riz avec une fraction massique d’amylose supérieure à 5 %.
NOTE Ces méthodes décrivent des modes opératoires simplifiés pour la préparation d’échantillons, qui sont
fréquemment utilisés en routine par les laboratoires. Les méthodes utilisent les mêmes réactifs que la méthode
de référence (voir l’ISO 6647-1), mais omettent l’étape de dégraissage. Les échantillons de riz pour lesquels la
fraction massique d’amylose a été déterminée par la méthode de référence sont utilisés comme étalons.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 712, Céréales et produits céréaliers — Détermination de la teneur en eau — Méthode de référence
ISO 6647-1:2020, Riz — Détermination de la teneur en amylose — Partie 1: Méthode de référence: Méthode
spectrophotométrique avec un mode opératoire de dégraissage au méthanol et des solutions d’étalonnage
d’amylose de pomme de terre et d’amylopectine de riz gluant
ISO 7301, Riz — Spécifications
ISO 8466-1, Qualité de l’eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d’analyse et estimation des
caractères de performance — Partie 1: Évaluation statistique de la fonction linéaire d’étalonnage
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et les définitions de l’ISO 6647-1 et l’ISO 7301
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
© ISO 2020 – Tous droits réservés 1

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ISO 6647-2:2020(F)

4 Principe
Le riz est broyé jusqu’à l’obtention d’une très fine farine pour rompre la structure de l’endosperme,
en vue de faciliter la dispersion complète et la gélatinisation. Une prise d’essai est dispersée dans une
solution d’hydroxyde de sodium. Une partie aliquote est prélevée, à laquelle est ajoutée une solution
d’iode. L’absorbance à 720 nm du complexe coloré formé est déterminée à l’aide d’un spectrophotomètre.
Des longueurs d’onde de mesure de 620 nm ou 680 nm peuvent également être utilisées.
La fraction massique d’amylose de l’échantillon est ensuite lue sur une courbe d’étalonnage, qui est
élaborée en utilisant des échantillons de riz ayant une fraction massique d’amylose connue, déterminée
en utilisant la méthode de référence spécifiée ci-dessus.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau
distillée, déminéralisée ou de pureté équivalente.
5.1 Éthanol, d’une fraction volumique de 95 %.
5.2 Hydroxyde de sodium:
a) Solution à 1 mol/l, pour la méthode A.
b) Solution à 2 mol/l, pour la méthode B.
5.3 Hydroxyde de sodium pour la solution à blanc:
a) Solution à 0,09 mol/l, pour la méthode A.
b) Solution à 0,18 mol/l, pour la méthode B.
5.4 Acide acétique, solution à 1 mol/l.
5.5 Solution d’iode.
Peser (6.8), à 5 mg près, 2,000 g d’iodure de potassium dans un flacon à tare équipé d’un bouchon.
Ajouter de l’eau en quantité suffisante pour obtenir une solution saturée. Ajouter 0,200 g d’iode, à 1 mg
près. Transférer la solution quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4) une fois l’iode
entièrement dissous, puis compléter au volume avec de l’eau, et mélanger.
Préparer une nouvelle solution chaque jour avant analyse et la maintenir à l’abri de la lumière.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Broyeur, permettant de réduire le riz usiné non cuit en farine qui passera à travers un tamis ayant
une ouverture de maille de 150 µm à 180 µm (100 mesh à 80 mesh). Il est recommandé d’utiliser un
filtre cyclone avec un tamis de 0,5 mm.
6.2 Tamis, ayant une ouverture de maille de 150 µm à 180 µm (100 mesh à 80 mesh).
6.3 Spectrophotomètre, muni de cellules appropriées, ayant généralement un trajet optique égal
à 1 cm, permettant de mesurer l’absorbance à 720 nm (ou à 620 nm ou 680 nm).
2 © ISO 2020 – Tous droits réservés

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ISO 6647-2:2020(F)

6.4 Fioles jaugées, 100 ml.
6.5 Bain d’eau bouillante, pour la méthode A uniquement.
6.6 Agitateur magnétique, permettant une agitation entre 950 r/min et 1 000 r/min, pour la
méthode B uniquement.
6.7 Fioles coniques, 100 ml.
6.8 Balance analytique, pouvant peser à 0,000 1 g près.
6.9 Pipettes, ayant une contenance de 1 ml, 2 ml, 5 ml et 10 ml.
7 Échantillonnage
Il convient qu’un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire. Il convient qu’il n’ait été ni
endommagé ni modifié au cours du transport ou du stockage.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Une méthode
d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 24333.
8 Mode opératoire
8.1 Détermination de l’humidité
Sur une prise séparée de l’échantillon de laboratoire et sur les échantillons étalons, réaliser une
détermination de l’humidité conformément à l’ISO 712.
8.2 Préparation de l’échantillon pour essai
À l’aide du broyeur (6.1), broyer au moins 4 g de riz usiné jusqu’à l’obtention d’une farine pouvant passer
à travers le tamis (6.2).
8.3 Prise d’essai et préparation de la solution d’essai
8.3.1 Peser (6.8) 100 mg ± 0,5 mg d’échantillon pour essai (voir 8.2) dans une fiole conique de 100 ml
(6.7). À l’aide d’une pipette, ajouter avec précaution 1 ml d’éthanol (5.1) à cette prise d’essai, en veillant à
rincer les éventuelles fractions de la prise d’essai qui adhèrent aux parois de la fiole. Remuer légèrement
afin de mouiller entièrement l’échantillon.
8.3.2 Méthode A
À l’aide d’une pipette (6.9), introduire 9,0 ml de solution d’hydroxyde de sodium [5.2 a)] dans la fiole
conique et mélanger. Chauffer ensuite le mélange dans un bain d’eau bouillante (6.5)
...

FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 6647-2
ISO/TC 34/SC 4
Rice — Determination of amylose
Secretariat: SAC
content —
Voting begins on:
2020-04-22
Part 2:
Voting terminates on:
Spectrophotometric routine method
2020-06-17
without defatting procedure and with
calibration from rice standards
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 2: Méthode spectrophotométrique de routine sans mode
opératoire de dégraissage et avec étalonnage à l'aide d'étalons de riz
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 6647-2:2020(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
©
NATIONAL REGULATIONS. ISO 2020

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ISO/FDIS 6647-2:2020(E)

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ISO/FDIS 6647-2:2020(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Procedure. 3
8.1 Determination of moisture . 3
8.2 Preparation of test sample . 3
8.3 Test portion and preparation of the test solution . 3
8.4 Preparation of the blank solution . 3
8.5 Preparation of the calibration graph . 4
8.5.1 Preparation of the set of calibration solutions . 4
8.5.2 Colour development and spectrophotometric measurements . 4
8.5.3 Plotting the calibration graph . 4
8.6 Determination . 4
9 Expression of results . 4
10 Precision . 5
10.1 Interlaboratory test. 5
10.2 Repeatability . 5
10.3 Reproducibility . 5
11 Test report . 6
Annex A (informative) Results of an interlaboratory test for the routine method .7
Bibliography .11
© ISO 2020 – All rights reserved iii

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ISO/FDIS 6647-2:2020(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4,
Cereals and pulses, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 338, Cereal and cereal products, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 6647-2:2015), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows.
— The set of calibration solutions in ISO 6647-2:2015 were made by rice samples analysed by size
exclusion chromatography. In this document, the set of calibration solutions are made by rice
samples analysed by spectrophotometer UV-VIS, without delipidization.
A list of all parts in the ISO 6647 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved

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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 6647-2:2020(E)
Rice — Determination of amylose content —
Part 2:
Spectrophotometric routine method without defatting
procedure and with calibration from rice standards
1 Scope
This document specifies two simplified routine methods for the determination of the amylose mass
fraction of milled rice, non-parboiled. The main difference between the two methods is the dispersion
procedure: method A specifies hot dispersion, and method B specifies cold dispersion.
Both methods are applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %.
NOTE These methods describe simplified procedures for the preparation of samples, which are frequently
used in routine laboratories. The methods use the same reagents as the reference method (see ISO 6647-1), but
omit the defatting step. Rice samples where the amylose mass fraction has been determined by the reference
method are used as standards.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 712, Cereals and cereal products — Determination of moisture content — Reference method
1)
ISO 6647-1:— , Rice — Determination of Amylose content — Reference method — Part 1:
Spectrophotometric method with a defatting procedure by methanol and with calibration solutions of potato
amylose and waxy rice amylopectin
ISO 7301, Rice — Specification
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 6647-1 and ISO 7301 apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Principle
Rice is ground to a very fine flour to break up the endosperm structure in order to aid complete
dispersion and gelatinization. A test portion is dispersed in a sodium hydroxide solution. An aliquot
1)  Under preparation.
© ISO 2020 – All rights reserved 1

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ISO/FDIS 6647-2:2020(E)

portion is taken to which is added an iodine solution. The absorbance, at 720 nm, of the colour complex
formed is then determined using a spectrophotometer.
Measurement wavelengths of 620 nm or 680 nm can also be used.
The amylose mass fraction of the sample is then read from a calibration graph, which is prepared by using
rice samples of known amylose mass fraction, determined using the reference method specified above.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Ethanol, a volume fraction of 95 %.
5.2 Sodium hydroxide:
a) 1 mol/l solution, for method A.
b) 2 mol/l solution, for method B.
5.3 Sodium hydroxide for blank solution:
a) 0,09 mol/l solution, for method A.
b) 0,18 mol/l solution, for method B.
5.4 Acetic acid, 1 mol/l solution.
5.5 Iodine solution.
Weigh (6.8), to the nearest 5 mg, 2,000 g of potassium iodide in a weighing bottle fitted with a stopper.
Add sufficient water to form a saturated solution. Add 0,200 g of iodine, weighed to the nearest 1 mg.
When all the iodine has dissolved, transfer the solution quantitatively to a 100 ml volumetric flask (6.4),
make up to volume with water and mix.
Prepare a fresh solution on each day of use and protect it from light.
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Grinder, capable of reducing uncooked milled rice to flour that will pass through a 150 µm to
180 µm (100 mesh to 80 mesh) sieve. A cyclone mill with 0,5 mm screen is recommended.
6.2 Sieve, size 150 µm to 180 µm (100 mesh to 80 mesh).
6.3 Spectrophotometer, with matching cells, usually of path length 1 cm, capable of measuring
absorbance at 720 nm (or 620 nm or 680 nm).
6.4 Volumetric flasks, 100 ml.
6.5 Boiling water bath, for method A only
6.6 Magnetic stirrer, capable of stirring at 950 r/min to 1 000 r/min, for method B only.
2 © ISO 2020 – All rights reserved

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ISO/FDIS 6647-2:2020(E)

6.7 Conical flasks, 100 ml.
6.8 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,000 1 g.
6.9 Pipettes, of capacity 1 ml, 2 ml, 5 ml and 10 ml.
7 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this document. A recommended sampling method is
given in ISO 24333.
8 Procedure
8.1 Determination of moisture
On a separate portion of the laboratory sample and the standard samples, carry out a moisture
determination in accordance with ISO 712.
8.2 Preparation of test sample
In the grinder (6.1), grind at least 4 g of milled rice that will pass through the sieve (6.2).
8.3 Test portion and preparation of the test soluti
...