Cosmetics — Microbiology — Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product

This document specifies a procedure for the interpretation of data generated by the preservation efficacy test or by the microbiological risk assessment, or both, when evaluating the overall antimicrobial protection of a cosmetic product. It comprises: — a preservation efficacy test; — a procedure for evaluating the overall antimicrobial protection of a cosmetic product that is not considered low risk, based on a risk assessment described in ISO 29621. The preservation efficacy test is a reference method to evaluate the preservation of a cosmetic formulation. It is applicable to cosmetic products in the marketplace. This test does not apply to those cosmetic products for which the microbiological risk has been determined to be low according to Annex A and ISO 29621. This test is primarily designed for water-soluble or water-miscible cosmetic products and can be used with modification to test products in which water is the internal (discontinuous) phase. NOTE This test can be used as a guideline to establish a development method during the development cycle of cosmetic products. In this case, the test can be modified or extended, or both, for example, to make allowance for prior data and different variables (microbial strains, media, incubation conditions exposure time, etc.). Compliance criteria can be adapted to specific objectives. During the development stage of cosmetic products, other methods, where relevant, can be used to determine the preservation efficacy of formulations.

Cosmétiques — Microbiologie — Évaluation de la protection antimicrobienne d'un produit cosmétique

Le présent document spécifie un mode opératoire pour l'interprétation des données résultant de l'essai d'efficacité de la protection antimicrobienne et/ou de l'appréciation du risque microbiologique lors de l'évaluation globale de la protection antimicrobienne d'un produit cosmétique. Il comprend: — un essai d'efficacité de la protection antimicrobienne; et — un mode opératoire permettant d'évaluer la protection antimicrobienne globale d'un produit cosmétique qui n'est pas identifié comme étant à faible risque microbiologique d'après l'appréciation du risque décrite dans l'ISO 29621. L'essai d'efficacité de la protection antimicrobienne est une méthode de référence pour évaluer la protection antimicrobienne d'une formulation cosmétique. Il s'applique aux produits cosmétiques disponibles sur le marché. Cet essai n'est pas applicable aux produits cosmétiques pour lesquels il a été démontré que le risque microbiologique est faible, conformément à l'Annexe A et à l'ISO 29621. Cet essai est principalement conçu pour les produits cosmétiques solubles dans l'eau ou miscibles à l'eau, et peut être utilisé avec modification pour soumettre à essai des produits dont la phase interne (discontinue) est aqueuse. NOTE Cet essai peut servir de ligne directrice pour établir une méthode de développement au cours du cycle de développement d'un produit cosmétique. Dans ce cas, l'essai peut être modifié et/ou élargi, par exemple pour prendre en compte des données antérieures et différents paramètres (souches microbiennes, milieux, conditions et durée d'incubation, etc.). Les critères de conformité peuvent être adaptés à des objectifs spécifiques. Au cours de la phase de développement des produits cosmétiques, d'autres méthodes peuvent être utilisées, le cas échéant, pour déterminer l'efficacité de la protection antimicrobienne des formulations.

General Information

Status
Published
Publication Date
14-Jan-2019
Current Stage
6060 - International Standard published
Due Date
20-Nov-2019
Completion Date
15-Jan-2019
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ISO 11930:2019 - Cosmetics -- Microbiology -- Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product
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ISO 11930:2019 - Cosmétiques -- Microbiologie -- Évaluation de la protection antimicrobienne d'un produit cosmétique
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Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11930
Second edition
2019-01
Cosmetics — Microbiology —
Evaluation of the antimicrobial
protection of a cosmetic product
Cosmétiques — Microbiologie — Évaluation de la protection
antimicrobienne d'un produit cosmétique
Reference number
ISO 11930:2019(E)
ISO 2019
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ISO 11930:2019(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2019

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 11930:2019(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Preservation efficacy test ............................................................................................................................................................................ 3

5.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 3

5.2 Materials, apparatus, reagents and culture media ................................................................................................... 3

5.2.1 General...................................................................................................................................................................................... 3

5.2.2 Materials ................................................................................................................................................................................. 3

5.2.3 Diluents .................................................................................................................................................................................... 3

5.2.4 Neutralizer ............................................................................................................................................................................ 4

5.2.5 Culture media ..................................................................................................................................................................... 5

5.3 Microbial strains .................................................................................................................................................................................... 6

5.4 Preparation and enumeration of inocula ......................................................................................................................... 7

5.4.1 General...................................................................................................................................................................................... 7

5.4.2 Preparation of bacterial and Candida albicans suspensions .................................................. 7

5.4.3 Preparation of Aspergillus brasiliensis spore suspension ....................................................... 8

5.5 Demonstration of the neutralizer efficacy ...................................................................................................................... 9

5.5.1 Principle .................................................................................................................................................................................. 9

5.5.2 Procedure ............................................................................................................................................................................... 9

5.5.3 Calculations .......................................................................................................................................................................... 9

5.5.4 Interpretation of results and conclusion on neutralizer efficacy........................................10

5.6 Determination of the preservation efficacy of the formulation .................................................................10

5.6.1 Procedure ............................................................................................................................................................................10

5.6.2 Counting of colonies...................................................................................................................................................11

