Water quality — Requirements for the performance testing of membrane filters used for direct enumeration of microorganisms by culture methods

This document specifies the requirements for the performance testing of membrane filters used for the retention followed by direct enumeration of microorganisms by culture methods. This document is applicable to membrane filters which are used for retention followed by direct enumeration of specific microorganisms on solid media or on other devices containing media, like absorbent pads[19]. This document is not applicable for membrane filters used for concentration and elution or for qualitative methods. These tests are applicable to the membrane filters intended for the microbiological analysis of different types of water, such as: — drinking water, bottled water and other types of water with expected low numbers of microorganisms; — water with expected higher numbers of microorganisms, for example, surface water and process water. These tests are intended to demonstrate the suitability of the whole system (membrane filter together with the culture medium including the filtration step) required for the specific tests described in References [3], [6], [8], [10], [12] and [13]. This document applies to: — manufacturers producing membrane filters; — microbiological laboratories using membrane filters for their own testing or providing these to other end users.

Qualité de l'eau — Exigences relatives aux essais de performance des membranes filtrantes utilisées pour le dénombrement direct des micro-organismes par des méthodes de culture

Le présent document spécifie les exigences pour les essais de performance des membranes filtrantes utilisées pour la rétention suivie d'un dénombrement direct des micro-organismes par des méthodes de culture. Le présent document s'applique aux membranes filtrantes qui sont utilisées pour la rétention suivie d'un dénombrement direct de micro-organismes spécifiques sur des milieux solides ou sur d'autres dispositifs contenant des milieux, comme des pads en papier absorbants [19]. Le présent document ne s'applique pas aux membranes filtrantes utilisées pour la concentration et l'élution ou pour des méthodes qualitatives. Les essais s'appliquent aux membranes filtrantes destinées à l'analyse microbiologique de différents types d'eau, tels que: — l'eau potable, l'eau embouteillée et d'autres types d'eau dans laquelle un faible nombre de micro-organismes est attendu; — l'eau dans laquelle un plus grand nombre de micro-organismes est attendu, par exemple l'eau de surface et l'eau de process. Ces essais sont destinés à démontrer l'adéquation de l'ensemble du système (membrane filtrante et milieu de culture, y compris l'étape de filtration) requis pour les essais spécifiques décrits dans les Références [3], [6], [8], [10], [12] et [13]. Le présent document s'applique: — aux fabricants produisant des membranes filtrantes; — aux laboratoires de microbiologie utilisant des membranes filtrantes pour leurs propres essais ou les fournissant à d'autres utilisateurs finaux.

General Information

Status
Published
Publication Date
11-Jan-2023
Current Stage
6060 - International Standard published
Due Date
04-Sep-2022
Completion Date
12-Jan-2023
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ISO 7704:2023 - Water quality — Requirements for the performance testing of membrane filters used for direct enumeration of microorganisms by culture methods Released:12. 01. 2023
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Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 7704
Second edition
2023-01
Water quality — Requirements for
the performance testing of membrane
filters used for direct enumeration of
microorganisms by culture methods
Qualité de l'eau — Exigences relatives aux essais de performance
des membranes filtrantes utilisées pour le dénombrement direct des
micro-organismes par des méthodes de culture
Reference number
ISO 7704:2023(E)
© ISO 2023
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ISO 7704:2023(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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Published in Switzerland
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ISO 7704:2023(E)
Contents Page

Foreword ..........................................................................................................................................................................................................................................v

Introduction .............................................................................................................................................................................................................................vii

1 S c op e ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Nor m at i ve r ef er enc e s ..................................................................................................................................................................................... 1

3 T erms and definitions .................................................................................................................................................................................... 1

3.1 G eneral terminology .......................................................................................................................................................................... 2

3.2 T erminology of performance testing .................................................................................................................................. 3

3.3 T erminology for test microorganisms ............................................................................................................................... 4

4 P r i nc iple ........................................................................................................................................................................................................................ 5

4.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 5

4 .1.1 I nt r o duc t ion ........................................................................................................................................................................... 5

4.1.2 Batch testing .......................................................................................................................................................................... 6

4.1.3 Supplementary testing .................................................................................................................................................. 6

4.2 P erformance testing .......................................................................................................................................................................... 7

4.2.1 M odules for batch and supplementary testing ........................................................................................ 7

4.2.2 A bsence of microbial contamination ................................................................................................................ 7

5 A pparatus and glassware ...........................................................................................................................................................................8

6 C ulture media and diluents ......................................................................................................................................................................8

7 P reparation of microorganisms for performance testing ....................................................................................... 8

7.1 G eneral ........................................................................................................................................................................................................... 8

7. 2 R ef er enc e c ou nt ..................................................................................................................................................................................... 8

7.2.1 Q uantitative productivity testing ....................................................................................................................... 8

