ISO 8451:1991

Tobacco — Determination of starch content — Enzymatic method

Specifies a method for the determination of natural starch in tobacco and tobacco products. Modified kinds of starch (phosphorylized or oxidized) do not react. Annex A is for information only.

Tabac — Détermination de la teneur en amidon — Méthode enzymatique

Tobak - Določanje vsebnosti škroba - Encimatska metoda

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 14-Aug-1991
• Withdrawal Date: 14-Aug-1991
• ICS: 65.160 - Tobacco, tobacco products and related equipment
• Technical Committee: ISO/TC 126/SC 2 - Leaf tobacco
• Drafting Committee: ISO/TC 126/SC 2 - Leaf tobacco
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 21-May-2002
• Ref Project: SIST ISO 8451:1995 - Tobacco -- Determination of starch content -- Enzymatic method

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL
8451
STANDARD
First edition
1991-08-15
----- -------
-_________ _ _. _-__.__._____ -____ _-_-. - -_-_ -- _I._ ----. .- __- -- -- -. - . . _ - _.-._ -.-- .-_-- .---. .---. -_-.-------_-- ---. ____-.-_
Tobacco - Determination of starch content -
Enzymatic method
D&termination de la teneur en amidon .-- M@thode enzymatique
Tahac -
---
.-_.-______ ___ ___-_-__________ -_--- _._.-. -- . .------ -I-.--- -.-. I__-._- _-.- _-- ---- ---*-- -___________-
=--
-- .- -.---
-- --
Reference number
-_----- - _. _- -
_____ ._._ -.__-_ --. - IS0 8451:1991(E)

---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 8451:1991(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Interna-
tional Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard IS0 8451 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products, Sub-Committee SC 2, Leaf
tobacco.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without
permission in writing from the publisher.
International Organizati
on for Stand ardization
Case Postale 56 @. CH-1 21 1 Genhve 20 + Switzer land
Printed in Switzerland
ii

---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 8451:1991(E)
INTERNATIONAL STANDARD
- Determination of starch content - Enzymatic
Tobacco
method
HK
1 Scope
Glucose + ATP f-r- G-6-P -t- ADP . . .
(2)
This International Standard specifies a method for
the determination of natural starch in tobacco and
In the presence of G6P-OH, qlucose-6-phosphate is
\
tobacco products. The method is applicable to all
oxidized by nicotinamide adenine dinucleotide
types of tobacco and tobacco products.
phosphate (NADP) to gluconate-6-phosphate (G-6-P)
with formation of the reduced form of NADP
NOTES
(NADPH) [equation (3)].
1 Modified kinds of starch (phosphorylized or oxidized)
G6P-OH
do not react.
G-6-P + NADP’ e” gluconate-6-phosphate
2 If this method is used for tobaccos or tobacco products
that have been cased with sugars, determine glucose be-
+ NADPH + H’ . . .
(3)
fore hydrolysis and then correct the glucose determi-
nation after analysis for the proper determination of
The amount of NADFH formed in the above reaction
starch content.
is stoichiometric with the amount of qlucose. NADPH
is determined by means of its ‘absorbance at
334 nm, 340 nm or 365 nm.
2 Definition
4 Reagents and preparation of the
For the purposes of this International Standard, the
solutions
following definition applies.
2.1 starch content of tobacco: The content of the
4.1 Reagents
substances determined by the procedure specified
in this International Standard and expressed as a
Use only reagents of recognized analytical grade
percentage of starch @z/m).
and freshly redistilled water in glassware.
4.1 .I Citric acid monohydrate, C,H,O,.H,O.
3 Reactions
4.1.2 Trisodium citrate dihydrate, C,H,Na,0,.2H,O.
In the presence of the enzyme amyloglucosidase
(AGS), starch is hydrolyzed to glucose at pH 4,6
4.1.3 Amyloglucosidase, AGS, about 6 units/mg
[equation (l)].
lyophilisate.
AGS
Starch + (IZ - 1) (H,O) it 12 glucose . . . (1)
4.1.4 Triethanolamine hydrochloride,
C,H,,NO,.HCI.
The glucose formed is determined with hexokinase
4.1.5 Magnesium sulfate heptahydrate,
(HK) and glucose-6-phosphate dehydrogenase
MgS0,.7H,O.
(GGP-DH) at pH 7,6. Glucose is phosphorylated to
glucose-6-phosphate (G-6-P)
bY
4.1.6 Sodium hydroxide solution,
adenosine-5’-triphosphate (ATP) [equation (2)] in
c(NaOH) = 5 mol/l.
the presence of hexokinase.

