ISO 6611:2004

Milk and milk products — Enumeration of colony-forming units of yeasts and/or moulds — Colony-count technique at 25 degrees C

ISO 6611|IDF 94:2004 specifies a method for the detection and enumeration of colony-forming units (CFU) of viable yeasts and/or moulds in milk and milk products by means of the colony-count technique at 25 °C. The method is applicable to milk, liquid milk products, dried milk, dried sweet whey, dried buttermilk, lactose, cheese, acid casein, lactic casein, rennet casein, caseinate, acid whey powder, butter, frozen milk products (including edible ices), custard, desserts, fermented milk and cream.

Lait et produits laitiers — Dénombrement des unités formant colonie de levures et/ou moisissures — Comptage des colonies à 25 degrés C

L'ISO 6611|IDF 94:2004 spécifie une méthode de dénombrement des unités formant colonie (UFC) de levures et/ou moisissures dans le lait et les produits laitiers par la technique de comptage des colonies à 25 °C. La méthode est applicable au lait, aux produits laitiers liquides, au lait sec, à la poudre de lactosérum non acide, au babeurre en poudre, au lactose, aux fromages, à la caséine acide, à la caséine lactique, à la caséine-présure, aux caséinates, à la poudre de lactosérum acide, au beurre, aux produits laitiers congelés (y compris les glaces de consommation), aux flans, aux desserts, aux laits fermentés et à la crème.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 20-Oct-2004
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9092 - International Standard to be revised
• Completion Date: 14-Nov-2022

Relations

• Revises: ISO 6611:1992 - Milk and milk products — Enumeration of colony-forming units of yeasts and/or moulds — Colony-count technique at 25 degrees C
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6611
IDF
94
Second edition
2004-10-15

Milk and milk products — Enumeration
of colony-forming units of yeasts
and/or moulds — Colony-count
technique at 25 °C
Lait et produits laitiers — Dénombrement des unités formant colonie de
levures et/ou moisissures — Comptage des colonies à 25 °C




Reference numbers
ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
©
ISO and IDF 2004

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ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
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Published in Switzerland

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ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6611IDF 94 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This edition of ISO 6611IDF 94 cancels and replaces ISO 6611:1992, of which it constitutes a minor revision.
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ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the National Committees casting a vote.
ISO 6611IDF 94 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Group of Experts, Enumeration of yeasts and moulds in
dairy products (E34), under the aegis of its chairman, Mr J.J. Devoyod (FR).
This edition of ISO 6611IDF 94 cancels and replaces IDF 94B:1990, of which it constitutes a minor revision.

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ISO 6611:2004(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 94:2004(E)

Milk and milk products — Enumeration of colony-forming units
of yeasts and/or moulds — Colony-count technique at 25 °C
1 Scope
This International Standard specifies a method for the detection and enumeration of colony-forming units
(CFU) of viable yeasts and/or moulds in milk and milk products by means of the colony-count technique at
25 °C.
The method is applicable to
 milk, liquid milk products,
 dried milk, dried sweet whey, dried buttermilk, lactose,
 cheese,
 acid casein, lactic casein, rennet casein,
 caseinate, acid whey powder,
 butter,
 frozen milk products (including edible ices),
 custard, desserts, fermented milk and cream.
NOTE This method is not suitable for a large number of thermolabile yeasts (in fresh cheese). In such cases the
agar-surface-plating method is preferred.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
ISO 8261IDF 122:2001, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples,
initial suspensions and decimal dilutions for microbiological examination
© ISO and IDF 2004 – All rights reserved 1

