ISO 18415:2017
(Main)Cosmetics — Microbiology — Detection of specified and non-specified microorganisms
Cosmetics — Microbiology — Detection of specified and non-specified microorganisms
ISO 18415:2017 gives general guidelines for the detection and identification of specified microorganisms in cosmetic products as well as for the detection and identification of other kinds of aerobic mesophilic non-specified microorganisms in cosmetic products. Microorganisms considered as specified in this document might differ from country to country according to national practices or regulations. Most of them considered as specified microorganisms include one or more of the following species: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans. In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate microbiological risk analysis to determine the types of cosmetic products to which this document is applicable. Products considered to present a low microbiological risk (see ISO 29621) include those with low water activity, hydro-alcoholic products, extreme pH values, etc. The method described in this document is based on the detection of microbial growth in a non-selective liquid medium (enrichment broth) suitable to detect microbial contamination, followed by isolation of microorganisms on non-selective agar media. Other methods can be appropriate depending on the level of detection required. In ISO 18415:2017 specific indications are given for identification of Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans. Other microorganisms that grow under the conditions described in this document may be identified by using suitable tests according to a general scheme (see Annex A). Other standards (e.g. ISO 18416, ISO 21150, ISO 22717, ISO 22718) may be appropriate. Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not be suited in every detail to some products (e.g. certain water-immiscible products). Other methods (e.g. automated) can be substituted for the tests presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise shown to be suitable.
Cosmétiques — Microbiologie — Détection des micro-organismes spécifiés et non spécifiés
ISO 18416:2017 donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification de micro-organismes spécifiés dans les produits cosmétiques, et aussi pour la détection et l'identification d'autres sortes de micro-organismes mésophiles aérobies non spécifiés, dans les produits cosmétiques. Les micro-organismes considérés comme spécifiés dans le présent document peuvent différer d'un pays à l'autre, suivant les pratiques ou réglementations nationales. La plupart des micro-organismes considérés comme spécifiés comprennent une ou plusieurs espèces, parmi les suivantes: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Candida albicans. Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est conseillé d'effectuer une analyse appropriée du risque microbiologique afin de déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent du présent document. Les produits considérés comme présentant un faible risque microbiologique comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydro-alcooliques, les produits ayant des valeurs de pH extrêmes, etc. La méthode décrite dans le présent document est fondée sur la détection d'une croissance microbienne dans un milieu liquide non sélectif (bouillon d'enrichissement) qui permet de détecter une contamination microbienne, suivie d'un isolement des micro-organismes sur un milieu gélosé non sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées, en fonction du niveau de détection exigé. Dans le présent document, des indications spécifiques sont données pour l'identification de Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Candida albicans. D'autres micro-organismes qui se développent dans les conditions décrites dans le présent document peuvent être identifiés en mettant en ?uvre des essais appropriés conformes à un schéma général (voir Annexe A). D'autres Normes internationales (par exemple, l'ISO 18416, l'ISO 21150, l'ISO 22717 et l'ISO 22718) peuvent convenir. En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant du présent domaine d'application, la présente méthode pourrait ne pas être, en tous points, applicable à certains produits (par exemple certains produits non miscibles à l'eau). D'autres méthodes (par exemple automatisées) peuvent se substituer aux essais présentés ici, sous réserve que leur équivalence ait été démontrée ou que la méthode ait été validée par ailleurs.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 18415
Second edition
2017-06
Cosmetics — Microbiology —
Detection of specified and non-
specified microorganisms
Cosmétiques — Microbiologie — Détection des micro-organismes
spécifiés et non spécifiés
Reference number
ISO 18415:2017(E)
©
ISO 2017
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ISO 18415:2017(E)
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ISO 18415:2017(E)
Contents Page
Foreword .v
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 3