---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 8451:1991(E)
4.1.7 Nicotinamide adenine dinucfeotide 4.2.5 Adenosine-5’-triphosphate (ATP) solution
phosphate-disodium salt, NADP-Na,.
Dissolve 300 mq adenosine-5’ triphosphate-
disodium salt (4.1:8) and 300 mq sodium hydrogen
,
4.1.8 Adenosine-5’ triphosphate-disodium salt,
carbonate (4.1.9) in 6 ml water.
ATP-Na,H,.
The solution is stable for at least 4 weeks at -t- 4 T.
4.1.9 Sodium hydrogen carbonate, NaHCO,.
4.2.6 Hexokinase/glucose=6=phosphate
dehydrogenase
4.1 .I0 Hexokinase/glucose=6=phosphate
dehydrogenase, HK/G6P-OH.
HK/GGP-OH (2 mg HK/ml suspension in 3,2 mol/l
ammonium sulfate solution; 1 mg G6P-OH/ml sus-
4.1.11 Dimethyl sulfoxide, CH,SOCH,. pension in 3,2 mol/l ammonium sulfate solution).
Use the suspension undiluted
4.1.12 Hydrochloric acid, c(HCI) = 8 mol/l.
The suspension is stable for at least 1 year at
-I- 4 “C.
4.2 Preparation of the solutions
5 Apparatus
4.2.1 Citrate buffer, pH 4,6
Usual laboratory equipment, and in particular
Dissolve 88 mg citric acid monohydrate (4.1 .I) and
170 mg trisodium citrate dihydrate (4.1.2) in water
and dilute to 20 ml; Check the pH value of 4,6 by
5.1 Spectrometer, suitable for making measure-
glass electrode.
ments at 340 nm.
The buffer is stable for at least 1 year at -t- 4 OC.
NOTE 3 Spectral line filter photometers suitable for
making measurements at 334 nm and 365 nm (mercury
Bring the buffer solution to 20 OC to 25 OC before
lamps) may also be used.
use.
5.2 Laboratory mill.
4.2.2 Amyloglucosidase (AGS) solution
Dissolve 29 mg lyophilized AGS (41.3) in I,2 ml
5.3 Wire sieve, O,3 mm sieve aperture.
citrate buffer (4.2.1).
The solution is stable for at least 6 months at
5.4 Glass cuvette, IO mm optical path length.
+ 4 OC.
5.5 Narrow neck volumetric flask. of capacity
4.2.3 Triethanolamine buffer, p
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 8451:1995
01-maj-1995
7REDN'RORþDQMHYVHEQRVWLãNURED(QFLPDWVNDPHWRGD
Tobacco -- Determination of starch content -- Enzymatic method
Tabac -- Détermination de la teneur en amidon -- Méthode enzymatique
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 8451:1991
ICS:
65.160 7REDNWREDþQLL]GHONLLQ Tobacco, tobacco products
RSUHPD and related equipment
SIST ISO 8451:1995 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------

SIST ISO 8451:1995

---------------------- Page: 2 ----------------------

SIST ISO 8451:1995
INTERNATIONAL
8451
STANDARD
First edition
1991-08-15
----- -------
-_________ _ _. _-__.__._____ -____ _-_-. - -_-_ -- _I._ ----. .- __- -- -- -. - . . _ - _.-._ -.-- .-_-- .---. .---. -_-.-------_-- ---. ____-.-_
Tobacco - Determination of starch content -
Enzymatic method
D&termination de la teneur en amidon .-- M@thode enzymatique
Tahac -
---
.-_.-______ ___ ___-_-__________ -_--- _._.-. -- . .------ -I-.--- -.-. I__-._- _-.- _-- ---- ---*-- -___________-
=--
-- .- -.---
-- --
Reference number
-_----- - _. _- -
_____ ._._ -.__-_ --. - IS0 8451:1991(E)

---------------------- Page: 3 ----------------------

SIST ISO 8451:1995
IS0 8451:1991(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Interna-
tional Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies
casting a vote.
International Standard IS0 8451 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products, Sub-Committee SC 2, Leaf
tobacco.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without
permission in writing from the publisher.
International Organizati
on for Stand ardization
Case Postale 56 @. CH-1 21 1 Genhve 20 + Switzer land
Printed in Switzerland
ii

