ISO 16140-6:2019
(Main)Microbiology of the food chain — Method validation — Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods for microbiological confirmation and typing procedures
Microbiology of the food chain — Method validation — Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods for microbiological confirmation and typing procedures
This document specifies the general principle and the technical protocol for the validation of alternative confirmation methods for microbiology in the food chain. This document compares the result of the alternative confirmation method against the confirmation procedure of a reference method or, if needed, a reference confirmation method (e.g. whole genome sequencing). This document is applicable to the validation of alternative confirmation methods used for the analysis (detection or quantification) of isolated microorganisms in: — products intended for human consumption; — products intended for animal feeding; — environmental samples in the area of food and feed production, handling; — samples from the primary production stage. Validated alternative confirmation methods can be used to replace (partly or completely) the confirmation procedure described in: — the reference method; — an alternative method validated in accordance with ISO 16140-2 only if one of the isolation agars specified in the validation study of the alternative confirmation method is used. This document is also applicable to the validation of alternative typing methods, where the reference method can be, for example, a serological method (e.g. serotyping of Salmonella) or a molecular method (e.g. typing of Shiga toxin-producing E. coli). This document is, in particular, applicable to bacteria and fungi. Some clauses can be applicable to other (micro)organisms, to be determined on a case-by-case basis. Validation studies in accordance with this document are primarily intended to be performed by organizations or expert laboratories involved in method validation, but can also be used by a single laboratory, especially when performing in-house validation under certain conditions (see ISO 16140-4).
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des méthodes — Partie 6: Protocole pour la validation de méthodes alternatives (commerciales) pour la confirmation microbiologique et le typage
Le présent document établit le principe général ainsi que le protocole technique pour la validation des méthodes alternatives de confirmation dans le domaine de la microbiologie de la chaîne alimentaire. Le présent document compare le résultat de la méthode alternative de confirmation avec celui du mode opératoire de confirmation d'une méthode de référence ou, si nécessaire, d'une méthode de confirmation de référence (par exemple, séquençage de génome complet). Le présent document est applicable à la validation de méthodes alternatives de confirmation utilisées pour l'analyse (recherche ou quantification) de micro-organismes isolés présents dans: — les produits destinés à la consommation humaine; — les produits destinés à l'alimentation animale; — les échantillons environnementaux dans les domaines de la production et de la manutention de produits alimentaires; — les échantillons au stade de la production primaire. Des méthodes alternatives de confirmation validées peuvent être utilisées pour remplacer (en partie ou en totalité) le mode opératoire de confirmation décrit dans: — la méthode de référence; — une méthode alternative validée conformément à l'ISO 16140‑2 uniquement si l'une des géloses d'isolement spécifiées dans l'étude de validation de la méthode de confirmation alternative est utilisée. Le présent document est également applicable à la validation de méthodes alternatives de typages, dans lesquelles la méthode de référence peut, par exemple, être une méthode sérologique (par exemple, sérotypage de Salmonella) ou une méthode moléculaire (par exemple, typage d'E. coli produisant des shigatoxines). Le présent document est notamment applicable aux bactéries et aux champignons. Certains articles peuvent être applicables à d'autres (micro)organismes, qui doivent être déterminés au cas par cas. Les études de validation conformément au présent document sont principalement destinées à être effectuées par des organismes ou des laboratoires experts impliqués dans la validation des méthodes, mais peuvent également être utilisées par un seul laboratoire, notamment lors de la réalisation d'une validation interne sous certaines conditions (voir ISO 16140‑4).
