ISO/DIS 7358

Essential oils of bergamot, lemon, bitter orange and lime, fully or partially reduced in bergapten -- Determination of bergapten content by high-performance liquid chromatography (HPLC)

Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette complètement ou partiellement privées de bergaptène -- Détermination de la teneur en bergaptène par chromatographie liquide à haute performance(CLHP)

Standards Content (sample)

PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 7358
ISO/TC 54 Secrétariat: UNE
Début de vote: Vote clos le:
2020-04-01 2020-06-24
Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade
et de limette complètement ou partiellement privées de
bergaptène — Détermination de la teneur en bergaptène
par chromatographie liquide à haute performance(CLHP)

Essential oils of bergamot, lemon, bitter orange and lime, fully or partially reduced in bergapten —

Determination of bergapten content by high-performance liquid chromatography (HPLC)

ICS: 71.100.60
CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR
OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC
SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT
ÊTRE CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE
AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES
FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE

Le présent document est distribué tel qu’il est parvenu du secrétariat du comité.

DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 7358:2020(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2020
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ISO/DIS 7358:2020(F)
ISO/DIS 7358:2020(F)
Sommaire Page

Avant-propos ...................................................................................................................................................................4

1 Domaine d’application ...................................................................................................................................1

2 Références normatives ..................................................................................................................................1

3 Principe ...............................................................................................................................................................1

4 Réactifs ................................................................................................................................................................1

5 Appareillage et équipement ........................................................................................................................2

5.1 Matériel courant de laboratoire .................................................................................................................2

5.2 Système de CLHP, composé des éléments suivants .............................................................................3

6 Préparation de l’échantillon pour essai ..................................................................................................3

7 Mode opératoire...............................................................................................................................................3

7.1 Conditions opératoires ..................................................................................................................................3

7.2 Détermination...................................................................................................................................................3

7.2.1 CLHP en phase normale .................................................................................................................................3

7.2.2 CLHP en phase inverse ...................................................................................................................................5

8 Calculs ..................................................................................................................................................................8

8.1 CLHP en phase normale ou inverse ...........................................................................................................8

8.1.1 Méthode de l’étalon interne .........................................................................................................................8

8.1.2 Méthode de l’étalon externe ........................................................................................................................8

9 Fidélité .................................................................................................................................................................9

9.1 Répétabilité .......................................................................................................................................................9

10 Rapport d’essai .................................................................................................................................................9

Annexe A ȋ‹ˆ‘”ƒ–‹˜‡Ȍ Chromatogramme type de l’analyse par chromatographie liquide

haute performance de composés de référence dans une phase inverse .................................. 10

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2020

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en oeuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

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Publié en Suisse
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ISO/DIS 7358:2020(F)
Sommaire Page

Avant-propos ...................................................................................................................................................................4

1 Domaine d’application ...................................................................................................................................1

2 Références normatives ..................................................................................................................................1

3 Principe ...............................................................................................................................................................1

4 Réactifs ................................................................................................................................................................1

5 Appareillage et équipement ........................................................................................................................2

5.1 Matériel courant de laboratoire .................................................................................................................2

5.2 Système de CLHP, composé des éléments suivants .............................................................................3

6 Préparation de l’échantillon pour essai ..................................................................................................3

7 Mode opératoire...............................................................................................................................................3

7.1 Conditions opératoires ..................................................................................................................................3

7.2 Détermination...................................................................................................................................................3

7.2.1 CLHP en phase normale .................................................................................................................................3

7.2.2 CLHP en phase inverse ...................................................................................................................................5

8 Calculs ..................................................................................................................................................................8

8.1 CLHP en phase normale ou inverse ...........................................................................................................8

8.1.1 Méthode de l’étalon interne .........................................................................................................................8

8.1.2 Méthode de l’étalon externe ........................................................................................................................8

9 Fidélité .................................................................................................................................................................9

9.1 Répétabilité .......................................................................................................................................................9

10 Rapport d’essai .................................................................................................................................................9

Annexe A (informative) Chromatogramme type de l’analyse par chromatographie liquide

haute performance de composés de référence dans une phase inverse .................................. 10

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ISO/DIS 7358:2020(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le

droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées et maintenues conformément aux règles données dans les

Directives ISO/CEI, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents critères

d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été rédigé

conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2 (voir

www.iso.org/directives).

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet

de droits de brevet. L’ISO ne saurait être tenue responsable d’identifier de tels droits de brevets. Les

détails des droits de brevet identifiés lors de l’élaboration du document seront dans l’Introduction

et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/patents).

