ISO 7359:1985
(Main)Essential oils — Analysis by gas chromatography on packed columns — General method
Essential oils — Analysis by gas chromatography on packed columns — General method
The Standard gives detailed information on all recurrent parameters, apparatus, products, methods and formulae for the analysis. In general a small quantity of essential oil is analyzed under specified conditions. If required different constituents are identified from their retention indexes. Quantitative determination of specific constituents is carried out by measurement of peak areas.
Huiles essentielles — Analyse par chromatographie en phase gazeuse sur colonne remplie — Méthode générale
General Information
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEIKflYHAPOAHAR OPTAHl43AiJ4R fl0 CTAH~APTbl3ALWl~ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATl0b.J
- Analysis by gas chromatography on
Essential oils
packed columns - General method
- Analyse par Chromatographie en Phase gazeuse SW colonne remplie - Methode g&x?rale
Huiles essentielles
First edition - 1985-12-01
Ref. No. ISO 7359-1985 (E)
UDC 665.5: 543.544
w
-
chromatographic analysis, gas chromatography.
Descriptors : essential oils, Chemical analysis,
Price based on 7 pages
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bedies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 7359 was prepared by Technical Committee ISO/TC 54,
Essential oils.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1985
Printed in Switzerland
INTERNATIONAL STANDARD ISO 7359-1985 (E)
- Analysis by gas chromatography on
Essential oils
packed columns - General method
4 Reagents and products
0 Introduction
During the analysis, unless otherwise specified, use only
Since the description of methods of analysis by gas
reagents of recognized analytical grade, and freshly distilled
chromatography is very long, it is considered useful to establish
products.
general methods on the one hand, giving detailed information
on all the recurrent Parameters, apparatus, products, methods,
formulae, etc. and, on the other hand, Standards with short
4.1 Carrier gas : hydrogen ‘) , helium or nitrogen, according
details on the determination of specific constituents in the
to the type of detector used. lf detectors are used which require
essential oils, giving only those operating conditions specific to carrier gases other than those mentioned, the carrier gas shall
the pertinent determination. be specif ied .
These short-Version Standards will either refer to the present
4.1.1 Auxiliary gases: any gases suitable for the detector
International Standard for gas chromatographic analyses on
used.
packed columns or to ISO 7609 for analyses on capillary
columns.
4.2 Product for checking the Chemical inertness of the
column: linalyl acetate, of purity at least 98 % .
1 Scope and field of application
4.3 Products for checking the efficiency of the
column.*)
This International Standard specifies a general method for the
analysis of essential oils by gas chromatography on packed
4.3.1 Linalol, of purity at least 99 % determined by
columns for the purpose of determining the content of a
chromatography.
specific constituent and/or searching for a characteristic
Profile.
4.3.2 Methane, of purity at least 99 % determined by
chromatography.
2 References
4.4 Reference substance, corresponding to the con-
stituent to be determined or detected. The reference substance
Prepara tion of test Sample.
ISO 356, Essential oik -
will be indicated in each relevant International Standard.
ISO 7609, Essential ois - Analysis by gas chromatography on
capillary columns - General method.
4.5 lnternal Standard.
The internal Standard will be specified in each relevant lnter-
national Standard; it should elute as near as possible to the
3 Principle
constituent to be determined and should not superimpose on
the peaks of any of the constituents of the essential Oil.
Analysis by gas chromatography under specified conditions of
a small quantity of essential oil on a column packed with
appropriate material. 4.6 Normal alkanes, of purity at least 95 % determined by
chromatography. The range of normal alkanes to be used in a
If required, identification of the different constituents from their specific International Standard depends on the retention in-
retention indexes. dexes of the constituents involved under the test conditions.
Quantitative determination of specific constituents by measure- NOTE - Normal alkanes are used only when it is required to determine
the retention indexes.
ment of peak areas.
1) Stritt observance of safety regulations is essential when using this gas.
2) Other products may be used to check the efficiency of the column; they will be specified in each relevant International Standard.
ISO 7359-1985 (EI
7 Operating conditions
4.7 Test mixture.
Prepare a mixture containing approximately equal proportions
7.1 Temperatures
of :
The temperatures of the oven, the injection System and the
limonene,
detector will be specified in each relevant International
Standard.
acetophenone,
- linalol,
7.2 Carrier gas flow rate
linalyl acetate,
Regulate the flow rate so as to obtain the necessary efficiency
naphthalene,
(see 8.2).
-
cinnamic alcohol.
7.3 Auxiliary gases flow rate
All these reagents shall be of purity at least 95 % determined
bY
chromatography. Refer to the manufacturer’s instructions to obtain the Optimum
response from the detector.
NOTE - Other products may be used; they will be specified in each
relevant I nterna tional Standard.
Column Performance
8.1 Chemical inertness test
5 Apparatus
Inject a quantity of linalyl acetate under the test conditions
(see 7.1).
