ISO 10993-5:1999

Biological evaluation of medical devices — Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity

Évaluation biologique des dispositifs médicaux — Partie 5: Essais concernant la cytotoxicité in vitro

La présente partie de l'ISO 10993 décrit des méthodes d'essai pour mesurer la cytotoxicité in vitro des dispositifs médicaux.Ces méthodes spécifient l'incubation de cellules en culture soit directement, soit par diffusion:a) avec des extraits du dispositif, et/oub) en contact direct avec le dispositif.Ces méthodes sont destinées à déterminer la réponse biologique de cellules de mammifères in vitro, à l'aide de paramètres biologiques appropriés.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 19-May-1999
• Withdrawal Date: 19-May-1999
• ICS: 11.100.20 - Biological evaluation of medical devices
• Technical Committee: ISO/TC 194 - Biological and clinical evaluation of medical devices
• Drafting Committee: ISO/TC 194/WG 5 - Cytotoxicity
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 20-May-2009

Relations

• Revised: ISO 10993-5:2009 - Biological evaluation of medical devices — Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Consolidates: ISO 3891:1978 - Acoustics — Procedure for describing aircraft noise heard on the ground
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 10993-5:1992 - Biological evaluation of medical devices — Part 5: Tests for cytotoxicity: in vitro methods
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10993-5
Second edition
1999-05-15
Biological evaluation of medical devices —
Part 5:
Tests for in vitro cytotoxicity
Évaluation biologique des dispositifs médicaux —
Partie 5: Essais concernant la cytotoxicité in vitro
A
Reference number
ISO 10993-5:1999(E)

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10993-5:1999(E)
Contents
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Sample preparation .2
5 Cell lines .4
6 Culture medium.4
7 Preparation of cell stock culture .4
8 Test procedures.5
9 Test report .8
10 Assessment of results.8
©  ISO 1999
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Switzerland
Internet [e-mail]
Printed in Switzerland
ii

---------------------- Page: 2 ----------------------
© ISO
ISO 10993-5:1999(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
International Standard ISO 10993-5 was prepared by Technical Committee ISO/TC 194, Biological evaluation of
medical devices.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 10993-5:1992), which has been technically revised.
ISO 10993 consists of the following parts, under the general title Biological evaluation of medical devices:

Part 1: Evaluation and testing
 Part 2: Animal welfare requirements
 Part 3: Tests for genotoxicity, carcinogenicity and reproductive toxicity
 Part 4: Selection of tests for interactions with blood
 Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity
 Part 6: Tests for local effects after implantation
 Part 7: Ethylene oxide sterilization residuals
 Part 8: Guidance for reference materials
 Part 9: Framework for the identification and quantification of potential degradation products
 Part 10: Tests for irritation and sensitization
 Part 11: Tests for systemic toxicity
 Part 12: Sample preparation and reference materials
 Part 13: Identification and quantification of degradation products from polymers
 Part 14: Identification and quantification of degradation products from ceramics
 Part 15: Identification and quantification of degradation products from metals and alloys
 Part 16: Toxicokinetic study design for degradation products and leachables
 Part 17: Methods for establishment of allowable limits for leachable substances using health-based risk
assessment
 Part 18: Chemical characterization
Future parts will deal with other relevant aspects of biological testing.
iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
© ISO
ISO 10993-5:1999(E)
Introduction
Due to the general applicability of in vitro cytotoxicity tests and their widespread use in evaluating a large range of
medical devices and materials, it is the purpose of this part of ISO 10993, rather than to specify a single test, to
define a scheme for testing which requires decisions to be made in a series of steps. This should lead to the
selection of the most appropriate test.
Three categories of test are listed: extract test, direct-contact test, indirect-contact test.
The choice of one or more of these categories depends upon the nature of the sample to be evaluated, the potential
site of use and the nature of the use.
This choice then determines the details of the preparation of the samples to be tested, the preparation of the
cultured cells, and the way in which the cells are exposed to the samples or their extracts.
At the end of the exposure time, the evaluation of the presence and extent of the cytotoxic effect is undertaken. It is
the intention of this part of ISO 10993 to leave open the choice of type of evaluation. Such a strategy makes
available a battery of tests, which reflects the approach of many groups which advocate in vitro biological tests.
The numerous methods used and end-points measured in cytotoxicity determination can be grouped into categories
of evaluation type:
a) assessments of cell damage by morphological means;
b) measurements of cell damage;
c) measurements of cell growth;
d) measurements of specific aspects of cellular metabolism.
There are, therefore, several alternative means of producing results in each of these four categories. The
investigator should be aware of the categories of test and into which a particular technique fits, in order that
comparisons may be made with other results on similar medical devices or materials, and in order that
interlaboratory tests may be conducted.
iv

