ISO 10253:2016

Water quality — Marine algal growth inhibition test with Skeletonema sp. and Phaeodactylum tricornutum

ISO 10253:2016 specifies a method for the determination of the inhibition of growth of the unicellular marine algae Skeletonema sp. and Phaeodactylum tricornutum by substances and mixtures contained in sea water or by environmental water samples (effluents, elutriates, etc.). The method can be used for testing substances that are readily soluble in water and are not significantly degraded or eliminated in any other way from the test medium.

Qualité de l'eau — Essai d'inhibition de la croissance des algues marines avec Skeletonema sp. et Phaeodactylum tricornutum

ISO 10253:2016 spécifie une méthode de détermination de l'inhibition de la croissance des algues marines unicellulaires Skeletonema sp. et Phaeodactylum tricornutum provoquée par des substances et des mélanges présents dans l'eau de mer (effluents, élutriats, etc.). Cette méthode peut être utilisée pour soumettre à l'essai des substances facilement solubles dans l'eau et qui ne sont pas sensiblement dégradées ou éliminées d'autre manière du milieu d'essai.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 03-Nov-2016
• ICS: 13.060.70 - Examination of biological properties of water
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 5 - Biological methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 5/WG 5 - Toxicity - Algae and aquatic plants
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 10-Jul-2024

Relations

• Revises: ISO 10253:2006 - Water quality — Marine algal growth inhibition test with Skeletonema costatum and Phaeodactylum tricornutum
• Effective Date: 31-May-2014

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10253
Third edition
2016-11-15
Water quality — Marine algal
growth inhibition test with
Skeletonema sp. and Phaeodactylum
tricornutum
Qualité de l’eau — Essai d’inhibition de la croissance des algues
marines avec Skeletonema sp. et Phaeodactylum tricornutum
Reference number
©
ISO 2016
© ISO 2016, Published in Switzerland
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
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Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Materials . 3
5.1 Test organisms . 3
5.2 Reagents. 4
6 Apparatus . 5
7 Procedure. 6
7.1 Preparation of growth medium . 6
7.2 Preparation of pre-culture and inoculum . 6
7.3 Choice of test concentrations . 6
7.4 Preparation of test substance stock solutions . 6
7.5 Preparation of test and control batches . 7
7.6 Incubation . 7
7.7 Measurements . 7
8 Validity criteria . 8
9 Interpretation of data . 8
9.1 Plotting growth curves . 8
9.2 Calculation of percentage inhibition . 8
9.3 Determination of EC(r) .
x 9
10 Expression of results . 9
11 Interpretation of results . 9
12 Test report . 9
Annex A (informative) Preparation of dilution series of mixtures in sea water(effluents
or elutriates) .11
Annex B (informative) Test procedure starting from stored algal inocula, and with direct
measurement of algal growth in spectrophotometric cells .12
Annex C (informative) Performance data .18
Bibliography .19
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity assessment,
as well as information about ISO’s adherence to the World Trade Organization (WTO) principles in the
Technical Barriers to Trade (TBT) see the following URL: www.iso.org/iso/foreword.html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological
methods.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 10253:2006), which has been technically
revised.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 10253:2016(E)
Water quality — Marine algal growth inhibition test with
Skeletonema sp. and Phaeodactylum tricornutum
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to
ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this document be
carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This document specifies a method for the determination of the inhibition of growth of the unicellular
marine algae Skeletonema sp. and Phaeodactylum tricornutum by substances and mixtures contained in
sea water or by environmental water samples (effluents, elutriates, etc.).
The method can be used for testing substances that are readily soluble in water and are not significantly
degraded or eliminated in any other way from the test medium.
NOTE With modifications, as described in ISO 14442 and ISO 5667–16, the inhibitory effects of poorly
soluble organic and inorganic materials, volatile compounds, metal compounds, effluents, marine water samples
and elutriates of sediments can be tested.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
ISO 14442, Water quality — Guidelines for algal growth inhibition tests with poorly soluble materials,
volatile compounds, metals and waste water
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http://www.electropedia.org/
— ISO Online browsing platform: available at http://www.iso.org/obp
3.1
cell density
number of cells per unit volume of medium
Note 1 to entry: The cell density is expressed as x cells/ml.
3.2
specific growth rate
µ
proportional rate of increase in cell density per unit of time:
1 dx
μ =× (/1 day)
x dt
where
x is the cell density, expressed in cells per millilitre;
t is the time, expressed in days.
−1
Note 1 to entry: Specific growth rate is expressed in inverse days (day ).
3.3
growth medium
mixture of sea water and nutrients which is used for pre-cultures and controls
3.4
test medium
mixture of sea water, nutrients [growth medium (3.3)] and test material in which algal cells are
incubated
3.5
test batch
mixture of sea water, nutrients and test material [test medium (3.4)] inoculated with algae
3.6
control
mixture of sea water, nutrients [growth medium (3.3)] without test material, inoculated with algae
3.7
effective concentration
EC(r)
x
concentration of test substance which results in an x % reduction in specific growth rate relative to the
controls
4 Principle
Mono-specific algal strains are cultured for several generations in a defined medium containing a
range of concentrations of the test substance, prepared by mixing appropriate quantities of nutrient
concentrate, sea water, stock solutions of the test substance, and an inoculum of exponentially growing
algal cells. The test solutions are incubated for a period of (72 ± 2) h, during which the cell density
in each is measured at intervals of at least every (24 ± 2) h. Inhibition is measured as a reduction in
specific growth rate, relative to control cultures grown under identical conditions.
2 © ISO 2016 – All rights reserved

