ISO 22662:2024

Milk and milk products — Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (reference method)

This document specifies a reference method for the determination of lactose content of raw milk, heat-treated milks, dried milk, dairy permeate, dairy permeate powder, and raw and pasteurized cream. The method does not apply to fermented milks and milks to which oligosaccharides have been added, nor to low-lactose or lactose-free milks.

Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en lactose par chromatographie liquide haute performance (méthode de référence)

Le présent document spécifie une méthode de référence permettant de déterminer la teneur en lactose du lait cru, des laits traités thermiquement, du lait sec, des perméats laitiers, des perméats laitiers en poudre, ainsi que de la crème crue et pasteurisée. Cette méthode ne s’applique ni aux laits fermentés, ni aux laits auxquels des oligosaccharides ont été ajoutés, ni aux laits à faible teneur en lactose, ni aux laits sans lactose.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 06-Mar-2024
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 07-Mar-2024
• Due Date: 13-Dec-2023
• Completion Date: 07-Mar-2024

Relations

• Revises: ISO 22662:2007 - Milk and milk products — Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method)
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

International
Standard
ISO 22662
IDF 198
Second edition
Milk and milk products —
2024-03
Determination of lactose content
by high-performance liquid
chromatography (reference
method)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en lactose
par chromatographie liquide haute performance (méthode de
référence)
Reference numbers
IDF 198:2024(en) © ISO and IDF 2024

IDF 198:2024(en)
© ISO and IDF 2024
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or ISO’s member body in the country of the requester.
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Published in Switzerland
ii
IDF 198:2024(en)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 3
9 Procedure . 4
9.1 Preparation of the standard solution .4
9.2 Preparation of test portion .4
9.2.1 Fluid milk or dairy permeate test sample .4
9.2.2 Dairy powder test sample .4
9.2.3 Cream test sample .4
9.3 Preparation of filtrate .4
9.4 HPLC determination .5
9.4.1 Preliminary preparation of HPLC .5
9.4.2 Chromatographic conditions .5
10 Calculation and expression of results . 6
10.1 Calculation .6
10.2 Expression of results . .7
11 Precision . 7
11.1 Interlaboratory test . .7
11.2 Repeatability .7
11.3 Reproducibility .7
12 Test report . 7
Annex A (informative) Results of interlaboratory test . 8
Bibliography .10

iii
IDF 198:2024(en)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk
and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 22662 | IDF 198:2007), which has been
technically revised.
The main changes are as follows:
— the Scope has been extended to dairy permeate powders and dairy permeates, including validation data;
— test portions have been adapted accordingly.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.

iv
IDF 198:2024(en)
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national interest
groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and governments/
food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis and
sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International Standards
using the logos and reference numbers of both organizations.
IDF draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). IDF takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, IDF had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
This document was prepared by the IDF Standing Committee on Analytical Methods for Composition and
ISO Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being
published jointly by ISO and IDF.
The work was carried out by the IDF/ISO Action Team C52 of the Standing Committee on Analytical Methods
for Composition under the aegis of its project leader P. Trossat (FR).

v
International Standard
IDF 198:2024(en)
Milk and milk products — Determination of lactose content
by high-performance liquid chromatography (reference
method)
1 Scope
This document specifies a reference method for the determination of lactose content of raw milk, heat-
treated milks, dried milk, dairy permeate, dairy permeate powder, and raw and pasteurized cream.
The method does not apply to fermented milks and milks to which oligosaccharides have been added, nor to
low-lactose or lactose-free milks.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes
requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,
the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 648, Laboratory glassware — Single-volume pipettes
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
lactose content
mass fraction of substances
Note 1 to entry: The lactose content is determined according to the procedure specified in this document.
Note 2 to entry: The mass fraction can be expressed as a percentage.
4 Principle
An internal standard [d(+)-melezitose] is added to a weighed volume of test sample and to lactose standards.
A chemical reagent (Biggs-Szijarto solution) is added to precipitate out the fat and the protein component
fractions of milk. The filtrate is filtered twice prior to injection, first through paper filter and then through a
0,45 µm nylon filter. The lactose and the internal standard are separated by a cation exchange column in the
lead form and detected by a differential refractometer detector or other suitable detector. As mobile phase,
high-performance liquid chromatography (HPLC) grade water is used.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.