---------------------- Page: 4 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD  © ISO ISO 10993-5:1999(E)
Biogical evaluation of medical devices —
Part 5:
Tests for in vitro cytotoxicity
1 Scope
This part of ISO 10993 describes test methods to assess the in vitro cytotoxicity of medical devices.
These methods specify the incubation of cultured cells either directly or through diffusion
a) with extracts of a device, and/or
b) in contact with a device.
These methods are designed to determine the biological response of mammalian cells in vitro using appropriate
biological parameters.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 10993. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these publications
do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 10993 are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For undated
references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 10993-1, Biological evaluation of medical devices — Part 1: Evaluation and testing.
ISO 10993-12:1996, Biological evaluation of medical devices — Part 12: Sample preparation and reference
materials.
3 Terms and definitions
For the purposes of this part of ISO 10993, the terms and definitions given in ISO 10993-1 and the following apply.
3.1
negative control material
material which, when tested in accordance with this part of ISO 10993, does not produce a cytotoxic response
NOTE The purpose of the negative control is to demonstrate background response. For example, high-density poly-
1)
ethylene for synthetic polymers, and aluminium oxide ceramic rods for dental material, have been used as negative controls.

1) High-density polyethylene can be obtained from the U.S. Pharmacopeia (Rockville, Maryland, USA) and Food and Drug
Safety Center, Hatano Research Institute (Ochiai 729-5, Hadanoshi, Kanagawa 257 - Japan). This information is given for the
convenience of the user of this part of ISO 10993 and does not constitute an endorsement by ISO of these products.
1

---------------------- Page: 5 ----------------------
© ISO
ISO 10993-5:1999(E)
3.2
positive control material
material which, when tested in accordance with this part of ISO 10993, provides a reproducible cytotoxic response
NOTE The purpose of the positive control is to demonstrate appropriate test system response. For example, an organo-tin
2)
stabilized poly(vinylchloride) has been used as a positive control for solid materials and extracts. Dilutions of phenol, for
example, have been used as a positive control for extracts.
3.3
reagent control
extraction vehicle without test material subjected to extraction conditions and test procedures
NOTE For the purposes of this part of ISO 10993, this definition replaces that given in 3.1 of ISO 10993-12:1996.
3.4
culture vessels
vessels appropriate for cell culture, including glass Petri dishes, plastic culture flasks or plastic multiwells and
microtitre plates
NOTE These vessels may be used interchangeably in these methods provided that they meet the requirements of tissue
culture grade and are suitable for use with mammalian cells.
3.5
subconfluency
approximately 80 % confluency, i.e. the end of the logarithmic phase of growth
4 Sample preparation
4.1 General
The test shall be performed on either
a) an extract of the material; and/or
b) the material itself.
Sample preparation shall be in accordance with ISO 10993-12.
4.2 Preparation of liquid extracts of material
4.2.1 Principles of extraction
Extraction conditions should attempt to simulate or exaggerate the conditions of clinical use so as to determine the
potential toxicological hazard, without causing significant changes in the test material such as fusion, melting or
alteration of the chemical structure.
NOTE The concentration of any endogenous or extraneous substances in the extract, and hence the amount of exposure
to the test cells, depends on the interfacial area, extraction volume, pH, chemical solubility, diffusion rate, osmolarity, agitation,
temperature, time and other factors.

