Textiles — Determination of antifungal activity of textile products — Part 2: Plate count method

ISO 13629-2:2014 specifies a test method for quantitative determination of antifungal activity by plate count method. ISO 13629-2:2014 is applicable to various kinds of textile products such as fibres, yarns, fabrics, clothing, bedclothes, home furnishings, and other miscellaneous goods.

Textiles — Détermination de l'activité antifongique des produits textiles — Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de gélose

L'ISO 13629-2:2014 spécifie une méthode d'essai pour la détermination quantitative de l'activité antifongique par dénombrement sur plaque de gélose. L'ISO 13629-2:2014 s'applique aux différents types de produits textiles, tels que les fibres, les fils, les étoffes, les vêtements, les articles de literie, les tissus d'ameublement et divers autres types d'articles.

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Publication Date
16-Jun-2014
Current Stage
9093 - International Standard confirmed
Completion Date
24-Oct-2019
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ISO 13629-2:2014 - Textiles -- Determination of antifungal activity of textile products
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ISO 13629-2:2014 - Textiles -- Détermination de l'activité antifongique des produits textiles
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Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 13629-2
First edition
2014-06-15
Textiles — Determination of
antifungal activity of textile
products —
Part 2:
Plate count method
Textiles — Détermination de l’activité antifongique des produits
textiles —
Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
Reference number
ISO 13629-2:2014(E)
©
ISO 2014

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ISO 13629-2:2014(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved

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ISO 13629-2:2014(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative reference . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Safety precaution . 2
6 Reference fungi . 2
7 Apparatus . 2
8 Reagents and culture media . 4
8.1 Pure water . 4
8.2 Anionic surfactant . 4
8.3 Culture medium . 4
9 Fungi preservation and use . 6
10 Spore suspension . 6
10.1 General . 6
10.2 Suspending spores in culture media . 7
10.3 Collection and dispersion of spore suspension from a culture medium . 7
10.4 Filtering to remove hyphae and spore thread . 7
10.5 Using centrifuge and re-suspension to remove supernatant . 7
10.6 Confirming the concentration of spore suspension . 8
10.7 Adjusting spore suspension for testing . 8
10.8 Enumeration of inoculum . 8
11 Testing procedure . 8
11.1 Inoculation and preparation of specimens . 8
11.2 Plate count method procedure .11
12 Test results
.13
12.1 Judgment of test effectiveness .13
12.2 Calculation of antifungal activity value .13
13 Test report .14
Annex A (normative) Fungi used in this part of ISO 13629 .15
Annex B (informative) Antifungal efficacy .16
Bibliography .17
© ISO 2014 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 13629-2:2014(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 38, Textiles.
ISO 13629 consists of the following parts, under the general title Textiles — Determination of antifungal
activity of textile products:
— Part 1: Luminescence method
— Part 2: Plate count method
iv © ISO 2014 – All rights reserved

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ISO 13629-2:2014(E)

Introduction
This part of ISO 13629 adopts the plate count method as a basis of quantitative determination of
antifungal activity.
The following are characteristics of the plate count method:
— conventional method which is easy to operate in bacteriological laboratories;
— no need to use special apparatus such as a lumino photometer;
— long history and common procedure.
© ISO 2014 – All rights reserved v

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 13629-2:2014(E)
Textiles — Determination of antifungal activity of textile
products —
Part 2:
Plate count method
1 Scope
This part of ISO 13629 specifies a test method for quantitative determination of antifungal activity by
plate count method.
This part of ISO 13629 is applicable to various kinds of textile products such as fibres, yarns, fabrics,
clothing, bedclothes, home furnishings, and other miscellaneous goods.
2 Normative reference
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 105-F02, Textiles — Tests for colour fastness — Part F02: Specification for cotton and viscose adjacent
fabrics
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
control fabric
fabric used to validate the growth condition of test fungi
Note 1 to entry: Control specimens are sampled from the control fabric.
Note 2 to entry: The control fabric may be the same fabric as the fabric to be tested but without antifungal
treatment. If this is not available, a 100 % cotton fabric without fluorescent brighteners or other finish, complying
with the requirements of ISO 105-F02, is used as control fabric, after washing at the temperature of 60 °C without
detergents or any brighteners, with mechanical agitation and rinsing.
3.2
antifungal agent
chemical agent to prevent or mitigate the growth of fungi or to reduce the number of fungi
3.3
antifungal treatment
treatment to prevent or mitigate the growth of fungi or to reduce the number of fungi
3.4
spore suspension
liquid with evenly dispersed fungal spores in sterilized water containing an anionic surfactant
© ISO 2014 – All rights reserved 1

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ISO 13629-2:2014(E)

3.5
plate count method
method in which the number of fungi present after incubation is calculated by counting the number of
colonies according to a ten-time dilution method
Note 1 to entry: The results are expressed in CFU (Colony Forming Unit).
3.6
neutralizer
chemical agent used to inactivate, neutralize, or quench the antifungal properties of antifungal agents
4 Principle
A test specimen and a control specimen are inoculated with spore suspension of reference fungi and
incubated at 30 °C for 48 h.
In this part of ISO 13629, fungal growth is quantitatively determined by the visual counting of colonies
on the agar plate as CFU and the fungal activity is calculated by CFU.
In case the test specimen absorbs water, the absorption method is recommended. In case the test
specimen does not absorb water, the transfer method is recommended.
5 Safety precaution
The test method specified herein requires use of fungi.
According to ISO 7218, this test shall be performed only by personnel with training and experience in
microbiological techniques.
All regulations, rules, and recommendations regarding appropriate safety precautions in the country
concerned may be consulted and followed.
6 Reference fungi
The fungi to be used shall be selected from Annex A, Table A.1.
The equivalent fungi types obtained from other agencies of the World Federation for Culture Collection
(WFCC) shall be used as agreed upon between interested parties.
The strain number and supply source of the fungi used shall be stated in the test report.
7 Apparatus
Usual laboratory apparatuses and, in particular, the following apparatuses are used. When relevant, the
items have to be sterilized before using.
7.1 Gauze, sterilized.
7.2 Petri dish, made of glass or plastic, with a diameter of about 60 mm or 90 mm.
7.3 Autoclave, capable of maintaining the temperature of (121 ± 2) °C (equivalent to 103 kPa).
7.4 Platinum loop, with a loop of 2 mm to 4 mm in diameter (or plastic equivalent).
7.5 L-shaped platinum colony hook (or plastic equivalent).
2 © ISO 2014 – All rights reserved