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16140-6
First edition
2019-11
Microbiology of the food chain —
Method validation —
Part 6:
Protocol for the validation of
alternative (proprietary) methods
for microbiological confirmation and
typing procedures
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des méthodes —
Partie 6: Protocole pour la validation de méthodes alternatives
(commerciales) pour la confirmation microbiologique et le typage
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
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Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 General principles for the validation of confirmation and typing methods.3
5 Strains . 4
6 Method comparison study . 4
6.1 General . 4
6.2 Selection of test strains . 4
6.3 Inclusivity study . 4
6.3.1 Testing of target strains . 4
6.3.2 Family level (non-Salmonella) . 5
6.3.3 Genus level (non-Salmonella) . 5
6.3.4 Species level (non-Salmonella) . 5
6.3.5 Microbial (sub)type level (non-Salmonella) . 5
6.3.6 Salmonella genus or species level . 5
6.3.7 Salmonella serovar level . 6
6.4 Exclusivity study . 6
6.4.1 Testing of non-target strains . 6
6.4.2 Family level (non-Salmonella) . 6
6.4.3 Genus level (non-Salmonella) . 6
6.4.4 Species level (non-Salmonella) . 6
6.4.5 Microbial (sub)type level (non-Salmonella) . 6
6.4.6 Salmonella genus or species level . 7
6.4.7 Salmonella serovar level . 7
6.5 Expression and interpretation of results . 7
6.6 Evaluation . 9
7 Interlaboratory study .10
7.1 General .10
7.2 Data sets to be obtained .10
7.3 Protocol .11
7.4 Expression of results .12
7.5 Interpretation and evaluation .12
Annex A (normative) Points to be considered when selecting strains for testing inclusivity
and exclusivity .14
Annex B (informative) Example of the validation of an alternative confirmation method to
the species level (Listeria monocytogenes) .16
Annex C (informative) Example of the validation of an alternative typing method to the
Salmonella serovar level (15 different serovars claimed) .19
Annex D (normative) Overview of the various options for validation under this document
and the acceptability limits .23
Bibliography .25
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
A list of all parts of the ISO 16140 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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Introduction
0.1 The ISO 16140 series
The ISO 16140 series has been expanded in response to the need for various ways to validate or verify
test methods. It is the successor to ISO 16140:2003. The ISO 16140 series consists of six parts with the
general title, Microbiology of the food chain — Method validation:
— Part 1: Vocabulary;
— Part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods against a reference method;
— Part 3: Protocol for the verification of validated reference methods and validated alternative methods
in a single laboratory;
— Part 4: Protocol for method validation in a single laboratory;
— Part 5: Protocol for factorial interlaboratory validation for non-proprietary methods;
— Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods for microbiological confirmation
and typing procedures.
ISO 17468 is a closely linked International Standard, which establishes technical rules for the
development and validation of standardized methods.
In general, two stages are needed before a method can be used in a laboratory.
— The first stage is the validation of the method. Validation is conducted using a study in a single
laboratory followed by an interlaboratory study (see ISO 16140-2, ISO 16140-5 and as described in
this document). In the case when a method is validated within one laboratory (see ISO 16140-4), no
interlaboratory study is conducted.
— The second stage is method verification, where a laboratory demonstrates that it can satisfactorily
perform a validated method. This is described in ISO 16140-3. Verification is only applicable to
methods that have been validated using an interlaboratory study.
In general, two types of methods are distinguished: reference methods and alternative methods.
A reference method is defined in ISO 16140-1:2016, 2.59, as an “internationally recognized and widely
accepted method”. The note to entry clarifies that “these are ISO standards and standards jointly
published by ISO and CEN or other regional/national standards of equivalent standing”.
In the ISO 16140 series, reference methods include standardized reference (ISO and CEN) methods as
defined in ISO 17468:2016, 3.5, as a “reference method described in a standard”.
An alternative method (method submitted for validation) is defined in ISO 16140-1:2016, 2.4, as a
“method of analysis that detects or quantifies, for a given category of products, the same analyte as
is detected or quantified using the corresponding reference method”. The note to entry clarifies that:
“The method can be proprietary. The term ‘alternative’ is used to refer to the entire ‘test procedure
and reaction system’. This term includes all ingredients, whether material or otherwise, required for
implementing the method.”.
ISO 16140-4 addresses validation within a single laboratory. The results are therefore only valid for
the laboratory that conducted the study. In this case, verification (as described in ISO 16140-3) is not
applicable. ISO 16140-5 describes protocols for non-proprietary methods where a more rapid validation
is required or when the method to be validated is highly specialized and the number of participating
laboratories required by ISO 16140-2 cannot be reached. ISO 16140-4 and ISO 16140-5 can be used
for validation against a reference method. ISO 16140-4 (qualitative and quantitative) and ISO 16140-5
(quantitative only) ca
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 16140-6
Première édition
