ISO 7358:2002
(Main)Oils of bergamot, lemon, citron and lime, fully or partially reduced in bergapten — Determination of bergapten content by high-pressure liquid chromatography (HPLC)
Oils of bergamot, lemon, citron and lime, fully or partially reduced in bergapten — Determination of bergapten content by high-pressure liquid chromatography (HPLC)
ISO 7358 specifies a high-pressure liquid chromatographic (HPLC) method, using either an internal standard or external standard, for the determination of the bergapten content in oil of bergamot [Citrus aurantium ssp bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], in oil of lemon [Citrus limon (L.) Burm. f.], in oil of citron (Citrus bigaradia Risso), and in oil of lime [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle and Citrus latifolia Tanaka], all of them fully or partially reduced in bergapten. For essential oils having a bergapten content greater than or equal to a mass fraction of 1 %, the internal standard method is applicable. For essential oils having a bergapten content from a mass fraction of 0,1 % to 1 %, the external standard method is applicable.
Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette complètement ou partiellement privées de bergaptène — Détermination de la teneur en bergaptène par chromatographie liquide à haute pression (CLHP)
L'ISO 7358 spécifie une méthode d'analyse par chromatographie liquide sous pression, avec utilisation soit d'un étalon interne, soit d'un étalon externe, pour la détermination de la teneur en bergaptène des huiles essentielles de bergamote [Citrus aurantium ssp bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], de citron [Citrus limon (L.) Burm. f.], de bigarade (Citrus bigaradia Risso), et de lime [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle et Citrus latifolia Tanaka], complètement ou partiellement privées de bergaptène. La méthode de l'étalon interne est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptène supérieure ou égale à une fraction massique de 1 %. La méthode de l'étalon externe est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptène correspondant à une fraction massique comprise entre 0,1 % et 1 %.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 7358
First edition
2002-11-01
Oils of bergamot, lemon, citron and lime,
fully or partially reduced in bergapten —
Determination of bergapten content by
high-pressure liquid chromatography
(HPLC)
Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de limette
complètement ou partiellement privées de bergaptène — Détermination de
la teneur en bergaptène par chromatographie liquide à haute pression
(CLHP)
Reference number
ISO 7358:2002(E)
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ISO 2002
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ISO 7358:2002(E)
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ISO 7358:2002(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 7358 was prepared by Technical Committee ISO/TC 54, Essential oils.
Annex A of this International Standard is for information only.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 7358:2002(E)
Oils of bergamot, lemon, citron and lime, fully or partially
reduced in bergapten — Determination of bergapten content
by high-pressure liquid chromatography (HPLC)
1 Scope
This International Standard specifies a high-pressure liquid chromatographic (HPLC) method, using either an
internal standard or external standard, for the determination of the bergapten content in oil of bergamot [Citrus
aurantium ssp. bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], in oil of lemon [Citrus limon (L.) Burm. f.], in oil of
citron (Citrus bigaradia Risso), and in oil of lime [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle and Citrus latifolia Tanaka],
all of them fully or partially reduced in bergapten.
For essential oils having a bergapten content greater than or equal to a mass fraction of 0,001 %, the internal
standard method is applicable.
For essential oils having a bergapten content between a mass fraction of 0,000 1 % and 0,001 %, the external
standard method is applicable.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 356, Essential oils — Preparation of test sample
ISO 8432:1987, Essential oils — Analysis by high performance liquid chromatography — General method
3 Principle
Liquid chromatography is based on the physico-chemical phenomena of adsorption, separation, ion exchange or
exclusion. It enables a small quantity of essential oil to be analysed using a chromatographic column with an
appropriate packing, under appropriate conditions, with identification of the different constituents and the
quantitative determination of specific compounds.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
DANGER — Attention is drawn to the hazard deriving from the specified use of chloroform, a toxic solvent.