Tout nom de marque utilisé dans ce document est fourni pour la commodité des utilisateurs et ne

constitue pas une approbation.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, de la signification des termes et expressions

spécifiques de l’ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion

de l’ISO aux principes de l’Organisation Mondiale du Commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien www.iso.org/iso/foreword.html.

Le comité technique chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 54, Huiles essentielles.

Cette seconde édition annule et remplace la première édition (ISO 7358:2002), qui a fait l’objet d'une

révision technique avec l’ajout d’une méthode alternative utilisant une colonne en phase inverse.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www.iso.org/members.html.
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 7358:2020(F)
Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de
limette complètement ou partiellement privées de
bergaptène — Détermination de la teneur en bergaptène par
chromatographie liquide haute performance (CLHP)
1 Domaine d’application

La présente Norme internationale spécifie une méthode d’analyse par chromatographie liquide haute

performance (CLHP), avec utilisation soit d’un étalon interne, soit d’un étalon externe, pour la

détermination de la teneur en bergaptène des huiles essentielles de bergamote [Citrus aurantium ssp.

bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], de citron [Citrus limon (L.) Burm. f.], de bigarade (Citrus

bigaradia Risso) et de limette [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle et Citrus latifolia Tanaka],

complètement ou partiellement privées de bergaptène.
2 Références normatives

Les documents suivants sont donnés en référence dans le texte de façon à ce qu’une partie ou la totalité

de leur contenu constitue des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l'édition

citée s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document normatif de référence

(y compris ses amendements) s’applique.
ISO 356, Huiles essentielles — Préparation des échantillons pour essai

ISO 8432:1987, Huiles essentielles — Analyse par chromatographie liquide haute performance —

Méthode générale
3 Principe

Les teneurs en bergaptène des échantillons à doser sont déterminées après dilution par

chromatographie liquide haute performance en phase inverse ou par chromatographie liquide haute

performance en phase normale avec gradient d’élution, par une méthode de standardisation interne ou

externe et une détection par spectromètre UV à barrettes de diodes.
4 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
4.1 Substance de référence : bergaptène (5-Méthoxypsoralène), C H O , masse
12 8 4
molaire = 216,19 g/mol de pureté connue ⩾ 95 %.

4.2 Étalon interne : coumarine (1-Benzopyran-2-one), C H O , masse molaire = 146,14 g/mol de

9 6 2
pureté connue ⩾ 98 %.
© ISO 2020 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 7358:2020(F)
4.3 Solvants

4.3.1 Solvants pour la chromatographie liquide haute performance en phase normale

4.3.1.1 Chloroforme, de pureté analytique, contenant moins de 2 % (fraction volumique) d’éthanol, à

utiliser lors de la préparation de l’échantillon d’huile essentielle contenant du bergaptène, l’étalon

interne et la phase mobile.
4.3.1.2 Hexane, de qualité CLHP, à utiliser dans la phase mobile (4.3.1.4).

4.3.1.3 Acétate d'éthyle, de qualité CLHP, à utiliser dans la phase mobile (4.3.1.4).

4.3.1.4 Phase mobile

Les solvants utilisés pour la phase mobile doivent être de qualité compatible avec le système de

détection utilisé, et préparés en quantité suffisante pour l’ensemble de l’analyse. Préparer, à titre

indicatif, un des mélanges suivants :

4.3.1.4.1 Hexane (4.3.1.2) et acétate d'éthyle (4.3.1.3), mélangés dans un rapport volumique de

80:20.

4.3.1.4.2 Hexane (4.3.1.2) et chloroforme (4.3.1.1), mélangés dans un rapport volumique de 85:15.

4.3.2 Solvants pour la chromatographie liquide h
...

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 7358
ISO/TC 54 Secretariat: UNE
Voting begins on: Voting terminates on:
2020-04-01 2020-06-24
Essential oils of bergamot, lemon, bitter orange and lime,
fully or partially reduced in bergapten — Determination
of bergapten content by high-performance liquid
chromatography (HPLC)

Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette complètement ou partiellement

privées de bergaptène — Détermination de la teneur en bergaptène par chromatographie liquide à haute

performance(CLHP)
ICS: 71.100.60
THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED
FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS
THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY
NOT BE REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL
STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
This document is circulated as received from the committee secretariat.
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 7358:2020(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT
RIGHTS OF WHICH THEY ARE AWARE AND TO
PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION. ISO 2020
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ISO/DIS 7358:2020(E)
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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

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Published in Switzerland
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ISO/DIS 7358:2020(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 1

4 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 1

5 Equipment and apparatus .......................................................................................................................................................................... 2

5.1 Common laboratory equipment ............................................................................................................................................... 2

5.2 HPLC system, consisting of the following ........................................................................................................................ 2