5 Diluents and culture media . 3
5.1 General . 3
5.2 Diluent for the microbial suspension (tryptone sodium chloride solution) . 3
5.2.1 General. 3
5.2.2 Composition . 4
5.2.3 Preparation . 4
5.3 Culture media . 4
5.3.1 General. 4
5.3.2 Enrichment broth . 4
5.3.3 Non-selective agar medium . 5
6 Apparatus and glassware . 5
7 Strains of microorganism . 6
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples . 6
9 Procedure. 6
9.1 General recommendations. 6
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth . 6
9.2.1 General. 6
9.2.2 Water-miscible products. 7
9.2.3 Water-immiscible products . 7
9.2.4 Filterable products . 7
9.3 Incubation of the initial suspension . 7
9.4 Isolation of specified and non-specified microorganisms . 7
9.5 Procedure for identification of the specified microorganism: Pseudomonas aeruginosa . 7
9.5.1 Gram staining . 7
9.5.2 Oxidase test . 7
9.5.3 Identification test . 8
9.6 Procedure for identification of the specified microorganism: Escherichia coli . 8
9.6.1 Gram staining . 8
9.6.2 Oxidase test . 8
9.6.3 Identification test . 8
9.7 Procedure for identification of the specified microorganism: Staphylococcus aureus . 8
9.7.1 Gram staining . 8
9.7.2 Catalase test . 8
9.7.3 Identification test . 8
9.8 Procedure for the identification of the specified microorganism: Candida albicans . 9
9.8.1 Gram staining . 9
9.8.2 Identification test . 9
9.9 Procedure for the identification of non-specified microorganisms . 9
9.9.1 Gram staining . 9
9.9.2 Oxidase test . 9
9.9.3 Catalase test . 9
9.9.4 Identification test . 9
10 Expression of the results .10
10.1 Detection of specified microorganisms .10
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ISO 18415:2017(E)
10.2 Detection of non-specified microorganisms.10
10.3 Absence of microorganisms .10
11 Neutralization of the antimicrobial properties of the product .10
11.1 General .10
11.2 Preparation of inoculum .10
11.3 Suitability of detection method by enrichment .10
11.3.1 Principle .10
11.3.2 Procedure .11
11.3.3 Interpretation of suitability test results .11
12 Test report .11
Annex A (informative) General scheme for identification of microorganisms.13
Annex B (informative) Other media .14
Annex C (informative) Neutralizers of antimicrobial activity of preservatives and rinsing liquids 17
Bibliography .19
iv © ISO 2017 – All rights reserved
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ISO 18415:2017(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: w w w . i s o .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 18415:2007), of which it constitutes a
minor revision with the following changes:
— in the Scope, “see ISO 29621” has been added and the reference has been added to the Bibliography;
— in the Scope, “used” has been changed to “substituted” and “validated” has been changed to “shown
to be suitable”;
— in 3.8, the term “validated” has been changed to “demonstrated to be suitable”;
— in Clause 4, the term “validated” has been changed to “demonstrated”;
— in 5.1, “specifications” has been changed to “instructions”;
— in 5.1, the phrase “are validated” has been changed to “have been demonstrated to be suitable”;
— in 5.2.1, 5.3.3.1, 11.3.1, 11.3.2, instances of the term “validation” and in the heading title of 11.3.3
have been changed to “suitability test”;
— in 11.3, the term “validation” in the heading title has been changed to “suitability”;
— in 11.3.3, instances of “validated” have been changed to “satisfactory”;
— in Clause 12 f), the term “validation” has been changed to “demonstration of the suitability”.
© ISO 2017 – All rights reserved v
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ISO 18415:2017(E)
Introduction
Microbiological examinations of cosmetic products are carried out according to an appropriate
microbiological risk analysis in order to ensure their quality and safety for consumers.
Microbiological risk analysis depends on several parameters such as:
— potential alteration of cosmetic products;
— pathogenicity of microorganisms;
— site of application of the cosmetic product (hair, skin, eyes, mucous membranes);
— type of user (adults, children including under 3 years).
For cosmetics and other topical products, the detection of skin pathogens such as Staphylococcus
aureus, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans may be relevant because they can cause skin
or eye infection. The detection of other kinds of microorganisms might be of interest since these
microorganisms (including indicators of faecal contamination e.g. Escherichia coli) suggest hygienic
failure during manufacturing process.
vi © ISO 2017 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 18415:2017(E)
Cosmetics — Microbiology — Detection of specified and
non-specified microorganisms
1 Scope
This document gives general guidelines for the detection and identification of specified microorganisms
in cosmetic products as well as for the detection and identification of other kinds of aerobic mesophilic
non-specified microorganisms in cosmetic products.