5.6.3 Calculations .......................................................................................................................................................................11

5.7 Interpretation of test results and conclusions ..........................................................................................................12

5.7.1 Criteria ...................................................................................................................................................................................12

5.7.2 General case (efficacy of the neutralizer is demonstrated for all strains) ..................13

5.7.3 Case of formulations for which the efficacy of the neutralizer is not

demonstrated for some strains ........................................................................................................................13

5.8 Test report ................................................................................................................................................................................................13

6 Overall evaluation of the antimicrobial protection of the cosmetic product .....................................14

6.1 General ........................................................................................................................................................................................................14

6.2 Case 1 — Preservation efficacy test has been performed on the formulation..............................14

6.3 Case 2 — Preservation efficacy test has not been performed on the formulation ....................15

Annex A (normative) Decision diagram .........................................................................................................................................................16

Annex B (normative) Evaluation criteria for the preservation efficacy test ............................................................17

Annex C (informative) Examples of neutralizers for the antimicrobial activity of

preservatives and washing liquids .................................................................................................................................................18

Annex D (informative) Packaging characteristics ...............................................................................................................................20

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................21

© ISO 2019 – All rights reserved iii
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ISO 11930:2019(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso

.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 11930:2012), which has been technically

revised. The main changes compared to the previous edition are as follows.

— Two types of diluents, composition 1 and composition 2 can be used as the diluents for bacteria and

Candida albicans on the revised version (5.2.3).

— 5.6.2 Paragraph 2 has been changed to “When counts of surviving microorganisms obtained in

5.6.1.4 c) are less than 30 for bacteria and C. albicans or less than 15 for A. brasiliensis at the dilution

where neutralization has been checked, record the number of colonies on Petri dishes and express

results by multiplying by the dilution factor. If no colonies are observed at the dilution where

neutralization has been checked, note the result as <1 and multiply by the dilution factor.”

iv © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 11930:2019(E)
Introduction

This document is designed to be used in the overall evaluation of the antimicrobial protection of a

cosmetic product.
The antimicrobial protection of a product can come from many sources:
— chemical preservation;
— inherent characteristics of the formulation;
— package design;
— manufacturing process.

This document defines a series of steps to be taken when assessing the overall antimicrobial protection

of a cosmetic product. A reference method for a preservation efficacy test (challenge test) along with

evaluation criteria is also described in this document.

The test described in this document involves, for each test microorganism, placing the formulation in

contact with a calibrated inoculum, and then measuring the changes in the microorganism count at set

time intervals for a set period and at a set temperature.

The data generated by the risk assessment (see ISO 29621) or by the preservation efficacy test, or both,

are used to establish the level of antimicrobial protection required to minimize user risk.

© ISO 2019 – All rights reserved v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 11930:2019(E)
Cosmetics — Microbiology — Evaluation of the
antimicrobial protection of a cosmetic product
1 Scope

This document specifies a procedure for the interpretation of data generated by the preservation

efficacy test or by the microbiological risk assessment, or both, when evaluating the overall

antimicrobial protection of a cosmetic product.
It comprises:
— a preservation efficacy test;

— a procedure for evaluating the overall antimicrobial protection of a cosmetic product that is not

considered low risk, based on a risk assessment described in ISO 29621.

The preservation efficacy test is a reference method to evaluate the preservation of a cosmetic

formulation. It is applicable to cosmetic products in the marketplace.

This test does not apply to those cosmetic products for which the microbiological risk has been

determined to be low according to Annex A and ISO 29621.

This test is primarily designed for water-soluble or water-miscible cosmetic products and can be used

with modification to test products in which water is the internal (discontinuous) phase.

NOTE This test can be used as a guideline to establish a development method during the development cycle

of cosmetic products. In this case, the test can be modified or extended, or both, for example, to make allowance

for prior data and different variables (microbial strains, media, incubation conditions exposure time, etc.).

Compliance criteria can be adapted to specific objectives. During the development stage of cosmetic products,

other methods, where relevant, can be used to determine the preservation efficacy of formulations.

2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 16212, Cosmetics — Microbiology — Enumeration of yeast and mould

ISO 18415, Cosmetics — Microbiology — Detection of specified and non-specified microorganisms

ISO 21148:2017, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination

ISO 21149, Cosmetics — Microbiology — Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria

ISO 29621, Cosmetics — Microbiology — Guidelines for the risk assessment and identification of

microbiologically low-risk products
3 Terms and definitions

For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 21148 and the following apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
© ISO 2019 – All rights reserved 1
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ISO 11930:2019(E)
— IEC Electropedia: available at https: //www .electropedia .org/
3.1
cosmetic formulation

preparation of raw materials with a qualitatively and quantitatively defined composition

3.2
cosmetic product

cosmetic formulation (3.1) that has undergone all stages of production, including packaging in its final

container
3.3
antimicrobial protection of a cosmetic product

ability of a cosmetic product (3.2) to overcome microbial contamination that might present a potential

risk to the user or to the aesthetic and functional integrity of the product, during intended use

Note 1 to entry: The overall antimicrobial protection includes preservation of the formulation, the specific

manufacturing process and protective packaging.
3.4
preservation of a cosmetic formulation

set of means used to avoid microbial proliferation in a cosmetic formulation (3.1)

