ISO 18416:2007
(Main)Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
ISO 18416:2007 gives general guidelines for the detection and identification of the specified microorganism Candida albicans in cosmetic products. Microorganisms considered as specified in this International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations. The method described in ISO 18416:2007 is based on the detection of Candida albicans in a non-selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other methods may be appropriate dependent on the level of detection required. Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not be suited in every detail, to some products (e.g. certain water-immiscible products). Other International Standards (e.g. ISO 18415) might be appropriate. Other methods (e.g. automated) can be substituted for the test presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise validated.
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Candida albicans
L'ISO 18416:2007 donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification du microorganisme spécifié Candida albicans dans les produits cosmétiques. Les microorganismes considérés comme spécifiés dans l'ISO 18416:2007 peuvent différer d'un pays à l'autre, suivant les pratiques ou les réglementations nationales. La méthode décrite dans l'ISO 18416:2007 repose d'abord sur la détection de Candida albicans dans un milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), puis sur l'isolement dudit microorganisme sur un milieu gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du niveau de détection exigé. En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant de ce domaine d'application, il se peut que cette méthode ne soit pas adaptée en tous points, à certains produits (par exemple aux produits non miscibles à l'eau). Une autre Norme internationale peut être appropriée. Il est possible de remplacer l'essai présenté ici par d'autres méthodes (par exemple des méthodes automatisées) sous réserve que leur équivalence a été démontrée ou que la méthode a été validée par ailleurs.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 18416
Первое издание
2007-07-15
Косметика. Микробиология.
Обнаружение Candida albicans
Cosmetics - Microbiology - Detection of Candida albicans
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 18416:2007(R)
©
ISO 2007
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2007
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2007 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Принцип.2
5 Разбавители и культурные питательные среды .3
5.1 Общие положения .3
5.2 Разбавитель для дрожжевой суспензии (триптоновый раствор хлорида натрия) .3
5.3 Культурные питательные среды .3
6 Аппаратура и стеклянная лабораторная посуда .6
7 Штаммы микроорганизмов .6
8 Обращение с косметическими продуктами и лабораторными образцами .6
9 Процедура.6
9.1 Общая рекомендация.6
9.2 Приготовление первоначальной суспензии в обогатительном растворе.7
9.3 Инкубация инокулированного обогатительного бульона.7
9.4 Обнаружение и идентификация Candida albicans.7
10 Выражение результатов (обнаружение Candida albicans) .9
11 Нейтрализация антимикробных свойств продукта.9
11.1 Общие положения .9
11.2 Приготовление инокулята .9
11.3 Валидация метода обнаружения.9
12 Протокол испытания.10
Приложение А (информативное) Другие питательные среды.11
A.1 Другие обогатительные бульоны .11
A.2 Другие агаровые среды для валидации.13
A.3 Другая селективная агаровая среда. Картофельная агаровая среда с декстрозой и
антибиотиками .14
Приложение В (информативное) Нейтрализаторы антимикробной активности
консервантов и промывочные жидкости .15
Библиография.16
© ISO 2007 – Все права сохраняются iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO
работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Обращается внимание на возможность патентования некоторых элементов данного международного
стандарта. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо или всех таких патентных
прав.
Международный стандарт ISO 18416:2007 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 217,
Косметика.
iv © ISO 2007 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
Введение
Микробиологические исследования косметических продуктов проводятся согласно соответствующему
анализу микробиологического риска, для того чтобы обеспечить пользователям их качество и
безопасность.
Анализ микробиологического риска зависит от нескольких параметров, таких как:
⎯ возможное изменение косметических продуктов;
⎯ патогенность микроорганизмов;
⎯ область применения косметического продукта (волосы, кожа, глаза, слизистые оболочки);
⎯ тип пользователя (взрослые, дети, включая детей до 3 лет).
Для косметических и других аналогичных продуктов обнаружение кожных патогенов, таких как
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans, является важным, потому что они
способны вызывать инфекцию кожи или глаз. Может представлять интерес и обнаружение других
видов микроорганизмов, поскольку эти микроорганизмы (включая индикаторы фекального заражения,
например Escherichia coli) предполагают нарушение гигиены во время производственного процесса.
© ISO 2007 – Все права сохраняются v
---------------------- Page: 5 ----------------------
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 18416:2007(R)
Косметика. Микробиология. Обнаружение Candida albicans
1 Область применения
Настоящий международный стандарт дает общие руководящие указания для обнаружения и
идентификации специфического микроорганизма Candida albicans в косметических продуктах.