---------------------- Page: 4 ----------------------

SIST ISO 8451:1995
IS0 8451:1991(E)
INTERNATIONAL STANDARD
- Determination of starch content - Enzymatic
Tobacco
method
HK
1 Scope
Glucose + ATP f-r- G-6-P -t- ADP . . .
(2)
This International Standard specifies a method for
the determination of natural starch in tobacco and
In the presence of G6P-OH, qlucose-6-phosphate is
\
tobacco products. The method is applicable to all
oxidized by nicotinamide adenine dinucleotide
types of tobacco and tobacco products.
phosphate (NADP) to gluconate-6-phosphate (G-6-P)
with formation of the reduced form of NADP
NOTES
(NADPH) [equation (3)].
1 Modified kinds of starch (phosphorylized or oxidized)
G6P-OH
do not react.
G-6-P + NADP’ e” gluconate-6-phosphate
2 If this method is used for tobaccos or tobacco products
that have been cased with sugars, determine glucose be-
+ NADPH + H’ . . .
(3)
fore hydrolysis and then correct the glucose determi-
nation after analysis for the proper determination of
The amount of NADFH formed in the above reaction
starch content.
is stoichiometric with the amount of qlucose. NADPH
is determined by means of its ‘absorbance at
334 nm, 340 nm or 365 nm.
2 Definition
4 Reagents and preparation of the
For the purposes of this International Standard, the
solutions
following definition applies.
2.1 starch content of tobacco: The content of the
4.1 Reagents
substances determined by the procedure specified
in this International Standard and expressed as a
Use only reagents of recognized analytical grade
percentage of starch @z/m).
and freshly redistilled water in glassware.
4.1 .I Citric acid monohydrate, C,H,O,.H,O.
3 Reactions
4.1.2 Trisodium citrate dihydrate, C,H,Na,0,.2H,O.
In the presence of the enzyme amyloglucosidase
(AGS), starch is hydrolyzed to glucose at pH 4,6
4.1.3 Amyloglucosidase, AGS, about 6 units/mg
[equation (l)].
lyophilisate.
AGS
Starch + (IZ - 1) (H,O) it 12 glucose . . . (1)
4.1.4 Triethanolamine hydrochloride,
C,H,,NO,.HCI.
The glucose formed is determined with hexokinase
4.1.5 Magnesium sulfate heptahydrate,
(HK) and glucose-6-phosphate dehydrogenase
MgS0,.7H,O.
(GGP-DH) at pH 7,6. Glucose is phosphorylated to
glucose-6-phosphate (G-6-P)
bY
4.1.6 Sodium hydroxide solution,
adenosine-5’-triphosphate (ATP) [equation (2)] in
c(NaOH) = 5 mol/l.
the presence of hexokinase.

---------------------- Page: 5 ----------------------

SIST ISO 8451:1995
IS0 8451:1991(E)
4.1.7 Nicotinamide adenine dinucfeotide 4.2.5 Adenosine-5’-triphosphate (ATP) solution
phosphate-disodium salt, NADP-Na,.
Dissolve 300 mq adenosine-5’ triphosphate-
disodium salt (4.1:8) and 300 mq sodium hydrogen
,
4.1.8 Adenosine-5’ triphosphate-disodium salt,
carbonate (4.1.9) in 6 ml water.
ATP-Na,H,.
The solution is stable for at least 4 weeks at -t- 4 T.
4.1.9 Sodium hydrogen carbonate, NaHCO,.
4.2.6 Hexokinase/glucose=6=phosphate
dehydrogenase
4.1 .I0 Hexokinase/glucose=6=phosphate
dehydrogenase, HK/G6P-OH.
HK/GGP-OH (2 mg HK/ml suspension in 3,2 mol/l
ammonium sulfate solution; 1 mg G6P-OH/ml sus-
4.1.11 Dimethyl sulfoxide, CH,SOCH,. pension in 3,2 mol/l ammonium sulfate solution).
Use the suspension undiluted
4.1.12 Hydrochloric acid, c(HCI) = 8 mol/l.
The suspension is stable for at least 1 year at
-I- 4 “C.
4.2 Preparation of the solutions
5 Apparatus
4.2.1 Citrate buffer, pH 4,6
Usual laboratory equipment, and in particular
Dissolve 88 mg citric acid monohydrate (4.1 .I) and
170 mg trisodium citrate dihydrate (4.1.2) in water
and dilute to 20 ml; Check the pH value of 4,6 by
5.1 Spectrometer, suitable for making measure-
glass electrode.
ments at 340 nm.
The buffer is stable for at least 1 year at -t- 4 OC.
NOTE 3 Spectral line filter photometers suitable for
m
...