EXAMPLE Preservatives, multifunctional compounds, hostile raw materials, extreme pH, low water-

activity values.
3.5
reference method

method applied by interested parties to assess a product on the market and in case of dispute

3.6
development method
in-house method

method used during the development stage of a product before the product is put on the market

3.7
consumer
end user of a cosmetic product (3.2)
4 Principle

The evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product combines the following elements

(see Annex A).

a) The characteristics of its formulation (see ISO 29621) or the results of the preservation efficacy

test (if performed), or both.
The preservation efficacy test is described in Clause 5.

b) The characteristics of the cosmetic product in conjunction with the production conditions

(see ISO 22716 and ISO 29621), the packaging materials and, if justified, recommendations for use

of the product (see ISO 29621) and, when relevant, the area of application and the targeted user

population (see Annex D).

This document describes a procedure for the interpretation of data generated by the preservation

efficacy test (if appropriate) and by the microbiological risk assessment.
2 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 11930:2019(E)
5 Preservation efficacy test
5.1 General

The evaluation of the preservation of a cosmetic formulation is based on inoculation of the formulation

with calibrated inocula (prepared from relevant strains of microorganisms). The number of surviving

microorganisms is measured at defined intervals during a period of 28 days. For each time and

each strain, the log reduction value is calculated and compared to the minimum values required for

evaluation criteria A or B (see Annex B).

When used as a reference method, procedures shall be strictly followed in order to avoid variability

in results. To determine the preservation efficacy of a formulation during product development, other

suitable development methods may be used.

Prior to the test, neutralizer efficacy shall be established (see 5.5), and the microbiological quality of

the product shall be determined (in accordance with ISO 21149 and ISO 16212, or with ISO 18415)

to ensure that any microorganisms present in the test sample do not interfere with recovery of test

organisms.
5.2 Materials, apparatus, reagents and culture media
5.2.1 General

When water is used in diluents, neutralizers or culture media preparation, use distilled water or

purified water as specified in ISO 21148:2017, 8.2.
5.2.2 Materials

In addition to the microbiology laboratory equipment described in ISO 21148, the following materials

should be used
5.2.2.1 Glass beads, 3 mm to 4 mm in diameter.
5.2.2.2 Sintered glass filter, of porosity 2 (40 µm to 100 µm).
5.2.2.3 Sterile glass containers with closures, of suitable volumes.
5.2.2.4 Centrifuge, capable of a centrifugal force of 2 000g.
5.2.3 Diluents
5.2.3.1 General

Unless otherwise specified, all reagents shall be equilibrated at ambient temperature before use. When

available, ready-to-use reagents and media may be used.
5.2.3.2 Diluents for bacteria and Candida albicans
5.2.3.2.1 Composition 1
Sodium chloride 8,5 g
Water 1 000 ml
© ISO 2019 – All rights reserved 3
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ISO 11930:2019(E)
5.2.3.2.2 Preparation

Dissolve sodium chloride in the water by mixing. Dispense into suitable containers. Sterilize in the

autoclave at 121 °C for 15 min.
5.2.3.2.3 Composition 2
Tryptone pancreatic digest of casein 1,0 g
Sodium chloride 8,5 g
Water 1 000 ml
5.2.3.2.4 Preparation

Dissolve the components in the water by mixing while heating. Dispense into suitable containers.

Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2,

when measured at room temperature.

5.2.3.3 Diluent for preparation of Aspergillus brasiliensis: polysorbate solution

Prepare a solution of polysorbate 80 (0,5 g/l). Dissolve by mixing while heating until complete

dissolution is achieved. Dispense the solution into suitable containers. Sterilize in the autoclave at

121 °C for 15 min.
5.2.4 Neutralizer
5.2.4.1 General

The suitability and effectiveness of the neutralizing agent with respect to the test strains used and to

the tested formulation shall be demonstrated as specified in 5.5.

The neutralizer described in 5.2.4.2 is frequently used. Examples of other suitable neutralizers are

given in Annex C (see Table C.1).
5.2.4.2 Eugon LT 100 liquid broth
5.2.4.2.1 General

This medium contains ingredients that neutralize inhibitory substances present in the sample (lecithin

and polysorbate 80) and dispersing agent octoxynol 9 (Triton X100 ). It may be prepared as described

in 5.2.4.2.2, or from dehydrated culture medium, according to the manufacturer’s instructions. A ready-

to-use medium may also be used.
5.2.4.2.2 Composition
Pancreatic digest of casein 15 g
Papaic digest of soybean meal 5 g
Sodium chloride 4 g
L-cystine 0,7 g

1) Triton X100® is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the

convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of this product.

4 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 11930:2019(E)
Sodium sulphite 0,2 g
Glucose 5,5 g
Egg lecithin 1 g
Polysorbate 80 5 g
Octoxynol 9 1 g
Water 1 000 ml
5.2.4.2.3 Preparation

Dissolve successively into boiling water polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin until they are

completely dissolved. Dissolve the other components by mixing while heating. Dispense the medium

into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. Mix well after sterilization while

the liquid is still hot to redissolve settled substances. After sterilization, the pH shall be equivalent to

7,0 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.2.5 Culture media
5.2.5.1 General

Culture media may be prepared as in 5.2.5.2, 5.2.5.3 and 5.2.5.4, or from dehydrated culture media

according to the manufacturer’s instructions. Ready-to-use media may be used when their composition

and/or growth yields are comparable to those of the formulae given in 5.2.5.2.1, 5.2.5.3.1 and 5.2.5.4.1.

