ISO 9308-2:2012

Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 2: Most probable number method

ISO 9308-2:2012 specifies a method for the enumeration of E. coli and coliform bacteria in water. The method is based on the growth of target organisms in a liquid medium and calculation of the "Most Probable Number" (MPN) of organisms by reference to MPN tables. This method can be applied to all types of water, including those containing an appreciable amount of suspended matter and high background counts of heterotrophic bacteria. However it must not be used for the enumeration of coliform bacteria in marine water. When using for the enumeration of E. coli in marine waters, a 1→10 dilution in sterile water is typically required, although the method has been shown to work well with some marine waters that have a lower than normal concentration of salts. In the absence of data to support the use of the method without dilution, a 1→10 dilution is used. This method relies upon the detection of E. coli based upon expression of the enzyme b‑D‑glucuronidase and consequently does not detect many of the enterohaemorhagic strains of E. coli, which do not typically express this enzyme. Additionally, there are a small number of other E. coli strains that do not express b‑D‑glucuronidase. The choice of tests used in the detection and confirmation of the coliform group of bacteria, including E. coli, can be regarded as part of a continuous sequence. The extent of confirmation with a particular sample depends partly on the nature of the water and partly on the reasons for the examination. The test described in ISO 9308-2:2012 provides a confirmed result with no requirement for further confirmation of positive wells.

Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes — Partie 2: Méthode du nombre le plus probable

L'ISO 9308-2:2012 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes dans l'eau. La méthode est basée sur la croissance d'organismes cibles dans un milieu liquide et sur le calcul du «nombre le plus probable» d'organismes en fonction de tables NPP. Cette méthode peut être appliquée à tous les types d'eau, y compris ceux contenant une quantité appréciable de matière en suspension et des nombres importants de bactéries hétérotrophes. Cependant, elle ne doit pas être utilisée pour dénombrer les bactéries coliformes dans l'eau de mer. Lorsqu'elle est utilisée pour dénombrer Escherichia coli dans l'eau de mer, une dilution 1→10 dans de l'eau stérile est généralement requise, bien que la méthode ait démontré son efficacité avec certaines eaux de mer ayant une concentration en sel inférieure à la normale. En l'absence de données étayant l'utilisation de la méthode sans dilution, une dilution 1→10 est utilisée. Cette méthode repose sur la détection des Escherichia coli en fonction de l'expression de l'enzyme β-D-glucuronidase et, par conséquent, ne permet pas de détecter les souches entérohémorragiques des Escherichia coli, qui n'expriment généralement pas cette enzyme. De plus, il existe un petit nombre d'autres souches d'Escherichia coli qui n'expriment pas la β-D-glucuronidase. Le choix des essais utilisés lors de la détection et de la confirmation du groupe de bactéries coliformes, notamment Escherichia coli, peut être considéré comme faisant partie intégrante d'une séquence continue. Le niveau de confirmation avec un échantillon particulier dépend d'une part de la nature de l'eau et d'autre part des raisons de l'examen. L'essai décrit dans l'ISO 9308-2:2012 fournit un résultat confirmé sans avoir besoin de confirmer les puits positifs.

Kakovost vode - Ugotavljanje števila Escherichia coli in koliformnih bakterij - 2. del: Metoda najverjetnejšega števila

