ISO 15685:2012
(Main)Soil quality — Determination of potential nitrification and inhibition of nitrification — Rapid test by ammonium oxidation
Soil quality — Determination of potential nitrification and inhibition of nitrification — Rapid test by ammonium oxidation
ISO 15685:2012 specifies a rapid method for the determination of the potential rate of ammonium oxidation and inhibition of nitrification in soils. This method is suitable for all soils containing a population of nitrifying microorganisms. It can be used as a rapid screening test for monitoring soil quality and quality of wastes, and is suitable for testing the effects of cultivation methods, chemical substances [except volatiles i.e. H > 1 (Henry's constant)], extracts of biosolids and pollution in soils.
Qualité du sol — Détermination de la nitrification potentielle et inhibition de la nitrification — Essai rapide par oxydation de l'ammonium
L'ISO 15685:2012 spécifie une méthode rapide de détermination de la vitesse potentielle d'oxydation de l'ammonium et d'inhibition de la nitrification des sols. Cette méthode convient à tous les sols contenant une population de micro-organismes nitrifiants. Elle peut être utilisée comme essai de criblage rapide pour surveiller la qualité des sols et la qualité des déchets et elle convient pour l'évaluation des effets des pratiques agricoles, des substances chimiques [sauf les composés volatils c'est-à-dire H > 1 (constante de Henry)], des extraits de biosolides et de la pollution des sols.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15685
Second edition
2012-07-15
Soil quality — Determination of potential
nitrification and inhibition of nitrification —
Rapid test by ammonium oxidation
Qualité du sol — Détermination de la nitrification potentielle et inhibition
de la nitrification — Essai rapide par oxydation de l’ammonium
Reference number
ISO 15685:2012(E)
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ISO 2012
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ISO 15685:2012(E)
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Published in Switzerland
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ISO 15685:2012(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sampling, storage and characterization of samples . 3
8 Procedure . 4
8.1 Testing soils . 4
8.2 Testing the effect of chemicals . 4
8.3 Testing polluted soils . 4
8.4 Testing water extracts of biosolids . 5
9 Calculations . 5
10 Test report . 5
Annex A (informative) Results of a laboratory ring test . 7
Annex B (informative) Micro-scale measurement of potential nitrification rates. 9
Bibliography . 11
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ISO 15685:2012(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International
Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15685 was prepared by Technical Committee ISO/TC 190, Soil quality, Subcommittee SC 4, Biological methods.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 15685:2004), which has been technically revised.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 15685:2012(E)
Soil quality — Determination of potential nitrification and
inhibition of nitrification — Rapid test by ammonium oxidation
1 Scope
This International Standard specifies a rapid method for the determination of the potential rate of ammonium
oxidation and inhibition of nitrification in soils. This method is suitable for all soils containing a population of
nitrifying microorganisms. It can be used as a rapid screening test for monitoring soil quality and quality of
wastes, and is suitable for testing the effects of cultivation methods, chemical substances [except volatiles,
i.e. H > 1 (Henry’s constant)], extracts of biosolids and pollution in soils.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document
(including any amendments) applies.
ISO 10381-6, Soil quality — Sampling — Part 6: Guidance on the collection, handling and storage of soil under
aerobic conditions for the assessment of microbiological processes, biomass and diversity in the laboratory
ISO 10390, Soil quality — Determination of pH
ISO 10694, Soil quality — Determination of organic and total carbon after dry combustion (elementary analysis)
ISO 11260, Soil quality — Determination of effective cation exchange capacity and base saturation level using
barium chloride solution
ISO 11261, Soil quality — Determination of total nitrogen — Modified Kjeldahl method
ISO 11277, Soil quality — Determination of particle size distribution in mineral soil material — Method by
sieving and sedimentation
ISO 11465, Soil quality — Determination of dry matter and water content on a mass basis — Gravimetric method
ISO 14238, Soil quality — Biological methods — Determination of nitrogen mineralization and nitrification in
soils and the influence of chemicals on these processes
ISO 14256-2, Soil quality — Determination of nitrate, nitrite and ammonium in field-moist soils by extraction
with potassium chloride solution — Part 2: Automated method with segmented flow analysis
EN 14735, Characterization of waste — Preparation of waste samples for ecotoxicity tests
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
inhibitory dose
ID
amount of a chemical added to soil that effectively inhibits biological activity by a stated percentage after a
given time, in comparison with an untreated control
NOTE It is expressed as a percentage. For example, ID25 and ID50 indicate a 25 % and 50 % inhibition of biological
activity, respectively.
