ISO 6647-1:2020

Rice — Determination of amylose content — Part 1: Spectrophotometric method with a defatting procedure by methanol and with calibration solutions of potato amylose and waxy rice amylopectin

This document specifies a reference method for the determination of the amylose content of milled rice, non-parboiled. The method is applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %. This document can also be used for husked rice, maize, millet and other cereals if the extension of this scope has been validated by the user. NOTE Amylose values determined with this document can be compared with PDO and PGI legislation.

Riz — Détermination de la teneur en amylose — Partie 1: Méthode spectrophotométrique avec un mode opératoire de dégraissage au méthanol et des solutions d'étalonnage d'amylose de pomme de terre et d'amylopectine de riz gluant

Le présent document spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en amylose du riz usiné, non étuvé. La méthode est applicable à du riz avec une fraction massique d'amylose supérieure à 5 %. Le présent document peut aussi être utilisé pour le riz décortiqué, le maïs, le millet et d'autres céréales si l'extension de son domaine d'application a été validée par l'utilisateur. NOTE Les valeurs de teneur en amylose déterminées selon le présent document peuvent être comparées à la législation AOP et IGP.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 13-Jul-2020
• ICS: 67.060 - Cereals, pulses and derived products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 4 - Cereals and pulses
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 4/WG 4 - Amylose in rice
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 14-Jul-2020
• Due Date: 31-Jul-2020
• Completion Date: 14-Jul-2020

Relations

• Revises: ISO 6647-1:2015 - Rice — Determination of amylose content — Part 1: Reference method
• Effective Date: 06-May-2017

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6647-1
Third edition
2020-07
Rice — Determination of amylose
content —
Part 1:
Spectrophotometric method with a
defatting procedure by methanol and
with calibration solutions of potato
amylose and waxy rice amylopectin
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 1: Méthode spectrophotométrique avec un mode opératoire de
dégraissage au méthanol et des solutions d'étalonnage d'amylose de
pomme de terre et d'amylopectine de riz gluant
Reference number
ISO 6647-1:2020(E)
©
ISO 2020

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ISO 6647-1:2020(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2020
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved

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ISO 6647-1:2020(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Procedure. 4
8.1 Preparation of test sample . 4
8.2 Test portion and preparation of the test solution . 4
8.3 Preparation of the blank solution . 4
8.4 Preparation of the calibration graph . 4
8.4.1 Preparation of the set of calibration solutions . 4
8.4.2 Colour development and spectrophotometric measurements . 5
8.4.3 Plotting the calibration graph . 5
8.5 Determination . 5
9 Expression of results . 5
10 Precision . 5
10.1 Interlaboratory test. 5
10.2 Repeatability . 6
10.3 Reproducibility . 6
11 Test report . 6
Annex A (informative) Determination of the quality of the potato amylose stock suspension .7
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test . 9
Annex C (informative) Example of a flow injection analyser (FIA) for the determination of
amylose .10
Bibliography .11
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ISO 6647-1:2020(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4,
Cereals and pulses, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 338, Cereal and cereal products, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 6647-1:2015), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows.
— A spectrophotometric method with a defatting procedure by methanol and with calibration solutions
of potato amylose and waxy rice amylopectin has replaced the size exclusion chromatography method.
A list of all parts in the ISO 6647 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 6647-1:2020(E)
Rice — Determination of amylose content —
Part 1:
Spectrophotometric method with a defatting procedure by
methanol and with calibration solutions of potato amylose
and waxy rice amylopectin
1 Scope
This document specifies a reference method for the determination of the amylose content of milled rice,
non-parboiled. The method is applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %.
This document can also be used for husked rice, maize, millet and other cereals if the extension of this
scope has been validated by the user.
NOTE Amylose values determined with this document can be compared with PDO and PGI legislation.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 712, Cereals and cereal products — Determination of moisture content — Reference method
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
ISO 15914, Animal feeding stuffs — Enzymatic determination of total starch content
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
amylose
DEPRECATED: apparent amylose
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have glucose units linked in a
predominantly linear structure
3.2
amylopectin
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have from 6 to 100 linked glucose
units in a branched structure
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ISO 6647-1:2020(E)