NORME
8451
INTERNATIONALE
Première édition
1991-08-15
--_--I___.__-_______.___.__-. - ---. -.- .-.-._I__C -----------P--P
---a- ---p-p
I
Tabac - Détermination de la teneur en
amidon - Méthode enzymatique
Tobacco - Deferminafion of star& corifenf - Enzymafic mefhod
--.--- .CI__-------.---_------ -
----*
Numéro de référence
------. -- -. - -
-- - -- _. _ . .- ISO 8451:1991(F)
__ _

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
Avant-propos
LT30 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre ink
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8451 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comité SC 2, Tabacs
en feuilles.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
de normalisation
Organisation internationale
Genhve 20 l Suisse
Case Postale 56 @. CH-121 1
Imprimé en Suisse
ii

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
NORME INTERNATIONALE
Tabac - Détermination de la teneur en amidon - Méthode
enzymatique
HK
1 Domaine d’application
Glucose -I- ATP r2 G-6-P t- ADP . . .
(2)
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de l’amidon naturel
En présence de G6P-DH, le glucose-6-phosphate est
dans le tabac et les produits du tabac. Cette mé-
oxydé par le nicotinamide adénine dinucléotide
thode s’applique à tous les types de tabac et pro-
phosphate (NADP) en gluconate-6-phosphate (G-6-P)
duits du tabac.
avec formation de la forme réduite de NADP
(NADPH) [équation (3)].
NOTES
G6P-DH
1 Les types d’amidon modifiés (phosphorylés ou oxydés)
G-6-P + NADP! 2 gluconate-6-phosphate
ne réagissent pas.
2 Si cette méthode est utilisée sur des tabacs ou pro-
-F NADPH + H’ . . .
(3)
duits du tabac ayant recu des sauces contenant des su-
cres, déterminer la teneur en glucose avant hydrolyse et
La quantité de NADPH formée au cours de la réac-
corriger ensuite la teneur en glucose après hydrolyse
tion indiquée ci-dessus est stoechiométrique à la
pour une détermination correcte de la teneur en amidon.
quantité de glucose. Elle est mesurée à une absor-
bance de 334 mn, 340 nm ou 365 nm.
2 Définitlon
4 Réactifs et préparation des solutions
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
nale, la définition suivante s’applique.
4.1 Réactifs
2.1 teneur en amidon du tabac: Teneur en sub-
Tous les réactifs utilisés doivent être de ,qualité
stances déterminée par la procédure spécifiée dans
analytique reconnue. L’eau utilisée doit avoir été
la présente Norme internationale, exprimée en
récemment bidistillée dans un appareil en verre.
pourcentage d’amidon (m/m).
4.1 .l Acide citrique, monohydraté, C,H,O,,H,O.
3 Réactions
4.1.2 Cit&e trisodique, dihydraté,
C,H,Na,0,,2H,O.
En présence de l’enzyme amyloglucosidase (AGS),
l’amidon est hydrolysé en glucose à pH 4,6
4.1.3 Amyloglucosidase, AGS, environ 6 unités/mg
[équation (1) J.
de lyophilisat.
AGS
. . . (1)
Amidon + (n - 1) (H*O) s II glucose
4.1.4 Hydrochlorure de triéthanolamine,
C,H,,NO,,HCI.
Le glucose forme est déterminé avec de
4.1.5 Sulfate de magnésium, heptahydraté,
I’hexokinase (HK) et du glucose-6-phosphate
MgS0,,7H,O.
déhydrogénase (G6P-DH) à pH 7,6. Le glucose est
phosphorylé en glucose-6-phosphate (G-6-P) par de
I’adénosine-5’-triphosphate (ATP) [équation (2)] en 4.1.6 Hydroxyde de sodium, solution
présence d’hexokinase.
c(NaOH) I= 5 mol/l.