Микроорганизмы, рассматриваемые как специфические в этом международном стандарте, могут
различаться в разных странах в зависимости от национальной практики или регламента.
Для гарантии потребителям качества и безопасности продуктов рекомендуется проводить
соответствующий анализ микробиологического риска, чтобы определить типы косметических
продуктов, к которым применим этот международный стандарт. К низкому микробиологическому риску,
относят продукты с низкой водной активностью, с крайними значениями pH, гидроспиртовые продукты
и др.
Метод, описанный в этом международном стандарте, основан на обнаружении Candida albicans в
неселективной жидкой среде (обогатительный бульон) с последующим выделением микроорганизмов
на неселективных агаровых средах. Можно применять и другие методы в зависимости от требуемого
уровня обнаружения
ПРИМЕЧАНИЕ Для обнаружения Candida albicans субкультуры могут быть получены на неселективных
культурных питательных средах с последующей подходящей поэтапной идентификацией (например,
использование идентификационных наборов).
Из-за большого разнообразия косметических продуктов в рассматриваемой области применения,
какие-то детали данного метода могут не годиться для некоторых продуктов (например, для продуктов,
не смешивающихся с водой). Могут оказаться полезными другие международные стандарты (например,
ISO 18415). Представленное здесь испытание можно заменить другими методами (например,
автоматизированными), при условии что продемонстрирована их равнозначность или что заменяющий
метод валидирован иначе.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 21148:2005, Косметика. Микробиология. Общие указания по микробиологическому контролю
EN 12353, Дезинфицирующие химические средства и антисептики. Сохранение микробных
штаммов, используемых для определения бактерицидной, микробактерицидной, спороцидной и
фунгицидной активности
3 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются следующие термины и определения.
© ISO 2007 – Все права сохраняются 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
3.1
продукт
product
часть идентифицируемого косметического продукта, полученная в лаборатории для испытания
3.2
проба
sample
часть продукта (как минимум 1 г или 1 мл), которая используется в испытании для приготовления
первоначальной суспензии
3.3
первоначальная суспензия
initial suspension
суспензия (или раствор) пробы в определенном объеме подходящего обогатительного бульона
3.4
разбавление пробы
sample dilution
разбавление первоначальной суспензии
3.5
специфические микроорганизмы
specified microorganisms
аэробные мезофильные бактерии или дрожжи, нежелательные в косметическом продукте, потому что
могут вызывать кожные или глазные инфекции или являются признаком нарушения гигиены
3.6
Candida albicans
дрожжи, которые образуют колонии выпуклых клеток от белого до бежевого и кремового цвета на
поверхности селективной среды
ПРИМЕЧАНИЕ Главными признаками для идентификации являются образование ростковой трубочки и/или
псевдомицелии и хламидоспоры при проведении испытания по методу, установленному в этом международном
стандарте.
3.7
обогатительный бульон
enrichment broth
неселективная жидкая питательная среда, содержащая подходящие нейтрализаторы и/или
диспергаторы и валидированная для испытуемого продукта
4 Принцип
Первым шагом процедуры является обогащение путем использования неселективной бульонной
среды, чтобы увеличить число микроорганизмов без риска подавления селективными ингредиентами,
которые присутствуют в селективной/дифференциальной средах для роста.
Второй этап испытания (выделение) выполняется на селективной среде с последующими
идентификационными испытаниями.
Возможное подавление микробного роста образцом должно быть нейтрализовано для обеспечения
[1]
обнаружения жизнеспособных микроорганизмов . Во всех случаях и при любой методологии
[2], [3], [4]
нейтрализация антимикробных свойств должна быть проверена и валидирована .
2 © ISO 2007 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
5 Разбавители и культурные питательные среды
5.1 Общие положения
Общие технические условия даны в ISO 21148. Если в составе должна быть вода, используют
дистиллированную или очищенную воду, как установлено в ISO 21148.
Обогатительный бульон используют для диспергирования пробы и для увеличения первоначальной
микробной популяции. Он может содержать нейтрализаторы, если испытуемый образец имеет
антимикробные свойства. Эффективность нейтрализации должна быть продемонстрирована (см.
Раздел 11). Информация о подходящих нейтрализаторах дана в Приложении B.
Обогатительный бульон (5.3.3.1) или любая из сред, приведенных в Приложении A, годятся для
контроля присутствия Candida albicans согласно этому международному стандарту, при условии что
они валидированы по 11.
Можно использовать другие разбавители и культурные питательные среды, если они
продемонстрировали свою пригодность для использования.