4 Principle
Rice is ground to a very fine flour to break up the endosperm structure in order to aid complete
dispersion and gelatinization; the flour is then defatted. A test portion is dispersed in a sodium
hydroxide solution. An aliquot portion is taken to which an iodine solution is added. The absorbance, at
720 nm, of the colour complex formed is then determined using a spectrophotometer.
The amylose mass fraction of the sample is then read from a calibration graph, which is prepared using
mixtures of potato amylose and amylopectin to make allowance for the effect of amylopectin on the
colour of the amylose–iodine complex of the test solution.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Methanol, a volume fraction of 85 %.
5.2 Ethanol, a volume fraction of 95 %.
5.3 Sodium hydroxide, 1 mol/l solution.
5.4 Sodium hydroxide, 0,09 mol/l solution.
5.5 Detergent solution.
Dissolve sodium dodecylbenzene sulfonate corresponding to a concentration of 20 g/l. Just before use,
add sodium sulfite to a final concentration of 2 g/l.
5.6 Sodium hydroxide, for protein removal, 3 g/l solution.
5.7 Acetic acid, 1 mol/l solution.
5.8 Iodine solution.
Weigh, to the nearest 5 mg, 2,000 g of potassium iodide in a weighing bottle fitted with a stopper. Add
sufficient water to form a saturated solution. Add 0,200 g of iodine, weighed to the nearest 1 mg. When
all the iodine has dissolved, transfer the solution quantitatively to a 100 ml volumetric flask (6.6), make
up to volume with water and mix.
Prepare a fresh solution on each day of use and protect it from light.
5.9 Stock potato amylose suspension, free of amylopectin, 1 g/l.
5.9.1 Defat the potato amylose by refluxing with methanol (5.1) for 4 h to 6 h in an extractor at a rate of
5 to 6 droplets per second.
The potato amylose should be pure and should be tested by amperometric or potentiometric titration.
Some commercial preparations are impure and would give erroneously high results for the amylose
mass fraction of rice samples. Pure amylose should bind 19 % to 20 % of its own mass of iodine. For
checking the purity of amylose, see Annex A.
5.9.2 Spread the defatted potato amylose on a tray and leave for two days to allow evaporation of
residual methanol and for moisture content equilibrium to be reached.
Treat the amylopectin (5.10) and the test samples (see 8.1) in the same way.
2 © ISO 2020 – All rights reserved

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ISO 6647-1:2020(E)

5.9.3 Weigh (6.9) 100 mg ± 0,5 mg of the defatted and conditioned potato amylose into a 100 ml conical
flask (6.8). Carefully add 1 ml of ethanol (5.2), rinsing down any potato amylose adhering to the walls of
the flask. Add 9,0 ml of 1 mol/l sodium hydroxide solution (5.3) and mix. Then heat the mixture on a
boiling water bath (6.7) for 10 min to disperse the potato amylose. Allow to cool to room temperature
and transfer into a 100 ml volumetric flask (6.6).
Make up to volume with water and mix vigorously.
1 ml of this stock suspension contains 1 mg of potato amylose.
If the test samples, the
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 6647-1
Troisième édition
2020-07
Riz — Détermination de la teneur en
amylose —
Partie 1:
Méthode spectrophotométrique avec
un mode opératoire de dégraissage
au méthanol et des solutions
d'étalonnage d'amylose de pomme de
terre et d'amylopectine de riz gluant
Rice — Determination of amylose content —
Part 1: Spectrophotometric method with a defatting procedure by
methanol and with calibration solutions of potato amylose and waxy
rice amylopectin
Numéro de référence
ISO 6647-1:2020(F)
©
ISO 2020

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ISO 6647-1:2020(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Publié en Suisse
ii © ISO 2020 – Tous droits réservés