5.1 Chromatograph, equipped with a suitable detector and
The injection and detection
a temperature programmer.
One peak only shall be obtained (within the defined limit of
Systems shall be fitted with devices for independent control of
purity).
their respective temperatures.
8.2 Column efficiency
5.2 Column, made of an inert material (for example glass or
stainless steel), of internal diameter between 2 and 4 mm, and
Determine the column efficiency from the linalol peak at an
preferably of length 2 to 4 m.
isothermal temperature of 130 OC. Determine the number of
effective plates N, which should be at least 3 000, by either of
The support shall be as inert as possible, for example silanized
the following formulae :
and acid-washed celite. lt is necessary to use a particular par-
title size, which will be specified in the relevant International
Formula No. 1: (See figure 1.)
Standard.
The nature of the stationary Phase will be specified in each rel-
evant International Standard. At present, the most frequently
used stationary phases are non-polar phases, such as dimethyl
Formula No. 2:
polysiloxanes, and polar phases such as polyethylene glycol.
d; 2
The ratio of the stationary Phase to the support is expressed in
N = 59 -
grams of stationary Phase per 100 g of support.
b
where
The composition of the column packing will be specified in
each relevant International Standard.
d; is the reduced retention distance, expressed in length
units (retention distance of the linalol peak minus the reten-
NOTE - If a column packing has been used not using a separate
tion distance of the air peak or the methane peak at 130 OC,
stationary Phase, this packing shall be suitably characterized
comparable to the air peak);
cc) is the distance, expressed in the same length units as
53 Recorder and integrator, the performances of which
the retention distance, between the two Points of intersec-
of the apparatus.
shall be compatible with the rest
tion of the base line with the t-wo tangents at the Points of
inflection of the linalol peak;
mi fied
b is the width, in Ilimetres, of the peak of the speci
Preparation of test Sample compound (linalol) at half of the peak height.
The cha rt Speed of the recorder shall be such that cc) is at
See ISO 356.
10 mm, in Order to obtain adequate precision
If the test Sample to be injected has to undergo special prep-
T ‘he Chart Speed of the recorder shall be such that b is at
aration, this will be indicated in the relevant International
5 mm, in Order to obtain adequate precision.
Standard.
ISO 7359-1985 (El
Y
t A
Figure 1
calculate R by means of the formula
8.3 Resolution and Separation
If ql) = cc’(ll) r
ln Order to determine resolution and/or Separation, inject a
411) - 4(l) 4(H) - 41)
suitable quantity of test mixture (4.7) under the conditions of =
R=
cc) 40
test.
where o is the Standard deviation (see figure 1).
8.3.1 Determination of resolution (see figure 2)
Calculate the resolution factor R of two neighbouring peaks l
If the distance between the two peaks, drill1 - dro, is equal to
and II, by means of the formula
4 0, the resolution factor R = 1.
dr(ll) - dr(l)
R=2
If the two peaks are not completely resolved, the tangents to
U(I) + qll)
the Points of inflection of the two peaks meet at Point 6. For
where
the resolution to be total, the distance between the peaks shall
be equal to
is the retention distance of peak 1;
41)
drlllj is the retention distance of peak II;
- drllj = 6 ct
4(H)
is the width of the base of peak 1;
%
from which R = 1,5 (see figure 3).
mfll) is the width of the base of peak II.
1 11
Figure 3
Figure 2
ISO 7359-1985 (EI
Figure 4
8.3.2 Determination of Separation (see figure 4) b) in the case of polyethylene glycol (M, = 20 000)
columns, the peaks of linalol and linalyl acetate shall have a
Separation of at least 95 % (see 8.3.2).
Draw a straight line connecting the tops of the peaks con-
cerned. From the base line, draw a perpendicular through the
minimum between the two peaks. Measure the distance, h, If another packing is specified in the relevant International
along this perpendicular, between the base line and the Point of
Standard, the requirements will be specified therein.
intersection with the straight line connecting the tops of the
peaks concerned.
8.3.3.2 lnject a suitable quantity of the test mixture (4.7) and
Measure also the distance, v, along the perpendicular from the
calculate the retention indexes (sec clause 9) of the con-
baseline to the minimum between the two peaks.
stituents of the test mixture.
Calculate the Separation, p, expressed as a percentage, by
In the case of dimethylpolysiloxane columns, use alkanes CIO
means of the formula
to C,&
loo(h - v)
In the case of polyethylene glycol (M, = 20 000) columns, use
P=
h
alkanes CI1 to &.
The retention indexes so calculated indicate the polarity of the
8.3.3 Checking the resolution at the programmed
column in comparison to the various structural characteristics
temperature
of the constituents analysed.
Use the following conditions :
The results obtained on different columns with the same
nominal packing are comparable if the retention indexes of the
- dimethylpolysiloxane or polyethylene glycol column ;
constituents of the test mixture only differ slightly on the dif-
-
ferent columns. l)
temperature programmed from 80 to 220 OC, at a rate
of 2 or 3 OC/min.