7.2.2 Q ualitative selectivity testing ................................................................................................................................ 9

7.2.3 Qualitative specificity testing ................................................................................................................................ 9

7.3 P reparation of a standardized test suspension using a working culture .......................................... 9

7.3.1 General ........................................................................................................................................................................................ 9

7.3.2 Preparation of the working culture .................................................................................................................. 9

7.3.3 Preparation of a standardized test suspension (inoculum) for the test ........................ 10

7.4 P reparation of a test suspension using reference material ......................................................................... 10

8 S ampling of membrane filters for testing ..............................................................................................................................10

9 P rocedure .................................................................................................................................................................................................................11

9.1 G eneral ........................................................................................................................................................................................................ 11

9.2 I noculation by spread plate technique ........................................................................................................................... 11

9.2.1 G eneral ..................................................................................................................................................................................... 11

9.2.2 Inoculation ............................................................................................................................................................................12

9.3 I noculation by membrane filtration technique ......................................................................................................12

9.3.1 General .....................................................................................................................................................................................12

9.3.2 Inoculation ............................................................................................................................................................................12

9.4 I ncubation and counting ............................................................................................................................................................. 13

9.5 T est for absence of microbial contamination ........................................................................................................... 13

10 C alculation, expression and interpretation of results .............................................................................................13

10.1 G eneral ........................................................................................................................................................................................................13

10.2 P roductivity testing ........................................................................................................................................................................ 13

10.3 S electivity testing ............................................................................................................................................................................. 14

10.4 S pecificity testing ............................................................................................................................................................................. 14

11 Documentation of test results ............................................................................................................................................................14

11.1 Te s t r ep or t ............................................................................................................................................................................................... 14

11.2 I nformation provided by the manufacturer .............................................................................................................. 15

11.3 T raceability ............................................................................................................................................................................................. 15

iii
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---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 7704:2023(E)

Annex A (normative) Diagram of the procedure for batch testing ...................................................................................16

Annex B (informative) Example of a card for recording test results from batch testing .........................17

Annex C (informative) Quantitative supplementary testing of membrane filters ..........................................18

Annex D (informative) Qualitative supplementary testing of membrane filters .............................................21

Annex E (informative) Practical example of quantitative batch testing and quantitative

supplementary testing by the end user ....................................................................................................................................25

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................35

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ISO 7704:2023(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to

the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see

www.iso.org/iso/foreword.html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 4,

Microbiological methods, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)

Technical Committee CEN/TC 230, Water analysis, in accordance with the Agreement on technical

cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 7704:1985), which has been technically

revised.
The main changes are as follows:

— the scope has been changed to cover the requirements for the performance testing of membrane

filters used for retention and direct enumeration;

— clauses have been added for terms and definitions, microorganisms, sampling and replicates,

procedure, inoculation and incubation, counting, calculation and documentation;

— the clauses referencing to culture media and diluents, test strain preparation, performance testing

and procedure have been revised to align with ISO 8199 and ISO 11133;
— Annex A has been added with a diagram of the batch testing;

— Annex B has been added to give an example of a card to record the test results from batch testing

and supplementary testing of membrane filters;

— Annex C has been added to describe the quantitative additional testing of membrane filters including

a diagram of the procedure;

— Annex D has been added to describe the qualitative supplementary testing of membrane filters;

— Annex E has been added to give a practical example of batch testing and quantitative additional

testing by the end user including a diagram of the procedure;
— the Bibliography has been added.
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---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 7704:2023(E)

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
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ISO 7704:2023(E)
Introduction

In laboratories carrying out microbiological examinations, the main objectives are to either capture,

resuscitate, grow, detect or enumerate, or all, a wide variety of microorganisms. Membrane filters are

used in many traditional microbiological culture techniques and are commercially available in various

brands and types. Many comparison studies of membrane filters which have been reported in the

literature show differences in their ability to recover bacteria from water samples, see References [22],

[23], [28], [30], [31], [32], [33] and [34]. The complex manufacturing process means that the chemical

composition, pore size and pore structure can vary, depending on the brands, and even on the lot of

material. Furthermore, the manufacturing process can also release leachables that can potentially

interfere with the recovery of microorganisms.

Thus, it is very important to standardize the performance testing of membrane filters as much as

possible, not only to provide consistent results, but also to enable the development of standardized

procedures for enumerating specific microorganisms.
vii
© ISO 2023 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 7704:2023(E)
Water quality — Requirements for the performance
testing of membrane filters used for direct enumeration of
microorganisms by culture methods
1 S cope

This document specifies the requirements for the performance testing of membrane filters used for the

retention followed by direct enumeration of microorganisms by culture methods.

This document is applicable to membrane filters which are used for retention followed by direct

enumeration of specific microorganisms on solid media or on other devices containing media, like

[19]
absorbent pads .

This document is not applicable for membrane filters used for concentration and elution or for

qualitative methods.