2) Organo-tin poly(vinyl chloride) positive control material is available from SIMS Portex Ltd, Hythe, Kent, CT21 6JL, UK,
(product No 499-300-000). The ZDEC and ZDBC polyurethanes are available from Food and Drug Safety Center, Hatano
Research Institute, (Ochiai 729-5, Hadanoshi, Kanagawa 257, Japan). This information is given for the convenience of the user
of this part of ISO 10993 and does not constitute an endorsement by ISO of the product.
2

---------------------- Page: 6 ----------------------
© ISO
ISO 10993-5:1999(E)
4.2.2 Extraction vehicle
For mammalian cell assays, one or more of the following solvents shall be used. The choice of the extraction
vehicule(s) shall be justified:
a) culture medium with serum;
b) culture medium without serum;
c) physiological saline solution;
d) other suitable solvent.
NOTE The choice of solvent should reflect the aim of the extraction and consideration shall be given to the use of both a
polar and a nonpolar solvent. Suitable solvents include purified water, vegetable oil and dimethyl sulfoxide (DMSO). DMSO is
known to be cytotoxic in selected assay systems at greater than 0,5 % (volume fraction) concentrations.
4.2.3 Extraction conditions
4.2.3.1  The extraction shall be performed in sterile, chemically inert closed containers using aseptic techniques, in
general accordance with ISO 10993-12.
4.2.3.2  Recommended extraction conditions are:
a) not less than 24 h at (37 + 2) °C;
b) (72 + 2) h at (50 + 2) °C;
c) (24 + 2) h at (70 + 2) °C;
d) (1 + 0,2) h at (121 + 2) °C.
The recommended conditions may be applied according to the device characteristics and specific conditions for
use.
Extraction procedures using culture medium with serum can only be used under the conditions specified in
4.2.3.2 a).
4.2.3.3  If the extract is filtered, centrifuged or processed by other methods prior to being applied to the cells, this
shall be included in the final report (see clause 9). Any pH adjustment of the extract shall be reported. Manipulation
of the extract, such as by pH adjustment, could influence the result.
4.3 Preparation of material for direct-contact tests
4.3.1  Materials that have various shapes, sizes or physical states (i.e. liquid or solid) may be tested without
modification in the cytotoxicity assays.
The preferred sample of a solid specimen should have at least one flat surface.
Adjustments shall be made for other shapes and physical states.
4.3.2  Sterility of the test specimen shall be taken into account.
Test materials from sterilized devices shall be handled aseptically through
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10993-5
Deuxième édition
1999-05-15
Évaluation biologique des dispositifs
médicaux —
Partie 5:
Essais concernant la cytotoxicité in vitro
Biological evaluation of medical devices —
Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity
A
Numéro de référence
ISO 10993-5:1999(F)

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10993-5:1999(F)
Sommaire
Page
1 Domaine d’application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions.1
4 Préparation des échantillons.3
5 Lignées cellulaires.4
6 Milieu de culture.5
7 Préparation de la culture-stock cellulaire .5
8 Modes opératoires d'essai.5
9 Rapport d'essai .9
10 Interprétation des résultats .9
©  ISO 1999
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Suisse
Internet [e-mail]
Imprimé en Suisse
ii