The carrier gas flow rate shall allow elution of all the com-
ponents of the test mixture (4.7) and the normal alkanes (4.6)
9 Determination of retention indexes
required for measurement of their retention indexes before the
end of the temperature Programme.
If it is necessary to determine the retention indexes, prepare a
mixture of the test Portion with normal alkanes including
n-pentane. Choose the normal alkanes in accordance with the
8.3.3.1 lnject a suitable quantity of the test mixture (4.7).
range of retention indexes expected. After stabilization of the
temperature of the column, inject a suitable quantity of the
On the chromatogram obtained :
mixture and proceed with the analysis under the conditions
specified in 10.1 .l.
a) in the case of dimethylpolysiloxane columns, the peaks
of limonene and acetophenone shall have a Separation of at
Chromatogram “B“ is thus obtained.
least 95 % (see 8.3.2) ;
1) Limits for these differentes will be specified later.
ISO 73594985 (El
where
9.1 Measurement of retention indexes
d; is the distance, in millimetres, between the top of the
Compare chromatograms “A” (see 10.1 .l) and ‘IB” (see
peak the retention index of which is to be calculated and the
clause 9) and note on chromatogram “B” the peaks cor-
top of the air peak (or methane peak) (sec 9.1 .l) ;
responding to the normal alkanes.
dh is the distance, in millimetres, between the top of the
peak of the normal alkane with n carbon atoms and the top
On chromatogram “B”, make the following measurements.
of the air peak (or methane peak) (sec 9.1.1) ;
9.1 .l kothermal conditions is the distance, in millimetres, between the top of
G+l
the peak of the normal alkane with (n + 1) carbon atoms
and that of the air peak (or methane peak) (see 9.1.1).
9.1.1.1 If a detector with thermal conductivity is used,
calculate the differente between the retention distances of the
NOTE - The formula is only valid if dh + 1 > dk > dh.
top of the peak under consideration and the top of the air peak.
Let d; be this differente, in millimetres.
9.2.2 Procedu re temperature
program
Calculate the differente between the retention distances of the
from i njection
top of the air peak and the top of the normal alkane peak
appearing immediately before the peak considered. Let dh be
This calculation is valid only for constituents having retention
this differente, in millimetres. times which are included in the linear zone of the temperature
Programme.
Calculate the differente between the retention distances of the
top of the air peak and the top of the normal alkane peak
Calculate the retention index, 1, by means of the formula
appearing immediately after the peak considered. Let dh+l be
this differente, in millimetres.
Ax
I=lOO--+lOOn
Av
9.1.1.2 If a flame ionisation detector is used, calculate the
differente between the retention distances of the top of the
peak considered and the top of the methane peak. Let d; be
Ax is the distance, in millimetres, between the top of the
this differente, in millimetres.
peak the retention index of which i
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEWYHAPOP(HAR OPl-AHM3AlJ4R l-l0 CTAH~APTM3ALWl.ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale
Analysis b y gas chromatograph y on packed columns - General method
Essential ois -
Première édition - 1985-12-01
CDU 665.5: 543.544 Réf. no : ISO 73594985 (F)
iL
-
CD
m huile essentielle, analyse chimique, méthode chromatographique, chromatographie en phase gazeuse.
Descripteurs :
F
Prix basé sur 7 pages
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7359 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essentielles .
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1985
Imprimé en Suisse
NORME INTERNATIONALE ISO 73594985 (FI
- Analyse par chromatographie en
Huiles essentielles
phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale
4 Réactifs et produits
0 Introduction
Au cours de l’analyse, sauf indications différentes, utiliser uni-
La description des méthodes d’analyse par chromatographie
quement des réactifs de qualité analytique reconnue et des pro-
étant longue, il a été estimé utile d’établir, d’une part, des
duits récemment distillés.
normes générales donnant en détail tous les paramètres répéti-
tifs : appareillage, produits, .méthodes, formules de calcul, etc.,
4.1 Gaz vecteur: hydrogène? hélium ou azote, selon le
et, d’autre part, des normes constituant des fiches d’analyse
type de détecteur que l’on utilise. Lorsqu’on utilise des détec-
abrégées relatives au dosage des composés dans les huiles
teurs exigeant l’emploi de gaz vecteurs autres que ceux indi-
essentielles, et ne reprenant que les conditions opératoires spé-
qués ci-dessus, le gaz vecteur à utiliser devra être indiqué.
cifiques au dosage concerné.
4.1.1 Gaz auxiliaires: tous gaz utiles selon le détecteur uti-
Ces fiches se référeront, selon le cas, soit à la présente Norme
lisé. Pour un détecteur à ionisation de flamme, air et hydrogène
internationale pour les analyses effectuées par chromatogra-
de haute pureté.
phie en phase gazeuse sur colonne remplie, soit à I’ISO 7669
pour les analyses effectuées sur colonne capillaire.
