ISO/FDIS 17721-2

Quantitative determination of antibacterial activity of ceramic tile surfaces -- Test methods

Détermination quantitative de l’activité antibactérienne des surfaces des carreaux céramiques -- Méthodes d’essai

General Information

• Status: Published
• ICS: 91.100.23 - Ceramic tiles
• Technical Committee: ISO/TC 189 - Ceramic tile
• Drafting Committee: ISO/TC 189/WG 8 - Antimicrobial properties of ceramic tile surfaces
• Current Stage: 5020 - FDIS ballot initiated: 2 months. Proof sent to secretariat
• Start Date: 17-May-2021
• Completion Date: 17-May-2021

Standards Content (sample)

FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 17721-2
ISO/TC 189
Quantitative determination of
Secretariat: ANSI
antibacterial activity of ceramic tile
Voting begins on:
2021-05-17 surfaces — Test methods —
Voting terminates on:
Part 2:
2021-07-12
Ceramic tile surfaces with
incorporated photocatalytic
antibacterial agents
Détermination quantitative de l’activité antibactérienne des surfaces
des carreaux céramiques — Méthodes d’essai —
Partie 2: Carreaux céramiques incorporant des agents antibactériens
photocatalytiques en surface
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
NATIONAL REGULATIONS. ISO 2021
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
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© ISO 2021

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Published in Switzerland
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ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Materials ....................................................................................................................................................................................................................... 2

4.1 Bacterial strains ..................................................................................................................................................................................... 2

4.2 Culture media and solutions ....................................................................................................................................................... 2

4.2.1 Non-ionic surfactant ..................................................................................................................................................... 2

4.2.2 Nutrient broth .................................................................................................................................................................... 2

4.2.3 1/500 nutrient broth ................................................................................................................................................... 3

4.2.4 Nutrient agar ....................................................................................................................................................................... 3

4.2.5 Soybean-casein digest broth with lecithin and polysorbate 80 (SCDLP)........................ 3

4.2.6 Phosphate buffer saline (PBS).............................................................................................................................. 3

5 Test specimen .......................................................................................................................................................................................................... 3

5.1 Size .................................................................................................................................................................................................................... 3

5.2 Control ............................................................................................................................................................................................................ 4

5.3 Precondition .............................................................................................................................................................................................. 4

5.4 Number of test specimen ............................................................................................................................................................... 4

6 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 4

6.1 Preparation of test inoculum ...................................................................................................................................................... 4

6.2 Adhesive film ............................................................................................................................................................................................ 5

6.3 Inoculation of test specimens .................................................................................................................................................... 5

6.4 Recovery of bacteria from non-treated control specimens at time t = 0 h .......................................... 5

6.5 UV irradiation conditions .............................................................................................................................................................. 5

6.6 Dark conditions ...................................................................................................................................................................................... 7

6.7 Recovery of bacteria from post irradiation and dark condition test specimens ............................ 7

6.8 Enumeration of viable bacterial count from test specimen washout ...................................................... 7

7 Validation and calculations ....................................................................................................................................................................... 8

7.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 8

7.2 Criteria for a valid test ...................................................................................................................................................................... 8

7.3 Calculation of antibacterial activity ...................................................................................................................................... 9

8 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 9

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................11

© ISO 2021 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/

iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 189, Ceramic tile.
A list of all parts in the ISO 17721 series can be found on the ISO website.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – All rights reserved
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
Quantitative determination of antibacterial activity of
ceramic tile surfaces — Test methods —
Part 2:
Ceramic tile surfaces with incorporated photocatalytic
antibacterial agents
1 Scope

This document specifies test methods for evaluating the antibacterial activity of glazed and unglazed

ceramic tile surfaces with incorporated photocatalytic antibacterial agents.

Secondary effects on ceramic tile surfaces due to photocatalytic antibacterial treatments, such as

changes in chemical resistance, stain resistance or small colour differences, are not covered by this

document. For chemical resistance refer to ISO 10545-13, for stain resistance refer to ISO 10545-14 and

for colour differences refer to ISO 10545-16.

Other types of performance of photocatalytic ceramics, i.e. decomposition of water contaminants, self-

cleaning, antifogging and air purification, are not covered by this document. It is also not intended to be

used to evaluate ceramic surfaces that have been treated with topical disinfectants or agents that can

offer residual activity for limited periods.