4.1 Reference substance: bergapten, of known purity W 95 %.
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ISO 7358:2002(E)
4.2 Internal standard: coumarin, of known purity W 98 %.
4.3 Solvents.
4.3.1 Chloroform, of analytical purity, containing less than 2 % (volume fraction) of ethanol, for use in preparing
the sample of essential oil containing the bergapten and internal standard as well as the mobile phase.
4.3.2 Hexane, HPLC grade, for use in the mobile phase (4.3.4).
4.3.3 Ethyl acetate, HPLC grade, for use in the mobile phase (4.3.4).
4.3.4 Mobile phase.
For the mobile phase, use solvents of a quality compatible with the detection system, and prepare sufficient
quantities for the complete analysis. Mix, for example, one of the following:
4.3.4.1 Hexane (4.3.2) and ethyl acetate (4.3.3), mixed in proportions of 80:20 by volume.
4.3.4.2 Hexane (4.3.2) and chloroform (4.3.1), mixed in proportions of 85:15 by volume.
5 Apparatus
5.1 HPLC system, consisting of the following.
5.1.1 Liquid chromatograph.
5.1.2 Column, made of stainless steel, of length between 150 mm and 250 mm, having an internal diameter
between 4 mm and 5 mm and packed with a stationary phase consisting of granulated silica of HPLC quality, with a
grain size of approximately 5 µm.
5.1.2 Solvent supply system, capable of supplying the mobile phase at a constant or programmed flow rate.
5.1.3 Solvent degassing system (optional).
5.1.4 UV detector, adjustable to wavelengths of 254 nm or 313 nm.
5.1.5 Recorder and (optional) integrator, suitable for this HPLC system.
5.2 Volumetric flasks, of 15 ml to 150 ml capacity, depending on the quantity of bergapten assumed to be
contained in the sample.
6 Sample preparation
Prepare the test sample as specified in ISO 356.
Dissolve any solid deposit by moderate heating.
7 Procedure
7.1 HPLC operating conditions
Adjust the flow rate of the mobile phase (4.3.4) so as to obtain good separation of the peaks corresponding to
bergapten and coumarin from other essential oil components detectable by the UV detector (5.1.4). The flow rate is
typically between 0,5 ml/min and 1 ml/min.
Follow the procedure specified in ISO 8432.
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ISO 7358:2002(E)
7.2 Determination
7.2.1 Internal standard method for essential oils with bergapten content WWWW 0,001 %%%% by mass
7.2.1.1 Optimizatio
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 7358
Première édition
2002-11-01
Huiles essentielles de bergamote, de citron,
de bigarade et de limette complètement ou
partiellement privées de bergaptène —
Détermination de la teneur en bergaptène
par chromatographie liquide à haute
pression (CLHP)
Oils of bergamot, lemon, citron and lime, fully or partially reduced in
bergapten — Determination of bergapten content by high-pressure liquid
chromatography (HPLC)
Numéro de référence
ISO 7358:2002(F)
©
ISO 2002
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ISO 7358:2002(F)
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Imprimé en Suisse
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ISO 7358:2002(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente Norme internationale peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 7358 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54, Huiles essentielles.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à titre d’information.
© ISO 2002 – Tous droits réservés iii
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NORME INTERNATIONALE ISO 7358:2002(F)
Huiles essentielles de bergamote, de citron, de bigarade et de
limette complètement ou partiellement privées de bergaptène —
Détermination de la teneur en bergaptène par chromatographie
liquide à haute pression (CLHP)
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode d’analyse par chromatographie liquide sous pression, avec
utilisation soit d’un étalon interne, soit d’un étalon externe, pour la détermination de la teneur en bergaptène des
huiles essentielles de bergamote [Citrus aurantium ssp. bergamia (Risso et Poit.) Wight et Arn. ex Engl.], de citron
[Citrus limon (L.) Burm. f.], de bigarade (Citrus bigaradia Risso) et de limette [Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle
et Citrus latifolia Tanaka], complètement ou partiellement privées de bergaptène.
