ISO 8360-2:1988

Water quality — Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa — Part 2: Membrane filtration method

Qualité de l'eau — Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa — Partie 2: Méthode par filtration sur membrane

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 28-Dec-1988
• Withdrawal Date: 28-Dec-1988
• ICS: 07.100.20 - Microbiology of water
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 23-Feb-1995

Standards Content (Sample)

IS0
INTERNATIONAL STANDARD
8 3 60-2
First edition
1988-12-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXBYHAPOAHAR OPTAHMSAUMR il0 CTAHflAPTM3AUMM
Water quality - Detection and enumeration of
Pseudomonas aeruginosa -
Part 2:
Membrane filtration method
Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de Pseudornonas aeruginosa -
Partie 2: Méthode par filtration sur membrane
Reference number
IS0 8360-2 : 1988 (E)

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IS0 8360-2 : 1988
E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 8360-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality.
IS0 8360 consists of the following parts, under the general title Water quality - Detec-
tion and enumeration of Pseudomonas aeruginosa :
Part 1 : Method by enrichment in liquid medium
Part 2: Membrane filtration method
Annex A of this part of IS0 8360 is for information only.
O International Organization for Standardization, 1988
Printed in Switzerland
ii

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so 8360-2 : 1988
E)
Introduction
Pseudomonas aeruginosal) may occur in water for a variety of reasons and from a
variety of sources, but it cannot be used as an indicator of faecal pollution and the
significance of its presence cannot always be precisely defined. However, since in
certain circumstances it may be the cause of some opportunist infections in man,
especially in debilitated patients, its presence in drinking water, bottled waters, swim-
ming pools and hospital water supplies is considered undesirable.
e
1) See annex A for further information.
iii

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INTERNATIONAL STANDARD
IS0 8360-2 : 1988 (E)
Water quality - Detection and enumeration of
Pseudomonas aeruginosa -
Part 2:
Membrane filtration method
1 Scope IS0 8199 : 1988, Water quality - General guide to the
enumeration of micro-organisms by culture.
This part of IS0 8360 presents a method for the isolation of
Pseudomonas aeruginosa and the estimation of the numbers of
this organism in water samples by the membrane filtration
3 Definition
technique.
For the purposes of this part of IS0 8360, the following defi-
This method is applicable to all types of water provided that the
nition applies.
amount of suspended particulate matter is not such that it
prevents the passage of either water or nutrients through the
Pseudomonas aeruginosa: Micro-organisms capable of growth
membrane filter.
on Drake's medium 19 selective media and producing charac-
teristic colonies when grown on milk agar at 42 OC.
In water where the expected number of Pseudomonas
aeruginosa is low, e.g. bottled water, or the water contains a
relatively high level of residual disinfectant (e.g. swimming
pools), the method described in IS0 8360-1 is recommended.
4 Principle
A measured volume of the water sample, or a dilution of the
I) 2 Normative references
sample, is filtered through a membrane filter that has filtration
characteristics equivalent to a rated pore diameter of 0,45 vm.
The following standards contains provisions which, through
The membrane filter is placed on the selective medium and
reference in this text, constitute provisions of this part of
incubated under the conditions specified for the medium.
IS0 8360. At the time of publication, the editions indicated
were valid. All standards are subject to revision, and parties to
agreements based on this part of IS0 8360 are encouraged to
4.1 Enumeration
investigate the possibility of applying the most recent editions
of the standards listed below. Members of IEC and IS0 main-
The numbers of presumed Pseudomonas aeruginosa are
tain registers of currently valid International Standards.
obtained by counting the number of characteristic colonies on
the membrane filter after incubation.
IS0 3696 : 1987, Water for analytical laboratory use -
Specification and test methods.
IS0 5667-1 : 1980, Water quality - Sampling - Part 1 : 4.2 Confirmation
Guidance on the design of sampling programmes.
Subcultures are made from each membrane filter onto plates of
IS0 5667-2 : 1982, Water quality - Sampling - Part2: milk agar medium. After incubation, the plates are examined
Guidance on sampling techniques.
for typical colonies of Pseudomonas aeruginosa.
IS0 5667-3 : 1985, Water quality - Sampling - Part3:
Guidance on the preservation and handling of samples.
4.2.1 Non-pigmented and atypical strains
IS0 6887 : 1983, Microbiology - General guidance for the
Subcultures are made either from milk agar plates or directly
preparation of dilutions for microbiological examination.
from the membrane filters onto solid agar media and incubated.
1

