ISO 22718:2006
(Main)Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus aureus
Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus aureus
ISO 22718:2006 gives general guidelines for the detection and identification of the specified micro-organism Staphylococcus aureus in cosmetic products. Micro-organisms considered as specified in this International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations. In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate microbiological risk analysis to determine the types of cosmetic product to which ISO 22718:2006 is applicable. Products considered to present a low microbiological risk include those with low water activity, hydro-alcoholic products, extreme pH values, etc. The method described in ISO 22718:2006 is based on the detection of Staphylococcus aureus in a non-selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other methods may be appropriate dependent on the level of detection required. Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method may not be appropriate for some products in every detail (e.g. certain water immiscible products). Other International Standards (ISO 18415) may be appropriate. Other methods (e.g. automated) may be substituted for the tests presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise validated.
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Staphylococcus aureus
L'ISO 22718:2006 donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification du microorganisme spécifié Staphylococcus aureus dans les produits cosmétiques. Les microorganismes considérés comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer d'un pays à l'autre, suivant les pratiques ou réglementations nationales. Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est préférable d'effectuer une analyse appropriée du risque microbiologique afin de déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent de l'ISO 22718:2006. Les produits considérés présenter un faible risque microbiologique comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydro-alcooliques, ceux ayant des valeurs de pH extrêmes, etc. La méthode décrite dans l'ISO 22718:2006 repose sur la détection de Staphylococcus aureus dans un milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), suivie de son isolement sur un milieu gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du niveau de détection exigé.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 22718
Первое издание
2006-02-01
Косметика. Микробиология.
Обнаружение Staphylococcus aureus
Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus aureus
Ответственность за подготовку русской версии несёт ГOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 22718:2006(R)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике Гeneral Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2006
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyriгht office
Case postale 56 • CH-1211 Гeneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyriгht@iso.orг
Web www.iso.orг
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Принцип.2
5 Растворители и культурная среда.3
5.1 Общие положенияl .3
5.2 Растворители для бактериальной суспензии (раствор триптон хлорид натрия).3
5.3 Культурная среда .3
6 Приборы и стеклянная посуда .6
7 Штаммы микроорганизмов .7
8 Обращение с косметической продукцией и лабораторными образцами .7
9 Процедура.7
9.1 Общие рекомендации .7
9.2 Приготовление первоначальной суспензии в обогатительном бульоне.7
9.3 Инкубация посеянного обогатительного бульона.8
9.4 Обнаружение и идентификация Staphylococcus aureus.8
10 Представление результатов (обнаружение Staphylococcus aureus) .9
11 Нейтрализация противомикробных свойств продукции .9
11.1 Общее положение.9
11.2 Приготовление посевной культуры .9
11.3 Достоверность метода обнаружения .10
12 Протокол испытания.11
Приложение А (информативное) Другие среды.12
Приложение В (информативное) Нейтрализаторы противомикробной активности
консервантов и промывных жидкостей .15
Библиография.16
© ISO 2006 – Все права сохраняются iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, установленными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы этого документа могут быть объектом патентных прав.
ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав
ISO 22718 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 217, Косметика.
iv
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
Введение
Микробиологическое исследование косметической продукции должно выполняться в соответствии с
соответствующим анализом степени микробиологического риска для того, чтобы обеспечить ее
качество и безопасность для потребителей.
Анализ микробиологического риска зависит от нескольких параметров, таких как:
потенциальное изменение косметической продукции;
патогенность микроорганизмов;
место применения косметической продукции (волосы, кожа, глаза, слизистые оболочки, и т.п.);
типы пользователей (взрослые, дети менее 3 лет).
Для косметической и другой продукции местного применения может быть очень важным обнаружение
кожных болезнетворных микроорганизмов таких, как Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
and Candida albicans. Обнаружение других видов микроорганизмов может представлять интерес,
поскольку эти микроорганизмы (включая индикаторы фекальных загрязнений типа Escherichia coli)
наводят на мысль о том, что в процессе производства не были соблюдены правила гигиены.
© ISO 2006 – Все права сохраняются v
---------------------- Page: 5 ----------------------
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 22718:2006(R)
Косметика. Микробиология. Обнаружение Staphylococcus
aureus
1 Область применения
Настоящий международный стандарт предлагает общие руководящие указания по обнаружению и
идентификации конкретного микроорганизма Staphylococcus aureus в косметической продукции.