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ISO 13629-2:2014(E)

7.6 Incubator, capable of maintaining a temperature in a range from 25 °C to 37 °C with a tolerance of
±2 °C.
7.7 Vial, capacity of 30 ml screw-top glass vial with polytetrafluoroethylene or silicone gasket and
polypropylene cap. It shall be carefully washed in alkaline or neutral detergent, rinsed, and dried.
7.8 Glass funnel.
7.9 Pipettes, capacity of 0,2 ml, 1 ml, 5 ml, and 10 ml with a tolerance of 0,5 % or less and with a tip
made of glass or plastic.
7.10 Pasteur pipette, for microbiological testing (or plastic equivalent).
7.11 Conical flask, capacity of 100 ml to 500 ml.
7.12 Tweezers, made of material which can be sterilized.
7.13 Centrifuge, with centrifugal acceleration of approximate 2 000 × g.
7.14 Centrifuge tube, used for centrifuge.
6 6
7.15 Hemacytometer, capable of measuring 1 × 10 cells/ml to 3 × 10 cells/ml.
7.16 Microscope, capable of 200x magnification.
7.17 Ultrasonic cleaner, compact for experiment tools, with frequency of approximately 30 kHz to
50 kHz.
7.18 pH meter, with glass electrodes for biochemical testing or equivalent pH paper.
7.19 Erlenmeyer flask, capacity of 100 ml.
7.20 Cutting template, made of stainless steel with a diameter of (3,8 ± 0,1) cm.
7.21 Stainless steel cylinder, with a weight of (200 ± 10) g and a diameter of (3,5 ± 0,1) cm.
7.22 Shaker, capable of producing a Vortex shaking action.
7.23 Paddle blender [Stomacher-type], capable of speed 6 blows/s to 8 blows/s with the corresponding
disposable containers.
7.24 Humidity chamber, a tropical chamber or other container capable of maintaining a high humidity
atmospheric condition.
7.25 Refrigerator, capable of maintaining a temperature of between 2 °C and 8 °C with a tolerance of
±2 °C.
7.26 Freezers, adjustable to a temperature below −70 °C and below –20 °C with a tolerance of ±2 °C.
7.27 Balance, capable of measuring 0,01 g as the readability.
© ISO 2014 – All rights reserved 3

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ISO 13629-2:2014(E)

7.28 Disposable plastic bags, suitable for containing food products to be used for the shake-out of
sample.
7.29 Microbiological safety cabinet (MSC Type II), designed for microbiological tests use, or other
system with equivalent performances.
7.30 Water baths, one capable of maintaining a constant temperature of (46 ± 2) °C and another capable
of maintaining a temperature of 70 °C to 90 °C.
8 Reagents and culture media
Reagents used in tests shall be of analytical grade and/or suited for microbiological purposes.
Dehydrated products available on the commercial market are recommended for use in preparing the
culture media strictly in accordance with the manufacturer’s instructions.
8.1 Pure water
Analytical-grade water for microbiological media preparation which is freshly distilled and/or ion-
exchanged and/or ultra-filtered and/or filtered with RO (reverse osmosis).
It shall be free from all toxic or fungi inhibitory substances.
8.2 Anionic surfactant
Dioctyl sodium sulfosuccinate to prepare spore suspension. The concentration of the anionic surfactant
in pure water (8.1) is 50 mg/l. Sterilize this solution by an autoclave (7.3) at 121 °C for 20 min.
8.3 Culture medium
Use a culture medium prepared as described below. Commercially prepared items may be used after
appropriate validation.
Culture media which will not be used immediately after preparation shall be stored at 5 °C to 10 °C and
discarded after one month.
8.3.1 Sabouraud dextrose broth (SDB)
Peptone 10 g
Dextrose 20 g
Pure water 1 000 ml
pH after sterilization 5,6 ± 0,2
8.3.2 Potato dextrose agar (PDA)
Potato infusion from 200 g
Dextrose 20 g
Agar 15 g
Pure water 1 000 ml
pH after sterilization 5,6 ± 0,2
4 © ISO 2014 – All rights reserved

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ISO 13629-2:2014(E)

This medium encourages mould sporulation.
8.3.3 Sabouraud dextrose agar (SDA)
Pepsic meat peptone 10 g
Dextrose 40 g
Agar 15 g
Pure water 1 000 ml (final volume)
Follow the indications of the supplier.
pH after sterilization 5,6 ± 0,2
NOTE This medium will be used for the transfer method.
8.3.4 Slant culture
8.3.4.1 Pour approximately 10 ml of pre-heated and fully dissolved PDA (described in 8.3.2) into a
sterilized test tube.
8.3.4.2 Put a cotton plug on and sterilize it with steam after sterilization.
8.3.4.3 Place the test tube at an approximately 15° angle against a level surface on a clean laboratory
table, and leave the contents to solidify.
8.3.4.4 When there is no bleed water on the solidified agar, dissolve, and solidify it again for use.
8.3.5 Neutralizing solution, SCDLP medium
Polysorbate 80 30 g
Egg yolk lecithin 3 g
Histidine hydrochloride 1 g
Meat or casein peptone 1 g
Sodium chloride (NaCl) 4,3 g
Monopotassium phosphate 3,6 g
Disodium phosphate dehydrate 7,2 g
Water 1 000 ml (final volume)
pH after sterilization 7,2 ± 0,2
When sufficient neutralizing power cannot be achieved, the content of polysorbate 80 or lecithin may be
adjusted or another neutralizing agent may be added. Commercial solutions of neutralizer can be used
after having tested their efficacy (see Annex B). The use of any unspecified neutralizer shall be recorded
along with the name and concentration.
...