---------------------- Page: 2 ----------------------
©
ISO
ISO 10993-5:1999(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 10993-5 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 194, Évaluation biologique
des dispositifs médicaux.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 10993-5:1992), dont elle constitue une révision
technique.
L'ISO 10993 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Évaluation biologique des dispositifs
médicaux:
 Partie 1: Évaluation et essais
 Partie 2: Exigences concernant la protection des animaux
 Partie 3: Essais concernant la génotoxicité, la cancérogénicité et la toxicité sur la reproduction
 Partie 4: Choix des essais concernant les interactions avec le sang
 Partie 5: Essais concernant la cytotoxicité in vitro
 Partie 6: Essais concernant les effets locaux après implantation
 Partie 7: Résidus de stérilisation à l'oxyde d'éthylène
 Partie 8: Guide des matériaux de référence
 Partie 9: Cadre pour l'identification et la quantification des produits potentiels de dégradation
 Partie 10: Essais d'irritation et de sensibilisation
 Partie 11: Essais de toxicité systémique
 Partie 12: Préparation des échantillons et des matériaux de référence
 Partie 13: Identification et quantification de produits de dégradation à base de polymères
 Partie 14: Identification et quantification des produits de dégradation de céramiques
 Partie 15: Identification et quantification des produits de dégradation de métaux et alliages
 Partie 16: Conception des études toxicocinétiques des produits de dégradation et des substances relargables
iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
©
ISO
ISO 10993-5:1999(F)
 Partie 17: Méthodes d'établissement des limites tolérables des résidus dans les dispositifs médicaux au
moyen d'évaluation de risques relatifs à la santé
 Partie 18: Caractérisation chimique des matériaux
Des parties ultérieures traiteront d'autres aspects en rapport avec les essais biologiques.
iv

---------------------- Page: 4 ----------------------
©
ISO
ISO 10993-5:1999(F)
Introduction
Étant donné l'utilisation généralisée des essais de cytotoxicité in vitro et de leur utilisation largement répandue pour
l'évaluation d'un grand nombre de dispositifs et matériaux médicaux, la présente partie de l'ISO 10993, plutôt que
de spécifier un essai unique, a pour objet de définir un programme d'essais impliquant une prise de décision
graduelle afin de permettre de choisir l'essai le plus approprié.
Trois catégories d'essais sont présentées: les essais utilisant un extrait, les essais en contact direct, les essais en
contact indirect.
Le choix d'une ou plusieurs de ces catégories dépend de la nature de l'échantillon devant être évalué, du site
potentiel d'utilisation et de la nature de l'utilisation.
Ce choix détermine alors les détails de la préparation des échantillons à soumettre à un essai, la préparation des
cellules en culture, et la manière dont les cellules sont exposées aux échantillons ou à leurs extraits.
À la fin de la période d'exposition, l'évaluation de la présence et de l'étendue de l'effet cytotoxique est effectuée. La
présente partie de l'ISO 10993 a pour objet de laisser ouvert le choix quant au type d'évaluation. Cette stratégie
permet d'utiliser différents essais et reflète l'approche de nombreux groupes qui préconisent les essais biologiques
in vitro.
Les nombreuses méthodes utilisées et les valeurs extrêmes mesurées lors de la détermination de la cytotoxicité
peuvent être regroupés en quatre catégories de type d'évaluation:
a) l'évaluation de l'atteinte des cellules par des observations morphologiques;
b) le mesurage de l'atteinte des cellules;
c) le mesurage de la croissance des cellules;
d) le mesurage de certains aspects spécifiques du métabolisme cellulaire.
Il existe ainsi plusieurs moyens d'obtenir des résultats dans ces quatre différentes catégories. Il convient que la
personne réalisant l'étude connaisse les différentes catégories d'essai et sache dans laquelle classer une technique
particulière, afin qu'il soit possible de comparer les résultats avec ceux obtenus sur des dispositifs ou matériaux
médicaux similaires, et de procéder à des essais interlaboratoires.
v