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ISO 6647-1:2020(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Mode opératoire. 4
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
8.2 Prise d’essai et préparation de la solution d’essai . 4
8.3 Préparation de la solution à blanc . 4
8.4 Élaboration de la courbe d’étalonnage. 5
8.4.1 Préparation du jeu de solutions d’étalonnage . 5
8.4.2 Développement de la couleur et mesurages spectrophotométriques . 5
8.4.3 Tracé de la courbe d’étalonnage . 5
8.5 Détermination . 5
9 Expression des résultats. 5
10 Fidélité . 6
10.1 Essai interlaboratoires . 6
10.2 Répétabilité . 6
10.3 Reproductibilité . 6
11 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Détermination de la qualité de la suspension mère d’amylose
de pomme de terre . 7
Annexe B (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires . 9
Annexe C (informative) Exemple d’analyseur par injection de flux (flow injection analyser,
FIA) pour la détermination de la teneur en amylose . .11
Bibliographie .12
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ISO 6647-1:2020(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 4, Céréales et légumineuses, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 338, Céréales
et produits céréaliers, du Comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 6647-1:2015), qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— une méthode spectrophotométrique avec un mode opératoire de dégraissage au méthanol et des
solutions d’étalonnage d’amylose de pomme de terre et d’amylopectine de riz gluant a remplacé la
méthode par chromatographie par exclusion stérique.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 6647 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés

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NORME INTERNATIONALE ISO 6647-1:2020(F)
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 1:
Méthode spectrophotométrique avec un mode
opératoire de dégraissage au méthanol et des solutions
d'étalonnage d'amylose de pomme de terre et
d'amylopectine de riz gluant
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en amylose
du riz usiné, non étuvé. La méthode est applicable à du riz avec une fraction massique d’amylose
supérieure à 5 %.
Le présent document peut aussi être utilisé pour le riz décortiqué, le maïs, le millet et d’autres céréales
si l’extension de son domaine d’application a été validée par l’utilisateur.
NOTE Les valeurs de teneur en amylose déterminées selon le présent document peuvent être comparées à la
législation AOP et IGP.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 712, Céréales et produits céréaliers — Détermination de la teneur en eau — Méthode de référence
ISO 8466-1, Qualité de l’eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d’analyse et estimation des
caractères de performance — Partie 1: Évaluation statistique de la fonction linéaire d’étalonnage
ISO 15914, Aliments des animaux — Détermination enzymatique de la teneur totale en amidon
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et les définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
amylose
DÉCONSEILLÉ: amylose apparente
constituant polysaccharide de l’amidon, dont les macromolécules contiennent des unités de glucose
reliées pour former une structure majoritairement linéaire
© ISO 2020 – Tous droits réservés 1

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ISO 6647-1:2020(F)

3.2
amylopectine
constituant polysaccharide de l’amidon, dont les macromolécules contiennent entre 6 et 100 unités de
glucose reliées pour former une structure ramifiée
4 Principe
Le riz est broyé jusqu’à l’obtention d’une très fine farine pour rompre la structure de l’endosperme, en
vue de faciliter la dispersion complète et la gélatinisation; la farine est ensuite dégraissée. Une prise
d’essai est dispersée dans une solution d’hydroxyde de sodium. Une partie aliquote est prélevée, à
laquelle est ajoutée une solution d’iode. L’absorbance à 720 nm du complexe coloré formé est déterminée
à l’aide d’un spectrophotomètre.
La fraction massique d’amylose de l’échantillon est ensuite lue sur une courbe d’étalonnage, qui est
préparée en utilisant des mélanges d’amylose de pomme de terre et d’amylopectine pour tenir compte
de l’effet de l’amylopectine sur la couleur du complexe amylose/iode de la solution d’essai.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau
distillée, déminéralisée ou de pureté équivalente.
5.1 Méthanol, d’une fraction volumique de 85 %.
5.2 Éthanol, d’une fraction volumique de 95 %.
5.3 Hydroxyde de sodium, solution à 1 mol/l.
5.4 Hydroxyde de sodium, solution à 0,09 mol/l.
5.5 Solution détergente.
Dissoudre du dodécylbenzènesulfonate de sodium correspondant à une concentration de 20 g/l. Juste
avant utilisation, ajouter du sulfite de sodium à une concentration finale de 2 g/l.
5.6 Hydroxyde de sodium, pour l’élimination des protéines, solution à 3 g/l.
5.7 Acide acétique, solution à 1 mol/l.
5.8 Solution d’iode.
Peser, à 5 mg près, 2,000 g d’iodure de potassium dans un flacon à tare équipé d’un bouchon. Ajouter
de l’eau en quantité suffisante pour obtenir une solution saturée. Ajouter 0,200 g d’iode, à 1 mg près.
Transférer la solution quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml (6.6) une fois l’iode entièrement
dissous, puis compléter au volume avec de l’eau, et mélanger.
Préparer une nouvelle solution chaque jour avant analyse et la maintenir à l’abri de la lumière.
5.9 Suspension mère d’amylose de pomme de terre, exempte d’amylopectine, 1 g/l.
5.9.1 Dégraisser l’amylose de pomme de terre par reflux avec du méthanol (5.1) pendant 4 h à 6 h dans
un extracteur à une vitesse de 5 à 6 gouttelettes par seconde.
Il convient que l’amylose de pomme de terre soit pure et que cela soit vérifié par titrage ampérométrique
ou potentiométrique. Certaines préparations du commerce sont impures et conduiraient à des résultats
2 © ISO 2020 – Tous droits réservés