These tests are applicable to the membrane filters intended for the microbiological analysis of different

types of water, such as:

— drinking water, bottled water and other types of water with expected low numbers of

microorganisms;

— water with expected higher numbers of microorganisms, for example, surface water and process

water.

These tests are intended to demonstrate the suitability of the whole system (membrane filter together

with the culture medium including the filtration step) required for the specific tests described in

References [3], [6], [8], [10], [12] and [13].
This document applies to:
— manufacturers producing membrane filters;

— microbiological laboratories using membrane filters for their own testing or providing these to

other end users.
2 Normat ive references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 8199:2018, Water quality — General requirements and guidance for microbiological examinations by

culture

ISO 11133:2014, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and

performance testing of culture media

ISO 11133:2014/Amd1: 2018, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production,

storage and performance testing of culture media
3 T erms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
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---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 7704:2023(E)

ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1 General terminolo gy
3.1.1
membrane filter

porous hydrophilic filtration matrix, composed of different polymers with filtration characteristics

equivalent to its/their rated nominal pore sizes, typically ranging from 0,1 µm to 1,2 µm, which is

intended to be used for the retention of microorganisms

Note 1 to entry: The membrane filter ensures the effective retention of microorganisms depending on the

membrane pore size when a differential (positive or negative) pressure is applied.

Note 2 to entry: The type of membrane filter to be used for a certain microbiological method is described in the

corresponding specific standard (3.1.7).
3.1.2
culture medium

formulation of substances, in liquid, semi-solid or solid form, which contain either natural and/

or synthetic constituents intended to support the multiplication (with or without constituents for

inhibition of certain microorganisms), identification or preservation of viability of microorganisms

Note 1 to entry: The culture medium to be used for a certain microbiological method is described in the

corresponding specific standard (3.1.7), see specific culture medium (3.1.3).

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.3.1, modified — “constituents for” has been included and Note 1 to entry

has been replaced.]
3.1.3
specific culture medium

culture medium (3.1.2), usually selective, as designated in a specific standard (3.1.7) for use with

membrane filters (3.1.1)
[8]

EXAMPLE 1 Chromogenic coliform agar (CCA) used with membrane filters in accordance with ISO 9308-1 .

[6]

EXAMPLE 2 Slanetz and Bartley medium used with membrane filters in accordance with ISO 7899-2 .

3.1.4
reference medium

culture medium (3.1.2), usually non-selective, for determination of the reference count (3.3.8) and

supplementary quantitative testing (3.2.2)

Note 1 to entry: The reference medium is usually a non-selective culture medium (3.1.2), which is different to the

culture medium under test and has been demonstrated to be suitable for use in the performance testing.

EXAMPLE Tryptone soya agar (TSA) is in accordance with ISO 11133.

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.3.4.13, modified — Note 1 to entry has been added and "is in accordance

with ISO 11133" has been added in the example.]
3.1.5
batch of membrane filter
lot of membrane filter

homogeneous and fully traceable units of membrane filter (3.1.1) referring to a defined amount of bulk,

semi-finished product or end product, which is consistent in type and quality, and which has been

produced within one defined production period, having been assigned the same batch (or lot) number

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---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 7704:2023(E)
3.1.6
batch of culture medium
lot of culture medium

homogeneous and fully traceable units of a culture medium (3.1.2) referring to a defined amount of

bulk, semi-finished product or end product, which is consistent in type and quality, and which has been

produced within one defined production period, having been assigned the same batch (or lot) number

Note 1 to entry: If the user does not define the batch or lot of culture medium used for performance testing of

membrane filters as the “end product”, it is important to demonstrate that the production process is sufficiently

controlled to produce culture media of consistent quality (e.g. by monitoring culture media performance testing

results).

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.1.2, modified — "medium" has been changed to "culture medium" and

Note 1 to entry has been added.]
3.1.7
specific standard

International Standard or guidance document describing the microbiological analysis of different types

of water for the detection or enumeration of a specific microorganism (or group of microorganisms)

3.2 T erminology of performance testing
3.2.1
batch testing

test of units of membrane filters (3.1.1) from a batch of membrane filter (3.1.5) for its/their intended use

with the specific culture medium (3.1.3) and determination of reference count (3.3.6)

3.2.2
supplementary quantitative testing

test of units of membrane filters (3.1.1) from a batch of membrane filter (3.1.5) for its/their intended use

with the specific culture medium (3.1.3), determination of reference count (3.3.6), test of the membrane

filters on a non-selective culture medium and test of the culture medium without membrane filter

Note 1 to entry: Annex C gives detailed description of the supplementary quantitative testing.