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IS0 8360-2 : 1988
Pure cultures are obtained by further subculture onto plates of
5.4 Confirmatory medium
the same agar medium as required. Each pure culture is finally
tested for certain biochemical characteristics (see annex A).
5.4. Milk agar with cetrimide
5.4.1.1 Composition
5 Diluents, culture media and reagents
Skim milk powder
Use reagents of analytical reagent quality in the preparation of
culture media and diluents, unless otherwise specified. Prepare Yeast extract broth (see below)
media using glass-distilled water, or water of equivalent quality, Agar
complying with IS0 3696 grade 3.
Hexadecyltrimethylammonium
bromide (cetrimide)
Alternatively, commercially available dehydrated media can be
Water
used. The media shall be prepared according to the manufac-
turer’s instructions and selective agents added, as supplements
Yeast extract broth :
at the given concentrations.
Bacteriological yeast extract 39
Bacteriological peptone 10 9
5.1 Dilution fluids
Sodium chloride 59
Water to 1 O00 ml
Use one of the diluents given in IS0 8199.
5.4.1.2 Preparation of medium
5.2 Culture medium
Prepare the yeast extract broth by dissolving all the consti-
It is essential that the culture medium used be suitable for the
tuents in the distilled water by steaming. Adjust the pH
type of water to be analysed and the purpose of the analysis.
between 7,2 and 7,4. Sterilize by autoclaving at 121 OC f 1 OC
Use the following medium for the determination of presumed
for 20 min.
Pseudornonas aeruginosa .
Mix the sterile yeast extract broth, cetrimide and agar, and
steam this mixture until the agar has dissolved. In a separate
5.3 Drake’s medium 19
glass container, add the skim milk powder to the distilled water
and mix, preferably with a magnetic stirrer, until the powder
has completely dissolved. Autoclave both solutions separately
5.3.1 Composition
at 121 OC f 1 OC for 5 min. To prevent caramelization of the
mi
...

NORME INTERNATIONALE
8 3 60-2
Première édition
1988-12-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
ME>t Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de
Pseudomonas aeruginosa -
Partie 2 :
Méthode par filtration sur membrane
Water quality - Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa -
Part 2: Membrane filtration method
e
Numéro de référence
IS0 8360-2 : 1988 (F)

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IS0 8360-2 : 1988 (FI
1 Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I‘ISO). L’élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I‘ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L‘ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I‘ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 8360-2 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 147, Qualité de l‘eau.
L’ISO 8360 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité de
l‘eau - Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa :
-
Partie 1 : Méthode par enrichissement en milieu liquide
-
2: Méthode par filtration sur membrane
Partie
L‘annexe A de la présente partie de I’ISO 8360 est donnée uniquement à titre d’infor-
mation.
@ Organisation internationale de normalisation, 1988 O
I Imprimé en Suisse

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IS0 8360-2 : 1988 (FI
Introduction
Pseudornonas aeruginosal) peut apparaître dans l’eau pour des raisons multiples et
être de diverses origines, mais il ne peut pas être utilisé comme indicateur de pollution
fécale et la signification de sa présence ne peut pas toujours être définie avec précision.
Dans certaines conditions, par contre, il peut être à l‘origine d’infections occasionnelles
chez l’homme, en particulier chez des sujets en état de faiblesse, et sa présence dans
l’eau potable, l‘eau en bouteille, l’eau de piscine et l’eau distribuée aux hôpitaux est
considérée comme indésirable.
1) Voir l‘annexe A pour des informations complémentaires.

