ISO 20418-3:2020
(Main)Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some animal hair fibres — Part 3: Peptide detection using LC-MS without protein reduction
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some animal hair fibres — Part 3: Peptide detection using LC-MS without protein reduction
This document specifies a qualitative and quantitative procedure to determine the composition of animal hair fibre blends (made of wool, cashmere, yak, alpaca, camel or angora) by LC-MS without protein reduction. NOTE 1 The composition of non-animal hair fibres can be measured by ISO 1833 (all parts). Both results are combined to determine the total fibre composition. The method is based on a preliminary identification, by light microscopy, of all fibres in the blend on the basis of their morphology, according to ISO/TR 11827[4]. It is not applicable if fibres of the same animal species (such as blends of cashmere and mohair) are present. NOTE 2 In this case, the quantitative analysis is performed using microscopical analysis [for example, ISO 17751 (all parts)].
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de certaines fibres animales — Partie 3: Détection des peptides par LC-MS sans réduction protéique
Le présent document spécifie une méthode qualitative et quantitative pour déterminer la composition des mélanges de fibres animales ? poils - (composés de laine, de cachemire, de yack, d'alpaga, de chameau ou d'angora) par LC-MS sans réduction protéique. NOTE 1 La composition des fibres autres que les poils animaux peut être mesurée conformément à l'ISO 1833 (toutes les parties). Les résultats de ces deux méthodes sont ensuite combinés pour déterminer la composition globale des fibres. La méthode repose sur une identification préliminaire, par microscopie optique, de toutes les fibres présentes dans le mélange sur la base de leur morphologie, conformément à l'ISO/TR 11827[4]. Elle n'est pas applicable si des fibres de la même espèce animale (telles que des mélanges de cachemire et de mohair) sont présentes. NOTE 2 Dans ce cas, l'analyse quantitative est réalisée par microscopie [tel que décrit dans l'ISO 17751 (toutes les parties), par exemple].
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FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 20418-3
ISO/TC 38
Textiles — Qualitative and
Secretariat: JISC
quantitative proteomic analysis of
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2020-03-11 some animal hair fibres —
Voting terminates on:
Part 3:
2020-05-06
Peptide detection using LC-MS without
protein reduction
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de
certaines fibres animales —
Partie 3: Détection des peptides par LC-MS sans réduction protéique
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
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BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
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LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
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NATIONAL REGULATIONS. ISO 2020
ISO/FDIS 20418-3:2020(E)
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below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved
ISO/FDIS 20418-3:2020(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Symbols and abbreviated terms . 2
5 Principle . 2
6 Reagents . 3
7 Apparatus . 3
8 Test method . 4
8.1 Sampling . 4
8.2 Preliminary identification . 4
8.3 Wash for degreasing . 4
8.4 Powderization of fibres . 4
8.5 Trypsin digestion . 4
8.6 Marker peptides . 5
8.7 LC-MS analysis . 5
8.8 Evaluation of the validity of observed data . 5
8.9 Calculation of correction factor . 5
8.9.1 Correction factor . 5
8.9.2 Correction factor for Cas1 against She1 and Yak1 (kc). 6
8.9.3 Correction factor for Yak2 against She2, She3 and Cas2 (ky) . 6
8.9.4 Correction factor for alpaca and camel (ka) . 6
8.9.5 Correction factor for angora (kr) . 6
8.10 Calculation of blending ratio . 6
8.10.1 Calculation of blending ratio of cashmere, sheep wool and yak . 6
8.10.2 Calculation by She1, Cas1, Yak1 and kc . 7
8.10.3 Calculation by She2, She3, Cas2, Yak2 and ky . 7
8.10.4 Calculation by She1, She2, She3, Cas2, Yak1 . 7
8.10.5 Calculation of blending ratio of camel, alpaca and angora . 8
9 Test report . 9
Annex A (informative) Marker peptides of cashmere, sheep wool and yak fibres .10
Annex B (informative) Example of LC-MS analysis conditions .13
Annex C (informative) Analysis of camel, alpaca and angora fibres .16
Annex D (informative) Example of marker peptide mass chromatograms .19
Annex E (informative) Results of interlaboratory study .23
Bibliography .24
ISO/FDIS 20418-3:2020(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 38, Textiles, in collaboration with
the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 248, Textiles, in
accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 20418 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved
ISO/FDIS 20418-3:2020(E)
Introduction
Cashmere is a long slender fibre obtained from cashmere goats and is expensive because of its high
quality and rarity. Mislabelling or adulteration of cashmere products blended with other cheaper
animal fibres such as sheep wool and yak have been repeatedly reported worldwide.