Note 2 to entry: Supplementary quantitative testing is used when a new type of a membrane filter(s) (3.1.1), or a

new manufacturer is tested initially, or when a problem in the day-to-day use or batch testing (3.2.1) of membrane

filters is noticed.
3.2.3
performance of the membrane filter

response of a membrane filter (3.1.1) challenged by a test organism (3.3.3) under defined conditions

Note 1 to entry: The defined conditions are described in the specific standard (3.1.7) for the intended use of

the membrane filter (3.1.1), like: test organism (3.3.3), specific culture medium (3.1.3), reference medium (3.1.4),

productivity (3.2.5), selectivity (3.2.6), specificity (3.3.7), incubation time and temperature.

3.2.4
performance of the culture medium

response of a culture medium (3.1.2) to challenge by test organisms (3.3.3) under defined conditions

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.1]
3.2.5
productivity

level of recovery of a target microorganism (3.3.1) from the culture medium (3.1.2) with the membrane

filter (3.1.1) under defined conditions

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.4, modified — "with the membrane filter" has been added to the term

and the definition.]
© ISO 2023 – All rights reserved
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 7704:2023(E)
3.2.6
selectivity

degree of inhibition of a non-target microorganism (3.3.2) on or in a selective culture medium (3.1.2)

with the membrane filter (3.1.1) under defined conditions

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.5, modified — "with the membrane filter" has been added to the term

and the definition.]
3.2.7
specificity

demonstration, under defined conditions, that non-target microorganisms (3.3.2), if able to grow on the

medium, do not show the same visual characteristics as the target microorganisms (3.3.1) on the culture

medium (3.1.2) with membrane filter (3.1.1) under defined conditions
3.3 T erminology for test microorganisms
3.3.1
target microorganism

microorganism or group of microorganisms to be detected or enumerated which can be expected to

grow under defined conditions

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.2, modified — "which can be expected to grow under defined conditions"

has been added to the definition.]
3.3.2
non-target microorganism

microorganism that is suppressed by the medium and/or conditions of incubation or does not show

expected characteristics of the target microorganism
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.3]
3.3.3
test microorganism
control strain

microorganism generally used for performance testing of membrane filters (3.1.1) and/or culture media

(3.1.2)

Note 1 to entry: Test microorganisms/control strains are further defined according to their source (see

3.3.4 to 3.3.10).
3.3.4
reference strain

microorganism obtained directly from a reference culture collection and defined to at least the species

level

Note 1 to entry: A reference culture collection is a culture collection which is a member of the World Federation

of Culture Collections (WFCC) or the European Culture Collections’ Organization (ECCO).

Note 2 to entry: A reference strain is catalogued and described according to its characteristics and preferably

originating from water as applicable.
3.3.5
reference stock

set of separate identical cultures obtained by a single subculture from the reference strain (3.3.4) either

in the laboratory or from a supplier
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.3]
© ISO 2023 – All rights reserved
---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 7704:2023(E)
3.3.6
stock culture
primary subculture from a reference stock (3.3.5)
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.4]
3.3.7
working culture

subculture from a reference stock (3.3.5) or stock culture (3.3.6) or a reference material (3.3.9) or a

certified reference material (3.3.10)

Note 1 to entry: Multi-strain reference material (3.3.9) and multi-strain certified reference material (3.3.10) can

also be used for the preparation of working cultures.

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.4, modified — "certified or not" has been replaced with " or a certified

reference material" Note 1 to entry has been added.]
3.3.8
reference count
inoculum level

total count of colonies on a reference medium (3.1.4) obtained without usage of a membrane filter (3.1.1)

3.3.9
reference material

microbiological material containing a quantity of revivable microorganisms, sufficiently homogenous

and stable with respect to the quantity of revivable microorganisms, which has been established to be

fit for its intended use in a measurement process
[15]
Note 1 to entry: See ISO Guide 30 .

Note 2 to entry: For in-house prepared quality control reference materials (QRMs), often so-called “in-house

[18]

reference materials” or “internal RM”, see ISO Guide 80 and References [23], [25], [27] and [28].

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.6, modified — the reference in Note 1 to entry has been updated and

Note 2 to entry has been added.]
3.3.10
certified reference material
CRM

microbiological reference material (3.3.9) characterized by a metrologically valid procedure for the

quantity of revivable microorganisms
[15]
Note 1 to entry: See ISO Guide 30 .

Note 2 to entry: Metrologically valid procedures for the production and certification of RMs are given in, among

[14] [16] [17]
others, ISO 17034, ISO Guide 31 and ISO Guide 35 .

Note 3 to entry: A microbiological CRM is accompanied by a certificate that provides the value of the specified

quantity of revivable microorganisms, its associated uncertainty and a statement of metrological traceability.