5.2.5.2 Culture medium for bacteria: tryptic soy agar (TSA) or soybean casein digest agar

medium
5.2.5.2.1 Composition
Pancreatic digest of casein 15,0 g
Papaic digest of soybean meal 5,0 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
5.2.5.2.2 Preparation

Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating.

Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. Mix well

after sterilization while the liquid is still hot to redissolve settled substances. After sterilization and

cooling down, the pH shall be equivalent to 7,3 ± 0,2 when measured at room temperature.

© ISO 2019 – All rights reserved 5
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ISO 11930:2019(E)
5.2.5.3 Culture medium for C. albicans: Sabouraud dextrose agar medium (SDA)
5.2.5.3.1 Composition
Dextrose 40,0 g
Peptic digest of animal tissue 5,0 g
Pancreatic digest of casein 5,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
5.2.5.3.2 Preparation

Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating.

Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After

sterilization, the pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.

5.2.5.4 Culture medium for A. brasiliensis: potato dextrose agar (PDA)
5.2.5.4.1 Composition
Potato infusion 200,0 g
Dextrose 20,0 g
Agar (see 5.2.5.4.2, Note 1) 20,0 g
Water 1 000 ml
5.2.5.4.2 Preparation

Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by heating. Dispense the

medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization, the

pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.

NOTE Commercially available dehydrated medium powders that contain less than 20 g/l of agar can be

supplemented with extra agar to the final concentration of 20 g/l if necessary.
5.3 Microbial strains
The test shall be run using the following strains as test microorganisms :
® TM3) ® TM4) ® TM5)
— Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (equivalent strain: CIP 82.118 or NCIMB 8626
® TM6) ® TM7)
or NBRC 13275 or KCTC 2513 or other equivalent national collection strain);

2) These are examples of suitable products available commercially. This information is given for the convenience

of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of these products.

3) ATCC : American Type Culture Collection
4) CIP : Collection de l’Institut Pasteur
5) NCIMB : National Collection of Industrial Marine Bacteria
6) NBRC : NITE Biological Resource Center, JP
7) KCTC : Korean Collection for Type Cultures
6 © ISO 2019 – All rights reserved
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ISO 11930:2019(E)
® TM ® TM ® TM
— Staphylococcus aureus ATCC 6538 (equivalent strain: CIP 4.83 or NCIMB 9518 or
® TM ® TM ® TM
NBRC 13276 or KCTC 3881 or NCTC 10788 or other equivalent national collection
strain);
® TM ® TM ® TM
— Escherichia coli ATCC 8739 (equivalent strain: CIP 53.126 or NCIMB 8545 or
® TM ® TM ® TM

NBRC 3972 or KCTC 2571 or NCTC 12923 or other equivalent national collection strain);

9) 10)
® TM TM ® TM
— Candida albicans ATCC 10231 (equivalent strain: IP 48.72 or NCPF 3179 or
® TM ® TM
NBRC 1594 or KCTC 7965 or other equivalent national collection strain);
® TM ® TM11)

— Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 (equivalent strain: IP 1431 or IMI 149007 or

® TM ® TM
NBRC 9455 or KCTC 6196 or other equivalent national collection strain).

The culture can be acquired frozen, freeze-dried, on slants or in ready-to-use formats and should be

prepared according to the procedures provided by the supplier of the reference strain. The strains

should be stored in a laboratory conforming to EN 12353 or according to another suitable method.

5.4 Preparation and enumeration of inocula
5.4.1 General

To perform the tests, use the strains stored in the laboratory (see 5.3) to obtain the stock cultures and

the working cultures.

The stock culture is a confluent culture obtained by streaking slant tubes or plates with the stored

strain (single-use vial or bead). After incubation, the stock culture can be kept between 2 °C and 8 °C for

two months and is used to obtain the working cultures.

The working culture, prepared when needed to perform a test, is used to obtain the calibrated

suspension (inoculum).

The same growth conditions (agar media and incubation) are used for both stock cultures and working

cultures (see 5.4.2 and 5.4.3).

NOTE 1 A limited number of serial subcultures and the use of confluent cultures instead of isolated colonies

lower the risk of change in the susceptibility of strains. The standardization of growth conditions and of inoculum

preparation improves the reproducibility of the test.

NOTE 2 Avoid thawing when multi-dose containers are used (for example, containers with several beads

brought out of the freezer to take one bead, then replaced in the freezer).
5.4.2 Preparation of bacterial and Candida albicans suspensions

5.4.2.1 To prepare the working culture of the test microorganism, prepare a subculture from the

stock culture by streaking slant tubes or plates (TSA for bacteria, SDA for C.albicans) in order to obtain a

confluent culture. Incubate at (32,5 ± 2,5) °C for 18 h to 24 h.