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ISO 15685:2012(E)
3.2
biosolids
organic products used in agriculture, which include sewage sludge, compost, manure and some industrial wastes
4 Principle
Ammonium oxidation, the first step in autotrophic nitrification in soil, is used to assess the potential activity of
microbial nitrifying populations. Autotrophic ammonium-oxidizing bacteria are exposed to ammonium sulfate
in a soil slurry buffered at pH 7,2. Oxidation of the nitrite performed by nitrite-oxidizing bacteria in the slurry
is inhibited by the addition of sodium chlorate. The subsequent accumulation of nitrite is measured over a 6 h
incubation period, and is taken as an estimate of the potential activity of ammonium-oxidizing bacteria. As the
generation time of ammonia-oxidizing bacteria is long (> 10 h), the method provides a measure of the potential
activity of the nitrifying population at the time of sampling. It does not measure growth of the nitrifying population.
Chemical test substances and extracts of biosolids can be tested by adding them to the slurry at various
concentrations. The test can be used for comparison of different soils (e.g. polluted and reference soils).
Effects of polluted soils, waste samples and other solid materials on nitrification can be evaluated by measuring
the method on mixtures of these samples with a reference soil.
Substances known to be active at pH < 7,2 should be added in due time before starting the test to allow
substances to exhibit their effects on nitrifying bacteria.
5 Reagents
5.1 Distilled water.
5.2 Potassium dihydrogenphosphate, c(KH PO = 0,2 mol/l).
2 4
5.3 Dipotassium hydrogenphosphate, c(K HPO = 0,2 mol/l).
2 4
5.4 Sodium chlorate, c(NaClO = 0,5 mol/l).
3
5.5 Diammonium sulfate, (NH ) SO .
4 2 4
5.6 Sodium hydrogencarbonate, c(NaHCO = 5 mmol/l).
3
5.7 Potassium chloride, c(KCl = 4 mol/l).
5.8 Stock solution A.
Prepare stock solution A as follows.
Potassium dihydrogenphosphate, KH PO (5.2) 28 ml
2 4
Dipotassium hydrogenphosphate, K HPO (5.3) 72 ml
2 4
Distilled water (5.1) 100 ml
5.9 Test medium.
Prepare the test medium as follows.
Stock solution A (5.8) 10 ml
Sodium chlorate, NaClO (5.4) 10 ml to 30 ml
3
Diammonium sulfate, (NH ) SO (5.5) 0,198 g
4 2 4
2 © ISO 2012 – All rights reserved
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ISO 15685:2012(E)
Dilute to 1 000 ml with distilled water (5.1).
The test medium contains 1 mmol/l of potassium phosphate buffer, 5 mmol/l to 15 mmol/l of sodium chlorate
and 1,5 mmol/l of diammonium sulfate, and has a pH of approximately 7,2.
The sodium chlorate concentration selected within the range given should be sufficient for effective inhibition
of biological nitrate formation, while not having negative effects on ammonium oxidation. If necessary, test the
influence of the sodium chlorate concentration.
Test chemicals to be added to the test medium shall be dissolved in the phosphate buffer described and added
before diluting to 1 l. For test chemicals with low water solubility, prepare solutions by mechanical dispersion
or by using vehicles such as organic solvents, emulsifiers or dispergents of low toxicity to ammonium-oxidizing
bacteria. If any vehicle is used to add a test chemical to the slurry or a soil, additional control shall be performed
to assess possible effects of this vehicle on ammonium oxidation.