A CRM is certified only for the method/methods and media that were included in the certification process,

otherwise its function is like an (ordinary) reference material (3.3.9).
4 Principle
4.1 General
4.1.1 Introduction

Membrane filters are used for retention followed by direct enumeration of microorganisms in water

samples. Many materials, pore sizes and brands are commercially available and designed for specific

© ISO 2023 – All rights rese
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 7704
Deuxième édition
2023-01
Qualité de l'eau — Exigences relatives
aux essais de performance des
membranes filtrantes utilisées pour
le dénombrement direct des micro-
organismes par des méthodes de
culture
Water quality — Requirements for the performance testing of
membrane filters used for direct enumeration of microorganisms by
culture methods
Numéro de référence
ISO 7704:2023(F)
© ISO 2023
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ISO 7704:2023(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Publié en Suisse
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ISO 7704:2023(F)
Sommaire Page

Avant-propos ...............................................................................................................................................................................................................................v

Introduction .............................................................................................................................................................................................................................vii

1 Domaine d'application ...................................................................................................................................................................................1

2 Références normatives ..................................................................................................................................................................................1

3 Termes et définitions ...................................................................................................................................................................................... 2

3.1 Terminologie générale ..................................................................................................................................................................... 2

3.2 Terminologie relative aux essais de performance .................................................................................................. 3

3.3 Terminologie relative aux micro-organismes d'essai .......................................................................................... 4

4 Principe.......................................................................................................................................................................................................................... 6

4.1 Généralités ................................................................................................................................................................................................. 6

4.1.1 Introduction ........................................................................................................................................................................... 6

4.1.2 Essai par lots .......................................................................................................................................................................... 6

4.1.3 Essais supplémentaires ................................................................................................................................................ 7

4.2 Essais de performance ..................................................................................................................................................................... 7

4.2.1 Modules pour les essais par lots et les essais supplémentaires ............................................... 7

4.2.2 Absence de contamination microbienne ....................................................................................................... 8

5 Appareillage et verrerie............................................................................................................................................................................... 8

6 Milieux de culture et diluants ................................................................................................................................................................8

7 Préparation de micro-organismes pour les essais de performance ............................................................9

7.1 Généralités ................................................................................................................................................................................................. 9

7.2 Nombre de référence ......................................................................................................................................................................... 9

7.2.1 Essais quantitatifs de productivité .................................................................................................................... 9

7.2.2 Essai qualitatif de sélectivité ............................................................................................................................... 10

7.2.3 Essai qualitatif de spécificité ............................................................................................................................... 10

7.3 Préparation d'une suspension d'essai normalisée à l'aide d'une culture de travail .............. 10

7.3.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 10

7.3.2 Préparation de la culture de travail ............................................................................................................... 10

7.3.3 Préparation d'une suspension d'essai normalisée (inoculum) pour l'essai ................ 11

7.4 Préparation d'une suspension d'essai à l'aide du matériau de référence ........................................ 11

8 Échantillonnage des membranes filtrantes pour les essais ...............................................................................11

9 Procédure .................................................................................................................................................................................................................12

9.1 Généralités ..............................................................................................................................................................................................12

9.2 Inoculation par la technique par étalement ..............................................................................................................12

9.2.1 Généralités ............................................................................................................................................................................12

9.2.2 Inoculation ............................................................................................................................................................................13

9.3 Inoculation par la technique de filtration sur membrane.............................................................................13

9.3.1 Généralités ............................................................................................................................................................................13

9.3.2 Inoculation ............................................................................................................................................................................13

9.4 Incubation et dénombrement ................................................................................................................................................. 14

9.5 Essai d'absence de contamination microbienne .................................................................................................... 14

10 Calcul, expression et interprétation des résultats .......................................................................................................14

10.1 Généralités .............................................................................................................................................................................................. 14

10.2 Essai de productivité ..................................................................................................................................................................... 14

10.3 Essai de sélectivité ........................................................................................................................................................................... 15

10.4 Essai de spécificité ........................................................................................................................................................................... 15

11 Documentation des résultats d'essai ..........................................................................................................................................15

11.1 Rapport d'essai .................................................................................................................................................................................... 15

11.2 Informations fournies par le fabricant........................................................................................................................... 16

11.3 Traçabilité ................................................................................................................................................................................................ 16

iii
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ISO 7704:2023(F)

Annexe A (normative) Diagramme de la procédure d'essai par lots ..............................................................................17

Annexe B (informative) Exemple de fiche de contrôle pour l'enregistrement des résultats

des essais par lots ............................................................................................................................................................................................18

Annexe C (informative) Essai quantitatif supplémentaire des membranes filtrantes ...............................19

Annexe D (informative) Essai qualitatif supplémentaire des membranes filtrantes ..................................22

Annexe E (informative) Exemple pratique d'essai quantitatif par lots et d'essai quantitatif

supplémentaire par l'utilisateur final .......................................................................................................................................26

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................37

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ISO 7704:2023(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a

été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir

www.iso.org/directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l'intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l'Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www.iso.org/iso/fr/avant-propos.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité

SC 4, Méthodes microbiologiques, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 230, Analyse de l'eau,

du Comité européen de normalisation (CEN), conformément à l'Accord de coopération technique entre

l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 7704:1985), qui a fait l'objet d'une

révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:

— modification du domaine d'application afin de couvrir les exigences relatives aux essais de

performance des membranes filtrantes utilisées pour la rétention et le dénombrement direct;

— ajout d'articles/paragraphes pour les termes et définitions, les micro-organismes, l'échantillonnage

et les répliques, la procédure, l'inoculation et l'incubation, le dénombrement, le calcul et la

documentation;

— révision des articles/paragraphes relatifs aux milieux de culture et diluants, à la préparation

des souches d'essai, aux essais de performance et à la procédure, de manière à être conformes à

l'ISO 8199 et à l'ISO 11133;
— ajout de l'Annexe A avec un diagramme pour les essais par lots;

— ajout de l'Annexe B afin de donner un exemple de fiche de contrôle pour l'enregistrement des

résultats des essais par lots et des essais supplémentaires des membranes filtrantes;

— ajout de l'Annexe C afin de décrire l'essai quantitatif supplémentaire des membranes filtrantes, y

compris un diagramme de la procédure;
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ISO 7704:2023(F)

— ajout de l'Annexe D afin de décrire l'essai qualitatif supplémentaire des membranes filtrantes;

— ajout de l'Annexe E afin de donner un exemple pratique d'essais par lots et d'essai quantitatif

supplémentaire par l'utilisateur final, y compris un diagramme de la procédure;
— ajout de la Bibliographie.

Il convient que l'utilisateur adresse tout retour d'information ou toute question concernant le présent

document à l'organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l'adresse https://www.iso.org/fr/members.html.
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ISO 7704:2023(F)
Introduction

Dans les laboratoires pratiquant des examens microbiologiques, les principaux objectifs sont la capture,

la revivification, la croissance, la recherche ou le dénombrement, voire tout cela à la fois, d'une grande

variété de micro-organismes. Les membranes filtrantes sont utilisées dans de nombreuses techniques

traditionnelles de culture microbiologique et sont commercialisées sous différents types et marques.

De nombreuses études comparatives de membranes filtrantes publiées dans la littérature font état

de différences dans leur capacité à récupérer les bactéries des échantillons d'eau; voir les Références

[22], [23], [28], [30], [31], [32], [33] et [34]. En raison de la complexité du processus de fabrication,

la composition chimique, la taille des pores et la structure des pores peuvent varier en fonction des

marques, voire du lot de matériau. Par ailleurs, le processus de fabrication peut également libérer

des substances lixiviables qui peuvent potentiellement interférer avec la récupération des micro-

organismes.

Il est par conséquent primordial de normaliser, autant que possible, les essais de performance des

membranes filtrantes, non seulement afin de fournir des résultats cohérents, mais également afin de

permettre la mise en place de procédures normalisées pour le dénombrement de micro-organismes

spécifiques.
vii
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NORME INTERNATIONALE ISO 7704:2023(F)
Qualité de l'eau — Exigences relatives aux essais de
performance des membranes filtrantes utilisées pour
le dénombrement direct des micro-organismes par des
méthodes de culture
1 Domaine d'application

Le présent document spécifie les exigences pour les essais de performance des membranes filtrantes

utilisées pour la rétention suivie d'un dénombrement direct des micro-organismes par des méthodes

de culture.

Le présent document s'applique aux membranes filtrantes qui sont utilisées pour la rétention suivie

d'un dénombrement direct de micro-organismes spécifiques sur des milieux solides ou sur d'autres

[19]
dispositifs contenant des milieux, comme des pads en papier absorbants .

Le présent document ne s'applique pas aux membranes filtrantes utilisées pour la concentration et

l'élution ou pour des méthodes qualitatives.

Les essais s'appliquent aux membranes filtrantes destinées à l'analyse microbiologique de différents

types d'eau, tels que:

— l'eau potable, l'eau embouteillée et d'autres types d'eau dans laquelle un faible nombre de micro-

organismes est attendu;

— l'eau dans laquelle un plus grand nombre de micro-organismes est attendu, par exemple l'eau de

surface et l'eau de process.

Ces essais sont destinés à démontrer l'adéquation de l'ensemble du système (membrane filtrante et

milieu de culture, y compris l'étape de filtration) requis pour les essais spécifiques décrits dans les

Références [3], [6], [8], [10], [12] et [13].
Le présent document s'applique:
— aux fabricants produisant des membranes filtrantes;

— aux laboratoires de microbiologie utilisant des membranes filtrantes pour leurs propres essais ou

les fournissant à d'autres utilisateurs finaux.
2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu'ils constituent, pour tout ou partie de leur

contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l'édition citée s'applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 8199:2018, Qualité de l’eau — Exigences et lignes directrices générales pour les examens

microbiologiques sur milieu de culture

ISO 11133:2014, Microbiologie des aliments, des aliments pour animaux et de l'eau — Préparation,

production, stockage et essais de performance des milieux de culture

I S O 11133:2014/A md1: 2018 , Microbiologie des aliments, des aliments pour animaux et de l’eau —

Préparation, production, stockage et essais de performance des milieux de culture

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ISO 7704:2023(F)
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.