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 13629-2
ISO/TC 38 Secretariat: JISC
Voting begins on: Voting terminates on:
2013-10-23 2014-01-23
Textiles — Determination of antifungal activity of textile
products —
Part 2:
Plate count method
Textiles — Détermination de l’activité antifongique des produits textiles —
Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
ICS: 59.080.01
THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED
FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS
THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY
NOT BE REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL
STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 13629-2:2013(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT
RIGHTS OF WHICH THEY ARE AWARE AND TO
©
PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION. ISO 2013

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/DIS 13629-2:2013(E)

Copyright notice
This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as
permitted under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract
from it may be reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means,
electronic, photocopying, recording or otherwise, without prior written permission being secured.
Requests for permission to reproduce should be addressed to either ISO at the address below or ISO’s
member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Reproduction may be subject to royalty payments or a licensing agreement.
Violators may be prosecuted.
ii © ISO 2013 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/DIS 13629-2
Contents Page
Foreword . iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative reference . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle. 2
5 Safety precaution . 2
6 Reference fungi . 3
7 Apparatus . 3
8 Reagents and culture media. 5
9 Fungi preservation and use . 7
10 Spore suspension . 8
11 Testing procedure . 10
12 Test results . 15
13 Test report . 16
Annex A (normative)  Fungi used in this standard. 17
Annex B (informative)  Antifungal efficacy . 18
Bibliography . 19

© ISO 2013 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/DIS 13629-2
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 13629-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 38, Textiles.
ISO 13629 consists of the following parts, under the general title Textiles — Determination of antifungal
activity of textile products:
 Part 2: Plate count method
 Part 1: Luminescence method
iv © ISO 2013 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/DIS 13629-2
Introduction
This part of standard adopts the plate count method as a basis of quantitative determination of
antifungal activity.
Characteristics of the plate count method are:

 conventional method with easiness to operate in bacteriological laboratories
 no need to special apparatus such as a lumino photometer
 long history and common procedure

© ISO 2013 – All rights reserved v

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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 13629-2

Textiles — Determination of antifungal activity of textile
products — Part 2: Plate count method
1 Scope
This part of ISO 13629 specifies a test method for quantitative determination of antifungal activity by
plate count method.
This standard is applicable to various kinds of textile products such as fibres, yarns, fabrics, clothing,
bedclothes, home furnishings and other miscellaneous goods.

2 Normative reference
The following referenced documents are indispensable for the application of this standard.
The latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 105 F02, Textiles —Tests for colour fastness—Part F02: Specification for cotton and viscose
adjacent fabrics
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs—General requirements and guidance for
microbiological examinations

3 Terms and definitions
For the purposes of this part of standard, the following terms and definitions apply.

3.1
control fabric
fabric used to validate the growth condition of test fungi. Control specimens are sampled form the control
fabric
NOTE   The control fabric may be the same fabric as the fabric to be tested but without antifungal treatment. If this is not
available, a 100% cotton fabric without fluorescent brighteners or other finish, complying with the requirements of ISO 105-
F02 is used as control fabric, after 10 cycles of washing for 10 minutes at the temperature of 60 ºC without detergents or
any brighteners with mechanical agitation and rinsing twice for 5 minutes in tap water at room temperature.

© ISO 2013 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/DIS 13629-2
3.2
antifungal agent
chemical agent to prevent or mitigate the growth of fungi or to reduce the number of fungi

3.3
antifungal treatment
treatment to prevent or mitigate the growth of fungi or to reduce the number of fungi

3.4
spore suspension
liquid with evenly-dispersed fungal spores in sterilized water containing an anionic surfactant

3.5
plate count method
method in which the number of fungi present after incubation is calculated by counting the number of colonies
according to a ten-time dilution method. The results are expressed in CFU (Colony Forming Unit)

3.6
Neutraliser
chemical agents used to inactivate, neutralise, or quench the antifungal properties of antifungal agents.


4 Principle
A test specimen and a control specimen are inoculated with spore suspension of reference fungi and
incubated at 30 ºC for 48 hours.
In this part of ISO 13629, fungal growth is quantitatively determined by the visual counting of colonies on the
agar plate as CFU and the fungal activity is calculated by CFU.
In case of the test specimen absorbs water, the absorption method is recommended and in case of the test
specimen does not absorb water, the transfer method is recommended.

5 Safety precaution
The test method specified herein requires use of fungi.
According to the ISO 7218 standard, this test shall be performed only by personnel with training and
experience in microbiological techniques.
All regulations, rules and recommendations regarding appropriate safety precautions in the country concerned
shall be consulted and followed.

2 © ISO 2013 – All rights reserved

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/DIS 13629-2
6 Reference fungi
The fungi to be used shall be selected from Annex A, Table A.1.
The equivalent fungi types obtained from other agencies of the World Federation for Culture Collection
(WFCC) may be used as agreed upon between interested parties.
The strain number and supply source of the fungi used shall be stated in the test report.

7 Apparatus
Usual laboratory apparatuses and, in particular, the following apparatuses are used. All items have to be
sterilized before using.



© ISO 2013 – All rights reserved 3

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ISO/DIS 13629-2
7.1 Gauze, sterized.
7.2 Petri dish, made of glass or plastic with a diameter of about 60 mm or 90 mm.
7.3 Autoclave, capable of maintaining the temperature of (121 ± 2) ºC (equivalent to 103 kPa).
7.4 Platinum loop, with a loop of 2 mm to 4 mm in diameter (or plastic equivalent).
7.5 L-shaped platinum colony hook (or plastic equivalent)
7.6 Incubator, capable of maintaining a temperature in a range from 25 ºC to 37 ºC with a tolerance of ± 2 ºC.
7.7 Vial, capacity of 30 ml screw-top glass vial with polytetrafluoroethylene or silicone gasket and
polypropylene cap. It shall be carefully washed in alkaline or neutral detergent, rinsed and dried.
7.8 Glass funnel
7.9 Pipettes, capacity of 0,2 ml, 1 ml, 5 ml and 10 ml with a tolerance of 0,5 % or less and with a tip made of
glass or plastic.
7.10 Pasteur pipette, for microbiological testing (or plastic equivalent).
7.11 Conical flask, capacity of 100 ml to 500 ml.
7.12 Tweezers, made of material which can be sterilized.
7.13 Centrifuge, with centrifugal acceleration of approximate 2 000 x g.
7.14 Centrifuge tube, used for centrifuge.
6 6
7.15 Hemacytometer, capable of measuring 1 x 10 cells/ml to 3 x 10 cells/ml.
7.16 Microscope, capable of 200 times magnification.
7.17 Ultrasonic cleaner, compact for experiment tools, with frequency of approximate 30 kHz to 50 kHz.
7.18 pH meter, with glass electrodes for biochemical testing or equivalent pH paper.
7.19 Erlenmeyer flask, capacity of 100 ml.
7.20 Cutting template, made of stainless steel with a diameter of (3,8 ± 0,1) cm.
7.21 Stainless steel cylinder, with a weight of (200 ± 10) g and a diameter of (3,5 ± 0,1) cm.
7.22 Shaker, capable of producing a Vortex shaking action.
7.23 Stomacher, capable of speed, 6 blows/s to 8 blows/s with the corresponding disposable containers.
7.24 Humidity chamber, a tropical chamber or other container capable of maintaining a high humidity
atmospheric condition.
7.25 Refrigerator, capable of maintaining a temperature of between 2 °C and 8 °C with a tolerance of ± 2 ºC.
4 © ISO 2013 – All rights reserved

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ISO/DIS 13629-2
7.26 Freezers, adjustable to a temperature below -70 °C and below – 20 °C with a tolerance of ± 2 ºC.
7.27 Balance, capable of measuring 0,01 g as the readability.
7.28 Disposable plastic bags, suitable for containing food products to be used for storage of sample.
7.29 Micro biological safety cabinet (MSC Type II), designed for microbiological tests use or other system
with equivalent performances.