Add extracts of biosolids, when tested, separately to the test medium before dilution to 1 l.
NOTE When a carbon source is needed, e.g. when testing biosolids with high nitrate levels, add 10 ml of
NaHCO (5.6) to the test medium before diluting to 1 l.
3
6 Apparatus
6.1 Ordinary laboratory equipment.
6.2 Orbital shaking incubator, thermostatically controlled.
7 Sampling, storage and characterization of samples
Guidance on sampling, sample processing and storage is given in ISO 10381-6. For the testing of chemicals
or biosolids, or for mixing tests with polluted soils, experimental soil with an ammonium-oxidizing activity of
between 200 ng N/g and 800 ng N/g of dry mass of soil/h, determined from a preliminary experiment, should
be chosen. When testing chemicals, the soil should have a low adsorption capacity (e.g. sandy soils low in
C < 1 %); on the other hand, the soil should have a pH between 5,5 and 7,5.
org
Soil samples can usually be stored in a refrigerator at approximately 4 °C for periods of up to three months prior
to use (ISO 10381-6). Some soils can only be kept in a refrigerator for up to two weeks. Storage of soil samples
in a freezer (‑20 °C) is not generally recommended.
It has been shown for a number of soils from temperate climates that storage at ‑20 °C for up to 12 months does
not inhibit ammonium oxidation activity (Reference [4]). Where such information is available for a particular soil,
storage under such conditions is permissible.
Measurement of the following variables is recommended for characterization of the soil:
— particle size distribution (ISO 11277);
— water content (ISO 11465);
— water-holding capacity (ISO 14238);
— pH (ISO 10390);
— effective cation exchange capacity (ISO 11260);
— organic matter content (ISO 10694);
— total nitrogen content (ISO 11261).
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ISO 15685:2012(E)
8 Procedure
8.1 Testing soils
8.1.1 General
The test design should include at least three replicates of approximately 25 g of moist soil. The water content
of soil for the calculation of dry mass is determined gravimetrically according to ISO 11465.
8.1.2 Initial incubation
Mix soil samples or waste materials with test medium (5.9) to form slurries. The volume of test medium should
be adjusted to give a precise total liquid volume, e.g. 100 ml. Calculate the volume of medium to be added by
subtracting the volume of water in the initial soil or waste sample from the desired liquid volume, e.g. 100 ml.
Incubate the slurries in 250 ml flasks, placed upright on the orbital shaking incubator (6.2), thermostatically
controlled at (25 ± 2) °C. Rotation should be sufficient to keep solids suspended (175 r/min).
A liquid volume greater than 100 ml is required in the slurry if the water-holding capacity of the soil is > 200 %
(organic soils).