5.2 Разбавитель для дрожжевой суспензии (триптоновый раствор хлорида натрия)
5.2.1 Общее
Разбавитель используется для приготовления дрожжевой суспензии, применяемой для процедуры
валидации (см. Раздел 11).
5.2.2 Состав
⎯ триптон, панкреатический гидролизат казеина 1,0 г
⎯ хлорид натрия 8,5 г
⎯ вода 1 000 мл
5.2.3 Приготовление
Растворяют компоненты в воде, смешивая при нагреве. Распределяют в подходящие контейнеры.
Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения раствора pН должен быть равен 7,0 ± 0,2 при измерении при
комнатной температуре.
5.3 Культурные питательные среды
5.3.1 Общие положения
Культурную питательную среду можно приготовить, как указано ниже, или из дегидратированной
культурной среды согласно инструкциям изготовителя. Инструкции поставщика среды должны
соблюдаться.
ПРИМЕЧАНИЕ Готовые к употреблению среды можно использовать, если их состав и/или продукты роста
сравнимы с составами, приведенными здесь.
© ISO 2007 – Все права сохраняются 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
5.3.2 Агаровая среда для валидации
5.3.2.1 Декстрозный агар Сабуро (SDA)
5.3.2.1.1 Состав
⎯ декстроза 40,0 г
⎯ пептический перевар животной ткани 5,0 г
⎯ панкреатический гидролизат казеина 5,0 г
⎯ агарr 15,0 г
⎯ вода 1 000 мл
5.3.2.1.2 Приготовление
Растворяют компоненты или дегидратированную полную среду в воде путем нагрева. Распределяют
среду в подходящие контейнеры. Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин. После
стерилизации pН должен быть равен 5,6 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.
5.3.2.2 Другие агаровые среды для валидации
Другие агаровые среды можно использовать соответствующим образом (см. Приложение А).
5.3.3 Обогатительный бульон
5.3.3.1 Бульон Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Общее
Эта среда содержит ингредиенты, которые нейтрализуют ингибиторы, присутствующие в пробе:
лецитин и полисорбат 80, и диспергирующий агент октоксинол 9.
5.3.3.1.2 Состав
⎯ панкреатический гидролизат казеина 15,0 г
⎯ папаиновый перевар соевой муки 5,0 г
⎯ L-цистин 0,7 г
⎯ хлорид натрия 4,0 г
⎯ сульфит натрия 0,2 г
⎯ глюкоза 5,5 г
⎯ яичный лецитин 1,0 г
⎯ полисорбат 80 5,0 г
⎯ октоксинол 9 1,0 г
⎯ вода 1 000 мл
4 © ISO 2007 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
5.3.3.1.3 Приготовление
Растворяют компоненты, полисорбат, октоксинол 9 и яичный лецитин, друг за другом в кипящей воде
до полного растворения. Растворяют другие компоненты, смешивая их при нагреве. Переносят среду в
подходящие контейнеры. Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения раствора pН должен быть равен 7,0 ± 0,2 при измерении при
комнатной температуре.
5.3.3.2 Другие обогатительные бульоны
Другие обогатительные бульоны можно использовать соответствующим образом (см. Приложение A).
5.3.4 Селективная агаровая среда для выделения Candida albicans
5.3.4.1 Декстрозный агар Сабуро с хлорамфениколом
5.3.4.1.1 Состав
⎯ декстроза 40,0 г
⎯ пептический перевар животной ткани 5,0 г
⎯ панкреатический гидролизат казеина 5,0 г
⎯ хлорамфеникол 0,050 г
⎯ агар 15,0 г
⎯ вода 1 000 мл
5.3.4.1.2 Приготовление
Растворяют компоненты (включая хлорамфеникол) или дегидратированную полную среду в воде,
смешивая при нагревании. Распределяют среду в подходящие контейнеры. Стерилизуют в автоклаве
при 121 °C в течение 15 мин. После стерилизации pН должен быть равен 5,6 ± 0,2 при измерении при
комнатной температуре.
5.3.4.2 Другие селективные агаровые среды
Другие селективные агаровые среды можно использовать соответствующим образом (см. Приложение
A).
5.3.5 Агар кукурузной муки с 1 % полисорбата 80
5.3.5.1 Состав
⎯ настой из кукурузной муки 50,0 г
⎯ агар 15,0 г
⎯ полисорбат 80 10,0 г
⎯ вода 1 000 мл
© ISO 2007 – Все права сохраняются 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 18416:2007(R)
5.3.5.2 Приготовление
Растворяют компоненты или дегидратированную полную среду в воде, смешивая при нагревании.