4.2 Produit pour le contrôle de l’inertie chimique de la
colonne: acétate de linalyle, de pureté minimale 98 % .
1 Objet et domaine d’application
4.3 Produits pour le contrôle de l’efficacité de la
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné-
colonne.*)
rale d’analyse des huiles essentielles par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne remplie, dans le but de doser un
de pureté minimale 99 % déterminée par chro-
4.3.1 Linalol,
composé spécifique et/ou de rechercher un profil caracté-
matographie.
ristique.
4.3.2 Méthane, de pureté minimale 99 % déterminée par
chromatographie.
2 Références
4.4 Substance de référence, correspondant au composé à
I S 0 356, Huiles essentielles - Préparation de l’échan til/on pour
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
essai.
internationale particulière.
I SO 7609, Huiles essentielles - Analyse par chroma tographie
4.5 Étalon interne.
en phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale.
L’étalon interne sera précisé dans chaque Norme internationale
particulière, et devra éluer aussi près que possible du composé
3 Principe à doser et ne se superposer à aucun des pics correspondant aux
composés de I’huile essentielle.
Analyse par chromatographie en phase gazeuse, dans des con-
ditions spécifiées, d’une petite quantité d’huile essentielle sur
4.6 Alcanes normaux, de pureté minimale 95 % détermi-
une colonne avec un remplissage approprié.
née par chromatographie. La gamme des alcanes normaux à
utiliser dans une certaine Norme internationale dépend de
Localisation éventuelle des différents composés par mesure de
l’indice de rétention des composés concernés dans les condi-
leurs indices de rétention.
tions de l’essai.
Détermination quantitative des composés spécifiques par NOTE - Les alcanes normaux sont utilisés uniquement si l’on désire
déterminer les indices de rétention.
mesure de l’aire de leurs pics.
1) Se conformer strictement aux consignes de sécurité en cas d’utilisation de ce gaz.
2) D’autres produits peuvent être utilisés pour déterminer l’efficacité de la colonne; ils seront précisés dans chaque Norme internationale particulière.
ISO 7359-1985 (FI
7 Conditions opératoires
4.7 Mélange d’essai.
des proportions à peu près
Préparer un mélange contenant
7.1 Températures
égales de
Les températures du four, de l’injecteur et du détecteur seront
- limonène,
précisées dans chaque Norme internationale particulière.
-
acétophénone,
7.2 Débit du gaz vecteur
- linalol,
Régler le débit de manière à obtenir l’efficacité nécessaire
-
acétate de linalyle,
(voir 8.2).
-
naphtalène,
-
alcool cinnamique. 7.3 Débit des gaz auxiliaires
Se référer aux instructions du constructeur de l’appareil, de
Tous ces réactifs doivent être de pureté minimale 95 % déter-
manière à respecter les conditions optimales de réponse du
minée par chromatographie.
détecteur.
; ils seront précisés
NOTE - D’autres produits peuvent être utilisés
dans chaque Norme internationale particuliére.
Performances de la colonne
5 Appareillage
8.1 Test d’inertie chimique
Injecter une quantité d’acétate de linalyle dans les conditions
5.1 Chromatographe, équipé d’un détecteur approprié et
d’analyse (voir 7.1).
d’un programmateur de température. Les systèmes d’injection
et de détection doivent être munis de dispositifs permettant le
On doit obtenir un seul pic (dans la limite de pureté définie).
réglage indépendant de leurs températures respectives.
8.2 Efficacité de la colonne
5.2 Colonne, en matériau inerte (par exemple verre ou acier
inoxydable), d’un diamétre intérieur compris entre 2 et 4 mm,
Déterminer l’efficacité de la colonne sur le pic du linalol, à tem-
et d’une longueur de 2 à 4 m de préférence. .
pérature isotherme de 130 OC. Déterminer le nombre de pla-
teaux effectifs, N, qui doit être au moins égal à 3 000, à l’aide
Le support doit être aussi inerte que possible, par exemple:
de l’une ou l’autre des formules suivantes:
terre de diatomées fossile lavée aux acides et silanisée. S’il est
nécessaire d’utiliser une granulométrie spécifique, celle-ci sera
Formule no 7 (voir figure 1)
indiquée dans la Norme internationale particulière.
La nature de la phase stationnaire sera précisée dans chaque
Norme internationale particulière. Actuellement, les phases sta-
tionnaires les plus couramment utilisées sont des phases non
Formule no 2
polaires telles que les diméthylpolysiloxanes, et des phases
polaires telles que le polyéthylène glycol.
La charge de phase stationnaire sur le support est exprimée en
nombre de grammes de phase stationnaire par 100 g de
où
support.
d; est la distance de rétention réduite, en unités de lon-
gueur (distance de rétention du pic du linalol moins la dis-
La composition du remplissage de la colonne sera précisée
tance de rétention du pic de l’air ou du pic du méthane à
dans chaque Norme internationale particuliére.
