ISO 20418-1:2018

Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some animal hair fibres — Part 1: Peptide detection using LC-ESI-MS with protein reduction

ISO 20418-1:2018 specifies a qualitative and quantitative testing method to determine the content of wool, cashmere, yak fibres and their blends in textiles by microscope preliminary screening, protein extraction, enzymatic digestion and specific peptides detection using a liquid chromatography-mass spectrometer equipped with electrospray ionization source (LCI-ESI-MC). This method can be applied to relevant textile products at each process stage (i.e. from raw material to garment) with a homogeneous distribution of the components. It can be applied to different types of textile materials (e.g. staples, tops, yarns and fabrics) that contain wool, cashmere or yak fibres and their blends. The method is based on a preliminary identification of all fibres in the blend on the basis of their morphology, by light microscopy. The proteins are then extracted by a thiourea/urea/dithiothreitol (DTT) solution. An enzymatic digestion by trypsin of the protein extracted from the fibres is carried out. Analysis of the specific markers is performed by LC-MS and the percent composition is calculated. This method is applicable to samples containing other kinds of fibres than wool, cashmere and yak, by combining its results with the results obtained using the ISO 1833 series and/or the ISO 17751 series. ISO 20418-1:2018 does not apply if fibres of the same animal species are present (e.g. blends of cashmere and mohair); in this case, the quantitative analysis can be performed using microscopic analysis (e.g. ISO 17751 series).

Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de certaines fibres animales — Partie 1: Détection des peptides par LC-ESI-MS avec réduction protéique

Le présent document spécifie une méthode d'essai qualitative et quantitative pour la détermination de la composition des fibres de laine, de cachemire, de yack et leurs mélanges dans les textiles par contrôle préliminaire au microscope, extraction protéique, digestion enzymatique et détection de peptides spécifiques au moyen d'un système de chromatographie en phase liquide-spectrométrie de masse équipé d'une source d'ionisation par électropulvérisation (LC-ESI-MS). Cette méthode peut être appliquée aux produits textiles pertinents à chaque étape de fabrication (c'est-à-dire, de la matière première au vêtement) avec une distribution homogène des composants. Elle peut être appliquée à différents types de matières textiles (par exemple, fibres à filer, rubans de peigné, fils et étoffes) qui contiennent des fibres de laine, de cachemire ou de yack et leurs mélanges. La méthode repose sur une identification préliminaire de toutes les fibres présentes dans le mélange sur la base de leur morphologie, par microscopie optique. Les protéines sont ensuite extraites par une solution de thiourée/urée/dithiothréitol (DTT). Une digestion enzymatique par la trypsine de la protéine extraite des fibres est réalisée. Une analyse des marqueurs spécifiques est réalisée par LC-MS et la composition en pourcentage est calculée. La présente méthode est applicable aux échantillons contenant d'autres types de fibres que la laine, le cachemire et le yack, en combinant ses résultats avec les résultats obtenus en utilisant la série ISO 1833 et/ou la série ISO 17751. Le présent document ne s'applique pas si des fibres de la même espèce animale sont présentes (par exemple, mélanges de cachemire et de mohair); dans ce cas, l'analyse quantitative peut être réalisée par microscopie (par exemple, série ISO 17751).

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 22-Mar-2018
• ICS: 59.060.01 - Textile fibres in general
• Technical Committee: ISO/TC 38 - Textiles
• Drafting Committee: ISO/TC 38/WG 22 - Composition and chemical testing
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 20-Jul-2023

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20418-1
First edition
2018-03
Textiles — Qualitative and
quantitative proteomic analysis of
some animal hair fibres —
Part 1:
Peptide detection using LC-ESI-MS
with protein reduction
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de
certaines fibres animales —
Partie 1: Détection des peptides par LC-ESI-MS avec réduction
protéique
Reference number
ISO 20418-1:2018(E)
©
ISO 2018

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ISO 20418-1:2018(E)

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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
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Published in Switzerland
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ISO 20418-1:2018(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Abbreviated terms . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Test method . 3
7.1 Sampling . 3
7.2 Preliminary identification . 3
7.3 Sample preparation . 3
7.4 Protein extraction . 4
7.5 Trypsin digestion of the extracted proteins . 4
7.6 Tryptic peptides analysis by LC-ESI-MS . 4
7.7 Calculation and expression of results. 4
7.8 Test report . 5
Annex A (informative) Parameters . 6
Annex B (informative) Markers . 8
Annex C (informative) Examples of interlaboratory results . 9
Bibliography .11
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ISO 20418-1:2018(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: www .iso .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 38, Textiles.
A list of all parts in the ISO 20418 series can be found on the ISO website.
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ISO 20418-1:2018(E)