Current official methods to identify specific animal fibres are based on microscopic observations.
However, the microscopy-based identification is becoming increasingly difficult due to a wider use
of chemical or physical treatments in the manufacturing process. Given these issues, several other
methods have also been studied either to distinguish fibre structures by the use of near-infrared
spectroscopy or terahertz spectroscopy, or to distinguish DNA sequences by the use of polymerase
chain reaction. Nevertheless, each method has shown some complications when applied. Therefore, it is
required to develop novel identification methods.
Animal fibres consist mainly of proteins called keratins and some associated proteins. Therefore, the
most promising methods to identify fibres are based on the analysis of proteins contained in textiles.
Commonly, proteins are analysed by being subjected to digestion by trypsin, resulting in smaller
molecules, i.e. peptides, which will be later characterized through mass spectrometry. Accordingly,
identification methods using either matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass
spectrometer or liquid chromatography/mass spectrometer (LC-MS) have been studied. When
comparing these options, the latter type of instrument is less expensive and more readily available in
testing laboratories as a versatile analytical instrument than the former. Moreover, LC-MS has a high
quantitative capability, and is therefore preferable to calculate the blending ratio of animal fibres.
Keratins are highly insoluble due to the disulphide bonds they tend to form, both at an intramolecular
as well as at an intermolecular level. Thus, keratins are generally extracted in the presence of reducing
agents. However, this reducing step is considered as time-consuming and arduous. In this document,
an alternative method in which cysteine-free peptides are selected for identification markers is used,
thereby eliminating the need of the reducing step and enabling rapid preparation of LC-MS samples.
Both ISO 20418-1 and this document describe procedures using LC-MS, but they differ regarding the
method utilized to extract the peptides. In ISO 20418-1, proteins are first extracted from fibres with
a thiourea/urea/dithiothreitol (DTT) solution, and then digested by trypsin to obtain peptides. In the
process described here, peptides are directly extracted by trypsin digestion of mechanically powdered
fibres. The method has been shown to be useful even for highly processed samples and is applicable to
various types of animal hairs such as goat (cashmere or mohair), wool and yak.
FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 20418-3:2020(E)
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis
of some animal hair fibres —
Part 3:
Peptide detection using LC-MS without protein reduction
1 Scope
This document specifies a qualitative and quantitative procedure to determine the composition of
animal hair fibre blends (made of wool, cashmere, yak, alpaca, camel or angora) by LC-MS without
protein reduction.
NOTE 1 The composition of non-animal hair fibres can be measured by ISO 1833 (all parts). Both results are
combin
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20418-3
First edition
2020-06
Textiles — Qualitative and
quantitative proteomic analysis of
some animal hair fibres —
Part 3:
Peptide detection using LC-MS without
protein reduction
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de
certaines fibres animales —
Partie 3: Détection des peptides par LC-MS sans réduction protéique
Reference number
©
ISO 2020
© ISO 2020
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
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Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Symbols and abbreviated terms . 2
5 Principle . 2
6 Reagents . 3
7 Apparatus . 3
8 Test method . 4
8.1 Sampling . 4
8.2 Preliminary identification . 4
8.3 Wash for degreasing . 4
8.4 Powderization of fibres . 4
8.5 Trypsin digestion . 4
8.6 Marker peptides . 5
8.7 LC-MS analysis . 5
8.8 Evaluation of the validity of observed data . 5
8.9 Calculation of correction factor . 5
8.9.1 Correction factor . 5
8.9.2 Correction factor for Cas1 against She1 and Yak1 (kc). 6
8.9.3 Correction factor for Yak2 against She2, She3 and Cas2 (ky) . 6
8.9.4 Correction factor for alpaca and camel (ka) . 6
8.9.5 Correction factor for angora (kr) . 6
8.10 Calculation of blending ratio . 6
8.10.1 Calculation of blending ratio of cashmere, sheep wool and yak . 6
8.10.2 Calculation by She1, Cas1, Yak1 and kc . 7
8.10.3 Calculation by She2, She3, Cas2, Yak2 and ky . 7
8.10.4 Calculation by She1, She2, She3, Cas2, Yak1 . 7
8.10.5 Calculation of blending ratio of camel, alpaca and angora . 8
9 Test report . 9
Annex A (informative) Marker peptides of cashmere, sheep wool and yak fibres .10
Annex B (informative) Example of LC-MS analysis conditions .13
Annex C (informative) Analysis of camel, alpaca and angora fibres .16
Annex D (informative) Example of marker peptide mass chromatograms .19
Annex E (informative) Results of interlaboratory study .23
Bibliography .24
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 38, Textiles, in collaboration with the
European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 248, Textiles and textile
products, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna
Agreement).