L'ISO et l'IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l'adresse https:// www .iso .org/ obp

— IEC Electropedia: disponible à l'adresse https:// www .electropedia .org/
3.1 Terminologie générale
3.1.1
membrane filtrante

matrice de filtration hydrophile poreuse, composée de différents polymères présentant des

caractéristiques de filtration équivalentes à leurs tailles nominales de pores, généralement comprises

entre 0,1 µm et 1,2 µm, destinée à être utilisée pour la rétention des micro-organismes

Note 1 à l'article: La membrane filtrante assure la rétention effective des micro-organismes en fonction de la

taille des pores de la membrane quand une pression différentielle (positive ou négative) est appliquée.

Note 2 à l'article: Le type de membrane filtrante à utiliser pour une méthode microbiologique donnée est décrit

dans la norme spécifique (3.1.7) correspondante.
3.1.2
milieu de culture

mélange de substances, sous forme liquide, semi-solide ou solide, qui contient des constituants naturels

et/ou synthétiques permettant la croissance des micro-organismes (avec ou sans constituants pour

l'inhibition de certains d'entre eux), leur identification ou leur conservation

Note 1 à l'article: Le milieu de culture à utiliser pour une certaine méthode microbiologique est décrit dans la

norme spécifique (3.1.7) correspondante, voir milieu de culture spécifique (3.1.3).

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.3.1, modifiée — ajout de «constituants pour» et remplacement de la Note 1

à l'article.]
3.1.3
milieu de culture spécifique

milieu de culture (3.1.2), généralement sélectif, tel que désigné dans une norme spécifique (3.1.7) pour

utilisation avec des membranes filtrantes (3.1.1)

EXEMPLE 1 La gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA) utilisée avec des membranes filtrantes

[8]
conformément à l'ISO 9308-1 .

EXEMPLE 2 Milieu de Slanetz et de Bartley utilisé avec des membranes filtrantes conformément à l'

[6]
ISO 7899-2 .
3.1.4
milieu de référence

milieu de culture (3.1.2), en général non sélectif, utilisé pour la détermination du nombre de référence

(3.3.8) et les essais quantitatifs supplémentaires (3.2.2)

Note 1 à l'article: Le milieu de référence est généralement un milieu de culture (3.1.2) non sélectif, qui est

différent du milieu de culture soumis à l'essai et dont l'aptitude à être utilisé dans les essais de performance a été

démontrée.
EXEMPLE La gélose tryptone soja (TSA) est conforme à l'ISO 11133.

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.3.4.13, modifiée — ajout de la Note 1 à l'article et ajout de «est conforme à

l'ISO 11133» dans l'exemple.]
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ISO 7704:2023(F)
3.1.5
lot de membranes filtrantes

unités de membrane filtrante (3.1.1) homogènes et conformes aux exigences de traçabilité,

correspondant à une quantité définie de produits en vrac, de produits semi-finis ou finis, de type et

de qualité homogènes, qui a été produite au cours d'une période définie et identifiée sous un même

numéro de lot
3.1.6
lot de milieu de culture

unités de milieu de culture (3.1.2) homogène et conforme aux exigences de traçabilité, correspondant à

une quantité définie de produits en vrac, de produits semi-finis ou finis, de type et de qualité homogènes,

qui a été produite au cours d'une période définie et identifiée sous un même numéro de lot

Note 1 à l'article: Si l'utilisateur ne définit pas le lot de milieu de culture utilisé pour les essais de performance

des membranes filtrantes comme le «produit fini», il est important de démontrer que le processus de production

est suffisamment contrôlé pour obtenir des milieux de culture de qualité constante (par exemple en surveillant

les résultats des essais de performance des milieux de culture).

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.1.2, modifiée — remplacement de «milieu» par «milieu de culture» et ajout

de la Note 1 à l'article.]
3.1.7
normes spécifiques

norme internationale ou document d'orientation décrivant l'analyse microbiologique de différents

types d'eau en vue de la recherche ou du dénombrement d'un micro-organisme déterminé (ou d'un

groupe de micro-organismes)
3.2 Terminologie relative aux essais de performance
3.2.1
essai par lots

essai d'unités de membranes filtrantes (3.1.1) provenant d'un lot de membranes filtrantes (3.1.5) en vue

de leur utilisation prévue avec le milieu de culture spécifique (3.1.3) et détermination du nombre de

référence (3.3.8)
3.2.2
essai quantitatif supplémentaire

essai d'unités de membranes filtrantes (3.1.1) provenant d'un lot de membranes filtrantes (3.1.5) en

vue de leur utilisation prévue avec le milieu de culture spécifique (3.1.3), détermination du nombre de

référence (3.3.6), essai des membranes filtrantes sur un milieu de culture non sélectif et essai du milieu

de culture sans membrane filtrante

Note 1 à l'article: L'Annexe C donne une description détaillée des essais quantitatifs supplémentaires.