Introduction
International producers of textiles in cashmere and other speciality fibres have to be aware of and be
able to guarantee the fibre content in order to protect consumers and defend themselves from common
frauds. Therefore, it is important to have a harmonized method of analysis at an international level to
avoid different interpretations of the results and related conflicts between stakeholders.
The innovations in the method described in this document are
— objective qualitative determination of the presence of fibres derived from animal species and
— quantitative assessment of the relative percentages present in blends.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20418-1:2018(E)
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis
of some animal hair fibres —
Part 1:
Peptide detection using LC-ESI-MS with protein reduction
1 Scope
This document specifies a qualitative and quantitative testing method to determine the content of
wool, cashmere, yak fibres and their blends in textiles by microscope preliminary screening, protein
extraction, enzymatic digestion and specific peptides detection using a liquid chromatography-mass
spectrometer equipped with electrospray ionization source (LCI-ESI-MC).
This method can be applied to relevant textile products at each process stage (i.e. from raw material
to garment) with a homogeneous distribution of the components. It can be applied to different types of
textile materials (e.g. staples, tops, yarns and fabrics) that contain wool, cashmere or yak fibres and their
blends. The method is based on a preliminary identification of all fibres in the blend on the basis of their
morphology, by light microscopy. The proteins are then extracted by a thiourea/urea/dithiothreitol
(DTT) solution. An enzymatic digestion by trypsin of the protein extracted from the fibres is carried
out. Analysis of the specific markers is performed by LC-MS and the percent composition is calculated.
This method is applicable to samples containing other kinds of fibres than wool, cashmere and yak, by
combining its results with the results obtained using the ISO 1833 series and/or the ISO 17751 series.
This document does not apply if fibres of the same animal species are present (e.g. blends of cashmere
and mohair); in this case, the quantitative analysis can be performed using microscopic analysis (e.g.
ISO 17751 series).
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 137:2015, Wool — Determination of fibre diameter — Projection microscope method
ISO 1833 (all parts), Textiles — Quantitative chemical analysis
ISO 17751 (all parts), Textiles — Quantitative analysis of cashmere, wool, other specialty animal fibers and
their blends
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
© ISO 2018 – All rights reserved 1

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ISO 20418-1:2018(E)

3.1
animal hair fibre
type of keratin fibre for textile use: wool, cashmere and yak
3.2
liquid chromatography – mass spectrometry
LC-ESI-MS
analytical chemistry technique that combines the physical separation capabilities of liquid
chromatography with the mass analysis capabilities of mass spectrometry
3.3
fibre test specimen
portion taken from fibre snippets randomly cut from a laboratory sample for measurement purposes
3.4
trypsin digestion
part of the sample preparation for the mass spectrometric identification which consists in enzymatically
cutting protein by trypsin into a limited number of shorter fragments
3.5
peptide
short fragment derived from a protein after enzymatic digestion
3.6
marker peptide
portion of a protein used for its identification, recovery and purification
3.7
proteomic analysis
systematic identification and quantification of the complete complement of proteins of a biological
system using different techniques of separation and analysis such as mass spectrometry
4 Abbreviated terms
WS cashmere
WO wool
WY yak
5 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Thiourea, 99 %.
5.2 Urea, 99,5 % (reagent plus).
5.3 DL,-dithiothreitol (DTT) >98 % (TLC), >99 % (titration).
5.4 Tris, (hydroxymethyl) aminomethane (Tris), >99,9 %.
5.5 Ammonium bicarbonate, (NH HCO ) eluent additive for LC-MS.
4 3
5.6 Iodoacetamide, (IAM), > 99 % (NMR).
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ISO 20418-1:2018(E)

5.7 Trypsin Type II, from porcine pancreas (1 000 to 2 000) units/mg dry solid or with an
equivalent level.
5.8 Water, LC-MS for LC-MS.
5.9 Hydrochloric acid, 37 % (HCl) >97 %.
5.10 Acetonitrile, LC-MS for LC-MS.
5.11 Formic acid, (HCOOH) reagent gra
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20418-1
Première édition
2018-07
Textiles — Analyse protéomique
qualitative et quantitative de certaines
fibres animales —
Partie 1:
Détection des peptides par LC-ESI-MS
avec réduction protéique
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some
animal hair fibres —
Part 1: Peptide detection using LC-ESI-MS with protein reduction
Numéro de référence
ISO 20418-1:2018(F)
©
ISO 2018

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ISO 20418-1:2018(F)

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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en oeuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
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ISO 20418-1:2018(F)

Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Abréviations . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Méthode d’essai . 3
7.1 Échantillonnage . 3
7.2 Identification préliminaire .4
7.3 Préparation de l’échantillon .4
7.4 Extraction des protéines .4
7.5 Digestion à la trypsine des protéines extraites .4
7.6 Analyse des peptides tryptiques par LC-ESI-MS .4
7.7 Calcul et expression des résultats .5
7.8 Rapport d'essai . 5
Annexe A (informative) Paramètres . 7
Annexe B (informative) Marqueurs . 9
Annexe C (informative) Exemples de résultats d'essais interlaboratoires .10
Bibliographie .12
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ISO 20418-1:2018(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 38, Textiles.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20418 se trouve sur le site Web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
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ISO 20418-1:2018(F)