Распределяют среду в подходящие контейнеры. Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации pН должен быть равен 6,0 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.
6 Аппаратура и стеклянная лабораторная посуда
Применяются лабораторное оборудование, аппаратура и стеклянная посуда, описанные в ISO 21148.
7 Штаммы микроорганизмов
Для валидации условий испытания используется следующий репрезентативный штамм:
1) 2) 3) 4)
Candida albicans ATCC 10231 или эквивалентный штамм: IP 48.72 или NCPF 3179 или NBRC 1594
5)
или KCTC 17205, или другой эквивалентный штамм из национальной коллекции.
Культура должна быть воспроизведена согласно процедурам, предоставляемым поставщиком
эталонного штамма.
Штаммы должны храниться в лаборатории согласно EN 12353.
8 Обращение с косметическими продуктами и лабораторными образцами
Если необходимо, испытуемые продукты хранят при комнатной температуре.
Продукты (3.1) и образцы(3.2) не подвергают инкубации, охлаждению или замораживанию перед
анализом или после него.
Отбор проб и приготовление образцов для анализа следует проводить, как описано в ISO 21148.
Анализируют образцы, как описано в ISO 21148, и согласно процедуре, приведенной в Разделе 9.
9 Процедура
9.1 Общая рекомендация
Для приготовления образца, первоначальной суспензии и разбавлений используют стерильные
материал и оборудование и асептические методы. В случае приготовления первоначальной суспензии
в подходящем растворителе время между окончанием приготовления и моментом, когда инокулят
вступает в контакт с обогатительным бульоном, не должно превышать 45 мин, если нет специальных
упоминаний в установленных протоколах или документах.
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 18416
First edition
2007-07-15
Cosmetics — Microbiology — Detection
of Candida albicans
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Candida albicans
Reference number
ISO 18416:2007(E)
©
ISO 2007
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2007
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 2
5 Diluents and culture media. 2
5.1 General. 2
5.2 Diluent for the yeast suspension (tryptone sodium chloride solution) . 3
5.3 Culture media . 3
6 Apparatus and glassware . 5
7 Strains of microorganisms . 5
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples . 6
9 Procedure . 6
9.1 General recommendation . 6
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth . 6
9.3 Incubation of the inoculated enrichment broth . 7
9.4 Detection and identification of Candida albicans . 7
10 Expression of the results (detection of Candida albicans) . 8
11 Neutralization of the antimicrobial properties of the product. 8
11.1 General. 8
11.2 Preparation of inoculum . 8
11.3 Validation of the detection method. 9
12 Test report . 9
Annex A (informative) Other media . 11
Annex B (informative) Neutralizers of antimicrobial activity of preservatives and rinsing liquids . 15
Bibliography . 16
© ISO 2007 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 18416 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
iv © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
Introduction
Microbiological examinations of cosmetic products are carried out according to an appropriate microbiological
risk analysis in order to ensure their quality and safety for consumers.
Microbiological risk analysis depends on several parameters such as:
⎯ potential alteration of cosmetic products;
⎯ pathogenicity of microorganisms;
⎯ site of application of the cosmetic product (hair, skin, eyes, mucous membranes);
⎯ type of user (adults, children, including under 3 years).
For cosmetics and other topical products, the detection of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
and Candida albicans may be relevant because they can cause skin or eye infections. The detection of other
kinds of microorganism might be of interest since those microorganisms (including indicators of faecal
contamination, e.g. Escherichia coli) suggest hygienic failure during the manufacturing process.
© ISO 2007 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 18416:2007(E)
Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
1 Scope
This International Standard gives general guidelines for the detection and identification of the specified
microorganism Candida albicans in cosmetic products. Microorganisms considered as specified in this
International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations.
In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate
microbiological risk analysis so as to determine the types of cosmetic product to which this International
Standard is applicable. Products considered to present a low microbiological risk include those with low water
activity, hydro-alcoholic products, those with extreme pH values, etc.
The method described in this International Standard is based on the detection of Candida albicans in a non-
selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other methods
may be appropriate dependent on the level of detection required.
NOTE For the detection of Candida albicans, subcultures can be performed on non-selective culture media followed
by suitable identification steps (e.g. using identification kits).
Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not be
suited in every detail to some products (e.g. certain water-immiscible products). Other International Standards
(e.g. ISO 18415) might be appropriate. Other methods (e.g. automated) can be substituted for the test
presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise
validated.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 21148:2005, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
EN 12353, Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of test organisms used for the
determination of bactericidal, mycobactericidal, sporicidal and fungicidal activity
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
product
portion of an identified cosmetic product received in the laboratory for testing
3.2
sample
portion of the product (at least 1 g or 1 ml) that is used in the test to prepare the initial suspension
© ISO 2007 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
3.3
initial suspension
suspension (or solution) of the sample in a defined volume of an appropriate enrichment broth
3.4
sample dilution
dilution of the initial suspension
3.5
specified microorganisms
aerobic mesophilic bacteria or yeast that is undesirable in a cosmetic product because it can cause skin or
eye infections or is an indication of hygienic failure
3.6
Candida albicans
yeast that form white to beige, creamy and convex colonies on the surface of a selective medium
NOTE The main characteristic for identification is the production of germ tube and/or pseudomycelium and
chlamydospore when the test is performed following the method specified in this International Standard.
3.7
enrichment broth
non-selective liquid medium containing suitable neutralizers and/or dispersing agents and validated for the
product under test
4 Principle
The first step of the procedure is to perform an enrichment by using a non-selective broth medium to increase
the number of microorganisms without the risk of inhibition by the selective ingredients that are present in
selective/differential growth media.
The second step (isolation) of the test is performed on a selective medium followed by identification tests.
To prevent the possible inhibition of microbial growth by the sample it shall be neutralized to allow the
[1]
detection of viable microorganisms . In all cases and whatever the methodology, the neutralization of the
[2], [3], [4]
antimicrobial properties of the product shall be checked and validated .
5 Diluents and culture media
5.1 General
General instructions are given in ISO 21148. When water is mentioned in this International Standard, use
distilled water or purified water as specified in ISO 21148.
The enrichment broth is used to disperse the sample and to increase the initial microbial population. It may
contain neutralizers if the specimen to be tested has antimicrobial properties. The efficacy of the neutralization
shall be demonstrated (see Clause 11). Information relative to suitable neutralizers is given in Annex B.
The enrichment broth (5.3.3.1), or any of the ones listed in Annex A, is suitable for checking the presence of
Candida albicans in accordance with this International Standard provided that it is validated in accordance
with Clause 11.
Other diluents and culture media may be used if it has been demonstrated that they are suitable for use.
2 © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
5.2 Diluent for the yeast suspension (tryptone sodium chloride solution)
5.2.1 General
The diluent is used for the preparation of yeast suspension used for the validation procedure (see Clause 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, pancreatic digest of casein 1,0 g
⎯ sodium chloride 8,5 g
⎯ water 1 000 ml
5.2.3 Preparation
Dissolve the components in water by mixing whilst heating. Dispense into suitable containers. Sterilize in the
autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling of the solution, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3 Culture media
5.3.1 General
Culture media may be prepared using the descriptions provided below or from dehydrated culture media in
accordance with the manufacturer's instructions. The instructions provided by the supplier of the media should
be followed.
NOTE Ready-to-use media may be used when their composition and/or growth yields are comparable to those of the
formulae given herein.
5.3.2 Agar medium for validation
5.3.2.1 Sabouraud dextrose agar (SDA)
5.3.2.1.1 Composition
⎯ dextrose 40,0 g
⎯ peptic digest of animal tissue 5,0 g
⎯ pancreatic digest of casein 5,0 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.2.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by heating. Dispense the medium
into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization the pH shall be
equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
© ISO 2007 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
5.3.2.2 Other agar media for validation
Other agar media for validation may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.3 Enrichment broth
5.3.3.1 Eugon LT 100 broth
5.3.3.1.1 General
This medium contains ingredients which neutralize inhibitory substances present in the sample: lecithin and
polysorbate 80, and dispersing agent octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ pancreatic digest of casein 15,0 g
⎯ papaic digest of soybean meal 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ sodium chloride 4,0 g
⎯ sodium sulfite 0,2 g
⎯ glucose 5,5 g
⎯ egg lecithin 1,0 g
⎯ polysorbate 80 5,0 g
⎯ octoxynol 9 1,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.3.1.3 Preparation
Dissolve the components polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin one after another in boiling water to
complete dissolution. Dissolve the other components by mixing whilst heating. Dispense the medium into
suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling of the solution, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.3.2 Other enrichment broths
Other enrichment broths may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.4 Selective agar medium for isolation of Candida albicans
5.3.4.1 Sabouraud dextrose chloramphenicol agar
5.3.4.1.1 Composition
⎯ dextrose 40,0 g
⎯ peptic digest of animal tissue 5,0 g
⎯ pancreatic digest of casein 5,0 g
4 © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
⎯ chloramphenicol 0,050 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.4.1.2 Preparation
Dissolve the components (including the chloramphenicol) or the dehydrated complete medium in the water by
mixing while heating. Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for
15 min. After sterilization the pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.3.4.2 Other selective agar media
Other selective agar media may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.5 Corn meal agar with 1 % polysorbate 80
5.3.5.1 Composition
⎯ infusion from corn meal 50,0 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ polysorbate 80 10,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.5.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating. Dispense
the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization the pH
shall be equivalent to 6,0 ± 0,2 when measured at room temperature.