130 OC, assimilable au pic de l’air) ;
NOTE - En cas d’emploi d’un remplissage sans phase stationnaire et
cc) est la distance, en mêmes unités de longueur que la dis-
support distincts, il y a lieu de caractériser de facon adéquate ce rem-
tance de rétention, comprise entre les deux points d’inter-
plissage.
section de la ligne de base avec les deux tangentes aux
points d’inflexion du pic du linalol;
dont les pet-forma nces
53 Enregistre ur et intégrateur,
sont compatibles avec l’ensemble de l’appareillage. b est la largeur, en millimétres, du pic du composé spécifié
(linalol) à mi-hauteur du pic.
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
6 Préparation de l’échantillon pour essai
telle que u soit au moins égale à 10 mm, de facon à avoir une
Voir ISO 356. précision suffisante.
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
telle que b soit au moins égale à 5 mm, de facon à avoir une
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
particulière. précision suffisante.
ISO 7359-1985 (FI
Figure 1
8.3 Résolution et séparation calculer R à l’aide de la formule
si ql) = qllb
Pour déterminer la résolution et/ou la séparation, injecter une
4(ll, - 41) 4(ll, - ddl)
quantité du mélange d’essai (4.7) dans les conditions de l’essai.
=
R=
CO 40
8.3.1 Dhermination de la résolution (voir figure 2)
où a est l’écart-type (voir figure 1).
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
et II, à l’aide de la formule
Si la distance entre les deux pics, drfllj - drto, est égale à 4 o,
le facteur de résolution R = 1.
dr(ll~ -
drcI)
R=2
QJ(I) + W) Si les deux pics ne sont pas complètement séparés, les tangen-
tes aux points d’inflexion des deux pics se croisent au point C.
où
Pour séparer complètement les deux pics, la distance entre les
deux pics doit être égale à
est la distance de rétention du pic 1;
dr(l)
dr(llj est la distance de rétention du pic II;
4(H) - 4(l) = 60
est la largeur de la base du pic I ;
o(l)
w(lI) est la largeur de la base du pic II. d’où R = 1,5 (voir figure 3).
1 II
Figure 3
Figure 2
ISO 73594985 (FI
Figure 4
8.3.2 Détermination de la séparation (voir figure 4) b) sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 000),
les pics du linalol et de l’acétate de linalyle doivent être sépa-
Tracer une droite passant par les sommets des pics concernés. rés à 95 % au moins (voir 8.3.2).
A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant
par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur Pour les autres remplissages éventuellement indiqués dans
cette perpendiculaire, entre la ligne de base et son point la méthode d’analyse, les exigences seront précisées dans
d’intersection avec la droite passant par les sommets des pics
celle-ci.
concernés.
8.3.3.2 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
Mesurer également la distance, v, sur la perpendiculaire entre la
(4.7) et calculer les indices de rétention (voir chapitre 9) des
ligne de base et le point minimal entre les deux pics.
constituants du mélange d’essai.
Calculer la séparation, p, exprimée en pourcentage, à l’aide de
la formule Sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, utiliser les alcanes
clO à c16-
lOO(h - v)
P=
Sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 OOO), utiliser
h
les alcanes CI1 à &.
8.3.3 Contrôle de la séparation en température
Les indices de rétention calculés indiquent la N polarité)) de la
programmée
colonne par rapport aux diverses caractéristiques structurelles
des constituants analysés.
Travailler dans les conditions suivantes :
-
Les résultats obtenus sur des colonnes différentes avec le
colonne de diméthylpolysiloxane ou de polyéthylène
glycol ; . même remplissage nominal sont comparables si les indices de
rétention des constituants du mélange d’essai ne diffèrent que
-
température programmée de 80 à 220 OC, à raison de
légèrement sur les différentes colonnes. l)
2 ou 3 OC/min.
Le débit du gaz vecteur doit permettre l’élution de tous les com-
posants du mélange d’essai (4.7) et des alcanes normaux (4.6)
nécessaires pour la détermination de leurs indices de rétention
9 Détermination des indices de rétention
avant la fin de la programmation de température.
S’il faut déterminer les indices relatifs de rétention, préparer un
mélange de la prise d’essai avec des alcanes normaux compre-
8.3.3.1 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
nant le n-pentane. Choisir les alcanes normaux selon la gamme
(4.7).
d’indices de rétention attendue. Après stabilisation de la tem-
pérature de la colonne, injecter une quantité appropriée de ce
Sur le chromatogramme obtenu :
mélange, et effectuer l’analyse dans les conditions précisées en
10.1.1.
a) sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, les pics du
limonène et de I’acétophénone doivent être séparés à 95 %
On obtient le chromatogramme (( B H.
au moins (voir 8.3.2);
1) À l’avenir, les limites de ces différences seront précisées.