Ta del ISO 9308 določa metodo za ugotavljanje števila Escherichia coli in koliformnih bakterij v vodi. Ta metoda temelji na rasti ciljnih organizmov v tekočem mediju in izračunu „najverjetnejšega števila“ (MPN) organizmov z referenco na tabele MPN. To metodo je mogoče uporabiti za vse vrste vode, vključno s tistimi, ki vsebujejo znatno količino lebdečih snovi in visoko število heterotrofnih bakterij v ozadju. Vendar se te metode ne sme uporabljati za ugotavljanje števila koliformnih bakterij v morski vodi. Pri ugotavljanju števila Escherichia coli v morskih vodah je običajno treba izvesti redčenje 1:10 v sterilni vodi, čeprav ta metoda dobro deluje tudi pri nekaterih morskih vodah z nižjo vsebnostjo koncentracije soli, kot je običajna. Ker ni podatkov, ki bi podpirali uporabo te metode brez redčenja, se uporablja razredčina v razmerju 1:10. Ta metoda upošteva zaznavanje Escherichia coli na podlagi izražanja encima β-D-glukuronidaza, zato posledično ne zazna številnih enterohemoragičnih sevov Eschericha coli, ki tega encima običajno ne izražajo. Poleg tega obstaja majhno število drugih sevov Escherichia coli, ki ne izražajo encima β-D-glukuronidaza. Izbiro preskusov, uporabljenih za zaznavanje in potrjevanje koliformne skupine bakterij, vključno z Escherichia coli, je mogoče upoštevati kot del nepretrganega zaporedja. Obseg potrditve z določenim vzorcem je delno odvisen od lastnosti vode in delno od vzrokov za preskus. Preskus, opisan v tem delu ISO 9308, podaja potrjen rezultat brez potrebe po nadaljnjem potrjevanju pozitivnih izvorov.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 12-Jun-2012
• ICS: 07.100.20 - Microbiology of water
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Current Stage: 9092 - International Standard to be revised
• Completion Date: 21-Jun-2024
• Ref Project: SIST ISO 9308-2:2013 - Water quality - Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 2: Most probable number method

Relations

• Revises: ISO 9308-2:1990 - Water quality — Detection and enumeration of coliform organisms, thermotolerant coliform organisms and presumptive Escherichia coli — Part 2: Multiple tube (most probable number) method
• Effective Date: 24-Jul-2008

Standards Content (Sample)

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 9308-2:2013
01-september-2013
1DGRPHãþD
SIST ISO 9308-2:1998
Kakovost vode - Ugotavljanje števila Escherichia coli in koliformnih bakterij - 2.
del: Metoda najverjetnejšega števila
Water quality - Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 2: Most
probable number method
Qualité de l'eau - Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes -
Partie 2: Méthode du nombre le plus probable
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 9308-2:2012
ICS:
07.100.20 Mikrobiologija vode Microbiology of water
SIST ISO 9308-2:2013 en,fr
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------

SIST ISO 9308-2:2013

---------------------- Page: 2 ----------------------

SIST ISO 9308-2:2013

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-2
Second edition
2012-07-01
Water quality — Enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 2:
Most probable number method
Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
organismes coliformes —
Partie 2: Méthode du nombre le plus probable




Reference number
ISO 9308-2:2012(E)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 3 ----------------------

SIST ISO 9308-2:2013
ISO 9308-2:2012(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland

ii © ISO 2012 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------

SIST ISO 9308-2:2013
ISO 9308-2:2012(E)
Contents Page
Foreword . iv
Introduction . v
1  Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 2
4  Principle . 2
5  Apparatus and glassware . 2
6  Culture media and reagents . 3
7  Sampling . 3
8  Procedure . 3
9  Expression of results . 4
10  Test report . 4
11  Quality assurance . 4
Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria . 5
5)
Annex B (normative) The Quanti-Tray Sealer and calculation of results . 6
Annex C (informative) Composition of the Colilert-18 medium . 42
8)
Annex D (informative) Validation of Colilert-18/Quanti-Tray for the enumeration of E.coli and
coliform bacteria from water . 44
Bibliography . 46

© ISO 2012 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 5 ----------------------

SIST ISO 9308-2:2013
IS
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-2
Second edition
2012-07-01
Water quality — Enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 2:
Most probable number method
Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
organismes coliformes —
Partie 2: Méthode du nombre le plus probable




Reference number
ISO 9308-2:2012(E)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland

ii © ISO 2012 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)
Contents Page
Foreword . iv
Introduction . v
1  Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 2
4  Principle . 2
5  Apparatus and glassware . 2
6  Culture media and reagents . 3
7  Sampling . 3
8  Procedure . 3
9  Expression of results . 4
10  Test report . 4
11  Quality assurance . 4
Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria . 5
5)
Annex B (normative) The Quanti-Tray Sealer and calculation of results . 6
Annex C (informative) Composition of the Colilert-18 medium . 42
8)
Annex D (informative) Validation of Colilert-18/Quanti-Tray for the enumeration of E.coli and
coliform bacteria from water . 44
Bibliography . 46

© ISO 2012 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-2
Second edition
2012-07-01
Water quality — Enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 2:
Most probable number method
Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
organismes coliformes —
Partie 2: Méthode du nombre le plus probable