6 Apparatus and glassware
The laboratory equipment, apparatus and glassware shall be as described in ISO 21148.
7 Strains of microorganisms
For the validation of the test conditions, the following representative strain is used:
1) 2) 3) 4)
Candida albicans ATCC 10231 or equivalent strain: IP 48.72 or NCPF 3179 or NBRC 1594 or
5)
KCTC 17205, or other equivalent national collection strain.
The culture should be reconstituted according to the procedures provided by the supplier of the reference
strain.
1) American Type Culture Collection.
2) Institute Pasteur.
3) National Collection of Pathogenic Fungi.
4) National Biological Resource Center.
5) Korean Collection for Type Culture.
© ISO 2007 – All rights reserved 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 18416:2007(E)
The strain can be kept in the laboratory in accordance with EN 12353.
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples
If necessary, store products to be tested at room temperature.
Do not incubate, refrigerate or freeze products (3.1) and samples (3.2) before or after analysis.
Sampling of cosmetic products to be analysed should be carried out as described in ISO 21148. Analyse
samples as described in ISO 21148 and according to the procedure given in Clause 9.
9 Procedure
9.1 General recommendation
Use sterile material, equipment and aseptic techniques to prepare the sample, initial suspension and dilutions.
In the case of preparation of the initial suspension in an appropriate solubilizing agent, the time that elapses
between the end of the preparation and the moment the inoculum comes into contact with the enrichment
broth shall not exceed 45 min, unless specifically mentioned in the established protocols or documents.
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth
9.2.1 General
The enrichment is prepared from a sample of at least 1 g or 1 ml of the
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 18416
Première édition
2007-07-15
Cosmétiques — Microbiologie —
Détection de Candida albicans
Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
Numéro de référence
ISO 18416:2007(F)
©
ISO 2007
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2007
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions. 1
4 Principe. 2
5 Diluants et milieux de culture. 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Diluant pour la suspension de levure (solution de tryptone et de chlorure de sodium) . 3
5.3 Milieux de culture. 3
6 Appareillage et verrerie. 5
7 Souches de microorganismes. 6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire . 6
9 Mode opératoire . 6
9.1 Recommandations générales. 6
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement. 6
9.3 Incubation du milieu liquide d'enrichissement ensemencé. 7
9.4 Isolement et identification de Candida albicans . 7
10 Expression des résultats (recherche de Candida albicans) . 8
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit . 9
11.1 Généralités . 9
11.2 Préparation de l'inoculum. 9
11.3 Validation de la méthode de recherche. 9
12 Rapport d'essai . 10
Annexe A (informative) Autres milieux . 11
Annexe B (informative) Neutralisants de l'activité antimicrobienne des conservateurs et des
liquides de rinçage . 15
Bibliographie . 16
© ISO 2007 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 18416 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.
iv © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques doivent être réalisés selon une analyse de risque
microbiologique appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L'analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que
⎯ l'altération potentielle des produits cosmétiques,
⎯ le caractère pathogène des microorganismes,
⎯ le site d'application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses),
⎯ la catégorie d'utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans).
Pour les cosmétiques et les autres produits topiques, la détection de Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa et Candida albicans peut être justifiée car ceux-ci peuvent engendrer des infections cutanées ou
oculaires. La recherche d'autres sortes de microorganismes peut aussi présenter un intérêt car ceux-ci
(y compris des indicateurs de contamination fécale, par exemple Escherichia coli) laissent penser à une
défaillance de l'hygiène au cours du processus de fabrication.
© ISO 2007 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 18416:2007(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Candida albicans
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification du
microorganisme spécifié Candida albicans dans les produits cosmétiques. Les microorganismes considérés
comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer d'un pays à l'autre suivant les
pratiques ou les réglementations nationales.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est préférable d'effectuer une analyse
appropriée du risque microbiologique de façon à déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent de
la présente Norme internationale. Les produits considérés comme présentant un faible risque microbiologique
comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydroalcooliques, ceux ayant des valeurs de
pH extrêmes, etc.