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ISO 6647-1:2020(F)

faussement élevés pour la fraction massique d’amylose des échantillons de riz. Pour l’amylose pure, il
convient que 19 % à 20 % de sa propre masse se lient avec l’iode. Pour vérifier la pureté de l’amylose,
voir l’Annexe A.
5.9.2 Étaler l’amylose de pomme de terre dégraissée sur un plateau et laisser reposer pendant
deux jours pour permettre l’évaporation du méthanol résiduel et pour que l’équilibre de la teneur en eau
soit atteint.
Traiter l’amylopectine (5.10) et les échantillons pour essai (voir 8.1) de la même manière.
5.9.3 Peser (6.9) 100 mg ± 0,5 mg de l’amylose de pomme de terre dégraissée et conditionnée dans
une fiole conique de 100 ml (6.8). Ajouter avec précaution 1 ml d’éthanol (5.2), en rinçant l’amylose
de pomme de terre éventuelle qui adhère aux parois de la fiole. Ajouter 9,0 ml de solution d’hydroxyde
de sodium à 1 mol/l (5.3) et mélanger. Chauffer ensuite le mélange dans un bain d’eau bouillante (6.7)
pendant 10 min pour disperser l’amylose de pomme de terre. Laisser l’échantillon refroidir à la
température ambiante et le transvaser dans une fiole jaugée de 100 ml (6.6).
Compléter au volume avec de l’eau et mélanger vigoureusement.
1 ml de cette suspension mère contient 1 mg d’amylose de pomme de terre.
Si les échantillons pour essai, l’amylose et l’amylopectine sont conditionnés dans le même environnement,
aucune correction pour la teneur en eau n’est nécessaire et les résultats sont obtenus sur une base
exprimée en matière sèche de riz usiné. Si les échantillons pour essai et les solutions mères ne sont pas
préparés dans les mêmes conditions, la teneur en eau des échantillons et des solutions mères doit être
déterminée comme spécif
...

FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 6647-1
ISO/TC 34/SC 4
Rice — Determination of amylose
Secretariat: SAC
content —
Voting begins on:
2020-04-22
Part 1:
Voting terminates on:
Spectrophotometric method with a
2020-06-17
defatting procedure by methanol and
with calibration solutions of potato
amylose and waxy rice amylopectin
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 1: Méthode spectrophotométrique avec un mode opératoire de
dégraissage au méthanol et des solutions d'étalonnage d'amylose de
pomme de terre et d'amylopectine de riz gluant
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 6647-1:2020(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
©
NATIONAL REGULATIONS. ISO 2020

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/FDIS 6647-1:2020(E)

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ISO/FDIS 6647-1:2020(E)