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IS0 8360-2 : 1988 (FI
NORME INTERNATIONALE
Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de
Pseudomonas aeruginosa -
Partie 2:
Méthode par filtration sur membrane
IS0 6887 : 1983, Microbiologie - Directives générales pour la
1 Domaine d'application
préparation des dilutions en vue de l'examen microbiologique.
La présente partie de I'ISO 8360 prescrit une méthode permet-
tant d'isoler Pseudomonas aeruginosa et d'estimer le nombre IS0 8199 : 1988, Qualité de l'eau - Guide général pour le
de ces organismes contenus dans des échantillons d'eau par fil- dénombrement des micro-organismes sur milieu de culture.
tration sur membrane.
La présente méthode s'applique à tous les types d'eaux, dans la 3 Définition
mesure où la quantité de matières particulières en suspension
n'est pas telle qu'elle empêche le passage de l'eau ou des subs- Pour les besoins de la présente partie de I'ISO 8360, la définition
tances nutritives à travers les membranes filtrantes. suivante s'applique.
Pour les eaux dans lesquelles le nombre prévu de Pseudomonas Pseudomonas aeruginosa: Micro-organismes pouvant croître
est faible, par exemple, l'eau en bouteille, et dans le
aeruginosa dans le milieu de Drake 19, et donnant des colonies caractéristi-
cas où l'eau renferme une teneur relativement élevée en désin- ques lorsqu'ils sont cultivés sur une gélose lactée à 42 OC.
fectant résiduel (par exemple, eau de piscine), la méthode
décrite dans I'ISO 8360-1 est recommandée.
4 Principe
Filtration d'un volume connu de l'échantillon, ou d'une dilution
2 Références normatives
de l'échantillon, sur une membrane filtrante présentant des
caractéristiques de filtration équivalant à un diamètre nominal
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par
de pore de 0,45 pm. La membrane filtrante est placée sur le
suite de la référence qui en est faite, constituent des disposi-
milieu sélectif et incubée dans les conditions spécifiées pour le
tions valables pour la présente partie de I'ISO 8360. Au moment
milieu.
de la publication de cette partie de I'ISO 8360, les éditions indi-
quées étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et
4.1 Dénombrement
les parties prenantes des accords fondés sur cette partie de
I'ISO 8360 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer
Le nombre de Pseudomonas aeruginosa présumés est obtenu
les éditions les plus récentes des normes indiquées ci-après.
en comptant le nombre de colonies caractéristiques sur les
Les membres de la CE1 et de I'ISO possèdent le registre des
membranes filtrantes après l'incubation.
Normes internationales en vigueur à un moment donné.
IS0 3696 : 1987, Eau pour laboratoire à usage analytique -
4.2 Confirmation
Spécification et méthodes d'essai.
Repiquage à partir de chaque membrane sur des boîtes de
IS0 5667-1 : 1980, Qualité de l'eau - Échantillonnage - gélose lactée. Après l'incubation, les boîtes sont examinées
Partie 7 : Guide général pour l'établissement des programmes pour la présence de colonies typiques de Pseudomonas aerugi-
nosa.
d'échantillonnage.
IS0 5667-2 : 1982, Qualité de l'eau - Échantillonnage -
4.2.1 Souches non pigmentées et atypiques
Partie 2: Guide général sur les techniques d'échantillonnage.
Des repiquages sont effectués soit à partir des boîtes de gélose
IS0 5667-3 : 1985, Qualité de l'eau - Échantillonnage - lactée ou directement à partir des membranes filtrantes sur un
Partie 3: Guide général pour la conservation et la manipulation
milieu solide gélosé, puis incubés. Des cultures pures sont ainsi
des échantillons.
obtenues par des repiquages supplémentaires sur le même
1

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IS0 8360-2 : 1988 (F)
5.4 Milieux confirmatifs
milieu gélosé. La confirmation finale de chaque culture pure est
obtenue par des essais portant sur les caractéristiques biochi-
miques (voir l’annexe A).
5.4.1 Gélose lactée à la cétrirnide
5.4.1 .I Composition
5 Diluants, milieux de culture et réactifs
Poudre de lait écrémé 100 g
Utiliser des réactifs de qualité analytique pour la préparation
Bouillon d‘extrait de levure (voir ci-après) 250 ml
des milieux de culture et des diluants, sauf spécification
Gélose 15 9
contraire. Préparer les milieux en utilisant de l‘eau distillée sur
Bromure d’hexadécyltriméthyl ammonium
verre, ou de l’eau d’une qualité équivalente conforme à
(cétrimide) 0,3 g
1‘1S0 3996, grade 3.
Eau à 750 ml
Des milieux déshydratés existant dans le commerce peuvent
Bouillon d’extrait de levure :
aussi être utilisés. Les milieux doivent être préparés conformé-
ment aux instructions du fabricant et les adjonctions d‘agents
Extrait de levure
sélectifs doivent être faites à la concentration donnée.
Peptone bactériologique
Chlorure de sodium
5g
à1000mi 1)
5.1 Liquides de dilution Eau
Utiliser l’un des diluants de I‘ISO 8199.
5.4.1.2 Préparation du milieu
Préparer un volume approprié de bouillon d’extrait de levure en
5.2 Milieu de culture
dissolvant tous les composants dans de l’eau distillée à I’ébulli-
tion. Ajuster le pH entre 7,2 et 7,4. Stériliser pendant 20 min à
II est très important que le milieu de culture soit approprié au
l‘autoclave à une température de 121 OC f 1 OC.
type d‘eau à analyser et au but recherché dans l’analyse. Utili-
ser le milieu suivant pour déterminer les Pseudornonas aerugi-
Mélanger le bouillon d’extrait de levure stérile, la cétrimide et la
nosa présumés.
gélose, et porter à ébullition jusqu‘à ce que la gélose soit dis-
soute. Introduire la poudre de lait écrémé dans un récipient en
5.3 Milieu 19 selon Drake verre, à part, contenant de l’eau et agiter, de préférence à l’aide
d’un agitateur magnétique, jusqu‘à ce que la poudre soit
complètement dissoute. Traiter les deux solutions séparément
5.3.1 Composition
à l’autoclav
...