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ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
yeasts and moulds
microorganisms which at 25 °C form colonies in a selective medium under the conditions specified in this
International Standard
4 Principle
4.1 Poured plates are prepared using a specified selective culture medium and a specified quantity of the
test sample if the initial product is liquid, or of an initial suspension in the case of other products.
Other plates are prepared, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of the
initial suspension.
4.2 The plates are aerobically incubated at 25 °C for 5 days.
4.3 The number of colony-forming units (CFU) of yeasts and/or moulds per gram or per millilitre of product
is calculated from the number of colonies obtained on plates chosen at dilution levels so as to give a
significant result.
5 Diluents and culture medium
For general guidance, see ISO 7218.
5.1 Basic materials
See ISO 8261IDF 122.
5.1.1 Diluents
For diluents for general use and diluents for special purposes, see ISO 8261IDF 122.
5.1.2 Distribution, sterilization and storage of diluents
See ISO 8261IDF 122.
5.2 Yeast extract/dextrose/oxytetracycline/agar medium
5.2.1 Basic medium
5.2.1.1 Components
Yeast extract powder 5,0 g
Dextrose (C H O) 20,0 g
6 12 6
a
Agar 10 g to 15 g
Water 900 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.

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ISO 6611:2004(E)
IDF 94:2004(E)
5.2.1.2 Preparation
Dissolve the components or dehydrated complete medium in the water, by heating if necessary.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 6,6 at 25 °C.
Sterilize in an autoclave (6.1) at 121 °C ± 1 °C for 15 min.
5.2.2 Oxytetracycline hydrochloride solution
5.2.2.1 Components
Oxytetracycline hydrochloride (C H O ⋅HCl) 50 mg
22 30 11
Water 50 ml

5.2.2.2 Preparation
Dissolve the oxytetracycline hydrochloride in the water. The solution shall be freshly prepared before use.
Sterilize the solution by means of filtration.
5.2.3 Complete medium
5.2.3.1 Components
Oxytetracycline hydrochloride solution 10 ml
Basic medium 90 ml

5.2.3.2 Preparation
Cool the sterilized basic medium (5.2.1) to 45 °C. Just before use, bring the oxytetracycline hydrochloride
solution (5.2.2) to 45 °C and add 10 ml of this solution aseptically to 90 ml of the basic medium.
5.3 Yeast extract/dextrose/chloramphenicol/agar medium
5.3.1 Components
Yeast extract powder 5,0 g
Dextrose (C H O) 20,0 g
6 12 6
a
Chloramphenicol (C H Cl N O) 0,1 g
11 12 2 2 5
b
Agar 12 g to 15 g
Water 1 000 ml
a
In order to obtain a final concentration of 100 µg/ml of medium.
b
Depending on the gel strength of the agar.

5.3.2 Preparation
Dissolve the components in the water by heating, if necessary.
Adjust the pH, i
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 6611
FIL
94
Deuxième édition
2004-10-15

Lait et produits laitiers — Dénombrement
des unités formant colonie de levures
et/ou moisissures — Comptage des
colonies à 25 °C
Milk and milk products — Enumeration of colony-forming units of yeasts
and/or moulds — Colony-count technique at 25 °C




Numéros de référence
ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
©
ISO et FIL 2004

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ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
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surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


©  ISO et FIL 2004
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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL à l’adresse respective ci-après.
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

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ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6611FIL 94 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC International.
Cette édition de l'ISO 6611FIL 94 annule et remplace l'ISO 6611:1992, dont elle constitue une révision
mineure.
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés iii

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ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO et avec
l'AOAC International pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et
les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'ISO 6611FIL 94 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC International.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO/FIL/AOAC du Comité permanent chargé de
l'énumeration des levures et des moisissures dans les produits laitiers (E34), sous la conduite de son chef de
projet, Monsieur J.J. Devoyod (FR).
Cette édition de l'ISO 6611FIL 94 annule et remplace l'IDF 94B:1990, dont elle constitue une révision
mineure.