A list of all parts in the ISO 20418 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved
Introduction
Cashmere is a long slender fibre obtained from cashmere goats and is expensive because of its high
quality and rarity. Mislabelling or adulteration of cashmere products blended with other cheaper
animal fibres such as sheep wool and yak have been repeatedly reported worldwide.
Current official methods to identify specific animal fibres are based on microscopic observations.
However, the microscopy-based identification is becoming increasingly difficult due to a wider use
of chemical or physical treatments in the manufacturing process. Given these issues, several other
methods have also been studied either to distinguish fibre structures by the use of near-infrared
spectroscopy or terahertz spectroscopy, or to distinguish DNA sequences by the use of polymerase
chain reaction. Nevertheless, each method has shown some complications when applied. Therefore, it is
required to develop novel identification methods.
Animal fibres consist mainly of proteins called keratins and some associated proteins. Therefore, the
most promising methods to identify fibres are based on the analysis of proteins contained in textiles.
Commonly, proteins are analysed by being subjected to digestion by trypsin, resulting in smaller
molecules, i.e. peptides, which will be later characterized through mass spectrometry. Accordingly,
identification methods using either matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass
spectrometer or liquid chromatography/mass spectrometer (LC-MS) have been studied. When
comparing these options, the latter type of instrument is less expensive and more readily available in
testing laboratories as a versatile analytical instrument than the former. Moreover, LC-MS has a high
quantitative capability, and is therefore preferable to calculate the blending ratio of animal fibres.
Keratins are highly insoluble due to the disulphide bonds they tend to form, both at an intramolecular
as well as at an intermolecular level. Thus, keratins are generally extracted in the presence of reducing
agents. However, this reducing step is considered as time-consuming and arduous. In this document,
an alternative method in which cysteine-free peptides are selected for identification markers is used,
thereby eliminating the need of the reducing step and enabling rapid preparation of LC-MS samples.
Both ISO 20418-1 and this document describe procedures using LC-MS, but they differ regarding the
method utilized to extract the peptides. In ISO 20418-1, proteins are first extracted from fibres with
a thiourea/urea/dithiothreitol (DTT) solution, and then digested by trypsin to obtain peptides. In the
process described here, peptides are directly extracted by trypsin digestion of mechanically powdered
fibres. The method has been shown to be useful even for highly processed samples and is applicable to
various types of animal hairs such as goat (cashmere or mohair), wool and yak.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20418-3:2020(E)
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis
of some animal hair fibres —
Part 3:
Peptide detection using LC-MS without protein reduction
1 Scope
This document specifies a qualitative and quantitative procedure to determine the composition of
animal hair fibre blends (made of wool, cashmere, yak, alpaca, camel or angora) by LC-MS without
protein reduction.
NOTE 1 The composition of non-animal hair fibres can be measured by ISO 1833 (all parts). Both results are
combined to determine the total fibre composition.
The method is based on a preliminary identification, by light microscopy, of all fibres in the blend on the
[4]
basis of their morphology, according to ISO/TR 11827 . It is not applicable if fibres of the same animal
species (such as blends of cashmere and mohair) are present.
NOTE 2 In this case, the quantitative analysis is performed using microscopical analysis [for example,
ISO 17751 (all parts)].