Prepare in the same way a second subculture, starting from the first subculture, and incubate at

(32,5 ± 2,5) °C for 18 h to 24 h. A third subculture can be grown in the same way, starting from the

second. The second subculture and the third one (if it was carried out) form the working cultures.

If the second subculture cannot be carried out in a timely manner, then the first subculture can be kept

for up to 48 h in the incubator (32,5 ± 2,5) °C and used to prepare the second subculture. In this case,

prepare the third 18 h to 24 h subculture and use this in the test.
8) NCTC : National Collection of Type Cultures
9) IP: Institut Pasteur
10) NCPF : National Collection of Pathogenic Fungi
11) IMI: International Mycological Institute, UK
© ISO 2019 – All rights reserved 7
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ISO 11930:2019(E)

It is recommended that a fourth subculture not be prepared from the initial stock culture.

5.4.2.2 Take 10 ml of diluent (5.2.3.2) and place in a suitable sterile container with approximately 5 g

of sterile glass beads. Transfer loopfuls of the cells harvested from the agar medium into the diluent; the

cells should be suspended in the diluent by rubbing the loop in a small amount of the dilue

...

NORME ISO
INTERNATIONALE 11930
Deuxième édition
2019-01
Cosmétiques — Microbiologie
— Évaluation de la protection
antimicrobienne d'un produit
cosmétique
Cosmetics — Microbiology — Evaluation of the antimicrobial
protection of a cosmetic product
Numéro de référence
ISO 11930:2019(F)
ISO 2019
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ISO 11930:2019(F)
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Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 2

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Essai d’efficacité de la protection antimicrobienne......................................................................................................... 3

5.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 3

5.2 Matériel, réactifs et milieux de culture ............................................................................................................................... 3

5.2.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 3

5.2.2 Matériel .................................................................................................................................................................................... 3

5.2.3 Diluants .................................................................................................................................................................................... 3

5.2.4 Milieu neutralisant ......................................................................................................................................................... 4

5.2.5 Milieux de culture ........................................................................................................................................................... 5

5.3 Souches microbiennes ...................................................................................................................................................................... 7

5.4 Préparation et dénombrement des inoculums............................................................................................................ 7

5.4.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 7

5.4.2 Préparation des suspensions bactériennes et de Candida albicans ................................. 8

5.4.3 Préparation de la suspension de spores d’Aspergillus brasiliensis ................................. 8

5.5 Démonstration de l’efficacité du milieu neutralisant ............................................................................................ 9

5.5.1 Principe .................................................................................................................................................................................... 9

5.5.2 Mode opératoire ............................................................................................................................................................... 9

5.5.3 Calculs ....................................................................................................................................................................................10

5.5.4 Interprétation des résultats et conclusion concernant l’efficacité du milieu

neutralisant .......................................................................................................................................................................10

5.6 Détermination de l’efficacité de la protection antimicrobienne de la formulation ..................11

5.6.1 Mode opératoire ............................................................................................................................................................11

5.6.2 Comptage des colonies ............................................................................................................................................12

5.6.3 Calculs ....................................................................................................................................................................................12

5.7 Interprétation des résultats d’essai et conclusions ..............................................................................................13

5.7.1 Critères ..................................................................................................................................................................................13

5.7.2 Cas général (l’efficacité du milieu neutralisant est démontrée pour toutes

les souches) .......................................................................................................................................................................14

5.7.3 Cas des formulations pour lesquelles l’efficacité du milieu neutralisant

n’est pas démontrée pour certaines souches .......................................................................................14

5.8 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................14

6 Évaluation globale de la protection antimicrobienne d’un produit cosmétique ............................15

6.1 Généralités ...............................................................................................................................................................................................15

6.2 Cas 1 — L’essai d’efficacité de la protection antimicrobienne a été réalisé sur

la formulation .................. ......................................................................................................................................................................15

6.3 Cas 2 — L’essai d’efficacité de la protection antimicrobienne n’a pas été réalisé sur

la formulation .................. ......................................................................................................................................................................16

Annexe A (normative) Diagramme décisionnel .....................................................................................................................................17

Annexe B (normative) Critères d’évaluation pour l’essai d’efficacité de la protection

antimicrobienne ................................................................................................................................................................................................18

Annexe C (informative) Exemples de milieux neutralisants de l’activité antimicrobienne,

de conservateurs et liquides de lavage ......................................................................................................................................19

Annexe D (informative) Caractéristiques du conditionnement ............................................................................................21

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................22

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ISO 11930:2019(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion

de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 11930:2012), qui a fait l’objet d’une

révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— deux types de diluants, la composition 1 et la composition 2, peuvent être utilisés comme diluants

pour les bactéries et Candida albicans dans la version révisée (5.2.3);

— 5.6.2 alinéa 2 a été modifié en «Lorsque le nombre de micro-organismes survivants obtenu en

5.6.1.4 c) est inférieur à 30 pour les bactéries et C. albicans ou à 15 pour A. brasiliensis à la dilution

pour laquelle la neutralisation a été vérifiée, noter le nombre de colonies sur les boîtes de Pétri et

exprimer le résultat en le multipliant par le facteur de dilution. Si aucune colonie n’a été observée

à la dilution pour laquelle la neutralisation a été vérifiée, noter le résultat comme étant < 1 et le

multiplier par le facteur de dilution».
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ISO 11930:2019(F)
Introduction

Le présent document est destiné à être utilisé pour l’évaluation globale de la protection antimicrobienne

d’un produit cosmétique.
La protection antimicrobienne d’un produit peut avoir plusieurs origines:
— protection chimique;
— caractéristiques inhérentes de la formulation;
— conception du conditionnement;
— procédé de fabrication.