Note 2 à l'article: Des essais quantitatifs supplémentaires sont utilisés lorsqu'un nouveau type de membrane

filtrante (3.1.1) ou un nouveau fabricant est soumis à des essais initiaux, ou lorsqu'un problème est constaté dans

l'utilisation quotidienne ou les essais par lots (3.2.1) des membranes filtrantes.

3.2.3
performance de la membrane filtrante

réponse d'une membrane filtrante (3.1.1) soumise à une souche test (3.3.3) dans des conditions définies

Note 1 à l'article: Les conditions définies sont décrites dans la norme spécifique (3.1.7) pour l'utilisation prévue

de la membrane filtrante (3.1.1), comme: souche test (3.3.3), milieu de culture spécifique (3.1.3), milieu de référence

(3.1.4), productivité (3.2.5), sélectivité (3.2.6), spécificité (3.2.7), durée et température d'incubation.

3.2.4
performance du milieu de culture

réponse d'un milieu de culture (3.1.2) soumis à une souche test (3.3.3) dans des conditions définies

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.1]
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ISO 7704:2023(F)
3.2.5
productivité

taux de récupération d'un micro-organisme cible (3.3.1) à partir du milieu de culture (3.1.2) avec la

membrane filtrante (3.1.1) dans des conditions définies

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.4, modifiée — ajout de «avec la membrane filtrante» dans la définition.]

3.2.6
sélectivité

degré d'inhibition d'un micro-organisme non cible (3.3.2) sur ou dans un milieu de culture (3.1.2) sélectif

avec la membrane filtrante (3.1.1) dans des conditions définies

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.5, modifiée — ajout de «avec la membrane filtrante» dans la définition.]

3.2.7
spécificité

démonstration, dans des conditions définies, que le micro-organisme non cible (3.3.2), s'il est capable de

se développer sur le milieu, ne présente pas les mêmes caractéristiques visuelles que le micro-organisme

cible (3.3.1), sur le milieu de culture (3.1.2) avec membrane filtrante (3.1.1) dans des conditions définies

3.3 Terminologie relative aux micro-organismes d'essai
3.3.1
micro-organisme cible

micro-organisme ou groupe de micro-organismes à rechercher ou à dénombrer, dont la croissance peut

être attendue dans des conditions définies

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.2, modifiée — ajout de «dont la croissance peut être attendue dans des

conditions définies» dans la définition.]
3.3.2
micro-organisme non cible

micro-organisme qui est supprimé par le milieu et/ou les conditions d'incubation ou qui ne présente

pas les caractéristiques attendues du micro-organisme cible
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.2.3]
3.3.3
souche test
souche de contrôle

micro-organisme utilisé en général pour les essais de performance des membranes filtrantes (3.1.1) et/

ou des milieux de culture (3.1.2)

Note 1 à l'article: Les souches test/souches de contrôle sont définies en fonction de leur provenance (voir 3.3.4 à

3.3.10).
3.3.4
souche de référence

micro-organisme obtenu directement auprès d'une collection de culture de référence et défini au moins

par son espèce

Note 1 à l'article: Une collection de culture de référence est une collection de culture qui est membre de la World

Federation of Culture Collections (WFCC) (Fédération mondiale des collections de culture) ou de l'European

Culture Collections' Organisation (ECCO) (Organisation européenne des collections de culture).

Note 2 à l'article: Une souche de référence est classée et décrite selon ses caractéristiques et issue, de préférence,

d'eau, le cas échéant.
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ISO 7704:2023(F)
3.3.5
stock de référence

ensemble de cultures identiques distinctes obtenues à partir d'une subculture de la souche de référence

(3.3.4) préparée au laboratoire ou obtenue auprès d'un fournisseur
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.3]
3.3.6
culture mère
subculture primaire obtenue à partir d'un stock de référence (3.3.5)
[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.4]
3.3.7
culture de travail

subculture issue d'un stock de référence (3.3.5), d'une culture mère (3.3.6), d'un matériau de référence

(3.3.9) ou d'un matériau de référence certifié (3.3.10)

Note 1 à l'article: Le matériau de référence (3.3.9) multi-souches et le matériau de référence certifié (3.3.10) multi-

souches peuvent également être utilisés pour la préparation des cultures de travail.

[SOURCE: ISO 11133:2014, 3.4.4, modifiée — remplacement de «certifié ou
...

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