Any results obtained with this document will always refer to this document and the conditions used.

Results obtained with this document indicate antibacterial activity under the specified experimental

conditions used herein, and do not reflect activity under other circumstances where a variety of factors,

such as temperature, humidity, different bacterial species, nutrient conditions, etc., are considered.

2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 17721-1, Quantitative determination of antibacterial activity of ceramic tile surfaces – Test methods –

Part1: Ceramic tile surfaces with incorporated antibacterial agents
3 Terms and definitions

For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 17721-1 and the following

apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
photocatalyst

substance that carries out many functions based on oxidization and reduction reactions under

ultraviolet (UV) irradiation, including decomposition and removal of air and water contaminants,

deodorization, and antibacterial, self-cleaning and antifogging actions
© ISO 2021 – All rights reserved 1
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ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
4 Materials

WARNING — Handling and manipulation of microorganisms which are potentially hazardous

requires a high degree of technical competence and may be subject to current national

legislation and regulations. Only personnel trained in microbiological techniques should carry

out such tests. Appropriate practices for disinfection, sterilization and laboratory hygiene must

be strictly observed.
4.1 Bacterial strains
Bacteria used for the tests are:
a) Escherichia coli;
b) Staphylococcus aureus.

The bacterial strains to be used in the test are listed in Table 1 and are stored by entities that are

registered under the World Federation for Culture Collections or of the Japan Society for Culture

Collections. Other bacterial species may be tested with this test method, details of the species used,

culture conditions and testing process shall be described in detail in the test report.

Transfer of cultures should be performed aseptically in safety cabinets. Inoculate each strain onto a

nutrient agar medium slant using a sterile inoculation loop; incubate for 18 h - 24 h at 37 °C ± 1 °C, and

then store at 5 °C – 10 °C. Subculture the strains by repeating the process within 30 d. The maximum

number of subcultures from the original strain from the culture collection is 10. Discard slant cultures

appropriately after 30 d.

NOTE 1 In the case of bacteria stored at -80 °C and lyophilized cultures, the maximum number of subcultures

from the original strain is 10.

NOTE 2 If necessary, additional tests with other bacterial strains can be performed.

Table 1 — Bacterial strains and culture collections
Bacteria Culture collections
E. coli ATCC 8739, DSM 1576, NBRC 3972, CIP 53.126, NCIB 8545
S. aureus ATCC 6538P, DSM 346, NBRC 12732, CIP 53.156, NCIB 8625
4.2 Culture media and solutions

Any water used shall be distilled or deionized and have a conductivity of <1 µS/cm. All reagents shall be

of analytical grade and/or of a grade appropriate for microbiological purposes.
4.2.1 Non-ionic surfactant

The non-ionic surfactant shall be polyoxyethylene sorbitan monooleate (polysorbate 80).

4.2.2 Nutrient broth

For 1 000 ml of purified water, take 3,0 g of meat extract, 10,0 g of peptone and 5,0 g of sodium chloride,

put them in a flask and dissolve them thoroughly. When the contents are thoroughly dissolved, use a

solution of sodium hydroxide or hydrochloric acid to bring the pH to (7,0 ± 0,1) at 25 °C. Sterilize in an

autoclave at 121 °C ± 2 °C for at least 15 min. After preparation, if nutrient broth is not used immediately,

store it at 5 °C to 10 °C. Storage for long periods should be avoided. Other suitable media such as tryptic

soy agar (TSA) and tryptic soy broth (TSB) can also be used for the growth and quantification steps

2 © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 17721-2:2021(E)
4.2.3 1/500 nutrient broth

For 1 000 ml of purified water, take 3,0 g of meat extract, 10,0 g of peptone and 5,0 g of sodium chloride,

put them in a flask and dissolve them thoroughly. Dilute this medium 500 times using distilled or

deionized water, and set the pH to (7,0 ± 0,2) using hydrochloric acid solution or sodium hydroxide

solution. Sterilize in an autoclave at 121 °C ± 2 °C for at least 15 min. After preparation, if 1/500 nutrient

broth is not used immediately, store it at 5 °C to 10 °C.