8.1.3 Sampling of soil slurry
Take samples (2 ml) of the soil slurry after 2 h and 6 h of incubation, provided that ammonium oxidation is
known to be linear over this period. The soil slurry should be well shaken at sampling times to ensure that
the ratio of solution to soil is constant during the test. Dispense samples into test tubes and add 2 ml of KCl
(5.7) to stop the ammonium oxida
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 15685
Deuxième édition
2012-07-15
Qualité du sol — Détermination de la
nitrification potentielle et inhibition de la
nitrification — Essai rapide par oxydation
de l’ammonium
Soil quality — Determination of potential nitrification and inhibition of
nitrification — Rapid test by ammonium oxidation
Numéro de référence
ISO 15685:2012(F)
©
ISO 2012
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Publié en Suisse
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ISO 15685:2012(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage, conservation et caractérisation des échantillons . 3
8 Mode opératoire . 4
8.1 Essais des sols . 4
8.2 Essais relatifs à l’effet des substances chimiques . 5
8.3 Essais avec des sols pollués . 5
8.4 Essais avec des extraits aqueux de biosolides . 5
9 Calculs . 5
10 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires . 7
Annexe B (informative) Mesures à micro-échelle des vitesses potentielles de nitrification . 9
Bibliographie .12
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ISO 15685:2012(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de droits
de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir
identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 15685 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4,
Méthodes biologiques.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 15685:2004), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
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NORME INTERNATIONALE ISO 15685:2012(F)
Qualité du sol — Détermination de la nitrification potentielle
et inhibition de la nitrification — Essai rapide par oxydation
de l’ammonium
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode rapide de détermination de la vitesse potentielle
d’oxydation de l’ammonium et d’inhibition de la nitrification des sols. Cette méthode convient à tous les sols
contenant une population de micro-organismes nitrifiants. Elle peut être utilisée comme essai de criblage
rapide pour surveiller la qualité des sols et la qualité des déchets et elle convient pour l’évaluation des effets
des pratiques agricoles, des substances chimiques [sauf les composés volatils, c’est-à-dire H > 1 (constante
de Henry)], des extraits de biosolides et de la pollution des sols.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l’application du présent document. Pour les
références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s’applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 10381-6, Qualité du sol — Échantillonnage — Partie 6: Lignes directrices pour la collecte, la manipulation
et la conservation, dans des conditions aérobies, de sols destinés à l’évaluation en laboratoire des processus,
de la biomasse et de la diversité microbiens
ISO 10390, Qualité du sol — Détermination du pH
ISO 10694, Qualité du sol — Dosage du carbone organique et du carbone total après combustion sèche
(analyse élémentaire)
ISO 11260, Qualité du sol — Détermination de la capacité d’échange cationique effective et du taux de
saturation en bases échangeables à l’aide d’une solution de chlorure de baryum
ISO 11261, Qualité du sol — Dosage de l’azote total — Méthode de Kjeldahl modifiée
ISO 11277, Qualité du sol — Détermination de la répartition granulométrique de la matière minérale des sols —
Méthode par tamisage et sédimentation
ISO 11465, Qualité du sol — Détermination de la teneur pondérale en matière sèche et en eau — Méthode
gravimétrique
ISO 14238, Qualité du sol — Méthodes biologiques — Détermination de la minéralisation de l’azote et de la
nitrification dans les sols, et de l’influence des produits chimiques sur ces processus
ISO 14256-2, Qualité du sol — Dosage des nitrates, des nitrites et de l’ammonium dans des sols bruts par extraction
avec une solution de chlorure de potassium — Partie 2: Méthode automatisée avec analyse en flux segmenté
EN 14735, Caractérisation des déchets — Préparation des échantillons de déchets en vue d’essais
écotoxicologiques
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
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ISO 15685:2012(F)
3.1
dose inhibitrice
DI
quantité de substance chimique ajoutée au sol qui inhibe de façon effective l’activité biologique d’un pourcentage
fixé, à l’issue d’un temps donné, par rapport à un échantillon d’essai témoin non traité
NOTE Elle est exprimée en pourcentage. Par exemple, DI25 et DI50 indiquent respectivement 25 % et 50 %
d’inhibition de l’activité biologique.
3.2
biosolides
produits organiques utilisés dans l’agriculture, incluant les boues d’épuration, les composts, les lisiers et des
déchets industriels
4 Principe
L’oxydation de l’ammonium, qui représente la première étape de la nitrification autotrophe dans un sol, est
utilisée pour évaluer l’activité potentielle des populations microbiennes nitrifiantes. Des bactéries autotrophes
nitrosantes sont exposées à du sulfate d’ammonium dans une boue de sol tamponnée à pH 7,2. L’oxydation des
nitrites par les bactéries nitratantes dans la boue est inhibée par l’addition de chlorate de sodium. L’accumulation
de nitrites qui s’ensuit est mesurée sur une période d’incubation de 6 h et sert à estimer l’activité potentielle des
bactéries nitrosantes. Comme le temps de génération des bactéries nitrosantes est long (> 10 h), la méthode
fournit une mesure de l’activité potentielle de la population nitrifiante au moment du prélèvement. Elle ne
mesure pas la croissance de la population nitrifiante.