Le présent document définit une série d’étapes à suivre pour évaluer la protection antimicrobienne

globale d’un produit cosmétique. Il décrit également une méthode de référence pour un essai d’efficacité

de la protection antimicrobienne (test d’épreuve), ainsi que les critères d’évaluation associés.

L’essai décrit dans le présent document implique, pour chaque micro-organisme d’essai, de mettre

en contact la formulation avec un inoculum calibré, puis de mesurer l’évolution du nombre de micro-

organismes à des intervalles de temps définis, pendant une période définie et à une température définie.

Les données résultant de l’appréciation du risque (voir l’ISO 29621) et/ou de l’essai d’efficacité de la

protection antimicrobienne sont utilisées pour établir le niveau de protection antimicrobienne requis

afin de réduire au minimum le risque pour l’utilisateur.
© ISO 2019 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 11930:2019(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Évaluation de la
protection antimicrobienne d'un produit cosmétique
1 Domaine d’application

Le présent document spécifie un mode opératoire pour l’interprétation des données résultant de l’essai

d’efficacité de la protection antimicrobienne et/ou de l’appréciation du risque microbiologique lors de

l’évaluation globale de la protection antimicrobienne d’un produit cosmétique.
Il comprend:
— un essai d’efficacité de la protection antimicrobienne; et

— un mode opératoire permettant d’évaluer la protection antimicrobienne globale d’un produit

cosmétique qui n’est pas identifié comme étant à faible risque microbiologique d’après l’appréciation

du risque décrite dans l’ISO 29621.

L’essai d’efficacité de la protection antimicrobienne est une méthode de référence pour évaluer la

protection antimicrobienne d’une formulation cosmétique. Il s’applique aux produits cosmétiques

disponibles sur le marché.

Cet essai n’est pas applicable aux produits cosmétiques pour lesquels il a été démontré que le risque

microbiologique est faible, conformément à l’Annexe A et à l’ISO 29621.

Cet essai est principalement conçu pour les produits cosmétiques solubles dans l’eau ou miscibles à

l’eau, et peut être utilisé avec modification pour soumettre à essai des produits dont la phase interne

(discontinue) est aqueuse.

NOTE Cet essai peut servir de ligne directrice pour établir une méthode de développement au cours du cycle

de développement d’un produit cosmétique. Dans ce cas, l’essai peut être modifié et/ou élargi, par exemple pour

prendre en compte des données antérieures et différents paramètres (souches microbiennes, milieux, conditions

et durée d’incubation, etc.). Les critères de conformité peuvent être adaptés à des objectifs spécifiques. Au cours

de la phase de développement des produits cosmétiques, d’autres méthodes peuvent être utilisées, le cas échéant,

pour déterminer l’efficacité de la protection antimicrobienne des formulations.
2 Références normatives

Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des

exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 16212, Cosmétiques — Microbiologie — Dénombrement des levures et des moisissures

ISO 18415, Cosmétiques — Microbiologie — Détection des micro-organismes spécifiés et non spécifiés

ISO 21148:2017, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques

ISO 21149, Cosmétiques — Microbiologie — Dénombrement et détection des bactéries aérobies mésophiles

ISO 29621, Cosmétiques — Microbiologie — Lignes directrices pour l'appréciation du risque et

l'identification de produits à faible risque microbiologique
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ISO 11930:2019(F)
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 21148 et les suivants

s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https: //www .electropedia .org/
3.1
formulation cosmétique

préparation constituée de matières premières dont la composition est qualitativement et

quantitativement définie
3.2
produit cosmétique

formulation cosmétique (3.1) ayant subi toutes les étapes de la production, y compris le conditionnement

dans son emballage final
3.3
protection antimicrobienne d’un produit cosmétique

aptitude d’un produit cosmétique (3.2) à résister à une contamination microbienne pouvant présenter

un risque potentiel pour l’utilisateur ou pour l’intégrité esthétique et fonctionnelle du produit au cours

de son utilisation prévue

Note 1 à l'article: La protection antimicrobienne globale inclut la protection antimicrobienne de la formulation, le

procédé de fabrication spécifique et le conditionnement protecteur.
3.4
protection antimicrobienne d’une formulation cosmétique

ensemble des moyens mis en œuvre pour éviter la prolifération microbienne dans une formulation

cosmétique (3.1)

EXEMPLE Conservateurs, composés multifonctionnels, matières premières hostiles, pH extrême et faible

activité de l’eau.
3.5
méthode de référence

méthode appliquée par les parties intéressées pour évaluer un produit sur le marché et en cas de litige

3.6
méthode de développement
méthode interne

méthode utilisée au cours de la phase de développement d’un produit avant sa mise sur le marché

3.7
consommateur
utilisateur final d’un produit cosmétique (3.2)
4 Principe

L’évaluation de la protection antimicrobienne d’un produit cosmétique comprend les points suivants

(voir l’Annexe A):

a) les caractéristiques de sa formulation (voir l’ISO 29621) et/ou les résultats de l’essai d’efficacité de

la protection antimicrobienne (s’il a été réalisé);

L’essai d’efficacité de la protection antimicrobienne est décrit dans l’Article 5.