---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE  © ISO ISO 10993-5:1999(F)
Évaluation biologique des dispositifs médicaux —
Partie 5:
Essais concernant la cytotoxicité in vitro
1 Domaine d’application
La présente partie de l'ISO 10993 décrit des méthodes d'essai pour mesurer la cytotoxicité in vitro des dispositifs
médicaux.
Ces méthodes spécifient l'incubation de cellules en culture soit directement, soit par diffusion
a) avec des extraits du dispositif, et/ou
b) en contact direct avec le dispositif.
Ces méthodes sont destinées à déterminer la réponse biologique de cellules de mammifères in vitro, à l'aide de
paramètres biologiques appropriés.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 10993. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s'appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente partie de l'ISO 10993 sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s'applique. Les membres de l’ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO 10993-1, Évaluation biologique des dispositifs médicaux — Partie 1: Évaluation et essais.
ISO 10993-12:1996, Évaluation biologique des dispositifs médicaux — Partie 12: Préparation des échantillons et
des matériaux de référence.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente partie de l'ISO 10993, les termes et définitions donnés dans l'ISO 10993-1 ainsi
que les suivants s'appliquent.
1

---------------------- Page: 6 ----------------------
©
ISO
ISO 10993-5:1999(F)
3.1
matériau contrôle négatif
matériau qui, lorsqu'il est soumis à un essai conformément à la présente partie de ISO 10993, ne produit pas de
réponse cytotoxique
NOTE L'objet du contrôle négatif est de mettre en évidence la réponse basale des cellules. Par exemple, le polyéthylène
1)
haute densité dans le cas des polymères synthétiques, et des bâtonnets de céramique en alumine dans le cas des matériaux
dentaires, ont été utilisés comme contrôles négatifs.
3.2
matériau contrôle positif
matériau qui, lorsqu'il est soumis à un essai conformément à la présente partie de ISO 10993, induit une réponse
cytotoxique reproductible
NOTE L'objet du contrôle positif est de mettre en évidence une réponse adaptée au test choisi. Par exemple, un chlorure
2)
de polyvinyle stabilisé par l'étain à été utilisé comme contrôle positif pour les matériaux solides et les extraits. Des dilutions
de phénol, par exemple, ont été utilisées comme contrôle positif pour les extraits.
3.3
réactif contrôle
véhicule d'extraction soumis aux conditions d'extraction et au protocole d'essai, mais sans le matériau d'essai
NOTE Pour les besoins de la présente partie de l'ISO 10993, cette définition remplace celle donnée en 3.1 de
l'ISO 10993-12:1996.
3.4
récipients de culture
récipients convenant à la culture de cellules, y compris les boîtes de Pétri en verre, les flacons de culture en
plastique ou les plaques multipuits en plastique pour microtitration
NOTE Les récipients de culture peuvent être utilisés de manière interchangeable dans le cadre de ces méthodes, à condition
qu'ils soient conformes aux exigences s'appliquant à la classe de culture cellulaire et qu'ils conviennent pour la culture de
cellules de mammifères.
3.5
sous-confluence
environ 80 % de la confluence, c'est-à-dire la fin de la phase logarithmique de la croissance

1)
  Le polyéthylène haute densité peut être obtenu auprès de la Pharmacopée des États-Unis (Rockville, Maryland, USA) et du
Food and Drug Safety Center, Hatano Research Institute (Ochiai 729-5, Hadanoshi, Kanagawa 257 – Japon). Cette
information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 10993 et ne signifie nullement que l'ISO
approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2)
 Le chlorure de polyvinyle stabilisé par l'étain est disponible auprès de SIMS Portex Ltd, Hythe, Kent, CT21 6JL, Royaume-
Uni (produit n° 499-300-000). Les polyuréthanes ZDEC et ZDBC sont disponibles auprès du Food and Drug Safety Center,
Hatano Research Institute (Ochiai 729-5, Hadanoshi, Kanagawa 257 – Japon). Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs de la présente partie de l'ISO 10993 et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif
des produits ainsi désignés.
2