Other culture media may be selected based on the requirements for the bacteria selected for the testing.

Details of the selected media shall be included in the test report under culture conditions.

Prepared culture media may be stored at 5 °C - 10 °C for up to one month.
4.2.4 Nutrient agar

For 1 000 ml of purified water, take 3,0 g of meat extract, 5,0 g of peptone and 15,0 g of agar powder,

put them in a flask and mix. Heat the flask in boiling water to dissolve the contents thoroughly. Use a

0,1 mol/l solution of sodium hydroxide to bring the pH to (6,8 ± 0,2) at 25 °C. Sterilize in an autoclave

at 121 °C ± 2 °C for at least 15 min. After preparation, if nutrient agar is not used immediately, store it

at 5 °C to 10 °C. Keep the medium temperature between 45 °C and 48 °C when mixing with a bacterial

suspension.
Other culture media may be selec
...

PROJET
NORME ISO/FDIS
FINAL
INTERNATIONALE 17721-2
ISO/TC 189
Détermination quantitative de
Secrétariat: ANSI
l’activité antibactérienne des surfaces
Début de vote:
2021-05-17 des carreaux céramiques — Méthodes
d’essai —
Vote clos le:
2021-07-12
Partie 2:
Carreaux céramiques incorporant
des agents antibactériens
photocatalytiques en surface
Quantitative determination of antibacterial activity of ceramic tile
surfaces — Test methods —
Part 2: Ceramic tile surfaces with incorporated photocatalytic
antibacterial agents
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSER-
VATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-
PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT
CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMEN-
TATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-
Numéro de référence
MERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI-
BILITÉ DE DEVENIR DES NORMES POUVANT
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTA-
TION NATIONALE. ISO 2021
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ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2021

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

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Tél.: [phone]
E-mail: [e-mail]
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Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

1 Domaine d'application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Matériel .......................................................................................................................................................................................................................... 2

4.1 Souches bactériennes ........................................................................................................................................................................ 2

4.2 Milieux de culture et solutions .................................................................................................................................................. 2

4.2.1 Tensioactif non ionique .............................................................................................................................................. 2

4.2.2 Bouillon nutritif ................................................................................................................................................................ 3

4.2.3 Bouillon nutritif dilué à 0,2 % .............................................................................................................................. 3

4.2.4 Gélose nutritive ................................................................................................................................................................. 3

4.2.5 Bouillon de peptones de caséine et de soja avec de la lécithine et du

polysorbate 80 (SCDLP) ............................................................................................................................................ 3

4.2.6 Tampon phosphate salin (PBS) ........................................................................................................................... 4

5 Éprouvettes d’essai ............................................................................................................................................................................................ 4

5.1 Dimensions ................................................................................................................................................................................................. 4

5.2 Éprouvettes témoins .......................................................................................................................................................................... 4

5.3 Pré-conditionnement ........................................................................................................................................................................ 4

5.4 Nombre d'éprouvettes ...................................................................................................................................................................... 5

6 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 5

6.1 Préparation de l’inoculum d’essai .......................................................................................................................................... 5

6.2 Film adhésif................................................................................................................................................................................................ 5

6.3 Ensemencement des éprouvettes d’essai ........................................................................................................................ 5

6.4 Récupération des bactéries à partir des éprouvettes témoins non traitées à

l’instant t = 0 h ......................................................................................................................................................................................... 6

6.5 Conditions d’irradiation UV ......................................................................................................................................................... 6

6.6 Conservation à l’obscurité ............................................................................................................................................................. 8

6.7 Récupération des bactéries à partir des éprouvettes soumises à l’irradiation UV et

des éprouvettes conservées à l’obscurité ........................................................................................................................ 8

6.8 Dénombrement des bactéries viables à partir du lavage des éprouvettes.......................................... 8

7 Validation et calculs .......................................................................................................................................................................................... 8

7.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 8

7.2 Critères de validité d’un essai .................................................................................................................................................... 9

7.3 Calcul de l’activité antibactérienne ....................................................................................................................................... 9

8 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................10

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................11

© ISO 2021 – Tous droits réservés iii
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ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/ directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/ brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/189, Ceramic tile.