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ISO 11930:2019(F)

b) les caractéristiques du produit cosmétique conjointement avec les conditions de production

(voir l’ISO 22716 et l’ISO 29621), les matériaux de conditionnement et, si cela est justifié, les

recommandations d’utilisation du produit (voir l’ISO 29621) ainsi que, le cas échéant, la zone

d’application et la population d’utilisateurs ciblés (voir l’Annexe D).

Le présent document décrit un mode opératoire pour l’interprétation des données résultant de

l’essai d’efficacité de la protection antimicrobienne (s’il est approprié) et de l’appréciation du risque

microbiologique.
5 Essai d’efficacité de la protection antimicrobienne
5.1 Généralités

L’évaluation de la protection antimicrobienne d’une formulation cosmétique repose sur l’inoculation

de la formulation avec des inoculums calibrés (préparés à partir de souches de micro-organismes

pertinents). Le nombre de micro-organismes survivants est mesuré à des intervalles de temps prédéfinis

pendant 28 jours. Pour chaque temps et chaque souche, le taux de réduction logarithmique est calculé

et comparé aux valeurs minimales requises pour les critères d’évaluation A ou B (voir l’Annexe B).

Lorsqu’ils sont utilisés comme méthode de référence, les modes opératoires doivent être suivis

scrupuleusement afin d’éviter toute variabilité des résultats. Pour déterminer l’efficacité de la

protection antimicrobienne d’une formulation lors du développement d’un produit, d’autres méthodes

de développement adaptées peuvent être utilisées.

Préalablement à l’essai, l’efficacité du milieu neutralisant doit être établie (voir 5.5) et la qualité

microbiologique du produit doit être déterminée (conformément à l’ISO 21149 et à l’ISO 16212, ou à

l’ISO 18415) afin de garantir que les micro-organismes présents dans l’échantillon d’essai n’interfèrent

pas avec le recouvrement des organismes d’essai.
5.2 Matériel, réactifs et milieux de culture
5.2.1 Généralités

Lorsque de l’eau est utilisée dans une préparation de diluant, de milieu neutralisant ou de milieu de

culture, utiliser de l’eau distillée ou de l’eau purifiée, comme spécifié dans l’ISO 21148:2017, 8.2.

5.2.2 Matériel

Outre le matériel courant de laboratoire de microbiologie décrit dans l’ISO 21148, il convient d’utiliser

le matériel suivant:
5.2.2.1 Billes de verre, de 3 mm à 4 mm de diamètre.
5.2.2.2 Filtre en verre fritté, de porosité 2 (40 µm à 100 µm).
5.2.2.3 Récipients en verre stériles, munis de bouchons, de volumes appropriés.
5.2.2.4 Centrifugeuse, capable de centrifuger à 2 000 g.
5.2.3 Diluants
5.2.3.1 Généralités

Sauf spécification contraire, tous les réactifs doivent être équilibrés à la température ambiante avant

usage. S’ils sont disponibles, des réactifs et des milieux prêts à l’emploi peuvent être utilisés.

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ISO 11930:2019(F)
5.2.3.2 Diluants pour bactéries et Candida albicans
5.2.3.2.1 Composition 1
Chlorure de sodium 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.3.2.2 Préparation

Dissoudre le chlorure de sodium en le mélangeant dans l’eau. Répartir dans des récipients appropriés.

Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min.
5.2.3.2.3 Composition 2
Tryptone, peptone pancréatique de caséine 1,0 g
Chlorure de sodium 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.3.2.4 Préparation

Dissoudre les composants dans l’eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients

appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après la stérilisation, le pH doit être de

7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.

5.2.3.3 Diluant pour la préparation d’Aspergillus brasiliensis: solution de polysorbate

Préparer une solution de polysorbate 80 (0,5 g/l). Dissoudre en mélangeant tout en chauffant jusqu’à

dissolution complète. Répartir la solution dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à

121 °C pendant 15 min.
5.2.4 Milieu neutralisant
5.2.4.1 Généralités

L’adéquation et l’efficacité du milieu neutralisant relativement aux souches d’essai utilisées et à la

formulation soumise à essai doivent être démontrées comme spécifié en 5.5.

Le milieu neutralisant décrit en 5.2.4.2 est souvent utilisé. D’autres milieux neutralisants pouvant

convenir sont donnés à titre d’exemples dans l’Annexe C (voir le Tableau C.1).
5.2.4.2 Milieu liquide Eugon LT 100
5.2.4.2.1 Généralités

Ce milieu contient des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans

l’échantillon (lécithine et polysorbate 80), ainsi qu’un agent dispersant, octoxynol 9 (Triton X100 ).

Il peut être préparé comme indiqué en 5.2.4.2.2 ou à partir d’un milieu de culture déshydraté en

respectant les instructions du fabricant. Un milieu prêt à l’emploi peut également être utilisé.