ISO 73594985 (FI
91 . Mesure des indices de rétention où
d; est la distance, en millimètres, entre le sommet du pic
Comparer les chromatogrammes ((A H (voir 10.1.1) et G B )) (voir
dont il faut calculer l’indice de rétention, et le sommet du pic
chapitre 9) et repérer dans le chromatogramme (( B H les pics
dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1 .l) ;
correspondant aux alcanes normaux.
d; est la distance, en millimètres, entre le sommet du pic
Sur le chromatogramme a B H, effectuer les mesures comme
de I’alcane normal à n atomes de carbone, et le sommet du
suit.
pic dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1 .l) ;
est la distance, en millimètres, entre le sommet du
C+l
9.1.1 Conditions isothermes
pic de I’alcane normal à (II + 1) atomes de carbone, et le
sommet du pic dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1.1).
9.1.1.1 Si l’on utilise un détecteur à conductivité thermique,
calculer la différence des distances de rétention entre le som-
-
NOTE Pour que les calculs soient valables, il faut que
met du pic de l’air et le sommet du pic considéré. Soit d; cette
> d; > d;-
G+l
différence, en millimétres.
9.2.2 Opération eff
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEWYHAPOP(HAR OPl-AHM3AlJ4R l-l0 CTAH~APTM3ALWl.ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale
Analysis b y gas chromatograph y on packed columns - General method
Essential ois -
Première édition - 1985-12-01
CDU 665.5: 543.544 Réf. no : ISO 73594985 (F)
iL
-
CD
m huile essentielle, analyse chimique, méthode chromatographique, chromatographie en phase gazeuse.
Descripteurs :
F
Prix basé sur 7 pages
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7359 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 54,
Huiles essentielles .
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1985
Imprimé en Suisse
NORME INTERNATIONALE ISO 73594985 (FI
- Analyse par chromatographie en
Huiles essentielles
phase gazeuse sur colonne remplie - Méthode générale
4 Réactifs et produits
0 Introduction
Au cours de l’analyse, sauf indications différentes, utiliser uni-
La description des méthodes d’analyse par chromatographie
quement des réactifs de qualité analytique reconnue et des pro-
étant longue, il a été estimé utile d’établir, d’une part, des
duits récemment distillés.
normes générales donnant en détail tous les paramètres répéti-
tifs : appareillage, produits, .méthodes, formules de calcul, etc.,
4.1 Gaz vecteur: hydrogène? hélium ou azote, selon le
et, d’autre part, des normes constituant des fiches d’analyse
type de détecteur que l’on utilise. Lorsqu’on utilise des détec-
abrégées relatives au dosage des composés dans les huiles
teurs exigeant l’emploi de gaz vecteurs autres que ceux indi-
essentielles, et ne reprenant que les conditions opératoires spé-
qués ci-dessus, le gaz vecteur à utiliser devra être indiqué.
cifiques au dosage concerné.
4.1.1 Gaz auxiliaires: tous gaz utiles selon le détecteur uti-
Ces fiches se référeront, selon le cas, soit à la présente Norme
lisé. Pour un détecteur à ionisation de flamme, air et hydrogène
internationale pour les analyses effectuées par chromatogra-
de haute pureté.
phie en phase gazeuse sur colonne remplie, soit à I’ISO 7669
pour les analyses effectuées sur colonne capillaire.
4.2 Produit pour le contrôle de l’inertie chimique de la
colonne: acétate de linalyle, de pureté minimale 98 % .
1 Objet et domaine d’application
4.3 Produits pour le contrôle de l’efficacité de la
La présente Norme internationale spécifie une méthode géné-
colonne.*)
rale d’analyse des huiles essentielles par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne remplie, dans le but de doser un
de pureté minimale 99 % déterminée par chro-
4.3.1 Linalol,
composé spécifique et/ou de rechercher un profil caracté-
matographie.
ristique.
4.3.2 Méthane, de pureté minimale 99 % déterminée par
chromatographie.
2 Références
4.4 Substance de référence, correspondant au composé à
I S 0 356, Huiles essentielles - Préparation de l’échan til/on pour
doser ou à localiser. Elle sera indiquée dans chaque Norme
essai.
internationale particulière.
I SO 7609, Huiles essentielles - Analyse par chroma tographie
4.5 Étalon interne.
en phase gazeuse sur colonne capillaire - Méthode générale.
L’étalon interne sera précisé dans chaque Norme internationale
particulière, et devra éluer aussi près que possible du composé
3 Principe à doser et ne se superposer à aucun des pics correspondant aux
composés de I’huile essentielle.
Analyse par chromatographie en phase gazeuse, dans des con-
ditions spécifiées, d’une petite quantité d’huile essentielle sur
4.6 Alcanes normaux, de pureté minimale 95 % détermi-
une colonne avec un remplissage approprié.
née par chromatographie. La gamme des alcanes normaux à
utiliser dans une certaine Norme internationale dépend de
Localisation éventuelle des différents composés par mesure de
l’indice de rétention des composés concernés dans les condi-
leurs indices de rétention.
tions de l’essai.