Microorganisms considered as specified in this document might differ from country to country
according to national practices or regulations. Most of them considered as specified microorganisms
include one or more of the following species: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus
aureus and Candida albicans.
In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate
microbiological risk analysis to determine the types of cosmetic products to which this document is
applicable. Products considered to present a low microbiological risk (see ISO 29621) include those
with low water activity, hydro-alcoholic products, extreme pH values, etc.
The method described in this document is based on the detection of microbial growth in a non-selective
liquid medium (enrichment broth) suitable to detect microbial contamination, followed by isolation of
microorganisms on non-selective agar media. Other methods can be appropriate depending on the level
of detection required.
In this document specific indications are given for identification of Pseudomonas aeruginosa, Escherichia
coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans. Other microorganisms that grow under the conditions
described in this document may be identified by using suitable tests according to a general scheme (see
Annex A). Other standards (e.g. ISO 18416, ISO 21150, ISO 22717, ISO 22718) may be appropriate.
Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not
be suited in every detail to some products (e.g. certain water-immiscible products). Other methods (e.g.
automated) can be substituted for the tests presented here provided that their equivalence has been
demonstrated or the method has been otherwise shown to be suitable.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 21148:2017, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
EN 12353, Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of test organisms used for the
determination of bactericidal (including Legionella), mycobactericidal, sporicidal, fungicidal and virucidal
(including bacteriophages) activity
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www .iso .org/ obp
© ISO 2017 – All rights reserved 1
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ISO 18415:2017(E)
3.1
product
portion of an identified cosmetic product received in the laboratory for testing
3.2
sample
portion of the product (3.1) (at least 1 g or 1 ml) that is used in the test to prepare the initial
suspension (3.3)
3.3
initial suspension
suspension (or solution) of the sample (3.2) in a defined volume of an appropriate enrichment broth (3.8)
3.4
sample dilution
dilution of the initial suspension (3.3)
3.5
aerobic mesophilic microorganism
mesophilic bacterium or yeast growing aerobically under the conditions specified in this document
Note 1 to entry: In the described conditions, other types of microorganism (e.g. moulds) are detectable.
3.6
specified microorganism
aerobic mesophilic bacterium or yeast undesirable in a cosmetic product and recognized as a skin
pathogen species that may be harmful for human health or as an indication of hygienic failure in the
manufacturing process
3.6.1
Pseudomonas aeruginosa
Gram-negative rod (bacilli), motile, smooth colonies pigmented brown or greenish
Note 1 to entry: The main characteristics for identification are growth on a selective cetrimide agar medium,
oxidase positive, production of diffusible fluorescent pigments and production of a soluble phenazine pigment
(pyocyanin) in suitable media.
Note 2 to entry: Pseudomonas aeruginosa can be isolated from a wide variety of environmental sources, especially
in water and has a very high potential to spoil many different substrates. It can produce infections of human skin
or eye areas. It is undesirable in cosmetic products for its potential pathogenicity and its capacity to affect the
physico-chemical properties of the cosmetic formula.
3.6.2
Escherichia coli
Gram-negative rod (bacilli), motile, smooth colonies
Note 1 to entry: The main characteristics are catalase positive, oxidase negative, fermentation of lactose,
production of indole, growth on selective medium containing bile salts with characteristic colonies.
Note 2 to entry: Escherichia coli can be isolated from the moist environmental sources (air, water, soil) and is a
faecal contamination indicator.
3.6.3
Staphylococus aureus
Gram-positive cocci, mainly aggregated in grape-like clusters, smooth colonies generally pigmented
in yellow
Note 1 to entry: The main characteristics for identification are growth on a specific selective medium, catalase
positive, coagulase positive.
Note 2 to entry: Staphylococcus aureus is an opportunistic pathogen for humans, which often can be also present
on the skin of healthy individuals without causing them any apparent illness. It is a specified microorganism and
undesirable in cosmetic products.
2 © ISO 2017 – All rights reserved
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ISO 18415:2017(E)
3.6.4
Candida albicans
yeast that forms white to beige, creamy and convex colonies on the surface of a non-selective agar medium
Note 1 to entry: The main characteristics for identification are production of germ tube and/or pseudomycelium
and chlamydospore when the test is performed following the method specified in this document.