1) Triton X100 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée

à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO approuve ou recommande

l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
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ISO 11930:2019(F)
5.2.4.2.2 Composition
Peptone pancréatique de caséine 15 g
Peptone papaïque de soja 5 g
Chlorure de sodium 4 g
L-cystine 0,7 g
Sulfite de sodium 0,2 g
Glucose 5,5 g
Lécithine d’œuf 1 g
Polysorbate 80 5 g
Octoxynol 9 1 g
Eau 1 000 ml
5.2.4.2.3 Préparation

Dissoudre dans l’eau bouillante successivement le polysorbate 80, l’octoxynol 9 et la lécithine d’œuf

jusqu’à dissolution complète. Dissoudre les autres composants à chaud et en mélangeant. Répartir le

milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Bien mélanger

après stérilisation pendant que le liquide est encore chaud pour redissoudre les substances en dépôt.

Après stérilisation, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température ambiante.

5.2.5 Milieux de culture
5.2.5.1 Généralités

Les milieux de culture peuvent être préparés comme indiqué en 5.2.5.2, 5.2.5.3 et 5.2.5.4 ou à partir de

milieux de culture déshydratés en respectant les instructions du fabricant. Des milieux prêts à l’emploi

peuvent être utilisés si leur composition et/ou rendement de croissance sont comparables à ceux des

formulations indiquées en 5.2.5.2.1, 5.2.5.3.1 et 5.2.5.4.1.

5.2.5.2 Milieu de culture pour bactéries: gélose trypto-caséine-soja (TSA) ou milieu gélosé

aux peptones de caséine et de soja
5.2.5.2.1 Composition
Peptone pancréatique de caséine 15,0 g
Peptone papaïque de soja 5,0 g
Chlorure de sodium 5,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1 000 ml
5.2.5.2.2 Préparation

Dissoudre dans l’eau à chaud et en mélangeant les composants ou le milieu complet déshydraté.

Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Bien

mélanger après stérilisation pendant que le liquide est encore chaud pour redissoudre les substances

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en dépôt. Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,3 ± 0,2, le mesurage étant effectué à

la température ambiante.

5.2.5.3 Milieu de culture pour C. albicans: gélose de Sabouraud au dextrose (SDA)

5.2.5.3.1 Composition
Dextrose 40,0 g
Peptone pepsique de tissus animaux 5,0 g
Peptone pancréatique de caséine 5,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1 000 ml
5.2.5.3.2 Préparation

Dissoudre dans l’eau à chaud et en mélangeant les composants ou le milieu complet déshydraté.

Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après

la stérilisation, le pH doit être de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.

5.2.5.4 Milieu de culture pour A. brasiliensis: gélose à la pomme de terre et au dextrose (PDA)

5.2.5.4.1 Composition
Infusion de pommes de terre 200,0 g
Dextrose 20,0 g
Gélose (voir 5.2.5.4.2, Note 1) 20,0 g
Eau 1 000 ml
5.2.5.4.2 Préparation

Dissoudre dans l’eau à chaud les composants ou le milieu complet déshydraté. Répartir le milieu dans

des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après la stérilisation, le pH

doit être de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.

NOTE Si le milieu déshydraté disponible dans le commerce contient moins de 20 g/l de gélose, celui-ci peut

être, si nécessaire, complété en gélose pour obtenir une concentration finale de 20 g/l.

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5.3 Souches microbiennes

L’essai doit être conduit en utilisant les souches suivantes comme micro-organismes d’essai :

3) 4) 5)
® TM ® TM ® TM

— Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (souche équivalente: CIP 82.118 ou NCIMB 8626

6) 7)
® TM ® TM

ou NBRC 13275 ou KCTC 2513 ou toute autre souche équivalente issue d’une collection

nationale);
® TM ® TM ® TM
— Staphylococcus aureus ATCC 6538 (souche équivalente: CIP 4.83 ou NCIMB 9518 ou
® TM ® TM ® TM
NBRC 13276 ou KCTC 3881 ou NCTC 10788 ou toute autre souche équivalente issue
d’une collection nationale);
® TM ® TM ® TM
— Escherichia coli ATCC 8739 (souche équivalente: CIP 53.126 ou NCIMB 8545 ou
® TM ® TM ® TM

NBRC 3972 ou KCTC 2571 ou NCTC 12923 ou toute autre souche équivalente issue d’une

collection nationale);
9) 10)
® TM TM ® TM
— Candida albicans ATCC 10231 (souche équivalente: IP 48.72 ou NCPF 3179 ou
® TM ® TM

NBRC 1594 ou KCTC 7965 ou toute autre souche équivalente issue d’une collection nationale);

11)
® TM ® TM

— Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 (souche équivalente: IP 1431 ou IMI 149007 ou

® TM ® TM

NBRC 9455 ou KCTC 6196 ou toute autre souche équivalente issue d’une collection nationale).

La culture peut être acquise congelée, lyophilisée, sur pentes ou en formats prêts à l’emploi et il

convient de la préparer conformément aux modes opératoires fournis par le fournisseur de la souche

de référence. Il est recommandé de cons
...

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