Détermination quantitative des composés spécifiques par NOTE - Les alcanes normaux sont utilisés uniquement si l’on désire
déterminer les indices de rétention.
mesure de l’aire de leurs pics.
1) Se conformer strictement aux consignes de sécurité en cas d’utilisation de ce gaz.
2) D’autres produits peuvent être utilisés pour déterminer l’efficacité de la colonne; ils seront précisés dans chaque Norme internationale particulière.
ISO 7359-1985 (FI
7 Conditions opératoires
4.7 Mélange d’essai.
des proportions à peu près
Préparer un mélange contenant
7.1 Températures
égales de
Les températures du four, de l’injecteur et du détecteur seront
- limonène,
précisées dans chaque Norme internationale particulière.
-
acétophénone,
7.2 Débit du gaz vecteur
- linalol,
Régler le débit de manière à obtenir l’efficacité nécessaire
-
acétate de linalyle,
(voir 8.2).
-
naphtalène,
-
alcool cinnamique. 7.3 Débit des gaz auxiliaires
Se référer aux instructions du constructeur de l’appareil, de
Tous ces réactifs doivent être de pureté minimale 95 % déter-
manière à respecter les conditions optimales de réponse du
minée par chromatographie.
détecteur.
; ils seront précisés
NOTE - D’autres produits peuvent être utilisés
dans chaque Norme internationale particuliére.
Performances de la colonne
5 Appareillage
8.1 Test d’inertie chimique
Injecter une quantité d’acétate de linalyle dans les conditions
5.1 Chromatographe, équipé d’un détecteur approprié et
d’analyse (voir 7.1).
d’un programmateur de température. Les systèmes d’injection
et de détection doivent être munis de dispositifs permettant le
On doit obtenir un seul pic (dans la limite de pureté définie).
réglage indépendant de leurs températures respectives.
8.2 Efficacité de la colonne
5.2 Colonne, en matériau inerte (par exemple verre ou acier
inoxydable), d’un diamétre intérieur compris entre 2 et 4 mm,
Déterminer l’efficacité de la colonne sur le pic du linalol, à tem-
et d’une longueur de 2 à 4 m de préférence. .
pérature isotherme de 130 OC. Déterminer le nombre de pla-
teaux effectifs, N, qui doit être au moins égal à 3 000, à l’aide
Le support doit être aussi inerte que possible, par exemple:
de l’une ou l’autre des formules suivantes:
terre de diatomées fossile lavée aux acides et silanisée. S’il est
nécessaire d’utiliser une granulométrie spécifique, celle-ci sera
Formule no 7 (voir figure 1)
indiquée dans la Norme internationale particulière.
La nature de la phase stationnaire sera précisée dans chaque
Norme internationale particulière. Actuellement, les phases sta-
tionnaires les plus couramment utilisées sont des phases non
Formule no 2
polaires telles que les diméthylpolysiloxanes, et des phases
polaires telles que le polyéthylène glycol.
La charge de phase stationnaire sur le support est exprimée en
nombre de grammes de phase stationnaire par 100 g de
où
support.
d; est la distance de rétention réduite, en unités de lon-
gueur (distance de rétention du pic du linalol moins la dis-
La composition du remplissage de la colonne sera précisée
tance de rétention du pic de l’air ou du pic du méthane à
dans chaque Norme internationale particuliére.
130 OC, assimilable au pic de l’air) ;
NOTE - En cas d’emploi d’un remplissage sans phase stationnaire et
cc) est la distance, en mêmes unités de longueur que la dis-
support distincts, il y a lieu de caractériser de facon adéquate ce rem-
tance de rétention, comprise entre les deux points d’inter-
plissage.
section de la ligne de base avec les deux tangentes aux
points d’inflexion du pic du linalol;
dont les pet-forma nces
53 Enregistre ur et intégrateur,
sont compatibles avec l’ensemble de l’appareillage. b est la largeur, en millimétres, du pic du composé spécifié
(linalol) à mi-hauteur du pic.
La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
6 Préparation de l’échantillon pour essai
telle que u soit au moins égale à 10 mm, de facon à avoir une
Voir ISO 356. précision suffisante.
Si l’échantillon pour essai à injecter doit subir une préparation La vitesse de déroulement du papier de l’enregistreur doit être
telle que b soit au moins égale à 5 mm, de facon à avoir une
spéciale, celle-ci sera indiquée dans la Norme internationale
particulière. précision suffisante.
ISO 7359-1985 (FI
Figure 1
8.3 Résolution et séparation calculer R à l’aide de la formule
si ql) = qllb
Pour déterminer la résolution et/ou la séparation, injecter une
4(ll, - 41) 4(ll, - ddl)
quantité du mélange d’essai (4.7) dans les conditions de l’essai.
=
R=
CO 40
8.3.1 Dhermination de la résolution (voir figure 2)
où a est l’écart-type (voir figure 1).