IDF 198:2024(en)
5.1 Degassed HPLC grade water.
Filter the water, conforming to the requirements of ISO 3696, grade 1, obtained from the water purification
unit (6.9) using the solvent filtration unit (6.10). To improve the pump performance and to obtain a stable
baseline, degas the mobile phase daily by selecting one of the available techniques such as sparging with
helium, sonication, vacuum or in-line degassing system.
5.2 d(+)-Melezitose hydrate solution, purity ≥ 99 %, c(C H O ·H O) = 50 mg/ml.
18 32 16 2
Dissolve an amount of d(+)-melezitose hydrate in water (5.1) to give a final concentration equivalent to
50 mg/ml of the anhydrous form. The d(+)-melezitose solution can be stored at 4 °C for no longer than
one week.
5.3 α-Lactose monohydrate, C H O ·H O, purity > 99 %.
12 22 11 2
Before use, dry the α-lactose monohydrate at 70 °C for 4 h. Cool it to room temperature in a desiccator.
NOTE After drying, the lactose remains in the monohydrate form.
5.4 Biggs-Szijarto solution.
Dissolve 25 g of zinc acetate dihydrate, Zn(CH COO) ·2H O and 12,5 g of phosphotungstic acid monohydrate
3 2 2
(W O ·H PO ·H O) in about 100 ml of HPLC grade water (5.1) in a 200 ml one-mark volumetric flask.
12 36 3 4 2
Add 20 ml of glacial acetic acid (CH COOH). Dilute to the 200 ml mark with HPLC grade water (5.1) and mix.
After use, the solution may be
...

Norme
internationale
ISO 22662
FIL 198
Deuxième édition
Lait et produits laitiers —
2024-03
Détermination de la teneur en
lactose par chromatographie
liquide haute performance
(méthode de référence)
Milk and milk products — Determination of lactose content by
high-performance liquid chromatography (reference method)
Numéros de référence
FIL 198:2024(fr) © ISO et FIL 2024

FIL 198:2024(fr)
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Web: www.iso.org Web: www.fil-idf.org
Publié en Suisse
© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
ii
FIL 198:2024(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Préparation de la solution témoin .4
9.2 Préparation d’une prise d’essai.4
9.2.1 Échantillon pour essai de lait liquide ou de perméat laitier .4
9.2.2 Échantillon pour essai de produit laitier en poudre .4
9.2.3 Échantillon pour essai de crème .4
9.3 Préparation du filtrat .5
9.4 Dosage par CLHP.5
9.4.1 Préparation préliminaire de la CLHP .5
9.4.2 Conditions chromatographiques.5
10 Calcul et expression des résultats . 7
10.1 Calcul .7
10.2 Expression des résultats . .7
11 Fidélité . 7
11.1 Essai interlaboratoires .7
11.2 Répétabilité .7
11.3 Reproductibilité . .7
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Résultats de l’essai interlaboratoires . 9
Bibliographie .11

© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
iii
FIL 198:2024(fr)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n'avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale du lait (FIL). Il est publié conjointement par l’ISO
et la FIL.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 22662 | FIL 198:2007), qui a fait l’objet
d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— le domaine d’application a été étendu aux perméats laitiers en poudre et aux perméats laitiers, y compris
les données de validation;
— les prises d’essai ont été adaptées en conséquence.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.

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iv
FIL 198:2024(fr)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente les
intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont organisés
en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de groupes d’intérêt
nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des acteurs de l’industrie
de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des universitaires et des
représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
La FIL attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. La FIL ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, la FIL n'avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie
de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent de la FIL chargé des Méthodes d’analyse
de la composition de la Fédération internationale du lait (FIL) et le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL.
L’ensemble des travaux a été confié au groupe de projet mixte ISO/FIL C52 du Comité permanent chargé des
Méthodes d’analyse de la composition, sous la conduite de son chef de projet, P. Trossat (FR).

© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
v
Norme internationale
FIL 198:2024(fr)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en
lactose par chromatographie liquide haute performance
(méthode de référence)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de référence permettant de déterminer la teneur en lactose du
lait cru, des laits traités thermiquement, du lait sec, des perméats laitiers, des perméats laitiers en poudre,
ainsi que de la crème crue et pasteurisée.
Cette méthode ne s’applique ni aux laits fermentés, ni aux laits auxquels des oligosaccharides ont été ajoutés,
ni aux laits à faible teneur en lactose, ni aux laits sans lactose.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour
les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 648, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un volume
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
teneur en lactose
fraction massique des substances
Note 1 à l'article: La teneur en lactose se détermine conformément au mode opératoire spécifié dans le présent
document.
Note 2 à l'article: La fraction massique peut être exprimée en pourcentage.
4 Principe
Un étalon interne [d(+)-mélézitose] est ajouté à un volume pesé d’échantillon pour essai et aux étalons de
lactose. Un réactif chimique (solution de Biggs-Szijarto) est ajouté pour précipiter les fractions de composants
gras et protéiques du lait. Le filtrat est filtré deux fois avant l’injection, d’abord à l’aide d’un filtre en papier,
puis à l’aide d’un filtre en nylon de porosité 0,45 µm. Le lactose et l’étalon interne sont séparés par une
colonne échangeuse de cations remplie sous forme de plomb et détectés par un réfractomètre différentiel ou

© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
FIL 198:2024(fr)
tout autre détecteur adapté. De l’eau de qualité « chromatographie liquide haute performance » (CLHP) est
utilisée comme phase mobile.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau de qualité CLHP dégazée.
À l’aide de l’unité de filtration du solvant (6.10), filtrer de l’eau conforme aux exigences de l’ISO 3696, qualité 1,
obtenue à partir de l’unité de purification de l’eau (6.9). Pour améliorer la performance de la pompe et pour
obtenir une ligne de base stable, dégazer la phase mobile quotidiennement à l’aide de l’une des techniques
disponibles comme le barbotage par l’hélium, les ultrasons ou à l’aide d’un système de dégazage à vide ou en
ligne.
5.2 Solution de d(+)-mélézitose hydrate, pureté ≥ 99 %, c(C H O ·H O) = 50 mg/ml.
18 32 16 2
Dissoudre une quantité équivalente de d(+)-mélézitose hydrate dans de l’eau (5.1) pour obtenir une
concentration finale de 50 mg/ml de la forme anhydre. La solution de d(+)-mélézitose peut être conservée à
4 °C pendant une semaine tout au plus.
5.3 α-lactose monohydrate, C H O ·H O, pureté > 99 %.
12 22 11 2
Avant utilisation, sécher le α-lactose monohydrate à 70 °C pendant 4 h. Le laisser refroidir à température
ambiante dans un dessiccateur.
NOTE Après séchage, le lactose demeure sous sa forme monohydrate.
5.4 Solution Biggs-Szijarto.
Dans une fiole jaugée à un trait de 200 ml, dissoudre 25 g d’acétate de zinc dihydrate, Zn(CH COO) ·2H O
3 2 2
et 12,5 g d’acide phosphotungstique monohydrate (W O ·H PO ·H O) dans environ 100 ml d’eau de qualité
12 36 3 4 2
CLHP (5.1).
Ajouter 20 ml d’acide acétique glacial (CH COOH). Compléter à 200 ml avec de l’eau de qualité CLHP (5.1),
puis mélanger. Après utilisation, la solution peut être conservée à 4 °C pendant une semaine tout au plus.
PRÉCAUTIONS DE SÉCURITÉ — Suivre les recommandations du fabricant en matière de santé et de
sécurité quant à la conservation et à la manipulation de ces produits chimiques.
6 Appareillage
Équipe
...