Introduction
Les producteurs internationaux de textiles en cachemire et autres fibres spéciales doivent connaître et
être capables de garantir la composition en fibres, afin de protéger les consommateurs et de se défendre
contre les fraudes courantes. Par conséquent, il est important de disposer d’une méthode d’analyse
harmonisée au niveau international, afin d’éviter des interprétations différentes des résultats et les
conflits qui pourraient en découler entre les parties prenantes.
Les innovations de la méthode décrite dans le présent document sont:
— la détermination qualitative objective de la présence de fibres dérivées d’espèces animales; et
— l’évaluation quantitative des pourcentages relatifs présents dans les mélanges.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20418-1:2018(F)
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative
de certaines fibres animales —
Partie 1:
Détection des peptides par LC-ESI-MS avec réduction
protéique
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode d’essai qualitative et quantitative pour la détermination de
la composition des fibres de laine, de cachemire, de yack et leurs mélanges dans les textiles par contrôle
préliminaire au microscope, extraction protéique, digestion enzymatique et détection de peptides
spécifiques au moyen d’un système de chromatographie en phase liquide-spectrométrie de masse
équipé d’une source d’ionisation par électropulvérisation (LC-ESI-MS).
Cette méthode peut être appliquée aux produits textiles pertinents à chaque étape de fabrication (c’est-
à-dire, de la matière première au vêtement) avec une distribution homogène des composants. Elle peut
être appliquée à différents types de matières textiles (par exemple, fibres à filer, rubans de peigné, fils
et étoffes) qui contiennent des fibres de laine, de cachemire ou de yack et leurs mélanges. La méthode
repose sur une identification préliminaire de toutes les fibres présentes dans le mélange sur la base
de leur morphologie, par microscopie optique. Les protéines sont ensuite extraites par une solution de
thiourée/urée/dithiothréitol (DTT). Une digestion enzymatique par la trypsine de la protéine extraite
des fibres est réalisée. Une analyse des marqueurs spécifiques est réalisée par LC-MS et la composition
en pourcentage est calculée.
La présente méthode est applicable aux échantillons contenant d’autres types de fibres que la laine, le
cachemire et le yack, en combinant ses résultats avec les résultats obtenus en utilisant la série ISO 1833
et/ou la série ISO 17751.
Le présent document ne s'applique pas si des fibres de la même espèce animale sont présentes (par
exemple, mélanges de cachemire et de mohair); dans ce cas, l’analyse quantitative peut être réalisée par
microscopie (par exemple, série ISO 17751).
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 137:2015, Laine — Détermination du diamètre des fibres — Méthode du microscope à projection
ISO 1833 (toutes les parties), Textiles — Analyse chimique quantitative
ISO 17751 (toutes les parties), Textiles — Analyse quantitative du cachemire, de la laine, d’autres fibres
animales spéciales et leurs mélanges
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
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ISO 20418-1:2018(F)

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1
fibre animale
type de fibre de kératine pour usage textile: laine, cachemire et yack
3.2
chromatographie en phase liquide – spectrométrie de masse
LC-ESI-MS
technique de chimie analytique qui combine les capacités de séparation physique de la chromatographie
en phase liquide avec les capacités d’analyse de masse de la spectrométrie de masse
3.3
prise d’essai de fibre
portion extraite à partir de tronçons de fibre coupés de manière aléatoire à partir d’un échantillon de
laboratoire à des fins de mesurage
3.4
digestion à la trypsine
partie de la préparation d’un échantillon pour identification par spectrométrie de masse, consistant à
couper la protéine par une méthode enzymatique à l’aide de trypsine en un nombre limité de fragments
plus courts
3.5
peptide
fragment court dérivé d’une protéine après digestion enzymatique
3.6
marqueur peptidique
portion d’une protéine utilisée pour son identification, sa récupération et sa purification
3.7
analyse protéomique
identification et quantification systématiques du complément complet de protéines d’un système
biologique en utilisant différentes techniques de séparation et d’analyse, telles que la spectrométrie
de masse
4 Abréviations
WS cachemire
WO laine
WY yack
5 Réactifs
Durant l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
5.1 Thiourée, 99 %.
5.2 Urée, 99,5 % (réactif plus).
2 © ISO 2018 – Tous droits réservés

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ISO 20418-1:2018(F)

5.3 DL,-dithiothréitol (DTT) >98 % (TLC), >99 % (titration).
5.4 Tris, (hydroxyméthyl) aminométhane (Tris), >99,9 %.
5.5 Bicarbonate d’ammonium, (NH HCO ) additif éluant pour LC-MS.
4 3
5.6 Iodoacétamide, (IAM), > 99 % (RMN).
5.7 Trypsine de type II, de pancréas porcin (1 000 à 2 000) unités/mg solide sec ou avec taux
équivalent.
5.8 Eau, LC-MS pour LC-MS.
5.9 Acide chlorhydrique, 37 % (HCl) >97 %.
5.10 Acétonitrile, LC-MS pour LC-MS.
5.11 Acide formique, (HCOOH) qualité réactif >95 %.
6 Appareillage
Appareillage de laboratoire habituel et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Microscope optique (MO) conformément à l’ISO 17751-1.
6.2 Appareil Soxhlet composé d’un condenseur, d’un extracteur, d’un ballon et d’une cartouche
(généralement en papier filtre épais) qui retient l'échantillon.
6.3 Microtome
...