6 Sample preparation ........................................................................................................................................................................................... 3

7 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 3

7.1 Operating conditions ......................................................................................................................................................................... 3

7.2 Determination ......................................................................................................................................................................................... 3

7.2.1 HPLC in normal phase ................................................................................................................................................. 3

7.2.2 HPLC in reversed phase ............................................................................................................................................. 5

8 Calculation .................................................................................................................................................................................................................. 7

8.1 Normal phase or reversed phase HPLC ............................................................................................................................. 7

8.1.1 Internal standard method ........................................................................................................................................ 7

8.1.2 External standard method ....................................................................................................................................... 8

9 Precision ....................................................................................................................................................................................................................... 8

9.1 Repeatability ............................................................................................................................................................................................. 8

10 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 8

Annex A (informative) Typical chromatogram of the reference substances using high-

performance liquid chromatography of reference compounds in reversed phase ........................9

© ISO 2020 – All rights reserved iii
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ISO/DIS 7358:2020(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/

iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 54, Essential oils.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 7358:2002), which has been technically

revised with the addition of an alternative method using a reversed phase column.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved
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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 7358:2020(E)
Essential oils of bergamot, lemon, bitter orange and lime,
fully or partially reduced in bergapten — Determination
of bergapten content by high-performance liquid
chromatography (HPLC)
1 Scope

This International Standard specifies a high-performance liquid chromatographic (HPLC) method,

using either an internal standard or external standard, for the determination of the bergapten content

in essential oil of bergamot [Citrus aurantium ssp. bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], in

essential oil of lemon [Citrus limon (L.) Burm. f.], in essential oil of bitter orange (Citrus bigaradia Risso),

and in essential oil of lime [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle and Citrus latifolia Tanaka], all of them

fully or partially reduced in bergapten.
2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 356, Essential oils — Preparation of test samples

ISO 8432:1987, Essential oils — Analysis by high performance liquid chromatography — General method

3 Principle

The bergapten contents of test samples to be measured are determined after dilution by reversed phase

high performance liquid chromatography or by normal phase high performance liquid chromatography

with gradient elution, using an internal standardization method or an external standardization method

and diode-array UV spectrometric detection.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.

4.1 Reference substance: bergapten (5-Methoxypsoralen), C H O , MW = 216,19 g/mol of known

12 8 4
purity ⩾ 95 %.

4.2 Internal standard: coumarin (1-Benzopyran-2-one), C H O , MW = 146,14 g/mol of known

9 6 2
purity ⩾ 98 %.
4.3 Solvents
4.3.1 Solvents for normal phase high performance liquid chromatography

4.3.1.1 Chloroform, of analytical purity, containing less than 2 % (volume fraction) of ethanol, for use

in preparing the sample of essential oil containing the bergapten and internal standard as well as the

mobile phase.
© ISO 2020 – All rights reserved 1
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ISO/DIS 7358:2020(E)
4.3.1.2 Hexane, HPLC grade, for use in the mobile phase (4.3.1.4).
4.3.1.3 Ethyl acetate, HPLC grade, for use in the mobile phase (4.3.1.4).
4.3.1.4 Mobile phase

For the mobile phase, use solvents of a quality compatible with the detection system, and prepare

sufficient quantities for the complete analysis. Mix, for example, one of the following:

4.3.1.4.1 Hexane (4.3.1.2) and ethyl acetate (4.3.1.3), mixed in proportions of 80:20 by volume.

4.3.1.4.2 Hexane (4.3.1.2) and chloroform (4.3.1.1), mixed in proportions of 85:15 by volume.

4.3.2 Solvents for reversed phase high performance liquid chromatography

The solvent used for the mobile phase is a ternary mobile phase prepared with these three solvents as

described in the table 1 (see 7.2.2.3.1).
4.3.2.1 HPLC grade distilled water, to be used in mobile phase (7.2.2.3.1).
4.3.2.2 HLPC grade acetonitrile, to be used in the mobile phase (7.2.2.3.1).
4.3.2.3 HLPC grade methanol, to be used in the mobile phase (7.2.2.3.1).

4.3.2.4 Dilution solvent, mixture of methanol (4.3.2.3) and acetonitrile (4.3.2.2) in proportions of

80:20 by volume.
5 Equipment and apparatus
5.1 Common laboratory equipment
5.1.1 Volumetric flasks: 100 ml, 50 ml, 10 ml

5.1.2 Pasteur pipettes; volumetric pipettes: 1 ml, 5 ml, 10 ml and 20 ml; micropipette: 500 µl

5.1.3 Single-use syringes: 5 ml
5.1.4 PTFE filter: 0,45 µm
...