Reference number
ISO 9308-2:2012(E)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland

ii © ISO 2012 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)
Contents Page
Foreword . iv
Introduction . v
1  Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 2
4  Principle . 2
5  Apparatus and glassware . 2
6  Culture media and reagents . 3
7  Sampling . 3
8  Procedure . 3
9  Expression of results . 4
10  Test report . 4
11  Quality assurance . 4
Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria . 5
5)
Annex B (normative) The Quanti-Tray Sealer and calculation of results . 6
Annex C (informative) Composition of the Colilert-18 medium . 42
8)
Annex D (informative) Validation of Colilert-18/Quanti-Tray for the enumeration of E.coli and
coliform bacteria from water . 44
Bibliography . 46

© ISO 2012 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-2:2012(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 9308-2
Deuxième édition
2012-07-01
Qualité de l’eau — Dénombrement
des Escherichia coli et des bactéries
coliformes —
Partie 2:
Méthode du nombre le plus probable
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 2: Most probable number method
Numéro de référence
ISO 9308-2:2012(F)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2012
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Version française parue en 2013
Publié en Suisse
ii © ISO 2012 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Appareillage et verrerie . 2
6 Milieux de culture et réactifs . 3
6.1 Substances de base . 3
6.2 Diluant . 3
6.3 Antimousse B . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’échantillon . 3
8.2 Ensemencement des milieux . 3
8.3 Incubation et différenciation . 4
8.4 Examen des résultats . 4
9 Expression des résultats.
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 9308-2
Deuxième édition
2012-07-01
Qualité de l’eau — Dénombrement
des Escherichia coli et des bactéries
coliformes —
Partie 2:
Méthode du nombre le plus probable
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 2: Most probable number method
Numéro de référence
ISO 9308-2:2012(F)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2012
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Version française parue en 2013
Publié en Suisse
ii © ISO 2012 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Appareillage et verrerie . 2
6 Milieux de culture et réactifs . 3
6.1 Substances de base . 3
6.2 Diluant . 3
6.3 Antimousse B . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’échantillon . 3
8.2 Ensemencement des milieux . 3
8.3 Incubation et différenciation . 4
8.4 Examen des résultats . 4
9 Expression des résultats.
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 9308-2
Второе издание
2012-07-01
Качество воды. Подсчет кишечных
палочек Escherichia coli и
колиформных бактерий.
Часть 2.
Метод наиболее вероятного
количества
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 2: Most probable number method



Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава
Ссылочный номер
ISO 9308-2:2012(R)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


©  ISO 2012
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO 2012 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .2
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Аппаратура и стеклянная посуда .3
6 Питательные среды и реактивы .4
7 Отбор проб.4
8 Процедура.4
9 Выражение результатов .5
10 Протокол испытания.5
11 Гарантия качества .6
Приложение А (информативное) Дополнительная информация о колиформных бактериях .7
5)
Приложение В (нормативное) Герметизатор Quanti-Tray и вычисление результатов .8
Приложение С (информативное) Состав питательной среды Colilert-18.44
8)
Приложение D (информативное) Валидация метода Colilert-18/Quanti-Tray для подсчета
E.coli и колиформных бактерий в воде .46
Библиография.48

© ISO 2012 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO
работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, од
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 9308-2
Второе издание
2012-07-01
Качество воды. Подсчет кишечных
палочек Escherichia coli и
колиформных бактерий.
Часть 2.
Метод наиболее вероятного
количества
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 2: Most probable number method



Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава
Ссылочный номер
ISO 9308-2:2012(R)
©
ISO 2012

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


©  ISO 2012
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO 2012 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .2
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Аппаратура и стеклянная посуда .3
6 Питательные среды и реактивы .4
7 Отбор проб.4
8 Процедура.4
9 Выражение результатов .5
10 Протокол испытания.5
11 Гарантия качества .6
Приложение А (информативное) Дополнительная информация о колиформных бактериях .7
5)
Приложение В (нормативное) Герметизатор Quanti-Tray и вычисление результатов .8
Приложение С (информативное) Состав питательной среды Colilert-18.44
8)
Приложение D (информативное) Валидация метода Colilert-18/Quanti-Tray для подсчета
E.coli и колиформных бактерий в воде .46
Библиография.48

© ISO 2012 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-2:2012(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO
работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, од
...