8 Reagents and culture media
8.1 General
Reagents used in tests shall be of analytical grade and/or suited for microbiological purposes.
Dehydrated products available on the commercial market are recommended for use in preparing the culture
media strictly in accordance with the manufacture's instructions.

8.2 Pure water, analytical-grade water for microbiological media preparation which is freshly distilled and/or
ion-exchanged and/or ultra-filtered and/or filtered with RO (reverse osmosis).

It shall be free from all toxic or fungi inhibitory substances.

8.3 Anionic surfactant, dioctyl sodium sulfosuccinate to prepare spore suspension. The concentration of the
anionic surfactant in pure water (8.2) is 50 mg/l. Sterilize this solution by an autoclave (7.3) at 121 °C for 20
minutes.

8.4 Culture medium

Use a culture medium prepared as described below. Commercially prepared items may be used after
appropriate validation.

NOTE That culture media which will not be used immediately after preparation must be stored at 5 ºC to 10 ºC and
discarded after one month.

8.4.1 Sabouraud dextrose broth (SDB)
Peptone                           10 g
Dextrose            20 g
Pure water                1 000 ml

pH after sterilization              5,6 ± 0,2

8.4.2 Potato dextrose agar (PDA)
Potato infusion from                200 g
© ISO 2013 – All rights reserved 5

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ISO/DIS 13629-2
Dextrose                         20 g
Agar                               15 g
Pure water                     1 000 ml

pH after sterilization              5,6 ± 0,2

This medium encourage mold sporulation

8.4.3 Sabouraud dextrose agar (SDA)
Pepsic Meat Pepton                     10 g
Dextrose                              40 g
Agar                                 15 g
Pure water                        1 000 ml (final volume)

Follow the indications of the supplier

pH after sterilization                   5,6 ± 0,2

NOTE This medium will be used for the transfer method.

8.4.4 Slant culture
8.4.4.1 Pour approximate 10 ml of pre-heated and fully-dissolved PDA (described in 8.4.2) into a sterilized
test tube.
8.4.4.2 Put a cotton plug on and sterilize it with steam after sterilization.
8.4.4.3 Place the test tube at an approximate 15 degree angle against a level surface on a clean laboratory
table, and leave the contents to solidify.
8.4.4.4 When there is no bleed water on the solidified agar, dissolve and solidify it again for use.

8.4.5 Neutralizing solution, SCDLP medium

Polysorbate 80                           30 g
Egg yolk lecithin                           3 g
Histidine hydrochloride                      1 g
Meat or casein peptone                     1 g
Sodium chloride (NaCl)                    4,3 g
Monopotassium phosphate                 3,6 g
Disodium phosphate dehydrate              7,2 g
Water                                1 000 ml (final volume)

pH after sterilization                     7,2 ± 0,2




6 © ISO 2013 – All rights reserved

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ISO/DIS 13629-2
When sufficient neutralizing power cannot be achieved, the content of polysorbate 80 or lecithin may be
adjusted or another neutralizing agent may be added. Commercial solutions of neutralizer can be used after
having tested their efficacy. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded along with the name and
concentration.

9 Fungi preservation and use
9.1   Fungi preservation
Subculture the reference fungi and spores and handle the fungi and spores inside a safety cabinet
or other equivalent system.
9.1.1 Perform either flame sterilization or the chemical sterilization on the cotton plugs and necks of the test
tubes before and after subculture.

9.1.2 Scrape off a small amount of fungi from the original fungi, spread the spores over the bleed water at
the bottom of slant culture (8.4.4.1) and smear onto the top end of the slant culture either in a straight or wavy
line (See Figure 1).

9.1.3 Use flame-sterilized platinum colony loop and hook every time when different types of fungi are
subcultured.

9.1.4 place the
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 13629-2
Première édition
2014-06-15
Textiles — Détermination de l’activité
antifongique des produits textiles —
Partie 2:
Méthode par dénombrement sur
plaque de gélose
Textiles — Determination of antifungal activity of textile products —
Part 2: Plate count method
Numéro de référence
ISO 13629-2:2014(F)
©
ISO 2014

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ISO 13629-2:2014(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés

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ISO 13629-2:2014(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Mesures de sécurité . 2
6 Champignons de référence . 2
7 Appareillage . 2
8 Réactifs et milieux de culture . 4
8.1 Eau pure . 4
8.2 Tensio-actif anionique . 4
8.3 Milieu de culture . 4
9 Conservation et utilisation des champignons . 6
10 Suspension de spores . 7
10.1 Généralités . 7
10.2 Suspension de spores dans des milieux de culture . 7
10.3 Collecte et dispersion de la suspension de spores à partir d’un milieu de culture . 8
10.4 Filtration pour éliminer les hyphes et les filaments de spore . 8
10.5 Centrifugation et re-suspension pour éliminer le liquide surnageant . 8
10.6 Vérification de la concentration de la suspension de spores . 8
10.7 Ajustement de la suspension de spores pour les essais . 8
10.8 Dénombrement de l’inoculum . 9
11 Mode opératoire d’essai. 9
11.1 Inoculation et préparation des éprouvettes . 9
11.2 Méthode par dénombrement sur plaque de gélose .11
12 Résultats d’essai
.13
12.1 Évaluation de l’efficacité de l’essai .13
12.2 Calcul de la valeur de l’activité antifongique .14
13 Rapport d’essai .14
Annexe A (normative) Champignons utilisés dans la présente partie d’ISO 13629 .16
Annexe B (informative) Efficacité antifongique .17
Bibliographie .18
© ISO 2014 – Tous droits réservés iii

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ISO 13629-2:2014(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 38, Textiles.
L’ISO 13629 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Textiles — Détermination de
l’activité antifongique des produits textiles:
— Partie 1: Méthode par luminescence
— Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés

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ISO 13629-2:2014(F)

Introduction
La présente partie de l’ISO 13629 adopte une méthode par dénombrement sur plaque de gélose comme
base pour la détermination quantitative de l’activité antifongique.
Les caractéristiques de la méthode par dénombrement sur plaque de gélose sont les suivantes:
— méthode conventionnelle facile à mettre en œuvre dans les laboratoires bactériologiques;
— aucun appareillage spécial, tel qu’un luminomètre, n’est nécessaire;
— existe depuis longtemps et représente un mode opératoire courant.
© ISO 2014 – Tous droits réservés v

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NORME INTERNATIONALE ISO 13629-2:2014(F)
Textiles — Détermination de l’activité antifongique des
produits textiles —
Partie 2:
Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 13629 spécifie une méthode d’essai pour la détermination quantitative de
l’activité antifongique par dénombrement sur plaque de gélose.
La présente partie de l’ISO 13629 s’applique aux différents types de produits textiles, tels que les fibres,
les fils, les étoffes, les vêtements, les articles de literie, les tissus d’ameublement et divers autres types
d’articles.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 105-F02, Textiles — Essais de solidité des teintures — Partie F02: Spécifications pour les tissus témoins
en coton et en viscose.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
étoffe témoin
étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des champignons soumis à l’essai.
Note 1 à l’article: Les éprouvettes témoins sont prélevées sur l’étoffe témoin.
Note 2 à l’article: L’étoffe utilisée comme témoin peut être la même que celle soumise à essai mais sans traitement
antifongique. Si une telle étoffe n’est pas disponible, un tissu 100 % coton sans azurants optiques ou autre apprêt,
conforme aux exigences de l’ISO 105-F02, est utilisé comme étoffe témoin après lavage à une température de 60
°C avec une agitation mécanique et un rinçage.
3.2
agent antifongique
agent chimique servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
3.3
traitement antifongique
traitement servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
© ISO 2014 – Tous droits réservés 1

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ISO 13629-2:2014(F)

3.4
suspension de spores
liquide contenant des spores fongiques uniformément réparties dans de l’eau stérilisée contenant un
tensio-actif anionique
3.5
méthode par dénombrement sur plaque de gélose
méthode dans laquelle le nombre de champignons présents après incubation est calculé par
dénombrement des colonies selon une méthode de dilution décimale
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en UFC (unités formant colonies).
3.6
neutralisant
agent chimique servant à inactiver, neutraliser ou stopper les propriétés antifongiques des agents
antifongiques
4 Principe
Une éprouvette d’essai et une éprouvette témoin sont inoculées avec une suspension de spores de
champignons de référence et incubées à 30 °C pendant 48 h.
Dans la présente partie de l’ISO 13629, la croissance fongique est déterminée de manière quantitative en
dénombrant visuellement les colonies sur la plaque de gélose, en UFC, et l’activité fongique est calculée
à l’aide des UFC.
Si l’éprouvette d’essai absorbe l’eau, la méthode d’absorption est recommandée. Au cas où elle n’absorbe
pas l’eau, la méthode de transfert est recommandée.
5 Mesures de sécurité
La méthode d’essai spécifiée ici nécessite l’utilisation de champignons.
Selon l’ISO 7218, cet essai doit être réalisé exclusivement par un personnel ayant reçu une formation et
ayant de l’expérience dans les techniques microbiologiques.
Concernant les mesures de sécurité à prendre, il convient de consulter et de suivre toutes les
réglementations, règles et recommandations dans le pays concerné.
6 Champignons de référence
Les champignons à utiliser doivent être choisis dans le Tableau A.1, Annexe A.
Des types de champignons équivalents obtenus auprès d’autres agences de la Fédération mondiale des
collections de cultures (World Federation for Culture Collections – WFCC) doivent être utilisés sous
réserve d’un accord entre les parties intéressées.
Le numéro de référence et la provenance de la souche des champignons utilisés doivent être mentionnés
dans le rapport d’essai.
7 Appareillage
Matériel de laboratoire courant et, en particulier, ce qui suit. Le cas échéant, les articles doivent être
stérilisés avant utilisation.
7.1 Gaze, stérilisée.
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés

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ISO 13629-2:2014(F)

7.2 Boîte de Petri, en verre ou en plastique, d’un diamètre d’environ 60 mm ou 90 mm.
7.3 Autoclave, pouvant maintenir la température à (121 ± 2) °C (équivalent à 103 kPa).
7.4 Anse d’ensemencement en platine, de 2 mm à 4 mm de diamètre (ou équivalent en plastique).
7.5 Fil d’ensemencement en platine en forme de L (ou équivalent en plastique).
7.6 Incubateur, pouvant maintenir la température dans une plage comprise entre 25 °C et 37 °C avec
une tolérance de ± 2 °C.
7.7 Flacon, à bouchon à vis d’une capacité de 30 ml en verre, avec un joint en polytétrafluoroéthylène
ou en silicone et un bouchon en polypropylène. Il doit être soigneusement lavé dans un détergent alcalin
ou neutre, rincé et séché.
7.8 Entonnoir en verre.
7.9 Pipettes, d’une capacité de 0,2 ml, 1 ml, 5 ml et 10 ml avec une tolérance de 0,5 % ou moins,
comportant un embout en verre ou en plastique.
7.10 Pipette Pasteur, pour les essais microbiologiques (ou équivalent en plastique).
7.11 Fiole conique, d’une capacité comprise entre 100 ml et 500 ml.
7.12 Pinces, constituées d’un matériau pouvant être stérilisé.
7.13 Centrifugeuse, ayant une accélération centrifuge d’environ 2 000 x g.
7.14 Tube à centrifuger, utilisé avec la centrifugeuse.
6 6
7.15 Hématimètre, permettant de réaliser de mesurer entre 1 x 10 cellules/ml et 3 x 10 cellules/ml.
7.16 Microscope, permettant un grossissement de x 200 .
7.17 Nettoyeur à ultrasons, compact, pour les outils d’expérimentation, ayant une fréquence d’environ
30 kHz à 50 kHz.
7.18 pH-mètre, avec des électrodes en verre pour les essais biochimiques ou papier pH équivalent.
7.19 Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.
7.20 Gabarit de découpe, en acier inoxydable, d’un diamètre de (3,8 ± 0,1) cm.
7.21 Cylindre en acier inoxydable, pesant (200 ± 10) g et ayant un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.
7.22 Agitateur, permettant de produire une action d’agitation de type vortex.
7.23 Malaxeur de type Stomacher, pouvant atteindre les 6 coups/s à 8 coups/s, avec les récipients
jetables correspondants.
7.24 Chambre d’humidité, enceinte tropicale ou autre conteneur pouvant maintenir des conditions
atmosphériques avec un taux d’humidité élevé.
© ISO 2014 – Tous droits réservés 3