3.7
non-specified microorganism
aerobic mesophilic bacterium or yeast found in cosmetic products, not defined in 3.6
3.8
enrichment broth
non-selective liquid medium containing suitable neutralizers and/or dispersing agents and
demonstrated to be suitable for the product (3.1) under test
4 Principle
The first step of the procedure is to perform an enrichment by using a non-selective broth medium to
increase the number of microorganisms without the risk of inhibition by the selective ingredients that
are present in selective/differential growth media.
The following steps (isolation and identification) are performed according to need by using appropriate
conditions of incubation and suitable identification test, as described in this document.
The possible inhibition of microbial growth by the sample shall be neutralized to allow the detection
[9]
of viable microorganisms . In all cases and whatever the methodology, the neutralization of the
[9][10][11]
antimicrobial properties of the product shall be checked and demonstrated .
5 Diluents and culture media
5.1 General
General instructions are given in ISO 21148. When water is mentioned in this document, use distilled
water or purified water as specified in ISO 21148.
The enrichment broth is used to disperse the sample and to increase the initial microbial population. It
may contain neutralizers if the specimen to be tested has antimicrobial properties. The efficacy of the
neutralization shall be demonstrated (see Clause 11). Information relative to suitable neutralizers is
given in Annex C.
The enrichment broth (see 5.3.2.1) or any of the ones listed in Annex B is suitable for checking the
presence of specified and non-specified microorganisms in accordance with this document provided
that they have been demonstrated to be suitable in accordance with Clause 11.
Other diluents and culture media may be used if it has been demonstrated that they are suitable for use.
5.2 Diluent for the microbial suspension (tryptone sodium chloride solution)
5.2.1 General
The diluent is used for the preparation of bacteria and yeast suspensions used for the suitability test
procedure (see Clause 11).
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ISO 18415:2017(E)
5.2.2 Composition
Tryptone, pancreatic digest of casein 1,0 g
Sodium chloride 8,5 g
Water 1 000 ml
5.2.3 Preparation
Dissolve the components in water by mixing while heating. Dispense into suitable containers. Sterilize
in the autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when
measured at room temperature.
5.3 Culture media
5.3.1 General
Culture media may be prepared as follows, or from dehydrated culture media according to the
manufacturer’s instructions.
Ready-to-use media may be used when their composition and/or growth yields are comparable with
those of the formulae given herein.
5.3.2 Enrichment broth
5.3.2.1 Eugon LT100 broth
5.3.2.1.1 General
This medium contains ingredients which neutralize inhibitory substances present in the sample:
lecithin and polysorbate 80, and dispersing agent: octoxynol 9.
5.3.2.1.2 Composition
Pancreatic digest of casein 15,0 g
Papaic digest of soybean meal 5,0 g
L-cystine 0,7 g
Sodium chloride 4,0 g
Sodium sulfite 0,2 g
glucose 5,5 g
egg lecithin 1,0 g
polysorbate 80 5,0 g
octoxynol 9 1,0 g
water 1 000 ml
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ISO 18415:2017(E)
5.3.2.1.3 Preparation
Dissolve the components polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin, one after another in boiling
water to complete dissolution. Dissolve the other components by mixing while heating. Dispense the
medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization, the
pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.3.2.2 Other enrichment broths
Other enrichment broths may be used as appropriate (see Annex B).
5.3.3 Non-selective agar medium
5.3.3.1 General
This medium is used for the isolation and detection of specified and non-specified microorganisms
present in the initial suspension after enrichment and for the preparation of inoculum used in the
suitability test procedure.
5.3.3.2 Soybean-casein digest agar medium (SCDA) or tryptic soy agar (TSA)
5.3.3.2.1 Composition
Pancreatic digest of casein 15,0 g
Papaic digest of soybean meal 5,0 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
5.3.3.2.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in water by mixing while heating.
Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. After
sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,3 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.3.3 Other non-selective agar medium
Other non-selective, non-neutralizing agar media may be used (see Annex B).
6 Apparatus and glassware
The laboratory equipment, apparatus and glassware are described in ISO 21148.
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ISO 18415:2017(E)
7 Strains of microorganism
For testing the recovery efficiency of the test conditions, three specified microorganisms are used: two
strains representative of both Gram-negative and Gram-positive bacteria and a strain of yeast.