La méthode décrite dans la présente Norme internationale repose d'abord sur la détection de Candida
albicans dans un milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), puis sur l'isolement dudit
microorganisme sur un milieu gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du
niveau de détection exigé.
NOTE Pour la recherche de Candida albicans, il est possible de réaliser des subcultures sur des milieux de culture
non sélectifs, puis de procéder aux étapes appropriées d'identification (par exemple en utilisant des kits d'identification).
En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant de ce domaine d'application, il se peut que
cette méthode ne soit pas adaptée en tous points à certains produits (par exemple aux produits non miscibles
à l'eau). Une autre Norme internationale (par exemple l'ISO 18415) peut être appropriée. Il est possible de
remplacer l'essai présenté ici par d'autres méthodes (par exemple des méthodes automatisées) sous réserve
que leur équivalence a été démontrée ou que la méthode a été validée par ailleurs.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 21148:2005, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
EN 12353, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Conservation des microorganismes d'essai utilisés
pour la détermination de l'activité bactéricide, mycobactéricide, sporicide et fongicide
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
produit
portion d'un produit cosmétique identifié reçue au laboratoire pour essais
© ISO 2007 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
3.2
échantillon
portion du produit (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée lors de l'essai pour préparer la suspension initiale (solution
mère)
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution mère) de l'échantillon dans un volume défini d'un milieu liquide d'enrichissement
approprié
3.4
dilution de l'échantillon
dilution de la suspension initiale
3.5
microorganisme spécifié
bactérie aérobie mésophile ou levure dont la présence dans un produit cosmétique est indésirable parce
qu'elle est susceptible de provoquer une infection cutanée ou ophtalmique ou qu'elle indique une défaillance
de l'hygiène
3.6
Candida albicans
levure qui forme des colonies convexes et crémeuses, de couleur blanche à beige, à la surface d'un milieu
sélectif
NOTE La principale caractéristique pour son identification est la production de filaments et/ou de pseudo-mycélium
et de chlamydopores lorsque l'essai est réalisé conformément à la méthode spécifiée dans la présente Norme
internationale.
3.7
milieu liquide d'enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou des agents dispersants appropriés, validé pour le
produit soumis à essai
4 Principe
La première étape du mode opératoire est une phase d'enrichissement utilisant un milieu liquide non sélectif
afin d'augmenter le nombre de microorganismes sans risque d'inhibition par les ingrédients sélectifs qui sont
présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
La seconde étape (isolement) de l'essai est réalisée sur un milieu sélectif et elle est suivie d'essais
d'identification.
L'inhibition potentielle de la croissance microbienne par l'échantillon doit être neutralisée pour permettre la
[1]
recherche des microorganismes viables . Dans tous les cas et quelle que soit la méthode employée, la
[2],[3],[4]
neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et validée .
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Des instructions générales sont données dans l'ISO 21148. Lorsque la présente Norme internationale
mentionne l'emploi d'eau, il faut utiliser de l'eau distillée ou de l'eau purifiée comme spécifié dans l'ISO 21148.
Le milieu liquide d'enrichissement (5.3.3.1), ou l'un de ceux donnés dans l'Annexe A, est utilisé pour disperser
l'échantillon et pour augmenter la population microbienne initiale. La présence de neutralisants dans le milieu
liquide d'enrichissement est admise si l'échantillon à soumettre à essai possède des propriétés
2 © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
antimicrobiennes. L'efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11). L'Annexe B fournit des
informations relatives aux neutralisants appropriés.
Le milieu liquide d'enrichissement ci-après peut être utilisé pour vérifier la présence de Candida albicans
conformément à la présente Norme internationale à condition d'avoir été validé conformément à l'Article 11.
D'autres diluants et milieux de culture sont utilisables s'il a été démontré que leur emploi convient.
5.2 Diluant pour la suspension de levure (solution de tryptone et de chlorure de sodium)
5.2.1 Généralités
Le diluant est utilisé pour préparer la suspension de levure utilisée pour la validation (voir Article 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, digesté pancréatique de caséine 1,0 g
⎯ chlorure de sodium 8,5 g
⎯ eau 1 000 ml
5.2.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés suivant les modes opératoires ci-dessous ou à partir de milieux
de culture déshydratés conformément aux instructions du fabricant. Il convient de se conformer aux
instructions données par le fournisseur des milieux.