Des essais peuvent être conduits avec des substances chimiques d’essai et des extraits de biosolides que l’on
ajoute en concentrations variées à la boue. Les essais peuvent être utilisés pour comparer différents sols (par
exemple des sols pollués et des sols de référence). Les effets des sols pollués, des échantillons de déchets et
d’autres matières solides sur la nitrification peuvent être évalués en appliquant la méthode à des mélanges de
ces échantillons avec un sol de référence.
Il convient que les substances connues pour être actives à pH < 7,2 soient ajoutées avant le début de l’essai,
au moment approprié, pour permettre à ces substances d’agir sur les bactéries nitrifiantes.
5 Réactifs
5.1 Eau distillée.
5.2 Dihydrogénophosphate de potassium, c(KH PO = 0,2 mol/l).
2 4
5.3 Hydrogénophosphate de dipotassium, c(K HPO = 0,2 mol/l).
2 4
5.4 Chlorate de sodium, c(NaClO = 0,5 mol/l).
3
5.5 Sulfate de diammonium, (NH ) SO .
4 2 4
5.6 Hydrogénocarbonate de sodium, c(NaHCO = 5 mmol/l).
3
5.7 Chlorure de potassium, c(KCl = 4 mol/l).
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ISO 15685:2012(F)
5.8 Solution mère A.
Préparer la solution mère A de la façon suivante.
Dihydrogénophosphate de potassium, KH PO (5.2) 28 ml
2 4
Hydrogénophosphate de dipotassium, K HPO (5.3) 72 ml
2 4
Eau distillée (5.1) 100 ml
5.9 Milieu d’essai.
Préparer le milieu d’essai de la façon suivante.
Solution mère A (5.8) 10 ml
Chlorate de sodium, NaClO (5.4) 10 ml à 30 ml
3
Sulfate de diammonium, (NH ) SO (5.5) 0,198 g
4 2 4
Diluer à 1 000 ml avec de l’eau distillée (5.1).
Le milieu d’essai contient 1 mmol/l de tampon phosphate de potassium, 5 mmol/l à 15 mmol/l de chlorate de
sodium et 1,5 mmol/l de sulfate de diammonium, et son pH est d’environ 7,2.
Il convient que la concentration en chlorate de sodium choisie dans la plage indiquée soit suffisante pour
réellement inhiber la formation biologique des nitrates, sans pour autant avoir d’effets négatifs sur l’oxydation
de l’ammonium. Si nécessaire, vérifier l’influence de la concentration en chlorate de sodium.
Les substances chimiques d’essai à ajouter au milieu d’essai doivent d’abord être dissoutes dans le tampon
phosphate décrit, puis ajoutées avant de procéder à la dilution à 1 l. Pour les substances chimiques d’essai
faiblement hydrosolubles, préparer les solutions par dispersion mécanique ou en utilisant des vecteurs tels
que des solvants organiques, des émulsifiants ou des agents dispersants de faible toxicité pour les bactéries
nitrosantes. Si un vecteur quelconque est utilisé pour ajouter une substance chimique d’essai à la boue ou à un
sol, un contrôle supplémentaire doit être effectué pour évaluer ses effets éventuels sur l’oxydation de l’ammonium.
Si des extraits de biosolides sont soumis à essai, les ajouter à part au milieu d’essai avant de procéder à la
dilution à 1 l.
NOTE Lorsqu’une source de carbone est nécessaire, par exemple lors des essais menés avec des biosolides à
teneurs élevées en nitrates, ajouter 10 ml de NaHCO (5.6) au milieu d’essai avant de procéder à la dilution à 1 l.
3
6 Appareillage
6.1 Équipement normal de laboratoire.