1) 2) 3)
— Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (equivalent strain: CIP 82.118 or NCIMB 8626 or
4) 5)
NBRC 13275 or KCTC 2513 or other equivalent national collection strain).
An alternative to the Gram-negative strain may be: Escherichia coli ATCC 8739 (equivalent strain:
CIP 53.126 or NCIMB 8545 or NBRC 3972 or KCTC 2571 or other equivalent national collection strain).
— Staphylococcus aureus ATCC 6538 (equivalent strain: CIP 4.83 or NCIMB 9518 or NBRC 13276 or
KCTC 1916 or other equivalent national collection strain);
6) 7)
— Candida albicans ATCC 10231 (equivalent strain: IP 48.72 or NCPF 3179 or NBRC 1594 or
KCTC 17205 or other equivalent national collection strain).
The culture should be reconstituted according to the procedures provided by the supplier of
reference strain.
The strains can be kept in the laboratory in accordance with EN 12353.
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples
If necessary, store products to be tested at room temperature. Do not incubate, refrigerate or free
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 18415
Deuxième édition
2017-06
Cosmétiques — Microbiologie —
Détection des micro-organismes
spécifiés et non spécifiés
Cosmetics — Microbiology — Detection of specified and non-specified
microorganisms
Numéro de référence
ISO 18415:2017(F)
©
ISO 2017
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ISO 18415:2017(F)
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ii © ISO 2017 – Tous droits réservés
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ISO 18415:2017(F)
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principes . 3
5 Diluants et milieux de culture . 3
5.1 Généralités . 3
5.2 Diluant pour la suspension microbienne (solution tryptone sel) . . 4
5.2.1 Généralités . 4
5.2.2 Composition . 4
5.2.3 Préparation . 4
5.3 Milieux de culture . 4
5.3.1 Généralités . 4
5.3.2 Bouillon d’enrichissement . 4
5.3.3 Milieu gélosé non sélectif . 5
6 Matériel et verrerie. 6
7 Souches de micro-organismes . 6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire .6
9 Mode opératoire. 6
9.1 Recommandations générales. 6
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le bouillon d’enrichissement . 7
9.2.1 Généralités . 7
9.2.2 Produits miscibles dans l’eau. 7
9.2.3 Produits non miscibles dans l’eau . 7
9.2.4 Produits filtrables . 7
9.3 Incubation de la suspension initiale . 7
9.4 Isolement des micro-organismes spécifiés et non spécifiés . 7
9.5 Mode opératoire d’identification du micro-organisme spécifié:
Pseudomonas aeruginosa . 8
9.5.1 Coloration de Gram . 8
9.5.2 Recherche de l’oxydase . 8
9.5.3 Essai d’identification . 8
9.6 Mode opératoire d’identification du micro-organisme spécifié: Escherichia coli . 8
9.6.1 Coloration de Gram . 8
9.6.2 Recherche de l’oxydase . 8
9.6.3 Essai d’identification . 8
9.7 Mode opératoire d’identification du micro-organisme spécifié: Staphylococus aureus . 9
9.7.1 Coloration de Gram . 9
9.7.2 Recherche de la catalase. 9
9.7.3 Essai d’identification . 9
9.8 Mode opératoire d’identification du micro-organisme spécifié: Candida albicans . 9
9.8.1 Coloration de Gram . 9
9.8.2 Essai d’identification . 9
9.9 Mode opératoire d’identification des micro-organismes non spécifiés . 9
9.9.1 Coloration de Gram . 9
9.9.2 Recherche de l’oxydase .10
9.9.3 Recherche de la catalase.10
9.9.4 Essai d’identification .10
10 Expression des résultats.10
© ISO 2017 – Tous droits réservés iii
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ISO 18415:2017(F)
10.1 Détection des micro-organismes spécifiés .10
10.2 Détection de micro-organismes non spécifiés .10
10.3 Absence de micro-organismes .10
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit .11
11.1 Généralités .11
11.2 Préparation de l’inoculum .11
11.3 Applicabilité de la méthode de détection par enrichissement .11
11.3.1 Principes .11
11.3.2 Mode opératoire .11
11.3.3 Interprétation des résultats d’essai d’applicabilité .12
12 Rapport d’essai .12
Annexe A (informative) Schéma général pour l’identification des micro-organismes .13
Annexe B (informative) Autres milieux .14
Annexe C (informative) Neutralisants de l’activité antimicrobienne des conservateurs et
des liquides de rinçage .17
Bibliographie .19
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ISO 18415:2017(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: http:// www .iso .org/ iso/ fr/ foreword .html.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 217, Cosmétiques.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 18415:2007), qui a fait l’objet d’une