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ISO 13629-2:2014(F)

7.25 Réfrigérateur, pouvant maintenir la température entre 2 °C et 8 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.26 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à –70 °C et l’autre à une
température inférieure à –20 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.27 Balance, d’une précision de 0,01 g.
7.28 Sacs jetables en plastique, pouvant contenir des produits alimentaires, destinés à être utilisés
pour l’agitation de l’échantillon.
7.29 Poste de sécurité microbiologique (PSM de type II), conçu pour les essais microbiologiques ou
autre système offrant des performances équivalentes.
7.30 Bains d’eau, un bain d’eau permettant de maintenir une température constante de (46 ± 2) °C et un
autre permettant de maintenir une température de 70 °C à 90 °C.
8 Réactifs et milieux de culture
Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés pour les essais
microbiologiques.
Il est recommandé d’utiliser des produits déshydratés disponibles dans le commerce pour la préparation
des milieux de culture, en respectant scrupuleusement les instructions du fabricant.
8.1 Eau pure
Eau de qualité analytique pour la préparation des milieux microbiologiques, fraîchement distillée et/ou
passée sur résine échangeuse d’ions et/ou ultra-filtrée et/ou filtrée par osmose inverse (OI).
Elle doit être exempte de substances toxiques ou inhibitrices pour les champignons.
8.2 Tensio-actif anionique
Dioctyl sulfosuccinate de sodium pour préparer la suspension de spores. La concentration du tensio-
actif anionique dans l’eau pure (8.1) est de 50 mg/l. Stériliser cette solution à l’autoclave (7.3) à 121 °C
pendant 20 min.
8.3 Milieu de culture
Utiliser un milieu de culture préparé comme décrit ci-dessous. Des produits préparés du commerce
peuvent être utilisés après une validation appropriée.
Les milieux de culture qui ne sont pas utilisés immédiatement après leur préparation doivent être
conservés à une température comprise entre 5 °C et 10 °C et jetés au bout d’un mois.
8.3.1 Bouillon de Sabouraud au dextrose (SDB)
Peptone 10 g
Dextrose 20 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
4 © ISO 2014 – Tous droits réservés

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ISO 13629-2:2014(F)

8.3.2 Gélose à la pomme de terre et au dextrose (PDA)
Infusion de pomme de terre 200 g
Dextrose 20 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
Ce milieu favorise la sporulation des moisissures.
8.3.3 Gélose de Sabouraud au dextrose (SDA)
Peptone pepsique de viande 10 g
Dextrose 40 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml (volume final)
Suivre les indications du fournisseur.
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
NOTE Ce milieu est utilisé pour la méthode de transfert.
8.3.4 Culture inclinée
8.3.4.1 Verser environ 10 ml de PDA préchauffée et entièrement dissoute (voir 8.3.2) dans un tube à
essai stérilisé.
8.3.4.2 Boucher avec un bouchon en coton et stériliser à la vapeur.
8.3.4.3 Après la stérilisation, incliner le tube à essai d’environ 15° contre une surface plane sur une
table de laboratoire propre et laisser le contenu se solidifier.
8.3.4.4 Lorsqu’il ne reste plus d’eau en excédent sur la gélose solidifiée, dissoudre et solidifier à nouveau
avant utilisation.
© ISO 2014 – Tous droits réservés 5

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ISO 13629-2:2014(F)

8.3.5 Solution neutralisante, milieu SCDLP
Polysorbate 80 30 g
Lécithine de jaune d’œuf 3 g
Chlorhydrate d’histidine 1 g
Peptone de viande ou de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 4,3 g
Phosphate monopotassique 3,6 g
Phosphate disodique déshydraté 7,2 g
Eau 1 000 ml (volume final)
pH après stérilisation 7,2 ± 0,2
Lorsqu’il est impossible d’obtenir un pouvoir neutralisant suffisant, la teneur en polysorbate 80 ou en
lécithine peut être ajustée ou un autre agent neutralisant peut être ajouté. Il est possible d’utiliser des
solutions neutralisantes du commerce si leur efficacité a été prouvée (voir Annexe B). L’utilisation de
tout neutralisant non spécifié doit être enregistrée, avec son nom et sa concentration.
9 Conservation et utilisation des champignons
9.1 Repiquer les champignons et les spores de référence et les traiter dans un poste de sécurité
microbiologique (7.29) ou autre système équivalent.
9.2 Réaliser une stérilisation à la flamme ou une stérilisation chimique sur les bouchons de coton et les
cols des tubes à essai avant et après le repiquage.
9.3 Racler une petite quantité de champignons sur les champignons d’origine, étaler les spores sur
l’eau en excédent qui se trouve au fond de la culture inclinée (8.3.4) et répartir en partant du somm
...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 13629-2
ISO/TC 38 Secrétariat: JISC
Début de vote: Vote clos le:
2013-10-23 2014-01-23
Textiles — Détermination de l’activité antifongique des
produits textiles —
Partie 2:
Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
Textiles — Determination of antifungal activity of textile products —
Part 2: Plate count method
ICS: 59.080.01
CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR
OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC
SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT
ÊTRE CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE
AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES
FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 13629-2:2013(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
©
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2013

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ISO/DIS 13629-2:2013(F)

Notice de droit d’auteur
Ce document de l’ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d’auteur
de l’ISO. Sauf autorisé par les lois en matière de droits d’auteur du pays utilisateur, aucune partie de
ce projet ISO ne peut être reproduite, enregistrée dans un système d’extraction ou transmise sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie,
les enregistrements ou autres, sans autorisation écrite préalable.
Les demandes d’autorisation de reproduction doivent être envoyées à l’ISO à l’adresse ci-après ou au
comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Toute reproduction est soumise au paiement de droits ou à un contrat de licence.
Les contrevenants pourront être poursuivis.
ii © ISO 2013 – Tous droits réservés