La méthode de l’étalon interne est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptène supérieure
ou égale à une fraction massique de 0,001 %.
La méthode de l’étalon externe est applicable aux huiles essentielles ayant une teneur en bergaptène
correspondant à une fraction massique comprise entre 0,000 1 % et 0,001 %.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l’ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO 356, Huiles essentielles — Préparation des échantillons pour essai
ISO 8432:1987, Huiles essentielles — Analyse par chromatographie liquide sous pression — Méthode générale
3 Principe
La chromatographie liquide est basée sur des phénomènes physico-chimiques d’adsorption, de partage,
d’échange d’ions ou d’exclusion. Elle permet l’analyse de petites quantités d’huiles essentielles sur une colonne de
chromatographie avec un remplissage adéquat, dans des conditions appropriées, la localisation des différents
constituants et la détermination quantitative des composés spécifiques.
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ISO 7358:2002(F)
4 Réactifs
Sauf indications contraires, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
DANGER — L’attention est attirée sur les risques dérivant de l’emploi spécifié du chloroforme, qui est un
solvant toxique.
4.1 Substance de référence: bergaptène, de pureté connue W 95 %.
4.2 Étalon interne: coumarine, de pureté connue W 98 %.
4.3 Solvants.
4.3.1 Chloroforme, de pureté analytique, contenant moins de 2 % (fraction volumique) d’éthanol, à utiliser lors
de la préparation de l’échantillon d’huile essentielle contenant du bergaptène, l’étalon interne et la phase mobile.
4.3.2 Hexane, de qualité CLHP, à utiliser dans la phase mobile (4.3.4).
4.3.3 Acétate d’éthyle, de qualité CLHP, à utiliser dans la phase mobile (4.3.4).
4.3.4 Phase mobile.
Les solvants utilisés pour la phase mobile doivent être de qualité compatible avec le système de détection utilisé,
et préparés en quantité suffisante pour l’ensemble de l’analyse. Préparer, à titre indicatif, un des mélanges
suivants:
4.3.4.1 Hexane (4.3.2) et acétate d’éthyle (4.3.3), mélangés dans un rapport volumique de 80:20.
4.3.4.2 Hexane (4.3.2) et chloroforme (4.3.1), mélangés dans un rapport volumique de 85:15.
5 Appareillage
5.1 Système de CLHP, composé des éléments suivants.
5.1.1 Chromatographe pour phase liquide.
5.1.2 Colonne, en acier inoxydable, d’une longueur comprise entre 150 mm et 250 mm, de diamètre intérieur
compris entre 4 mm et 5 mm et garnie d’une phase stationnaire de silice granulée de qualité CLHP, présentant une
granulométrie voisine de 5 µm.
5.1.3 Système délivrant le solvant, permettant de délivrer la phase mobile à un débit constant ou programmé.
5.1.4 Système de dégazage des solvants (facultatif).
5.1.5 Détecteur à UV, pouvant être réglé à une longueur d’onde de 254 nm ou de 313 nm.
5.1.6 Enregistreur et intégrateur (facultatif), compatibles avec l’ensemble du système de CLHP.
5.2 Fioles jaugées, de 15 ml à 150 ml de capacité, selon les quantités supposées de bergaptène contenues
dans l’échantillon.
6 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 356.
Dissoudre les éventuels dépôts solides en les chauffant modérément.
2 © ISO 2002 – Tous droits réservés
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ISO 7358:2002(F)
7 Mode opératoire
7.1 Conditions opératoires pour la CLHP
Régler le débit de la phase mobile (4.3.4) de façon que les pics correspondant au bergaptène et à la coumarine
soient nettement séparés des autres constituants de l’huile essentielle détectables par le détecteur à UV (5.1.5).
Typiquement, le débit se situe entre 0,5 ml/min et 1 ml/min.
Suivre le mode opératoire spécifié dans l’ISO 8432.
7.2 Détermination
7.2.1 Méthod
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.