Микроорганизмы, рассматриваемые как конкретные в данном международном стандарте, могут
отличаться в зависимости от страны в соответствии с национальными инструкциями или правилами.
Чтобы обеспечить качество и безопасность продукции для потребителя, рекомендуется провести
соответствующий анализ микробиологического риска, чтобы определить типы косметической
продукции, к которой применим данный международный стандарт. К продукции с низкой степенью
микробиологического риска относятся те, которые имеют низкую водную активность, водноспиртовые
продукты, с экстремальными значениями pH и т д.
Метод, описанный в настоящем международном стандарте, основан на обнаружении Staphylococcus
aureus в неселективной жидкой среде (обогатительном бульоне), за чем следует выделение на
селективной агаровой среде. Возможны другие методы в зависимости от уровня требуемого
обнаружения.
ПРИМЕЧАНИЕ Для обнаружения Staphylococcus aureus, субкультуры (пассированные культуры) могут быть
выполнены не неселективной культурной среде, за которой следуют соответствующие этапы идентификации (т.н.
с помощью идентификационных китов).
По причине большого разнообразия косметической продукции в данной области применения,
настоящий метод не может полностью подходить к некоторой продукции (т. н. к некоторым продуктам,
погружаемым в воду). Возможно применение других подходящих международных стандартов
[10]
(ISO 18415 ). Другие методы (т. н. автоматизированный) могут быть заменены испытаниями,
представленными в данном стандарте, при условии, что их эквивалентность была
продемонстрирована или метод был достоверен иначе.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения
настоящего документа. Для жестких ссылок применяется только цитируемое издание документа. Для
плавающих ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного
документа (включая любые изменения).
ISO 21148:2005, Косметика. Микробиология. Общие указания по микробиологическому контролю
EN 12353, Химические дезинфицирующие средства и антисептики. Консервация микробных
штаммов, используемых для определения бактерицидной и фунгицидной активности
© ISO 2006 – Все права сохраняются 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
3 Термины и определения
Для данного документа применены следующие термины и определения.
3.1
продукция
product
часть идентифицированной косметической продукции, полученной в лаборатории для испытания
3.2
образец
sample
часть продукции (как минимум 1 г или 1 млl), которая используется при испытании для приготовления
первоначальной суспензии
3.3
первоначальная суспензия
initial suspension
суспензия (или раствор) образца в определенном объеме обогатительного бульона
3.4
растворение (ния) образца
sample dilution(s)
растворение (ния) первоначальной суспензии
3.5
конкретный микроорганизм
specified micro-organism
аэробные мезофильные бактерии или дрожжи, которые нежелательны в косметической продукции.
Они признаны как кожные патогенные разновидности, которые могут быть вредными для здоровья
человека или являются указанием на нарушения гигиены производственного процесса
3.6
Staphylococcus aureus
Грамположительные палочки, соединенные подобно виноградным кистям; колонии гладких клеток,
окрашенных обычно в желтый цвет
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Основными характеристиками для идентификации являются: рост на селективной среде,
положительная каталаза, положительная коагулаза.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Staphylococcus aureus является условно патогенной для людей бактерией, которая может также
присутствовать на коже здоровых людей, не вызывая расстройства для них. Ее присутствие неприемлемо в
косметической продукции по причине ее потенциальной патогенности.
3.7
обогатительный бульон (питательная среда))
enrichment broth
неселективная жидкая среда, содержащая соответствующие нейтрализаторы и/или диспергаторы, и
достоверная для испытываемой продукции
4 Принцип
На первом этапе процедуры выполняют обогащение, используя неселективную питательную среду
(бульон), чтобы увеличить число микроорганизмов без риска угнетения селективными ингредиентами,
которые присутствуют в селективной/дифференциальной среде для выращивания.
Второй этап испытания (выделение) выполняется на селективной среде, за чем следуют
идентификационные испытания.
2 © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
Возможное угнетение микробиологического роста действием образца должно нейтрализоваться, чтобы
[1]
позволить обнаружить жизнеспособные микроорганизмы . Во всех случаях и независимо от
методологии, нейтрализация противомикробных свойств продукции должна проверяться и
[2], [3], [4]
подтверждаться достоверность .
5 Растворители и культурная среда
5.1 Общие положения
Общие инструкции приведены в ISO 21148. Когда в данном документе упоминается вода, используют
дистиллированную воду или очищенную воду, как установлено в ISO 21148.