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
4.1.7 Micotinamide adénine dinucléotide La solution est stable pendant au moins 4 swnaines
phosphate-sel disodique, NADP-Na,. à + 4 OC.
4.2.5 Solution d’adénosine-Y-triphosphate (ATP)
4.1.8 Adénosine-5’ triphosphate-sel disodique,
ATP-Na,H,.
Dissoudre 300 mq d’adhnosine-5’ triphosphate-sel
disodique (4.1.8) 4.1.9 Hydrogénocarbonate de sodium, NaHC03.
de sodium (4.1.9) dans 6 mi d’eau. .
4.1 .lO HexokinaseIglucose-6-phosphate La solution est stable pendant au moins 4 semaines
déhydrogénase, HK/G6P-DH. à + 4 OC.
4.2.6 Hexokinase/gIucose-6-phosphate
4.1 .ll Sulfoxyde diméthylique, CH,SOCH,.
déhydrogénase
4.1.12 Acide chlorhydrique, c(HCI) = 8 mol/l.
HK/G6P-DH (2 mg HK/ml suspension dans une so-
lution de sulfate d’arnmonium 2 3,2 mol/l; 1 rng
4.2 Préparation des solutions GGP-DH/ml suspension dans une solution de sulfate
d’ammonium à 3.2 mol/!).
4.2.1 Tampon de citrate, pH 4,6
Utiliser la suspension non diluée.
Dissoudre 88 mg de monohydrate d’acide citrique
La suspension est shble pendant au moins un an à
(4.1.1) et 170 mg de dihydrate de citrate trisodique
-t- 4 OC.
(4.12) dans de l’eau et compléter avec de l’eau jus-
qu’à 20 ml. Vérifier la valeur du pH au moyen d’une
5 Appareillage
électrode en verre. .
Le tampon est stable pendant au moins une année
fv!atériel courant de laboratoire, et notamment
à + 4 OC.
5.1 Spectromètre, permettant d’opérer à 340 nm.
Porter la solution tampon à une température com-
prise entre 20 OC et 25 OC avant emploi.
NOTE 3 Des photomètres filtres à raies spectrales per-
mettant d’opiirer à 334 nrn et 365 nrn (lampes de mer-
cure) peuvent aussi 6tre utilis6s.
4.2.2 Solution d’amyloglucosidase (AGS)
Dissoudre 29 mg d’AGS (4.1.3) lyophilisée dans
5.2 Broyeur de laboratoire.
l,2 ml de tampon de citrate (4.2.1).
5.3 Tamis en fil métallique. d’ouverture de maille
La solution est stable pendant au moins 6 mois à
0,3 mm.
+ 4 “C.
5.4 Cuve en verre. ayar~t II~I parcours optique de
4.2.3 Tampon de triéthanolamine, pH 7,6
10 mm.
Dissoudre 14 g d’hydrochlorure de triéthanolamine
5.5 fl
...

NORME
8451
INTERNATIONALE
Première édition
1991-08-15
--_--I___.__-_______.___.__-. - ---. -.- .-.-._I__C -----------P--P
---a- ---p-p
I
Tabac - Détermination de la teneur en
amidon - Méthode enzymatique
Tobacco - Deferminafion of star& corifenf - Enzymafic mefhod
--.--- .CI__-------.---_------ -
----*
Numéro de référence
------. -- -. - -
-- - -- _. _ . .- ISO 8451:1991(F)
__ _

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
Avant-propos
LT30 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre ink
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8451 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac, sous-comité SC 2, Tabacs
en feuilles.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
de normalisation
Organisation internationale
Genhve 20 l Suisse
Case Postale 56 @. CH-121 1
Imprimé en Suisse
ii