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ISO 6611:2004(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 94:2004(F)

Lait et produits laitiers — Dénombrement des unités formant
colonie de levures et/ou moisissures — Comptage des colonies
à 25 °C
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dénombrement des unités formant colonie (UFC)
de levures et/ou moisissures dans le lait et les produits laitiers par la technique de comptage des colonies à
25 °C.
La méthode est applicable aux produits suivants:
 lait, produits laitiers liquides,
 lait sec, poudre de lactosérum non acide, babeurre en poudre, lactose,
 fromages,
 caséine acide, caséine lactique, caséine-présure,
 caséinates, poudre de lactosérum acide,
 beurre,
 produits laitiers congelés (y compris les glaces de consommation),
 flans, desserts, laits fermentés et crème.
NOTE La méthode n'est pas applicable à la détermination d'un très grand nombre de levures thermolabiles (dans le
fromage frais). Dans ce cas, il est préférable d'utiliser la technique d'ensemencement en surface.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 8261FIL 122:2001, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des
échantillons pour essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés 1

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ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
levures et moisissures
micro-organismes qui, à 25 °C, forment des colonies dans un milieu sélectif selon la méthode spécifiée dans
la présente Norme internationale.
4 Principe
4.1 Ensemencement en profondeur d'un milieu de culture sélectif défini, coulé dans des boîtes de Petri
avec une quantité spécifiée de l'échantillon pour essai, si le produit à examiner est liquide, ou une quantité
déterminée de la suspension mère, dans le cas d'autres produits.
Préparation d'autres boîtes dans les mêmes conditions, en utilisant des dilutions décimales de l'échantillon
pour essai ou de la suspension mère.
4.2 Incubation des boîtes en aérobiose à 25 °C pendant 5 jours.
4.3 Calcul du nombre d'unités formant colonie (UFC) et/ou de moisissures par gramme ou par millilitre
d'échantillon, en se basant sur le nombre de colonies obtenues sur des boîtes choisies à des niveaux de
dilution permettant d'obtenir un résultat significatif.
5 Diluants et milieu de culture
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 7218.
5.1 Composants de base
Voir l'ISO 8261FIL 122.
5.1.1 Diluants
Pour les diluants d'emploi général et pour les diluants pour les besoins particuliers, voir l'ISO 8261FIL 122.
5.1.2 Répartition, stérilisation et conservation des diluants
Voir l'ISO 8261FIL 122.
5.2 Milieu à l'extrait de levure, dextrose, oxytétracycline et agar-agar
5.2.1 Milieu de base
5.2.1.1 Composants
Extrait de levure en poudre 5,0 g
Glucose (C H O) 20,0 g
6 12 6
a
Agar-agar 10 g à 15 g
Eau 900 ml
a
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.
2 © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

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ISO 6611:2004(F)
FIL 94:2004(F)
5.2.1.2 Préparation
Dissoudre les composants du milieu de base ou du milieu déshydraté en chauffant, si nécessaire.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de 6,6 à 25 °C.
Stériliser à l'autoclave (6.1) à 121 °C ± 1 °C pendant 15 min.
5.2.2 Solution au chlorhydrate d'oxytétracycline
5.2.2.1 Composants
Chlorhydrate d'oxytétracycline (C H O ,HCl) 50 mg
22 30 11
Eau 50 ml

5.2.2.2 Préparation
Dissoudre le chlorhydrate d'oxytétracycline dans l'eau. La solution doit être préparée juste avant l'emploi.
Stériliser la solution par filtration.
5.2.3 Milieu complet
5.2.3.1 Composants
Solution de chlorhydrate d'oxytétracycline 10 ml
Milieu de base 90 ml

5.2.3.2 Préparation
Refroidir le milieu de base stérilisé (5.2.1) à 45 °C. Juste avant l'emploi, amener la solution de chlorhydrate
d'oxytétracycline (5.2.2) à 45 °C et ajouter 10 ml de cette solution aseptiquement à 90 ml du milieu de base.
5.3 Milieu à l'extrait de levure, glucose, chloramphénicol et agar-agar
5.3.1 Composants
Extrait de levure 5,0 g
Glucose (C H O) 20,0 g
6 12 6
a
Chloramphénicol (C H Cl N O) 0,1 g
11 12 2 2 5
b
Agar-agar 12 g à 15 g
Eau 1 000 ml
a
En vue d'obtenir une concentration finale de 100 µg/ml du milieu.
b
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.

© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés 3

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