2019-11
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Validation des
méthodes —
Partie 6:
Protocole pour la validation de
méthodes alternatives (commerciales)
pour la confirmation microbiologique
et le typage
Microbiology of the food chain — Method validation —
Part 6: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods for microbiological confirmation and typing procedures
Numéro de référence
©
ISO 2019
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 2
3 Termes et définitions . 2
4 Principes généraux applicables à la validation de méthodes de confirmation et de typage 3
5 Souches . 4
6 Étude comparative des méthodes . 4
6.1 Généralités . 4
6.2 Sélection des souches d’essai . 4
6.3 Étude d’inclusivité . 5
6.3.1 Essais de souches cibles . 5
6.3.2 Au niveau de la famille (non-Salmonella) . 5
6.3.3 Au niveau du genre (non-Salmonella) . 5
6.3.4 Au niveau de l’espèce (non-Salmonella) . 5
6.3.5 Au niveau du (sous)type microbien (non-Salmonella) . 5
6.3.6 Au niveau de l’espèce ou du genre Salmonella . 6
6.3.7 Au niveau du sérotype de Salmonella . 6
6.4 Étude d’exclusivité . 6
6.4.1 Essais de souches non cibles . 6
6.4.2 Au niveau de la famille (non-Salmonella) . 7
6.4.3 Au niveau du genre (non-Salmonella) . 7
6.4.4 Au niveau de l’espèce (non-Salmonella) . 7
6.4.5 Au niveau du (sous)type microbien (non-Salmonella) . 7
6.4.6 Au niveau de l’espèce ou du genre Salmonella . 7
6.4.7 Au niveau du sérotype de Salmonella . 8
6.5 Expression et interprétation des résultats . 8
6.6 Évaluation .10
7 Étude interlaboratoires .11
7.1 Généralités .11
7.2 Ensembles de données à obtenir.11
7.3 Protocole .12
7.4 Expression des résultats .13
7.5 Interprétation et évaluation .13
Annexe A (normative) Aspects à prendre en compte lors du choix des souches pour
les études d’inclusivité et d’exclusivité .15
Annexe B (informative) Exemple de méthode alternative de confirmation au niveau
de l’espèce (Listeria monocytogenes) .17
Annexe C (informative) Exemple de validation d’une méthode alternative de typage
au niveau du sérotype de Salmonella (15 sérotypes différents revendiqués) .20
Annexe D (normative) Aperçu des différentes options de validation conformément
au présent document et des limites d’acceptabilité .24
Bibliographie .26
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 9, Microbiologie.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 16140 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
0.1 Série ISO 16140
La série ISO 16140 a été étendue en réponse à la nécessité de disposer de différents protocoles pour la
validation ou la vérification des méthodes d’essai. Elle succède à l’ISO 16140:2003. La série ISO 16140
comprend six parties ayant le titre général Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des
méthodes:
— Partie 1: Vocabulaire;
— Partie 2: Protocole pour la validation de méthodes alternatives (commerciales) par rapport à une
méthode de référence;
— Partie 3: Protocole pour la vérification de méthodes alternatives validées et de référence appliquées
dans un laboratoire;
— Partie 4: Protocole pour la validation de méthodes dans un seul laboratoire;
— Partie 5: Protocole pour la validation interlaboratoires de méthodes non commerciales par plan
factoriel;
— Partie 6: Protocole pour la validation de méthodes alternatives (commerciales) pour la confirmation
microbiologique et le typage.
L’ISO 17468 est une Norme internationale étroitement liée, qui établit les règles techniques pour le
développement et la validation de méthodes normalisées.
En général, deux étapes sont nécessaires avant de pouvoir utiliser une méthode en laboratoire.
— La première étape est la validation de la méthode. Celle-ci est effectuée à l’aide d’une étude dans un
seul laboratoire suivie d’une étude interlaboratoires (voir l’ISO 16140-2, l’ISO 16140-5 et le présent
document). Dans le cas où une méthode est validée dans un seul laboratoire (voir l’ISO 16140-4),
aucune étude interlaboratoires n’est effectuée.
— La deuxième étape est la vérification des méthodes, au cours de laquelle un laboratoire prouve qu’il
peut effectuer une méthode validée de manière satisfaisante. Celle-ci est décrite dans l’ISO 16140-3.
La vérification n’est applicable qu’aux méthodes qui ont été validées à l’aide d’une étude
interlaboratoires.
On distingue en général deux types de méthodes: les méthodes de référence et les méthodes alternatives.
Une méthode de référence est définie dans l’ISO 16140-1:2016, 2.59, comme étant une «méthode
reconnue internationalement et largement acceptée». La note à l’article clarifie que «ces normes sont
des normes ISO et des normes publiées conjointement par l’ISO et le CEN ou d’autres normes régionales/
nationales de niveau équivalent».
Dans la série ISO 16140, les méthodes de référence comprennent les méthodes de référence normalisées
(ISO et CEN) telle que définie dans l’ISO 17468:2016, 3.5, en tant que «méthode de référence décrite
dans une norme».
Une méthode alternative (une méthode soumise à validation) est définie dans l’ISO 16140-1:2016, 2.4,
en tant que «méthode d’analyse permettant de détecter ou de quantifier, pour une catégorie de produits
donnée, le même analyte que celui détecté ou quantifié avec la méthode de référence correspondante».
La note à l’article clarifie que: «La méthode peut être commerciale. L’adjectif «alternatif» se réfère à la
totalité du «mode opératoire d’analyse et du système réactionnel». Ce terme recouvre tous les éléments
nécessaires à la mise en œuvre de la méthode, qu’ils soient matériels ou autres.»
L’ISO 16140-4 traite de la validation dans un seul laboratoire. Par conséquent, les résultats sont
uniquement valides pour le laboratoire effectuant l’étude. Dans ce cas, aucune vérification (comme décrit
dans l’ISO 16140-3) n’est
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.