révision mineure comprenant les modifications suivantes:
— en le domaine d’application, «voir ISO 29621» a été ajouté et le référence a été ajouté au Bibliographie;
— en le domaine d’application, «validée» a été remplacé par «indiquée comme adéquate»;
— en 3.8, le terme «validé» a été remplacé par «démontré comme étant applicable»;
— en l’Article 4, le terme «validée» a été remplacé par «démontrée»;
— en 5.1, «spécifications» a été remplacé par «instructions»;
— en 5.1, le syntagme «d’avoir été validés» a été remplacé par «qu’ils aient été démontrés comme étant
applicables»;
— en 5.2.1, 5.3.3.1, 11.3.1, 11.3.2, les occurrences du terme «validation» et dans le titre de 11.3.3 ont
été remplacées par «essai d’applicabilité»;
— en 11.3, le terme «validation» dans le titre a été remplacé par «applicabilité»;
— en 11.3.3, les occurrences de «validées» ont été remplacées par «satisfaisantes»;
— en l’Article 12, le terme «validation» a été remplacé par «démonstration de l’applicabilité».
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ISO 18415:2017(F)
Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques sont réalisés conformément à une analyse de
risque appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L’analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que:
— l’altération potentielle des produits cosmétiques;
— le caractère pathogène des micro-organismes;
— le site d’application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses);
— la catégorie d’utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans).
Pour les cosmétiques et d’autres produits topiques, la détection d’agents pathogènes pour la peau,
tels que Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans, peut être justifiée, car ils
peuvent engendrer des infections cutanées ou ophtalmiques. La détection d’autres sortes de micro-
organismes peut aussi présenter un intérêt, car ces micro-organismes (y compris des indicateurs de
contamination fécale, par exemple Escherichia coli) peuvent indiquer une défaillance de l’hygiène au
cours du processus de fabrication.
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NORME INTERNATIONALE ISO 18415:2017(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Détection des micro-
organismes spécifiés et non spécifiés
1 Domaine d’application
Le présent document donne des lignes directrices générales pour la détection et l’identification de
micro-organismes spécifiés dans les produits cosmétiques, et aussi pour la détection et l’identification
d’autres sortes de micro-organismes mésophiles aérobies non spécifiés, dans les produits cosmétiques.
Les micro-organismes considérés comme spécifiés dans le présent document peuvent différer
d’un pays à l’autre, suivant les pratiques ou réglementations nationales. La plupart des micro-
organismes considérés comme spécifiés comprennent une ou plusieurs espèces, parmi les suivantes:
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Candida albicans.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est conseillé d’effectuer une
analyse de risque microbiologique appropriée, afin de déterminer les types de produits cosmétiques
qui relèvent du présent document. Les produits considérés comme présentant un faible risque
microbiologique (voir ISO 29621) comprennent ceux ayant une faible activité de l’eau, les produits
hydro-alcooliques, les produits ayant des valeurs de pH extrêmes, etc.
La méthode décrite dans le présent document est fondée sur la détection d’une croissance microbienne
dans un milieu liquide non sélectif (bouillon d’enrichissement) qui permet de détecter une contamination
microbienne, suivie d’un isolement des micro-organismes sur un milieu gélosé non sélectif. D’autres
méthodes peuvent être appropriées, en fonction du niveau de détection exigé.
Dans le présent document, des indications spécifiques sont données pour l’identification de Pseudomonas
aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Candida albicans. D’autres micro-organismes qui se
développent dans les conditions décrites dans le présent document peuvent être identifiés en mettant
en œuvre des essais appropriés conformes à un schéma général (voir Annexe A). D’autres Normes
internationales (par exemple, l’ISO 18416, l’ISO 21150, l’ISO 22717 et l’ISO 22718) peuvent convenir.