---------------------- Page: 7 ----------------------
© ISO
ISO 10993-5:1999(F)
4 Préparation des échantillons
4.1 Généralités
L'essai doit être réalisé avec
a) un extrait du matériau, et/ou
b) le matériau lui-même.
L'échantillon doit être préparé conformément à l'ISO 10993-12.
4.2 Préparation des liquides d'extraction du matériau
4.2.1 Principe de l'extraction
Il convient que les conditions d'extraction simulent ou exagèrent les conditions d'utilisation clinique du matériau, afin
de définir le danger potentiel de toxicité, sans induire de modifications significatives pour le matériau d'essai telles
qu'une fusion, un ramollissement ou une altération de sa structure chimique.
NOTE La concentration de toute substance endogène ou exogène dans l'extrait, et donc le taux de ces substances mis au
contact des cellules utilisées dans l'essai, dépendent de la surface de contact, du volume d'extraction, du pH, de la solubilité
chimique, de l'osmolarité, de l'agitation, de la température, de la durée et d'autres facteurs.
4.2.2 Véhicule d'extraction
Pour les essais avec des cellules de mammifères, un ou plusieurs des solvants suivants doivent être utilisés; le
choix du (des) véhicule(s) d'extraction doit être justifié:
a) milieu de culture avec sérum;
b) milieu de culture sans sérum;
c) solution saline physiologique;
d) tout autre solvant approprié.
NOTE Il convient que le choix du solvant reflète le but de l'extraction. L'utilisation d'un solvant polaire ainsi que d'un
solvant non polaire doit également être prise en considération. L'eau purifiée, l'huile végétale et le diméthylsulfoxyde (DMSO)
sont des solvants appropriés. Le DMSO est connu pour être cytotoxique dans le cadre de certains essais à des concentrations
supérieures à une fraction volumique de 0,5 %.
4.2.3 Conditions d'extraction
4.2.3.1  L'extraction doit être réalisée dans des récipients fermés, stériles, chimiquement inertes et en conditions
d'asepsie, conformément à l'ISO 10993-12.
4.2.3.2  Les conditions recommandées pour l'extraction sont les suivantes:
a) pas moins de 24 h à (37 – 2) °C;
b) (72 – 2) h à (50 – 2) °C;
c) (24 – 2) h à (70 – 2) °C;
d) (1 – 0,2) h à (121 – 2) °C.
Les conditions d'extraction recommandées peuvent être mises en pratique selon les caractéristiques du matériel et
ses conditions spécifiques d'utilisation.
3

---------------------- Page: 8 ----------------------
©
ISO
ISO 10993-5:1999(F)
Le protocole d'extraction utilisant le milieu de culture avec sérum ne peut être utilisé que dans des conditions
spécifiées en 4.2.3.2 a).
4.2.3.3  Si l'extrait est filtré, centrifugé ou traité par d'autres méthodes avant d'être appliqué aux cellules, le rapport
final doit le signaler (voir l'article 9). Tout ajustement du pH de l'extrait doit être consigné. Toute manipulation de
l'extrait, comme l'ajustement du pH, est susceptible de modifier le résultat.
4.3 Préparation du matériau pour les essais en contact direct
4.3.1  Les matériaux qui ont des formes, des tailles ou des états physiques (c'est-à-dire liquide ou solide) variés
peuvent être soumis à essai sans modification pour les essais de cytotoxicité.
Il est souhaitable que l'échantillon préférentiel d'un solide présente au moins une surface plane.
Des ajustements doivent être réalisés pour les autres formes et états physiques.
4.3.2  La stérilité de l'échantillon d'essai doit être prise en compte.
4.3.2.1  Les matériaux d'essai obtenus à partir de dispositifs stériles doivent être manipulés aseptiquement au
cours de l'extraction et du mode opératoire d'essai.
4.3.2.2  Les matériaux d'essai obtenus à partir de dispositifs normalement fournis non stériles, mais qui sont
stérilisés avant utilisation, doivent être stérilisés selon la méthode recommandée par le fabricant et manipulés
aseptiquement au cours de l'extraction et du mode opératoire d'essai.
Il convient de cons
...