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ISO/DIS 13629-2
Sommaire Page
Avant-propos . iv
Introduction . v
1  Domaine d’application . 1
2  Références normatives . 1
3  Termes et définitions . 1
4  Principe . 2
5  Mesures de sécurité . 2
6  Champignons de référence . 2
7  Appareillage . 3
8  Réactifs et milieux de culture . 4
9  Conservation et utilisation des champignons . 6
10  Suspension de spores . 7
11  Mode opératoire d’essai . 9
12  Résultats d’essai . 13
13  Rapport d’essai . 14
Annexe A (normative) Champignons utilisés dans la présente norme . 15
Annexe B (informative) Efficacité antifongique . 16
Bibliographie . 17

© ISO 2013 – Tous droits réservés iii

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ISO/DIS 13629-2
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 13629-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 38, Textiles.
L’ISO 13629 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Textiles — Détermination de
l’activité antifongique des produits textiles :
— Partie 1 : Méthode par luminescence
— Partie 2 : Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
iv © ISO 2013 – Tous droits réservés

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ISO/DIS 13629-2
Introduction
La présente partie de la norme adopte une méthode par dénombrement sur plaque de gélose comme base
pour la détermination quantitative de l’activité antifongique.
Les caractéristiques de la méthode par dénombrement sur plaque de gélose sont les suivantes :
 méthode conventionnelle facile à mettre en œuvre dans les laboratoires bactériologiques ;
 aucun appareillage spécial, tel qu’un luminomètre, n’est nécessaire ;
 existe depuis longtemps et représente un mode opératoire courant.
© ISO 2013 – Tous droits réservés v

---------------------- Page: 5 ----------------------
PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 13629-2