En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant du présent domaine d’application, la
présente méthode pourrait ne pas être, en tous points, applicable à certains produits (par exemple
certains produits non miscibles à l’eau). Il est possible de remplacer les essais présentés ici par
d’autres méthodes (par exemple des méthodes automatisées) sous réserve que leur équivalence ait été
démontrée ou que la méthode ait été par ailleurs indiquée comme adéquate.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 21148:2017, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
EN 12353, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Conservation des microorganismes d’essai utilisés
pour la détermination de l’activité bactéricide (Legionella incluses), mycobactéricide, sporicide, fongicide et
virucide (bactériophages inclus)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
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ISO 18415:2017(F)
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http:// www .iso .org/ obp
3.1
produit
portion d’un produit cosmétique identifié reçue au laboratoire pour essais
3.2
échantillon
portion du produit (3.1) (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée dans l’essai pour préparer la suspension initiale (3.3)
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution) de l’échantillon (3.2) dans un volume défini d’un bouillon d’enrichissement (3.8)
approprié
3.4
dilution de l’échantillon
dilution de la suspension initiale (3.3)
3.5
micro-organisme mésophile aérobie
bactérie ou levure mésophile se développant en aérobiose dans les conditions spécifiées dans le présent
document
Note 1 à l’article: Dans les conditions décrites, la détection d’autres types de micro-organismes (par exemple
moisissures) est admise.
3.6
micro-organisme spécifiés
bactérie aérobie mésophile ou levure dont la présence dans un produit cosmétique est indésirable parce
qu’elle peut causer une infection cutanée ou ophtalmique ou peut être considérée comme un indicateur
de défaillance de l’hygiène dans le processus de fabrication
3.6.1
Pseudomonas aeruginosa
bâtonnet (bacille) à Gram négatif, mobile, colonies lisses pigmentées brunes ou verdâtres
Note 1 à l’article: Les principales caractéristiques pour l’identification sont les suivantes: croissance sur milieu
sélectif gélosé cétrimide, oxydase positive, production de pigments fluorescents diffusibles et production d’un
pigment phénazine soluble (pyocyanine) dans les milieux appropriés.
Note 2 à l’article: Pseudomonas aeruginosa peut être isolé d’une grande variété de sources environnementales,
notamment dans l’eau, et il est très largement capable de détériorer nombre de substrats différents. Il peut
engendrer, chez l’Homme, des infections cutanées ou ophtalmiques. Sa présence est indésirable dans les produits
cosmétiques en raison de son caractère potentiellement pathogène et de sa capacité à altérer les propriétés
physicochimiques de la formule du cosmétique.
3.6.2
Escherichia coli
bâtonnet (bacille) à Gram négatif, mobile; colonies lisses
Note 1 à l’article: Les principales caractéristiques sont les suivantes: catalase positive, oxydase négative,
fermentation du lactose, production d’indole, croissance sur milieu sélectif contenant des sels biliaires avec
colonies caractéristiques.
Note 2 à l’article: Escherichia coli peut être isolé à partir de sources environnementales humides (air, eau, sol) et
constitue un indicateur de contamination fécale.
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ISO 18415:2017(F)
3.6.3
Staphylococus aureus
cocci à Gram positif, principalement regroupés en grappes, colonies lisses généralement pigmentées
en jaune
Note 1 à l’article: Les principales caractéristiques pour l’identification sont les suivantes: croissance sur milieu
sélectif spécifique, catalase positive, coagulase positive.
Note 2 à l’article: Staphylococcus aureus est une bactérie pathogène opportuniste chez l’homme qui peut également
souvent être présente sur la peau d’individus sains chez lesquels elle n’engendre apparemment aucune maladie.
C’est un micro-organisme spécifié dont la présence est indésirable dans les produits cosmétiques.
3.6.4
Candida albicans
levure qui forme des colonies convexes et d’aspect crémeux, de couleur blanche à beige, à la surface
d’un milieu gélosé non sélectif
Note 1 à l’article: Les principales caractéristiques pour l’identification sont la production de filaments et/ou de
pseudomycélium et de chlamydospores, lorsque l’essai est réalisé conformément à la méthode spécifiée dans le
présent document.