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Procedure. 4
8.1 Preparation of test sample . 4
8.2 Test portion and preparation of the test solution . 4
8.3 Preparation of the blank solution . 4
8.4 Preparation of the calibration graph . 4
8.4.1 Preparation of the set of calibration solutions . 4
8.4.2 Colour development and spectrophotometric measurements . 5
8.4.3 Plotting the calibration graph . 5
8.5 Determination . 5
9 Expression of results . 5
10 Precision . 5
10.1 Interlaboratory test. 5
10.2 Repeatability . 6
10.3 Reproducibility . 6
11 Test report . 6
Annex A (informative) Determination of the quality of the potato amylose stock suspension .7
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test . 9
Annex C (informative) Example of a flow injection analyser (FIA) for the determination of
amylose .10
Bibliography .11
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ISO/FDIS 6647-1:2020(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4,
Cereals and pulses, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 338, Cereal and cereal products, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 6647-1:2015), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows.
— A spectrophotometric method with a defatting procedure by methanol and with calibration solutions
of potato amylose and waxy rice amylopectin has replaced the size exclusion chromatography method.
A list of all parts in the ISO 6647 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 6647-1:2020(E)
Rice — Determination of amylose content —
Part 1:
Spectrophotometric method with a defatting procedure by
methanol and with calibration solutions of potato amylose
and waxy rice amylopectin
1 Scope
This document specifies a reference method for the determination of the amylose content of milled rice,
non-parboiled. The method is applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %.
This document can also be used for husked rice, maize, millet and other cereals if the extension of this
scope has been validated by the user.
NOTE Amylose values determined with this document can be compared with PDO and PGI legislation.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 712, Cereals and cereal products — Determination of moisture content — Reference method
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of
performance characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
ISO 15914, Animal feeding stuffs — Enzymatic determination of total starch content
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
amylose
DEPRECATED: apparent amylose
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have glucose units linked in a
predominantly linear structure
3.2
amylopectin
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have from 6 to 100 linked glucose
units in a branched structure
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ISO/FDIS 6647-1:2020(E)

4 Principle
Rice is ground to a very fine flour to break up the endosperm structure in order to aid complete
dispersion and gelatinization; the flour is then defatted. A test portion is dispersed in a sodium
hydroxide solution. An aliquot portion is taken to which an iodine solution is added. The absorbance, at
720 nm, of the colour complex formed is then determined using a spectrophotometer.
The amylose mass fraction of the sample is then read from a calibration graph, which is prepared using
mixtures of potato amylose and amylopectin to make allowance for the effect of amylopectin on the
colour of the amylose–iodine complex of the test solution.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Methanol, a volume fraction of 85 %.
5.2 Ethanol, a volume fraction of 95 %.
5.3 Sodium hydroxide, 1 mol/l solution.
5.4 Sodium hydroxide, 0,09 mol/l solution.
5.5 Detergent solution.
Dissolve sodium dodecylbenzene sulfonate corresponding to a concentration of 20 g/l. Just before use,
add sodium sulfite to a final concentration of 2 g/l.
5.6 Sodium hydroxide, for protein removal, 3 g/l solution.
5.7 Acetic acid, 1 mol/l solution.
5.8 Iodine solution.
Weigh, to the nearest 5 mg, 2,000 g of potassium iodide in a weighing bottle fitted with a stopper. Add
sufficient water to form a saturated solution. Add 0,200 g of iodine, weighed to the nearest 1 mg. When
all the iodine has dissolved, transfer the solution quantitatively to a 100 ml volumetric flask (6.6), make
up to volume with water and mix.
Prepare a fresh solution on each day of use and protect it from light.
5.9 Stock potato amylose suspension, free of amylopectin, 1 g/l.
5.9.1 Defat the potato amylose by refluxing with methanol (5.1) for 4 h to 6 h in an extractor at a rate of
5 to 6 droplets per second.
The potato amylose should be pure and should be tested by amperometric or potentiometric titration.
Some commercial preparations are impure and would give erroneously high results for the amylose
mass fraction of rice samples. Pure amylose should bind 19 % to 20 % of its own mass of iodine. For
checking the purity of amylose, see Annex A.
5.9.2 Spread the defatted potato amylose on a tray and leave for two days to allow evaporation of
residual methanol and for moisture content equilibrium to be reached.
Treat the amylopectin (5.10) and the test samples (see 8.1) in the same way.
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ISO/FDIS 6647-1:2020(E)

5.9.3 Weigh (6.9) 100 mg ± 0,5 mg of the defatted and conditioned potato amylose into a 100 ml conical
flask (6.8). Carefully add 1 ml of ethanol (5.2), rinsing down any potato amylose adhering to the walls of
the flask. Add 9,0 ml of 1 mol/l sodium hydroxide solution (5.3) and mix. Then h
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