Обогатительный бульон используют, чтобы диспергировать образец и увеличить первоначальную
микробную популяцию. Он может содержать нейтрализаторы, если испытываемый образец обладает
противомикробными свойствами. Эффективность нейтрализации должна быть показана (смотри
Раздел 11). Информация, относящаяся к подходящим нейтрализаторам, приведена в Приложении B.
Нижеследующий обогатительный бульон пригоден для проверки присутствия Staphylococcus aureus в
соответствии с настоящим международным стандартом при условии, что он удостоверен в
соответствии с Разделом 11.
Разрешается применение других растворителей и культурных сред, если они могут показать свою
пригодность при применении.
5.2 Растворители для бактериальной суспензии (раствор триптон хлорид натрия)
5.2.1 Общие положения
Растворитель используется для приготовления бактериальной суспензии, применяемой для
процедуры проверки на достоверность (см. Раздел 11).
5.2.2 Состав
триптон, панкреатическая питательная среда казеина 1,0 г
хлорид натрия 8,5 г
вода 1 000 мл
5.2.3 Приготовление
Компоненты растворяют в воде, перемешивая при нагревании. Распределяют в подходящие
контейнеры. Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения pH должно равняться 7,0 ± 0,2 при измерении при комнатной
температуре.
5.3 Культурная среда
5.3.1 Общие положения
Культурная среда может быть приготовлена по описаниям, приведенным ниже или из обезвоженной
культурной среды согласно инструкциям изготовителя. Необходимо следовать инструкциям,
предлагаемым поставщиком среды.
© ISO 2006 – Все права сохраняются 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
ПРИМЕЧАНИЕ. Готовые к использованию среды разрешается использовать, если их состав и/или
продуктивность роста можно сравнить с формулами приведенными здесь.
5.3.2 Агаровая среда для проверки на достоверность (см. Раздел 11)[соевая казеиновая
агаровая питательная среда (SCDA) или триптический соевый агар(TSA)]
5.3.2.1 Состав
панкреатическая питательная среда казеина 15,0 г
папаиновая питательная среда соевой пищи 5,0 г
хлорид натрия 5,0 г
агар 15,0 г
вода 1 000 мл
5.3.2.2 Приготовление
Компоненты или обезвоженную готовую среду растворяют в воде, перемешивая при нагревании.
Распределяют среду в подходящие контейнеры. Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения pH должно равняться 7,3 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.
5.3.3 Обогатительный бульон
5.3.3.1 Быстрорастущий бульон Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Общее положение
Данная среда содержит ингредиенты, которые нейтрализуют угнетающие вещества, присутствующие в
образце: лецитин и полисорбат 80 (эфир полиоксиэтиленовой жирной кислоты), и диспергатор:
октоксинол 9.
5.3.3.1.2 Состав
панкреатическая питательная среда казеина 15,0 г
папаиновая питательная среда соевой пищи 5,0 г
L- цистин 0,7 г
хлорид натрия 4,0 г
сульфит натрия 0,2 г
глюкоза 5,5 г
яичный лецитин 1,0 г
полисорбат 80 (эфир полиоксиэтиленовой жирной кислоты) 5,0 г
октоксинол 9 1,0 г
вода 1 000 мл
4 © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
5.3.3.1.3 Приготовление
Один за другим растворяют компоненты в кипящей воде – полисорбат 80, октоксинол 9 и яичный
лецитин до их полного растворения. Другие компоненты растворяют в воде, перемешивая при
нагревании. Распределяют среду в подходящие контейнеры.Стерилизуют в автоклаве при 121 °C в
течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения pH должно равняться 7,0 ± 0,2 при измерении при комнатной
температуре.
5.3.3.2 Другие обогатительные бульоны
Можно использовать и другие обогатительные бульоны, если они соответствуют (см. Приложение A).
5.3.4 Селективная агаровая среда для выделения Staphylococcus aureus
5.3.4.1 Агаровая среда Baird Parker
5.3.4.1.1 Основная среда
5.3.4.1.1.1 Состав
панкреатическая питательная среда казеина 10,0 г
дрожжевой экстракт 1,0 г
мясной экстракт 5,0 г
пируват натрия 10,0 г
L-глицин 12,0 г
хлорид лития 5,0 г
1)
агар 12 г до 22 г
вода до окончательного oбъема 950 млl
5.3.4.1.1.2 Приготовление
Растворяют компоненты или полностью обезвоженное основание в кипящей воде. Переносят среду в
количествах по 100 мл в колбы или бутылки соответствующей емкости. Стерилизуют среду в
автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.