Une liste de toutes les parties de la série ISO 17721 se trouve sur le site Web de l’ISO.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés
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PROJET FINAL DE NORME INTERNATIONALE ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
Détermination quantitative de l’activité antibactérienne
des surfaces des carreaux céramiques — Méthodes
d’essai —
Partie 2:
Carreaux céramiques incorporant des agents
antibactériens photocatalytiques en surface
1 Domaine d'application

Le présent document spécifie des méthodes d’essai permettant d’évaluer l’activité antibactérienne des

surfaces des carreaux céramiques émaillés et non émaillées incorporant des agents antibactériens

photocatalytiques.

Le présent document ne traite pas des effets secondaires des traitements antibactériens

photocatalytiques, tels que la modification de la résistance chimique, la variation de la résistance aux

taches ou les faibles différences de couleur, sur les surfaces des carreaux céramiques. Se reporter à

l’ISO 10545-13 pour obtenir de plus amples informations sur la résistance chimique, à l’ISO 10545-14

pour la résistance aux taches et à l’ISO 10545-16 pour les différences de couleur.

Le présent document ne couvre pas les autres types de performances des céramiques photocalytiques,

c’est-à-dire la décomposition des polluants de l’eau, l’auto-nettoyage, l’anticondensation et la purification

de l’air. Elle n’est pas non plus destinée à être utilisée pour évaluer les surfaces céramiques ayant été

traitées avec des désinfectants ou des agents topiques qui peuvent avoir une activité résiduelle pendant

une durée limitée.

Il convient que tous les résultats obtenus avec le présent document se réfèrent toujours à celui-ci ainsi

qu’aux conditions d’utilisation. Les résultats obtenus à l’aide du présent document indiquent l’activité

antibactérienne dans les conditions expérimentales spécifiées dans celui-ci, et ne reflètent pas l’activité

dans toutes autres circonstances où une diversité de facteurs, tels que la température, l’humidité, les

différentes espèces bactériennes, les teneurs en éléments nutritifs, etc., doit être prise en compte.

2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur

contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 17721-1, Détermination quantitative de l’activité antibactérienne des surfaces des carreaux

céramiques — Méthodes d’essai — Partie 1: Carreaux céramiques incorporant des agents antibactériens en

surface
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp

© ISO 2021 – Tous droits réservés 1
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ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
photocatalyseur

substance remplissant plusieurs fonctions basées sur des réactions d’oxydation et de réduction sous

rayonnement ultraviolet (UV), notamment la décomposition et l’élimination des polluants de l’air et de

l’eau, la désodorisation, et les actions antibactérienne, auto-nettoyante et anticondensation

4 Matériel
AVERTISSEMENT — Toute manipulation de microorganismes potentiellement dangereux

nécessite un haut degré de compétences techniques et peut être soumise aux législations et aux

réglementations nationales en vigueur. Il convient que ces essais soient exclusivement réalisés

par des personnes formées aux techniques microbiologiques. Les pratiques usuelles en matière

de désinfection, de stérilisation et d’hygiène de laboratoire doivent être rigoureusement

respectées.
4.1 Souches bactériennes
Les bactéries utilisées pour les essais sont:
a) Escherichia coli;
b) Staphylococcus aureus.

Les souches bactériennes à utiliser pour l’essai sont indiquées dans le Tableau 1 et sont conservées par

des entités enregistrées à la WFCC (World Federation for Culture Collections) ou à la JSCC (Japan Society

for Culture Collections). D’autres espèces bactériennes peuvent être soumises à essai en utilisant

cette méthode, mais les espèces utilisées, les conditions de culture et le processus d’essai doivent être

détaillés dans le rapport d’essai.

Il convient de réaliser les transferts de cultures dans des enceintes de sécurité aseptisées. Ensemencer

chaque souche sur un milieu de gélose nutritive inclinée en utilisant une anse d’ensemencement stérile;

incuber pendant 18 h à 24 h à (37 ± 1) °C, puis les conserver à une température comprise entre 5 °C et

10 °C. Procéder à un repiquage des souches en répétant le processus dans les 30 jours. Au maximum

10 repiquages doivent être effectués à partir de la souche d’origine provenant de la collection de

cultures. Après 30 jours, éliminer les cultures inclinées de manière appropriée.