6.2 Incubateur thermostaté à agitateur orbital.
7 Échantillonnage, conservation et caractérisation des échantillons
Des lignes directrices sur l’échantillonnage, le traitement des échantillons et la conservation sont données dans
l’ISO 10381-6. Pour réaliser les essais avec des substances chimiques ou des biosolides, ou des échantillons
en mélange de sols pollués, il convient de choisir un sol expérimental présentant une activité d’oxydation de
l’ammonium comprise entre 200 ng N/g de masse sèche de sol/h et 800 ng N/g de masse sèche de sol/h,
déterminée par un essai préliminaire. Pour réaliser des essais avec des substances chimiques, il convient que
le sol ait une faible capacité d’adsorption (par exemple des sols sableux faibles en C < 1 %); d’autre part il
org
convient que le sol ait un pH compris entre 5,5 et 7,5.
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ISO 15685:2012(F)
Les échantillons de sol peuvent généralement être conservés au réfrigérateur à environ 4 °C sur des périodes
allant jusqu’à trois mois avant utilisation (ISO 10381-6). Certains sols ne peuvent pas être conservés plus de
deux semaines au réfrigérateur. La conservation des échantillons de sol dans un congélateur (-20 °C) n’est
généralement pas recommandée.
Pour un certain nombre de sols provenant de climats tempérés, il a été montré que la conservation jusqu’à
12 mois à -20 °C n’inhibe pas l’activité d’oxydation de l’ammonium (Référence [4]). S’il existe des informations
de cet ordre concernant un sol particulier, la conservation dans ces conditions est admise.
Le mesurage des variables suivantes est recommandé pour la caractérisation du sol:
— la granulométrie (ISO 11277);
— la teneur en eau (ISO 11465);
— la capacité de rétention d’eau (ISO 14238);
— le pH (ISO 10390);
— la capacité d’échange cationique effective (ISO 11260);
— la teneur en matière organique (ISO 10694);
— la teneur totale en azote (ISO 11261).
8 Mode opératoire
8.1 Essais des sols
8.1.1 Généralités
Il convient que le protocole d’essai inclue au moins trois réplicats de sol humide pesant environ 25 g. La teneur
en eau du sol, utile pour calculer la masse sèche, est déterminée par gravimétrie conformément à l’ISO 11465.
8.1.2 Incubation initiale
Mélanger des échantillons de sol ou de déchets avec le milieu d’essai (5.9) pour former des boues. Il convient
d’ajuster le volume du milieu d’essai pour obtenir un volume de liquide total précis, par exemple 100 ml. Calculer
le volume de milieu à ajouter en soustrayant du volume de liquide souhaité, par exemple 100 ml, le volume
d’eau contenu dans l’échantillon de sol ou de déchets initial. Incuber les boues dans des fioles de 250 ml en
position verticale sur l’incubateur thermostaté à agitateur orbital (6.2) dont le thermostat est réglé à (25 ± 2) °C.
Il convient que le mouvement de rotation soit suffisant pour maintenir les solides en suspension (175 r/min).
Il est nécessaire que le volume de liquide soit supérieur à 100 ml dans la boue lorsque la capacité de rétention
d’eau du sol est > 200 % (sols organiques).
8.1.3 Échantillonnage des boues de sol
Prélever des échantillons (2 ml) de la boue de sol après 2 h et 6 h d’incubation, sous réserve de s’être assuré
de la linéarité de la courbe d’oxydation de l’ammonium sur cette période. Il convient de bien secouer la boue
de sol à chaque prélèvement des échantillons pour s’assurer de la constance du rapport solution/sol pendant
l’essai. Verser les échantillons prélevés dans des tubes à essai et ajouter 2 ml de KCl (5.7) pour stopper
l’oxydation de l’ammonium. Soumettre ensuite les échantillons à une centrifugation de 2 min à 3 000g, par
exemple, ou à une filtration. S’il convient que la vitesse de filtration du papier filtre soit élevée, son degré de
pureté chimique n’a pas besoin d’être maximal. Doser les nitrites en ut
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