После стерилизации и охлаждения pH должно равняться 7,2 ± 0,2 при измерении при комнатной
температуре.
5.3.4.1.2 Раствор теллурита калия
5.3.4.1.2.1 Состав
теллурит калия (K TeO) 1,0 г
2 3
1) В зависимости от гелевой концентрации агара.
© ISO 2006 – Все права сохраняются 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 22718:2006(R)
вода 100 млl
5.3.4.1.2.2 Приготовление
Полностью растворяют теллурит калия в воде с минимальным нагревом.
Cтерилизуют путем фильтрации, используя мембраны с размером пор 0,22 мкм. Раствор может
храниться максимум в течение одного месяца при 3 °C ± 2 °C. Раствор выбрасывают, если образуется
белый осадок.
Твердые частички должны легко растворяться. Если в воде присутствует белое нерастворимое
вещество, то порошок следует вбросить.
5.3.4.1.3 Эмульсия из яичного желтка (концентрация около 20 % или согласно инструкциям
изготовителя)
Если данная среда отсутствует в коммерческом приготовлении, ее готовят, как указано ниже.
Берут куриные яйца с цельной скорлупой. Очищают яйца щеткой и жидким моющим средством.
Ополаскивают их водой из крана, затем дезинфицируют скорлупу либо погружая яйца в 70 %
(объёмная доля) этанола на 30 с и дают им высохнуть на воздухе, либо обрызгивают их спиртом и
затем стерилизуют в пламени. Продолжая приготовление в антисептических условиях, разбивают
каждое яйцо и отделяют желток от белка, перенося желток из одн
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 22718
First edition
2006-02-01
Cosmetics — Microbiology — Detection
of Staphylococcus aureus
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Staphylococcus aureus
Reference number
ISO 22718:2006(E)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
© ISO 2006
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 2
5 Diluents and culture media. 2
5.1 General. 2
5.2 Diluent for the bacterial suspension (tryptone sodium chloride solution). 3
5.3 Culture media . 3
6 Apparatus and glassware . 6
7 Strains of microorganisms . 6
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples . 6
9 Procedure . 7
9.1 General recommendation . 7
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth . 7
9.3 Incubation of the inoculated enrichment broth . 7
9.4 Detection and Identification of Staphylococcus aureus. 7
10 Expression of the results (detection of Staphylococcus aureus) . 8
11 Neutralization of the antimicrobial properties of the product. 9
11.1 General. 9
11.2 Preparation of inoculum . 9
11.3 Validation of the detection method. 9
12 Test report . 10
Annex A (informative) Other media . 11
Annex B (informative) Neutralizers of antimicrobial activity of preservatives and rinsing liquids . 14
Bibliography . 15
© ISO 2006 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 22718 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
iv © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
Introduction
Microbiological examinations of cosmetic products shall be carried out according to an appropriate
microbiological risk analysis in order to ensure their quality and safety for consumers.
Microbiological risk analysis depends on several parameters such as:
⎯ potential alteration of cosmetic products;
⎯ pathogenicity of micro-organisms;
⎯ site of application of the cosmetic product (hair, skin, eyes, mucous membranes, etc.);
⎯ type of users (adults, children under 3 years).
For cosmetics and other topical products, the detection of skin pathogens such as Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans may be relevant. The detection of other kinds of
micro-organism might be of interest since these micro-organisms (including indicators of faecal contamination
e.g. Escherichia coli) suggest hygienic failure during manufacturing process.
© ISO 2006 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 22718:2006(E)
Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus
aureus
1 Scope
This International Standard gives general guidelines for the detection and identification of the specified
micro-organism Staphylococcus aureus in cosmetic products. Micro-organisms considered as specified in this
International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations.
In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate
microbiological risk analysis to determine the types of cosmetic product to which this International Standard is
applicable. Products considered to present a low microbiological risk include those with low water activity,
hydro-alcoholic products, extreme pH values, etc.
The method described in this International Standard is based on the detection of Staphylococcus aureus in a
non-selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other
methods may be appropriate dependent on the level of detection required.
NOTE For the detection of Staphylococcus aureus, subcultures can be performed on non-selective culture media
followed by suitable identification steps (e.g. using identification kits).
Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method may not be
appropriate for some products in every detail (e.g. certain water immiscible products). Other International
[10]
Standards (ISO 18415 ) may be appropriate. Other methods (e.g. automated) may be substituted for the
tests presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been
otherwise validated.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 21148:2005, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
EN 12353, Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of microbial strains used for the
determination of bactericidal and fungicidal activity
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
product
portion of an identified cosmetic product received in the laboratory for testing
3.2
sample
portion of the product (at least 1 g or 1 ml) that is used in the test to prepare the initial suspension
© ISO 2006 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
3.3
initial suspension
suspension (or solution) of the sample in a defined volume of an appropriate enrichment broth
3.4
sample dilution(s)
dilution(s) of the initial suspension
3.5
specified micro-organism
aerobic mesophilic bacteria or yeast that is undesirable in a cosmetic product and is recognized as a skin
pathogen species that may be harmful for human health or as indication of hygienic failure in the
manufacturing process
3.6
Staphylococcus aureus
Gram-positive cocci, mainly joined in grape-like clusters, smooth colonies generally pigmented in yellow
NOTE 1 The main characteristics for identification are: growth on specific selective medium, catalase positive,
coagulase positive.
NOTE 2 Staphylococcus aureus is an opportunistic pathogen bacterium for humans that can be also present on the
skin of healthy people without causing disorder for them. It is undesirable in cosmetic products due to its potential
pathogenicity.
3.7
enrichment broth
non-selective liquid medium containing suitable neutralizers and/or dispersing agents and validated for the
product under test
4 Principle
The first step of the procedure is to perform an enrichment by using a non-selective broth medium to increase
the number of micro-organisms without the risk of inhibition by the selective ingredients that are present in
selective/differential growth media.
The second step (isolation) of the test is performed on a selective medium followed by identification tests.
The possible inhibition of microbial growth by the sample shall be neutralized to allow the detection of viable
[1]
micro-organisms . In all cases and whatever the methodology, the neutralization of the antimicrobial
[2], [3], [4]
properties of the product shall be checked and validated .
5 Diluents and culture media
5.1 General
General instructions are given in ISO 21148. When water is mentioned in this document, use distilled water or
purified water as specified in ISO 21148.
The enrichment broth is used to disperse the sample and to increase the initial microbial population. It may
contain neutralizers if the specimen to be tested has antimicrobial properties. The efficacy of the neutralization
shall be demonstrated (see Clause 11). Information relative to suitable neutralizers is given in Annex B.
The following enrichment broth is suitable for checking the presence of Staphylococcus aureus in accordance
with this International Standard provided that it is validated in accordance with Clause 11.
Other diluents and culture media may be used if they can be demonstrated to be suitable for use.
2 © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
5.2 Diluent for the bacterial suspension (tryptone sodium chloride solution)
5.2.1 General
The diluent is used for the preparation of bacterial suspension used for the validation procedure
(see Clause 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, pancreatic digest of casein 1,0 g
⎯ sodium chloride 8,5 g
⎯ water 1 000 ml
5.2.3 Preparation
Dissolve the components in water by mixing whilst heating. Dispense into suitable containers. Sterilize in the
autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3 Culture media
5.3.1 General
Culture media may be prepared using the descriptions provided below or from dehydrated culture media
according to the instructions from the manufacturer. The instructions provided by the supplier of the media
should be followed.
NOTE Ready to use media may be used when their composition and/or growth yields are comparable to those of the
formulas given herein.
5.3.2 Agar medium for validation (see Clause 11) [soybean-casein digest agar medium (SCDA) or
tryptic soy agar (TSA)]
5.3.2.1 Composition
⎯ pancreatic digest of casein 15,0 g
⎯ papaic digest of soybean meal 5,0 g
⎯ sodium chloride 5,0 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.2.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating. Dispense
the medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,3 ± 0,2 when measured at room
temperature.