5 Materials
5.1 Test organisms
Use either of the following marine algae:
1)
a) Skeletonema sp. (CCAP 1077/1C, NIVA BAC 1); or
b) Phaeodactylum tricornutum Bohlin (CCAP 1052/1A, SAG 1090-1a, NIVA BAC 2).
These algae are important and widely distributed phytoplankton species (phylum Bacillariophyta) in
estuarine and coastal areas.
The recommended algae are available in unialgal, non-axenic cultures from the following sources.
NIVA
Norwegian Institute for Water Research
Gaustadaléen 21
N 0349 Oslo
Norway
CCAP
Dunstaffnage Marine Laboratory
P O Box 3 Oban
Argyll PA37 1QA
United Kingdom
SAG
Collection of Algal Cultures
University of Göttingen
Albrecht-von-Haller Institute for Plant Science
Untere Karspüle 2
37073 Göttingen
Germany
Stock cultures may be maintained in the medium described in 7.1. Regular subculturing is necessary.
Weekly intervals may be necessary for Skeletonema sp., every two or three weeks may be sufficient
for Phaeodactylum tricornutum. The stock cultures may also be maintained for extended periods on
richer algal media such as those recommended by the culture collection. It is recommended to keep the
1) The previous editions of this document suggested the use of two strains of Skeletonema costatum. Following a
taxonomic review of the Skeletonema genus, several strains originally identified as S. costa
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10253
Troisième édition
2016-11-15
Qualité de l’eau — Essai d’inhibition
de la croissance des algues marines
avec Skeletonema sp. et
Phaeodactylum tricornutum
Water quality — Marine algal growth inhibition test with
Skeletonema sp. and Phaeodactylum tricornutum
Numéro de référence
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ISO 2016
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Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Matériels . 3
5.1 Organismes d’essai . 3
5.2 Réactifs . 4
5.2.1 Eau . . . 4
5.2.2 Eau de mer . 4
5.2.3 Nutriments . 4
6 Appareillage . 5
7 Mode opératoire. 6
7.1 Préparation du milieu de croissance. 6
7.2 Préparation de la préculture et de l’inoculum . 6
7.3 Sélection des concentrations de l’essai . 6
7.4 Préparation des solutions mères de substance d’essai . 6
7.5 Préparation des lots d’essai et des témoins . 7
7.6 Incubation . 7
7.7 Mesurages . 8
8 Critères de validité . 8
9 Interprétation des données . 8
9.1 Tracé des courbes de croissance . 8
9.2 Calcul du pourcentage d’inhibition . 9
9.3 Détermination des valeurs de EC(r) .
x 9
10 Expression des résultats.10
11 Interprétation des résultats .10
12 Rapport d’essai .10
Annexe A (informative) Préparation des gammes de dilution des mélanges en eau de mer
(effluents ou élutriats) .12
Annexe B (informative) Mode opératoire d’essai à partir d’inocula algaux de conservation,
avec mesurage direct de la croissance algale en cuve spectrophotométrique .13
Annexe C (informative) Données de performance .19
Bibliographie .20
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 147, Qualité de l’eau, Sous-comité 5,
Méthodes biologiques.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 10253:2006), qui a fait l’objet de la
révision technique suivante:
iv © ISO 2016 – Tous droits réservés