3.7
micro-organisme non spécifié
levure ou bactérie aérobie mésophile trouvée dans des produits cosmétiques, non définie en 3.6
3.8
bouillon d’enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou agents dispersants appropriés et
démontrés comme étant applicables pour le produit (3.1) soumis à essai
4 Principes
La première étape du mode opératoire est de procéder à l’enrichissement en utilisant un milieu liquide
non sélectif pour augmenter le nombre de micro-organismes, sans risque d’inhibition par les ingrédients
sélectifs présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
Les étapes suivantes (isolement et identification) sont réalisées en fonction des besoins, en utilisant des
conditions appropriées d’incubation et des essais d’identification appropriés, tels que décrits dans le
présent document.
L’inhibition potentielle de la croissance microbienne par l’échantillon doit être neutralisée pour
[9]
permettre la détection de micro-organismes viables. Dans tous les cas et quelle que soit la méthode
[9]
utilisée, la neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et démontrée
[10][11]
.
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Les instructions générales sont indiquées dans l’ISO 21148. Lorsque de l’eau est mentionnée dans ce
document, utiliser de l’eau distillée ou purifiée tel qu’indiqué dans l’ISO 21148.
Le bouillon d’enrichissement sert à disperser l’échantillon et à accroître la population microbienne
initiale. Il peut contenir des agents neutralisants si l’échantillon à soumettre à essai possède des
propriétés antimicrobiennes. L’efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11).
L’Annexe C fournit des informations relatives aux neutralisants appropriés.
© ISO 2017 – Tous droits réservés 3
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ISO 18415:2017(F)
Le bouillon d’enrichissement (5.3.2.1) ou tout bouillon parmi ceux listés dans l’Annexe B est applicable
pour vérifier la présence de micro-organismes spécifiés et non spécifiés conformément au présent
document, à condition qu’il ait été démontré comme étant applicable conformément à l’Article 11.
D’autres diluants et d’autres milieux de culture peuvent être utilisés s’il a été démontré qu’ils sont
applicables pour cet usage.
5.2 Diluant pour la suspension microbienne (solution tryptone sel)
5.2.1 Généralités
Le diluant est utilisé pour la préparation des suspensions bactériennes et de levure utilisées pour le
mode opératoire de l’essai d’applicabilité (voir Article 11).
5.2.2 Composition
Tryptone, hydrolysat pancréatique de caséine 1,0 g
Chlorure de sodium 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être
de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés comme indiqué ci-dessous ou à partir de milieux de
culture déshydratés conformément aux instructions du fabricant.
Il est permis d’utiliser des milieux prêts à l’emploi quand leur composition et/ou leurs performances de
croissance sont comparables à celles des formules indiquées ici.
5.3.2 Bouillon d’enrichissement
5.3.2.1 Bouillon Eugon LT100
5.3.2.1.1 Généralités
Ce milieu contient des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans
l’échantillon (lécithine et polysorbate 80); et un agent de dispersion (octoxynol 9).
5.3.2.1.2 Composition
Hydrolysat pancréatique de caséine 15,0 g
Hydrolysat papaïque de soja 5,0 g
L-cystine 0,7 g
Chlorure de sodium 4,0 g
4 © ISO 2017 – Tous droits réservés
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ISO 18415:2017(F)
Sulfite de sodium 0,2 g
Glucose 5,5 g
Lécithine d’œuf 1,0 g
Polysorbate 80 5,0 g
Octoxynol 9 1,0 g
Eau 1 000 ml
5.3.2.1.3 Préparation
Dissoudre successivement dans l’eau bouillante le polysorbate 80, l’octoxynol 9 et la lécithine d’œuf
jusqu’à dissolution complète. Dissoudre les autres composants en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après
stérilisation, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température ambiante.
5.3.2.2 Autres bouillons d’enrichissement
D’autres bouillons d’enrichissement peuvent être utilisés s’ils sont appropriés (voir Annexe B).
5.3.3 Milieu gélosé non sélectif
5.3.3.1 Généralités
Ce milieu est utilisé pour l’isolement et la détection des micro-organismes spécifiés et non spécifiés,
présents dans la suspension initiale après l’enrichissement et pour la préparation de l’inoculum utilisé
pour l’essai
...
Questions, Comments and Discussion
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