© ISO 2006 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
5.3.3 Enrichment broth
5.3.3.1 Eugon LT 100 broth
5.3.3.1.1 General
This medium contains ingredients which neutralize inhibitory substances present in the sample: lecithin and
polysorbate 80, and dispersing agent: octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ pancreatic digest of casein 15,0 g
⎯ papaic digest of soybean meal 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ sodium chloride 4,0 g
⎯ sodium sulfite 0,2 g
⎯ glucose 5,5 g
⎯ egg lecithin 1,0 g
⎯ polysorbate 80 5,0 g
⎯ octoxynol 9 1,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.3.1.3 Preparation
Dissolve the components, one after another, in boiling water – polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin
until their complete dissolution. Dissolve the other components by mixing whilst heating. Dispense the medium
into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.3.2 Other enrichment broths
Other enrichment broths may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.4 Selective agar medium for isolation of Staphylococcus aureus
5.3.4.1 Baird Parker agar medium
5.3.4.1.1 Base medium
5.3.4.1.1.1 Composition
⎯ pancreatic digest of casein 10,0 g
⎯ yeast extract 1,0 g
4 © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 22718:2006(E)
⎯ meat extract 5,0 g
⎯ sodium pyruvate 10,0 g
⎯ L-glycine 12,0 g
⎯ lithium chloride 5,0 g
1)
⎯ agar 12 g to 22 g
⎯ water to a final volume of 950 ml
5.3.4.1.1.2 Preparation
Dissolve the components or the complete dehydrated base in the water by boiling. Transfer the medium in
quantities of 100 ml to flasks or bottles of appropriate capacity. Sterilize the medium in the autoclave at 121 °C
for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,2 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.4.1.2 Potassium tellurite solution
5.3.4.1.2.1 Composition
⎯ potassium tellurite (K TeO) 1,0 g
2 3
⎯ water 100 ml
5.3.4.1.2.2 Preparation
Dissolve the potassium tellurite completely in the water with minimal heating.
Sterilize by filtration using 0,22 µm pore size membranes. The solution may be stored at the maximum for one
month at 3 °C ± 2 °C. Discard the solution if a white precipitate forms.
The solid should be readily soluble. If a white insoluble material is present in the water, the powder should be
discarded.
5.3.4.1.3 Egg yolk emulsion (concentration approximately 20 % or according to the manufacturer's
instructions)
If a commercial preparation is not available, prepare the medium as follows.
Use fresh hens' eggs, the shells being intact. Clean the eggs with a brush using a liquid detergent. Rinse them
under running water, then disinfect the shells either by immersing them in 70 % (volume fraction) ethanol for
30 s and allow them to dry in the air, or by spraying them with alcohol followed by flame sterilization.
Proceeding under aseptic conditions, break each egg and separate the yolk from its white by repeated
transfer of the yolk from one half of the shell to the other. Place the yolks in a sterile flask and add four times
their volume of sterile water. Mix thoroughly. Heat the mixture at 47 °C for 2 h
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 22718
Première édition
2006-02-01
Cosmétiques — Microbiologie —
Détection de Staphylococcus aureus
Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus aureus
Numéro de référence
ISO 22718:2006(F)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2006
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions. 1
4 Principe. 2
5 Diluants et milieux de culture. 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (solution de tryptone et de chlorure de sodium). 3
5.3 Milieux de culture. 3
6 Appareillage et verrerie. 6
7 Souches de microorganismes. 6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire . 7
9 Mode opératoire . 7
9.1 Recommandations générales. 7
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement. 7
9.3 Incubation du milieu liquide d'enrichissement ensemencé. 8
9.4 Détection et identification de Staphylococcus aureus. 8
10 Expression des résultats (détection de Staphylococcus aureus). 9
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit . 9
11.1 Généralités . 9
11.2 Préparation de l'inoculum. 9
11.3 Validation de la méthode de recherche. 9
12 Rapport d'essai . 10
Annexe A (informative) Autres milieux . 11
Annexe B (informative) Neutralisants de l'activité antimicrobienne des conservateurs et liquides
de rinçage . 14
Bibliographie . 15
© ISO 2006 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 22718 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.
iv © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques doivent être réalisés conformément à une analyse
de risque appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L'analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que
⎯ l'altération potentielle des produits cosmétiques,
⎯ le caractère pathogène des microorganismes,
⎯ le site d'application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses, etc.),
⎯ la catégorie d'utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans).
Pour les cosmétiques et autres produits topiques, la détection d'agents pathogènes pour la peau tels que
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans peut être justifiée. La recherche
d'autres sortes de microorganismes peut aussi présenter un intérêt car ceux-ci (y compris des indicateurs de
contamination fécale, par exemple Escherichia coli) laissent penser à une défaillance de l'hygiène au cours du
processus de fabrication.