NOTE 1 Dans le cas des bactéries conservées à −80 °C et des cultures lyophilisées, au maximum 10 repiquages

doivent être effectués à partir de la souche d’origine.

NOTE 2 Si nécessaire, des essais supplémentaires peuvent être réalisés avec d’autres souches bactériennes.

Tableau 1 — Souches bactériennes et collections de cultures
Bactérie Numéro de souche
E. coli ATCC 8739, DSM 1576, NBRC 3972, CIP 53.126, NCIB 8545
S. aureus ATCC 6538P, DSM 346, NBRC 12732, CIP 53.156, NCIB 8625
4.2 Milieux de culture et solutions

L’eau utilisée doit être distillée ou déionisée et sa conductivité doit être < 1 µS/cm. Tous les réactifs

doivent être de qualité analytique et/ou adaptée aux applications microbiologiques.

4.2.1 Tensioactif non ionique

Le tensioactif non ionique doit être du monooléate de polyoxyéthylène sorbitanne (polysorbate 80).

2 © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 17721-2:2021(F)
4.2.2 Bouillon nutritif

Pour 1 000 ml d’eau purifiée, prélever 3,0 g d’extrait de viande, 10,0 g de peptone et 5,0 g de chlorure

de sodium, les placer dans une fiole et bien les dissoudre. Une fois le contenu bien dissous, utiliser

une solution d’hydroxyde de sodium ou d’acide chlorhydrique pour amener le pH à (7,0 ± 0,1) à 25 °C.

Stériliser en autoclave à (121 ± 2) °C pendant au moins 15 min. Après la préparation, si le bouillon

nutritif n’est pas utilisé immédiatement, le stocker à une température comprise entre 5 °C et 10 °C.

Il convient d’éviter les stockages prolongés. Pour les étapes de croissance et de quantification, il est

également possible d’utiliser d’autres milieux adaptés tels que la gélose de soja tryptique (TSA) et le

bouillon de soja tryptique (TSB).
4.2.3 Bouillon nutritif dilué à 0,2 %

Pour 1 000 ml d’eau purifiée, prélever 3,0 g d’extrait de viande, 10,0 g de peptone et 5,0 g de chlorure

de sodium, les placer dans une fiole et bien les dissoudre. Diluer 500 fois ce milieu à l’eau distillée ou

déionisée, et ajuster le pH à (7,0 ± 0,2) en utilisant une solution d’acide chlorhydrique ou d’hydroxyde

de sodium. Stériliser en autoclave à (121 ± 2) °C pendant au moins 15 min. Après la préparation, si le

bouillon nutritif dilué à 0,2 % n’est pas utilisé immédiatement, le conserver à une température comprise

entre 5 °C et 10 °C.

D’autres milieux de culture peuvent être sélectionnés sur la base des exigences relatives aux bactéries

choisies pour l’essai. Le milieu sélectionné et les conditions de culture doivent être détaillés dans le

rapport d’essai.

Le milieu de culture préparé peut être conservé au maximum un mois à une température comprise

entre 5 °C et 10 °C.
4.2.4 Gélose nutritive

Pour 1 000 ml d’eau purifiée, prélever 3,0 g d’extrait de viande, 5,0 g de peptone et 15,0 g de poudre

de gélose (poudre d’agar-agar), les placer dans une fiole et mélanger. Chauffer la fiole dans l’eau

bouillante afin de bien dissoudre son contenu. Utiliser une solution d’hydroxyde de sodium à 0,1 mol/l

pour amener le pH à (6,8 ± 0,2) à 25 °C. Stériliser en autoclave à (121 ± 2) °C pendant au moins 15 min.

Après la préparation, si la gélose nutritive n’est pas utilisée immédiatement, la conserver à une

température comprise entre 5 °C et 10 °C. Lors du mélange avec une suspension bactérienne, maintenir

la température moyenne entre 45 °C et 48 °C.

D’autres milieux de culture peuvent être sélectionnés sur la base des exigences relatives aux bactéries

choisies pour l’essai. Le milieu sélectionné et les conditions de culture doivent être détaillés dans le

rapport d’essai.

Le milieu de culture préparé peut être conservé au maximum un mois à une température comprise

entre 5
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