Calculer le facteur de résolution, R, de deux pics avoisinants I
et II, à l’aide de la formule
Si la distance entre les deux pics, drfllj - drto, est égale à 4 o,
le facteur de résolution R = 1.
dr(ll~ -
drcI)
R=2
QJ(I) + W) Si les deux pics ne sont pas complètement séparés, les tangen-
tes aux points d’inflexion des deux pics se croisent au point C.
où
Pour séparer complètement les deux pics, la distance entre les
deux pics doit être égale à
est la distance de rétention du pic 1;
dr(l)
dr(llj est la distance de rétention du pic II;
4(H) - 4(l) = 60
est la largeur de la base du pic I ;
o(l)
w(lI) est la largeur de la base du pic II. d’où R = 1,5 (voir figure 3).
1 II
Figure 3
Figure 2
ISO 73594985 (FI
Figure 4
8.3.2 Détermination de la séparation (voir figure 4) b) sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 000),
les pics du linalol et de l’acétate de linalyle doivent être sépa-
Tracer une droite passant par les sommets des pics concernés. rés à 95 % au moins (voir 8.3.2).
A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant
par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur Pour les autres remplissages éventuellement indiqués dans
cette perpendiculaire, entre la ligne de base et son point la méthode d’analyse, les exigences seront précisées dans
d’intersection avec la droite passant par les sommets des pics
celle-ci.
concernés.
8.3.3.2 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
Mesurer également la distance, v, sur la perpendiculaire entre la
(4.7) et calculer les indices de rétention (voir chapitre 9) des
ligne de base et le point minimal entre les deux pics.
constituants du mélange d’essai.
Calculer la séparation, p, exprimée en pourcentage, à l’aide de
la formule Sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, utiliser les alcanes
clO à c16-
lOO(h - v)
P=
Sur les colonnes de polyéthylène glycol (M, = 20 OOO), utiliser
h
les alcanes CI1 à &.
8.3.3 Contrôle de la séparation en température
Les indices de rétention calculés indiquent la N polarité)) de la
programmée
colonne par rapport aux diverses caractéristiques structurelles
des constituants analysés.
Travailler dans les conditions suivantes :
-
Les résultats obtenus sur des colonnes différentes avec le
colonne de diméthylpolysiloxane ou de polyéthylène
glycol ; . même remplissage nominal sont comparables si les indices de
rétention des constituants du mélange d’essai ne diffèrent que
-
température programmée de 80 à 220 OC, à raison de
légèrement sur les différentes colonnes. l)
2 ou 3 OC/min.
Le débit du gaz vecteur doit permettre l’élution de tous les com-
posants du mélange d’essai (4.7) et des alcanes normaux (4.6)
nécessaires pour la détermination de leurs indices de rétention
9 Détermination des indices de rétention
avant la fin de la programmation de température.
S’il faut déterminer les indices relatifs de rétention, préparer un
mélange de la prise d’essai avec des alcanes normaux compre-
8.3.3.1 Injecter une quantité appropriée du mélange d’essai
nant le n-pentane. Choisir les alcanes normaux selon la gamme
(4.7).
d’indices de rétention attendue. Après stabilisation de la tem-
pérature de la colonne, injecter une quantité appropriée de ce
Sur le chromatogramme obtenu :
mélange, et effectuer l’analyse dans les conditions précisées en
10.1.1.
a) sur les colonnes de diméthylpolysiloxane, les pics du
limonène et de I’acétophénone doivent être séparés à 95 %
On obtient le chromatogramme (( B H.
au moins (voir 8.3.2);
1) À l’avenir, les limites de ces différences seront précisées.
ISO 73594985 (FI
91 . Mesure des indices de rétention où
d; est la distance, en millimètres, entre le sommet du pic
Comparer les chromatogrammes ((A H (voir 10.1.1) et G B )) (voir
dont il faut calculer l’indice de rétention, et le sommet du pic
chapitre 9) et repérer dans le chromatogramme (( B H les pics
dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1 .l) ;
correspondant aux alcanes normaux.
d; est la distance, en millimètres, entre le sommet du pic
Sur le chromatogramme a B H, effectuer les mesures comme
de I’alcane normal à n atomes de carbone, et le sommet du
suit.
pic dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1 .l) ;
est la distance, en millimètres, entre le sommet du
C+l
9.1.1 Conditions isothermes
pic de I’alcane normal à (II + 1) atomes de carbone, et le
sommet du pic dit de l’air (ou le pic du méthane) (voir 9.1.1).
9.1.1.1 Si l’on utilise un détecteur à conductivité thermique,
calculer la différence des distances de rétention entre le som-
-
NOTE Pour que les calculs soient valables, il faut que
met du pic de l’air et le sommet du pic considéré. Soit d; cette
> d; > d;-
G+l
différence, en millimétres.
9.2.2 Opération eff
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.