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
NORME INTERNATIONALE
Tabac - Détermination de la teneur en amidon - Méthode
enzymatique
HK
1 Domaine d’application
Glucose -I- ATP r2 G-6-P t- ADP . . .
(2)
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de l’amidon naturel
En présence de G6P-DH, le glucose-6-phosphate est
dans le tabac et les produits du tabac. Cette mé-
oxydé par le nicotinamide adénine dinucléotide
thode s’applique à tous les types de tabac et pro-
phosphate (NADP) en gluconate-6-phosphate (G-6-P)
duits du tabac.
avec formation de la forme réduite de NADP
(NADPH) [équation (3)].
NOTES
G6P-DH
1 Les types d’amidon modifiés (phosphorylés ou oxydés)
G-6-P + NADP! 2 gluconate-6-phosphate
ne réagissent pas.
2 Si cette méthode est utilisée sur des tabacs ou pro-
-F NADPH + H’ . . .
(3)
duits du tabac ayant recu des sauces contenant des su-
cres, déterminer la teneur en glucose avant hydrolyse et
La quantité de NADPH formée au cours de la réac-
corriger ensuite la teneur en glucose après hydrolyse
tion indiquée ci-dessus est stoechiométrique à la
pour une détermination correcte de la teneur en amidon.
quantité de glucose. Elle est mesurée à une absor-
bance de 334 mn, 340 nm ou 365 nm.
2 Définitlon
4 Réactifs et préparation des solutions
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
nale, la définition suivante s’applique.
4.1 Réactifs
2.1 teneur en amidon du tabac: Teneur en sub-
Tous les réactifs utilisés doivent être de ,qualité
stances déterminée par la procédure spécifiée dans
analytique reconnue. L’eau utilisée doit avoir été
la présente Norme internationale, exprimée en
récemment bidistillée dans un appareil en verre.
pourcentage d’amidon (m/m).
4.1 .l Acide citrique, monohydraté, C,H,O,,H,O.
3 Réactions
4.1.2 Cit&e trisodique, dihydraté,
C,H,Na,0,,2H,O.
En présence de l’enzyme amyloglucosidase (AGS),
l’amidon est hydrolysé en glucose à pH 4,6
4.1.3 Amyloglucosidase, AGS, environ 6 unités/mg
[équation (1) J.
de lyophilisat.
AGS
. . . (1)
Amidon + (n - 1) (H*O) s II glucose
4.1.4 Hydrochlorure de triéthanolamine,
C,H,,NO,,HCI.
Le glucose forme est déterminé avec de
4.1.5 Sulfate de magnésium, heptahydraté,
I’hexokinase (HK) et du glucose-6-phosphate
MgS0,,7H,O.
déhydrogénase (G6P-DH) à pH 7,6. Le glucose est
phosphorylé en glucose-6-phosphate (G-6-P) par de
I’adénosine-5’-triphosphate (ATP) [équation (2)] en 4.1.6 Hydroxyde de sodium, solution
présence d’hexokinase.
c(NaOH) I= 5 mol/l.

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8451:1991(F)
4.1.7 Micotinamide adénine dinucléotide La solution est stable pendant au moins 4 swnaines
phosphate-sel disodique, NADP-Na,. à + 4 OC.
4.2.5 Solution d’adénosine-Y-triphosphate (ATP)
4.1.8 Adénosine-5’ triphosphate-sel disodique,
ATP-Na,H,.
Dissoudre 300 mq d’adhnosine-5’ triphosphate-sel
disodique (4.1.8) 4.1.9 Hydrogénocarbonate de sodium, NaHC03.
de sodium (4.1.9) dans 6 mi d’eau. .
4.1 .lO HexokinaseIglucose-6-phosphate La solution est stable pendant au moins 4 semaines
déhydrogénase, HK/G6P-DH. à + 4 OC.
4.2.6 Hexokinase/gIucose-6-phosphate
4.1 .ll Sulfoxyde diméthylique, CH,SOCH,.
déhydrogénase
4.1.12 Acide chlorhydrique, c(HCI) = 8 mol/l.
HK/G6P-DH (2 mg HK/ml suspension dans une so-
lution de sulfate d’arnmonium 2 3,2 mol/l; 1 rng
4.2 Préparation des solutions GGP-DH/ml suspension dans une solution de sulfate
d’ammonium à 3.2 mol/!).
4.2.1 Tampon de citrate, pH 4,6
Utiliser la suspension non diluée.
Dissoudre 88 mg de monohydrate d’acide citrique
La suspension est shble pendant au moins un an à
(4.1.1) et 170 mg de dihydrate de citrate trisodique
-t- 4 OC.
(4.12) dans de l’eau et compléter avec de l’eau jus-
qu’à 20 ml. Vérifier la valeur du pH au moyen d’une
5 Appareillage
électrode en verre. .
Le tampon est stable pendant au moins une année
fv!atériel courant de laboratoire, et notamment
à + 4 OC.
5.1 Spectromètre, permettant d’opérer à 340 nm.
Porter la solution tampon à une température com-
prise entre 20 OC et 25 OC avant emploi.
NOTE 3 Des photomètres filtres à raies spectrales per-
mettant d’opiirer à 334 nrn et 365 nrn (lampes de mer-
cure) peuvent aussi 6tre utilis6s.
4.2.2 Solution d’amyloglucosidase (AGS)
Dissoudre 29 mg d’AGS (4.1.3) lyophilisée dans
5.2 Broyeur de laboratoire.
l,2 ml de tampon de citrate (4.2.1).
5.3 Tamis en fil métallique. d’ouverture de maille
La solution est stable pendant au moins 6 mois à
0,3 mm.
+ 4 “C.
5.4 Cuve en verre. ayar~t II~I parcours optique de
4.2.3 Tampon de triéthanolamine, pH 7,6
10 mm.
Dissoudre 14 g d’hydrochlorure de triéthanolamine
5.5 fl
...