NORME INTERNATIONALE ISO 10253:2016(F)
Qualité de l’eau — Essai d’inhibition de la croissance des
algues marines avec Skeletonema sp. et Phaeodactylum
tricornutum
AVERTISSEMENT — Il convient que les utilisateurs du présent document maîtrisent les pratiques
courantes de laboratoire. Le présent document ne prétend pas couvrir tous les problèmes de
sécurité potentiels associés à son utilisation. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de mettre
en place des pratiques d’hygiène et de sécurité adéquates et de s’assurer de la conformité avec
toutes les dispositions réglementaires nationales.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés conformément au présent document le
soient par du personnel qualifié.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de l’inhibition de la croissance des algues
marines unicellulaires Skeletonema sp. et Phaeodactylum tricornutum provoquée par des substances et
des mélanges présents dans l’eau de mer (effluents, élutriats, etc.).
Cette méthode peut être utilisée pour soumettre à l’essai des substances facilement solubles dans l’eau
et qui ne sont pas sensiblement dégradées ou éliminées d’autre manière du milieu d’essai.
NOTE Avec les modifications telles que décrites dans l’ISO 14442 et l’ISO 5667-16, il est possible d’évaluer
par cet essai les effets inhibiteurs des matières organiques et inorganiques peu solubles, des composés volatils,
des composés métalliques, des effluents, des échantillons d’eaux marines et des élutriats de sédiments.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 5667-16, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques
des échantillons
ISO 14442, Qualité de l’eau — Lignes directrices pour essais d’inhibition de la croissance algale avec des
matières peu solubles, des composés volatils, des métaux et des eaux résiduaires
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia disponible à l’adresse http://www.electropedia.org/
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http://www.iso.org/obp
3.1
densité cellulaire
nombre de cellules par unité de volume du milieu
Note 1 à l’article: La densité cellulaire est exprimée en x cellules/ml.
3.2
taux de croissance spécifique
µ
taux proportionnel de l’augmentation de la densité cellulaire par unité de temps:
1 dx
μ =× (/1 jour)
x dt
où
x est la densité cellulaire, exprimée en cellules par millilitre;
t est le temps, exprimé en jours.
−1
Note 1 à l’article: Le taux de croissance spécifique est exprimé en inverse de jours (j ).
3.3
milieu de croissance
mélange d’eau de mer et de nutriments utilisé pour les précultures et les témoins
3.4
milieu d’essai
mélange d’eau de mer, de nutriments [milieu de croissance (3.3)] et de matériel d’essai dans lequel sont
incubées les cellules algales
3.5
lot d’essai
mélange d’eau de mer, de nutriments et de matériel d’essai [milieu d’essai (3.4)] inoculé avec les algues
3.6
témoin
mélange d’eau de mer, de nutriments [milieu de croissance (3.3)] sans matériel d’essai, inoculé avec
les algues
3.7
concentration efficace
EC(r)
x
concentration de la substance d’essai qui entraîne une réduction de x % du taux de croissance spécifique
par rapport à celui des témoins
4 Principe
Des souches monospécifiques d’algues sont cultivées pendant plusieurs générations dans un milieu
défini contenant une plage de concentrations de la substance d’essai, préparées en mélangeant des
quantités adéquates de concentré de nutriments, d’eau de mer et de solutions mères de la substance
d’essai, et un inoculum de cellules algales à croissance exponentielle. Les solutions d’essai sont incubées
pendant une période de (72 ± 2) h, pendant laquelle la densité cellulaire est mesurée dans chacune
des solutions à intervalles réguliers au moins toutes les (24 ± 2) h. L’inhibition est mesurée en tant
que réduction du taux de croissance spécifique, par rapport aux cultures témoins cu
...