© ISO 2006 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 22718:2006(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Staphylococcus
aureus
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification du
microorganisme spécifié Staphylococcus aureus dans les produits cosmétiques. Les microorganismes
considérés comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer d'un pays à l'autre,
suivant les pratiques ou réglementations nationales.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est préférablr d'effectuer une analyse
appropriée du risque microbiologique afin de déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent de la
présente Norme internationale. Les produits considérés présenter un faible risque microbiologique
comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydro-alcooliques, ceux ayant des valeurs de
pH extrêmes, etc.
La méthode décrite dans la présente Norme internationale repose sur la détection de Staphylococcus aureus
dans un milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), suivie de son isolement sur un milieu
gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du niveau de détection exigé.
NOTE Pour la détection de Staphylococcus aureus, il est possible de réaliser des sous-cultures sur des milieux de
culture non sélectifs avant de procéder aux étapes appropriées d'identification (en utilisant, par exemple des kits
d'identification).
En raison de la grande variété de produits cosmétiques entrant dans le présent domaine d'application, il se
peut que la présente méthode ne soit pas adaptée, en tous points, à quelques produits (par exemple certains
[10]
produits non miscibles à l'eau). Une autre Norme internationale (l'ISO 18415 ) peut convenir. Il est possible
de remplacer les essais présentés ici par d'autres méthodes (automatisées, par exemple) sous réserve que
leur équivalence ait été démontrée ou que la méthode ait été validée par ailleurs.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 21148:2005, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
EN 12353, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Conservation des souches microbiennes utilisées
pour la détermination de l'activité bactéricide et fongicide
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
produit
portion d'un produit cosmétique identifié, reçue au laboratoire pour essais
© ISO 2006 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
3.2
échantillon
portion du produit (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée dans l'essai pour préparer la suspension initiale
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution) de l'échantillon dans un volume défini d'un milieu liquide d'enrichissement approprié
3.4
dilution(s) de l'échantillon
dilution(s) de la suspension initiale
3.5
microorganisme spécifié
bactérie aérobie mésophile ou levure dont la présence dans un produit cosmétique est indésirable parce
qu'elle est reconnue comme une espèce pathogène pour la peau susceptible d'être néfaste pour la santé
humaine ou parce que c'est un indicateur de défaillance de l'hygiène dans le processus de fabrication
3.6
Staphylococcus aureus
cocci Gram positif, principalement regroupés en grappes, colonies lisses généralement pigmentées en jaune
NOTE 1 Les principales caractéristiques pour l'identification sont les suivantes: croissance sur milieu sélectif spécifique,
catalase positive, coagulase positive.
NOTE 2 Staphylococcus aureus est une bactérie pathogène opportuniste chez l'homme, qui peut également être
présente sur la peau d'individus sains sans engendrer de troubles. Sa présence est indésirable dans les produits
cosmétiques en raison de son caractère potentiellement pathogène.
3.7
milieu liquide d'enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou agents dispersants appropriés, validé pour le
produit soumis à essai
4 Principe
La première étape du mode opératoire est de procéder à l'enrichissement en utilisant un milieu liquide non
sélectif pour augmenter le nombre de microorganismes, de façon à éviter le risque d'inhibition par les
ingrédients sélectifs présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
La seconde étape de l'essai (isolement) est réalisée sur un milieu sélectif, avant les essais d'identification.
L'inhibition potentielle de la croissance microbienne par l'échantillon doit être neutralisée pour permettre la
[1]
recherche des microorganismes viables . Dans tous les cas et quelle que soit la méthode employée, la
[2], [3], [4]
neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et validée .
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Des instructions générales sont données dans l'ISO 21148. Lorsque le présent document mentionne
l'utilisation d'eau, utiliser de l'eau distillée ou de l'eau purifiée comme spécifié dans l'ISO 21148.
Le milieu liquide d'enrichissement est utilisé pour disperser l'échantillon et pour augmenter la population
microbienne initiale. Il peut contenir des neutralisants si l'échantillon à soumettre à essai possède des
propriétés antimicrobiennes. L'efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11). L'Annexe B
fournit des informations relatives aux neutralisants appropriés.
2 © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
Le milieu liquide d'enrichissement suivant peut être utilisé pour vérifier la présence de Staphylococcus aureus
conformément à la présente Norme internationale, à condition d'avoir été validé conformément à l'Article 11.
D'autres diluants et milieux de culture sont utilisables s'il a été démontré que leur emploi convient.