Textiles — Détermination de l’activité antifongique des produits
textiles — Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de
gélose
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 13629 spécifie une méthode d’essai pour la détermination quantitative de l’activité
antifongique par dénombrement sur plaque de gélose.
Cette norme s’applique aux différents types de produits textiles, tels que les fibres, les fils, les étoffes, les
vêtements, les articles de literie, les tissus d’ameublement et divers autres types d’articles.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 105 F02, Détermination de l''activité antifongique des produits textiles — Partie 2 : Méthode de comptage
sur plaque de gélose.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
étoffe témoin
étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des champignons soumis à l’essai. Les éprouvettes
témoins sont prélevées sur l’étoffe témoin
NOTE L’étoffe utilisée comme témoin peut être la même que celle soumise à essai mais sans traitement
antifongique. Si une telle étoffe n’est pas disponible, un tissu 100 % coton sans azurants optiques ou autre apprêt,
conforme aux exigences de l’ISO 105-F02, est utilisé comme étoffe témoin après 10 cycles de lavage de 10 min à une
température de 60 °C sans détergents ni azurants avec une agitation mécanique et un double rinçage de 5 min à l’eau du
robinet à la température ambiante.
3.2
agent antifongique
agent chimique servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
3.3
traitement antifongique
traitement servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
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3.4
suspension de spores
liquide contenant des spores fongiques uniformément réparties dans de l’eau stérilisée contenant un tensio-
actif anionique
3.5
méthode par dénombrement sur plaque de gélose
méthode dans laquelle le nombre de champignons présents après incubation est calculé par dénombrement
des colonies selon une méthode de dilution décimale. Les résultats sont exprimés en UFC (unités formant
colonies)
3.6
neutralisant
agent chimique servant à inactiver, neutraliser ou stopper les propriétés antifongiques des agents
antifongiques
4 Principe
Une éprouvette d’essai et une éprouvette témoin sont inoculées avec une suspension de spores de
champignons de référence et incubées à 30 °C pendant 48 h.
Dans la présente partie de l’ISO 13629, la croissance fongique est déterminée de manière quantitative en
dénombrant visuellement les colonies sur la plaque de gélose, en UFC, et l’activité fongique est calculée à
l’aide des UFC.
Si l’éprouvette d’essai absorbe l’eau, la méthode d’absorption est recommandée ; si elle n’absorbe pas l’eau,
la méthode de transfert est recommandée.
5 Mesures de sécurité
La méthode d’essai spécifiée ici nécessite l’utilisation de champignons.
Selon l’ISO 7218, cet essai doit être réalisé exclusivement par un personnel ayant reçu une formation et ayant
de l’expérience dans les techniques microbiologiques.
Toutes les réglementations, règles et recommandations concernant les mesures de sécurité à prendre dans le
pays concerné doivent être consultées et suivies.
6 Champignons de référence
Les champignons à utiliser doivent être choisis dans le Tableau A.1.
Des types de champignons équivalents obtenus auprès d’autres agences de la Fédération mondiale des
collections de cultures (World Federation for Culture Collections – WFCC) peuvent être utilisés sous réserve
d’un accord entre les parties intéressées.
Le numéro de référence et la provenance de la souche des champignons utilisés doivent être mentionnés
dans le rapport d’essai.
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7 Appareillage
Matériel de laboratoire courant et, en particulier, ce qui suit. Stériliser tous les articles avant utilisation.
7.1 Gaze, stérilisée.
7.2 Boîte de Petri, en verre ou en plastique, d’un diamètre d’environ 60 mm ou 90 mm.
7.3 Autoclave, pouvant maintenir la température à (121 ± 2) °C (équivalent à 103 kPa).
7.4 Anse d’ensemencement en platine, de 2 mm à 4 mm de diamètre (ou équivalent en plastique).
7.5 Fil d’ensemencement en platine en forme de L (ou équivalent en plastique).
7.6 Incubateur, pouvant maintenir la température dans une plage comprise entre 25 °C et 37 °C avec une
tolérance de ± 2 °C.
7.7 Flacon, à bouchon à vis d’une capacité de 30 ml en verre, avec un joint en polytétrafluoroéthylène ou
en silicone et un bouchon en polypropylène. Il doit être soigneusement lavé dans un détergent alcalin ou
neutre, rincé et séché.
7.8 Entonnoir en verre.
7.9 Pipettes, d’une capacité de 0,2 ml, 1 ml, 5 ml et 10 ml avec une tolérance de 0,5 % ou moins,
comportant un embout en verre ou en plastique.
7.10 Pipette Pasteur, pour les essais microbiologiques (ou équivalent en plastique).
7.11 Fiole conique, d’une capacité comprise entre 100 ml et 500 ml.
7.12 Pinces, constituées d’un matériau pouvant être stérilisé.
7.13 Centrifugeuse, ayant une accélération centrifuge d’environ 2 000g.
7.14 Tube à centrifuger, utilisé avec la centrifugeuse.
6 6
7.15 Hématimètre, permettant de réaliser de mesurer entre 1 x 10 cellules/ml et 3 x 10 cellules/ml.
7.16 Microscope, permettant un grossissement de 200 fois.
7.17 Nettoyeur à ultrasons, compact, pour les outils d’expérimentation, ayant une fréquence d’environ
30 kHz à 50 kHz.
7.18 pH-mètre, avec des électrodes en verre pour les essais biochimiques ou papier pH équivalent.
7.19 Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.
7.20 Gabarit de découpe, en acier inoxydable, d’un diamètre de (3,8 ± 0,1) cm.
7.21 Cylindre en acier inoxydable, pesant (200 ± 10) g et ayant un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.
7.22 Agitateur, permettant de produire une action d’agitation de type vortex.
7.23 Malaxeur de type Stomacher, pouvant atteindre les 6 coups/s à 8 coups/s, avec les récipients jetables
correspondants.
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7.24 Chambre d’humidité, enceinte tropicale ou autre conteneur pouvant maintenir des conditions
atmosphériques avec un taux d’humidité élevé.
7.25 Réfrigérateur, pouvant maintenir la température entre 2 °C et 8 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.26 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à –70 °C et l’autre à une
température inférieure à –20 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.27 Balance, d’une précision de 0,01 g.
7.28 Sacs jetables en plastique, pouvant contenir des produits alimentaires, destinés à être utilisés pour le
stockage de l’échantillon.
7.29 Poste de sécurité microbiologique (PSM de type II), conçu pour les essais microbiologiques ou
autre système offrant des performances équivalentes.
8 Réactifs et milieux de culture
8.1 Généralités
Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés pour les essais
microbiologiques.
Il est recommandé d’utiliser des produits déshydratés disponibles dans le commerce pour la préparation des
milieux de culture, en respectant scrupuleusement les instructions du fabricant.
8.2 Eau pure, de qualité analytique pour la préparation des milieux microbiologiques, fraîchement distillée
et/ou passée sur résine échangeuse d’ions et/ou ultra-filtrée et/ou filtrée par osmose inverse (OI).
Elle doit être exempte de substances toxiques ou inhibitrices pour les champignons.
8.3 Tensio-actif anionique, dioctyl sulfosuccinate de sodium pour préparer la suspension de spores. La
concentration du tensio-actif anionique dans l’eau pure (8.2) est de 50 mg/l. Stériliser cette solution à
l’autoclave (7.3) à 121 °C pendant 20 min.
8.4 Milieu de culture
Utiliser un milieu de culture préparé comme décrit ci-dessous. Des produits préparés du commerce peuvent
être utilisés après une validation appropriée.
NOTE Les milieux de culture qui ne sont pas utilisés immédiatement après leur préparation doivent être conservés à
une température comprise entre 5 °C et 10 °C et jetés au bout d’un mois.
8.4.1 Bouillon de Sabouraud au dextrose (SDB)
Peptone 10 g
Dextrose 20 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
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8.4.2 Gélose à la pomme de terre et au dextrose (PDA)
Infusion de pomme de terre 200 g
Dextrose 20 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
Ce milieu favorise la sporulation des moisissures.
8.4.3 Gélose de Sabouraud au dextrose (SDA)
Peptone pepsique de viande 10 g
Dextrose 40 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml (volume final)
Suivre les indications du fournisseur.
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
NOTE Ce milieu est utilisé pour la méthode de transfert.
8.4.4 Culture inclinée
8.4.4.1 Verser environ 10 ml de PDA préchauffée et entièrement dissoute (voir 8.4.2) dans un tube à
essai stérilisé.
8.4.4.2 Boucher avec un bouchon en coton et stériliser à la vapeur.
8.4.4.3 Après la stérilisation, incliner le tube à essai d’environ 15° contre une surface plane sur une table
de laboratoire propre et laisser le contenu se solidifier.
8.4.4.4 Lorsqu’il ne reste plus d’eau en excédent sur la gélose solidifiée, dissoudre et solidifier à nouveau
avant utilisation.
8.4.5 Solution neutralisante, milieu SCDLP
Polysorbate 80 30 g
Lécithine de jaune d’œuf 3 g
Chlorhydrate d’histidine 1 g
Peptone de viande ou de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 4,3 g
Phosphate monopotassique 3,6 g
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Phosphate disodique déshydraté 7,2 g
Eau 1 000 ml (volume final)
pH après stérilisation 7,2 ± 0,2
Lorsqu’il est impossible d’obtenir un pouvoir neutralisant suffisant, la teneur en polysorbate 80 ou en lécithine
peut être ajustée ou un autre agent neutralisant peut être ajouté. Il est possible d’utiliser des solutions
neutralisantes du commerce si leur efficacité a été prouvée. L’utilisation de tout neutralisant non spécifié doit
être enregistrée, avec son nom et sa concentration.
9 Conservation et utilisation des champignons
9.1 Conservation des champignons
Repiquer les champignons et les spores de référence et les traiter dans un poste de sécurité microbiologique
ou autre système équivalent.
9.1.1 Réaliser une stérilisation à la flamme ou une stérilisation chimique sur les bouchons de coton et les
cols des tubes à essai avant et après le repiquage.
9.1.2 Racler une petite quantité de champignons sur les champignons d’origine, étaler les spores sur l’eau
en excédent qui se trouve au fond de la culture inclinée (8.4.4.1) et répartir en partant du sommet de la culture
inclinée soit en ligne droite, soit selon une ligne ondulée (voir la Figure 1).
9.1.3 Utiliser l’anse et le fil d’ensemencement en platine stérilisés à la flamme à chaque fois que des types
de champignons différents sont repiqués.
9.1.4 Placer les cultures inclinées repiquées dans un incubateur à (25 ± 2) °C pendant au moins 8 jours et
vérifier qu’une quantité suffisante de spores a été produite avant la conservation entre 5 °C et 10 °C.
9.1.5 Dans les 3 mois, transplanter les champignons repiqués vers de nouvelles cultures inclinées en vue
d’une nouvelle incubation et conservation.
Ne pas répéter le repiquage plus de cinq fois sur un intervalle de 3 mois au maximum. Ne pas utiliser de
champignons de plus de 3 mois pour d’autres repiquages.
NOTE La conservation à long terme peut être possible par congélation à –80 °C.
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Légende
1 eau en excédent
2 culture inclinée
Figure 1 — Repiquage sur une culture inclinée
10 Suspension de spores
Voir la Figure 2.
Pre-culture
Step1 Step2 Step3 Step4 Step5
onPDAplate

L
...

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