NOTE Il est possible d'utiliser des milieux prêts à l'emploi quand leur composition et/ou leurs performances de
croissance sont comparables à celles des formules indiquées ci-après.
5.3.2 Milieux gélosés pour validation
5.3.2.1 Gélose Sabouraud au dextrose (SDA)
5.3.2.1.1 Composition
⎯ Dextrose 40,0 g
⎯ Digesté pancréatique de tissus animaux 5,0 g
⎯ Digesté pancréatique de caséine 5,0 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
© ISO 2007 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
5.3.2.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en chauffant. Répartir le milieu dans
des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être
de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.
5.3.2.2 Autre milieu gélosé pour validation
L'emploi d'un autre milieu gélosé pour validation est admis s'il est approprié (voir Annexe A).
5.3.3 Milieux liquides d'enrichissement
5.3.3.1 Bouillon Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Généralités
Ce milieu contient des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans l'échantillon,
telles que la lécithine et le polysorbate 80 ainsi qu'un agent dispersant comme l'octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ Digesté pancréatique de caséine 15,0 g
⎯ Digesté papaïque de soja 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ Chlorure de sodium 4,0 g
⎯ Sulfite de sodium 0,2 g
⎯ Dextrose 5,5 g
⎯ Lécithine d'œuf 1,0 g
⎯ Polysorbate 80 5,0 g
⎯ Octoxynol 9 1,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.3.1.3 Préparation
Dissoudre successivement dans l'eau bouillante le polysorbate 80, l'octoxynol 9 et la lécithine d'œuf jusqu'à
dissolution complète. Dissoudre les autres composants en mélangeant tout en chauffant. Répartir le milieu
dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3.3.2 Autres milieux liquides d'enrichissement
D'autres milieux liquides d'enrichissement peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
4 © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
5.3.4 Milieu gélosé sélectif pour l'isolement de Candida albicans
5.3.4.1 Gélose Sabouraud au dextrose chloramphénicol
5.3.4.1.1 Composition
⎯ Dextrose 40,0 g
⎯ Digesté de tissus animaux 5,0 g
⎯ Digesté pancréatique de caséine 5,0 g
⎯ Chloramphénicol 0,050 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.4.1.2 Préparation
Dissoudre ces composants (y compris le chloramphénicol) ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en
mélangeant tout en chauffant. Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à
121 °C pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à
température ambiante.
5.3.4.2 Autre milieu gélosé sélectif
D'autres milieux gélosés sélectifs peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
5.3.5 Gélose à la farine de maïs avec 1 % de polysorbate 80
5.3.5.1 Composition
⎯ Infusion de farine de maïs 50,0 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Polysorbate 80 10,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.5.2 Préparation
Dissoudre ces composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après
stérilisation, le pH doit être de 6,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.
6 Appareillage et verrerie
L'équipement de laboratoire, l'appareillage et la verrerie doivent être tels que décrits dans l'ISO 21148.
© ISO 2007 – Tous droits réservés 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
7 Souches de microorganismes
Pour la validation des conditions d'essai, on utilise la souche représentative suivante:
1) 2) 3) 4)
Candida albicans ATCC 10231 ou souche équivalente: IP 48.72 ou NCPF 3179 ou NBRC 1594 ou
5)
KCTC 17205, ou encore toute autre souche équivalente provenant d'une collection nationale.
Il convient de reconstituer la culture conformément aux méthodes indiquées par le fournisseur de la souche
de référence.
La souche peut être conservée au laboratoire conformément à la EN 12353.
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire
Si nécessaire, stocker les produits à soumettre à essai à température ambiante.
Ne pas incuber, réfrigérer ou congeler les produits (3.1) et les échantillons (3.2) avant ou après l'analyse.
Il convient d'effectuer l'échantillonnage des produits cosmétiques à analyser conformément à la description
donnée dans l'ISO 21148. Analyser les échantillons selon la description donnée dans l'ISO 21148 et
conformément au mode opératoire indiqué à l'Article 9.
9 Mode opératoire
9.1 Recommandations générales
Utiliser du matériel et un équipement stériles ainsi que des techniques aseptiques pour préparer l'échantillon,
la suspension initiale et les dilutions. En cas de préparation de la suspension initiale dans un agent
solubilisant approprié, le temps écoulé entre la fin de la préparation et le moment où l'inoculum entre en
contact avec le milieu d'enrichissement liquide ne doit pas dépasser 45 min, sauf indications particulières
mentionnées dans la documentation ou les protocoles établis.
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement
9.2.1 Généralités
L'enrichissement est préparé à partir d'un échanti
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.