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (solution de tryptone et de chlorure de sodium)
5.2.1 Généralités
Le diluant est utilisé pour préparer la suspension bactérienne utilisée pour la validation (voir Article 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, peptone de caséine 1,0 g
⎯ chlorure de sodium 8,5 g
⎯ eau 1 000 ml
5.2.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés comme indiqué ci-dessous ou à partir de milieux de culture
déshydratés conformément aux instructions du fabricant. Il convient de suivre les instructions données par le
fournisseur de ces milieux.
NOTE Il est possible d'utiliser des milieux prêts à l'emploi quand leur composition et/ou leurs performances de
croissance sont comparables à celles des formules indiquées ici.
5.3.2 Milieu gélosé pour validation (voir Article 11) milieu gélosé aux peptones de caséine et de soja
(SCDA) ou gélose trypto-caséine soja (TSA)
5.3.2.1 Composition
⎯ peptone de caséine 15,0 g
⎯ peptone de soja 5,0 g
⎯ chlorure de sodium 5,0 g
⎯ gel d'agar 15,0 g
⎯ eau 1 000 ml
© ISO 2006 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en mélangeant tout en chauffant.
Répartir dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,3 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3.3 Milieu liquide d'enrichissement
5.3.3.1 Bouillon Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Généralités
Ce milieu contient des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans l'échantillon:
lécithine et polysorbate 80 ainsi qu'un agent dispersant: octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ peptone de caséine 15,0 g
⎯ peptone de soja 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ chlorure de sodium 4,0 g
⎯ sulfite de sodium 0,2 g
⎯ glucose 5,5 g
⎯ lécithine d'œuf 1,0 g
⎯ polysorbate 80 5,0 g
⎯ octoxynol 9 1,0 g
⎯ eau 1 000 ml
5.3.3.1.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau bouillante dans l'ordre suivant: polysorbate 80, octoxynol 9 et lécithine
d'oeuf jusqu'à dissolution complète. Dissoudre les autres composants en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être égal à 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à
température ambiante.
5.3.3.2 Autres milieux liquides d'enrichissement
D'autres milieux liquides d'enrichissement peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
4 © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
5.3.4 Milieu gélosé sélectif pour isolement de Staphylococcus aureus
5.3.4.1 Gélose Baird Parker
5.3.4.1.1 Milieu de base
5.3.4.1.1.1 Composition
⎯ peptone de caséine 10,0 g
⎯ extrait de levure 1,0 g
⎯ extrait de viande 5,0 g
⎯ pyruvate de sodium 10,0 g
⎯ L-glycine 12,0 g
⎯ chlorure de lithium 5,0 g
1)
⎯ gélose 12 g à 22 g
⎯ eau compléter au volume final de 950 ml
5.3.4.1.1.2 Préparation
Dissoudre tous ces composants ou la base complète déshydratée dans l'eau à ébullition. Transférer le milieu
par portions de 100 ml dans des fioles ou flacons de capacité appropriée. Stériliser à l'autoclave à 121 °C
pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,2 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3.4.1.2 Solution de tellurite de potassium
5.3.4.1.2.1 Composition
⎯ tellurite de potassium (K TeO) 1,0 g
2 3
⎯ eau 100 ml
5.3.4.1.2.2 Préparation
Dissoudre le tellurite de potassium complètement dans l'eau en chauffant au minimum.
Stériliser par filtration sur des membranes ayant une porosité de 0,22 µm. La solution peut être conservée à
3 °C ± 2 °C pendant une période maximale de un mois. Rejeter la solution en cas de formation d'un précipité
blanc.
En principe, la poudre se dissout facilement. S'il persiste dans l'eau une substance blanche insoluble, il
convient de rejeter la poudre.
1) En fonction des propriétés gélifiantes de l'agar.
© ISO 2006 – Tous droits réservés 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 22718:2006(F)
5.3.4.1.3 Émulsion de jaune d'oeuf (concentration de 20 % approximativement ou selon les
instructions du fabricant)
Si l'on ne dispose pas d'une préparation commerciale, préparer le milieu de la façon suivante.
Utiliser des oeufs de poule frais aux coquilles intactes. Les laver à la brosse avec un détergent liquide. Les
rincer à l'eau courante, désinfecter les coquilles soit en les plongeant dans de l'éthanol à 70 % (fraction
volumique) pendant 30 s et en les laissant sécher à l'air, soit en les vaporisant d'alcool et en les stérilisant à la
flamme. Dans des conditions aseptiques, casser chaque oeuf et séparer le jaune du blanc en faisant passer
le jaune d'une moitié de c
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.