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this docu
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20418-3
First edition
2020-06
Textiles — Qualitative and
quantitative proteomic analysis of
some animal hair fibres —
Part 3:
Peptide detection using LC-MS without
protein reduction
Textiles — Analyse protéomique qualitative et quantitative de
certaines fibres animales —
Partie 3: Détection des peptides par LC-MS sans réduction protéique
Reference number
©
ISO 2020
© ISO 2020
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
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Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Symbols and abbreviated terms . 2
5 Principle . 2
6 Reagents . 3
7 Apparatus . 3
8 Test method . 4
8.1 Sampling . 4
8.2 Preliminary identification . 4
8.3 Wash for degreasing . 4
8.4 Powderization of fibres . 4
8.5 Trypsin digestion . 4
8.6 Marker peptides . 5
8.7 LC-MS analysis . 5
8.8 Evaluation of the validity of observed data . 5
8.9 Calculation of correction factor . 5
8.9.1 Correction factor . 5
8.9.2 Correction factor for Cas1 against She1 and Yak1 (kc). 6
8.9.3 Correction factor for Yak2 against She2, She3 and Cas2 (ky) . 6
8.9.4 Correction factor for alpaca and camel (ka) . 6
8.9.5 Correction factor for angora (kr) . 6
8.10 Calculation of blending ratio . 6
8.10.1 Calculation of blending ratio of cashmere, sheep wool and yak . 6
8.10.2 Calculation by She1, Cas1, Yak1 and kc . 7
8.10.3 Calculation by She2, She3, Cas2, Yak2 and ky . 7
8.10.4 Calculation by She1, She2, She3, Cas2, Yak1 . 7
8.10.5 Calculation of blending ratio of camel, alpaca and angora . 8
9 Test report . 9
Annex A (informative) Marker peptides of cashmere, sheep wool and yak fibres .10
Annex B (informative) Example of LC-MS analysis conditions .13
Annex C (informative) Analysis of camel, alpaca and angora fibres .16
Annex D (informative) Example of marker peptide mass chromatograms .19
Annex E (informative) Results of interlaboratory study .23
Bibliography .24
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
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European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 248, Textiles and textile
products, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna
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complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved
Introduction
Cashmere is a long slender fibre obtained from cashmere goats and is expensive because of its high
quality and rarity. Mislabelling or adulteration of cashmere products blended with other cheaper
animal fibres such as sheep wool and yak have been repeatedly reported worldwide.
Current official methods to identify specific animal fibres are based on microscopic observations.
However, the microscopy-based identification is becoming increasingly difficult due to a wider use
of chemical or physical treatments in the manufacturing process. Given these issues, several other
methods have also been studied either to distinguish fibre structures by the use of near-infrared
spectroscopy or terahertz spectroscopy, or to distinguish DNA sequences by the use of polymerase
chain reaction. Nevertheless, each method has shown some complications when applied. Therefore, it is
required to develop novel identification methods.
Animal fibres consist mainly of proteins called keratins and some associated proteins. Therefore, the
most promising methods to identify fibres are based on the analysis of proteins contained in textiles.
Commonly, proteins are analysed by being subjected to digestion by trypsin, resulting in smaller
molecules, i.e. peptides, which will be later characterized through mass spectrometry. Accordingly,
identification methods using either matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass
spectrometer or liquid chromatography/mass spectrometer (LC-MS) have been studied. When
comparing these options, the latter type of instrument is less expensive and more readily available in
testing laboratories as a versatile analytical instrument than the former. Moreover, LC-MS has a high
quantitative capability, and is therefore preferable to calculate the blending ratio of animal fibres.
Keratins are highly insoluble due to the disulphide bonds they tend to form, both at an intramolecular
as well as at an intermolecular level. Thus, keratins are generally extracted in the presence of reducing
agents. However, this reducing step is considered as time-consuming and arduous. In this document,
an alternative method in which cysteine-free peptides are selected for identification markers is used,
thereby eliminating the need of the reducing step and enabling rapid preparation of LC-MS samples.
Both ISO 20418-1 and this document describe procedures using LC-MS, but they differ regarding the
method utilized to extract the peptides. In ISO 20418-1, proteins are first extracted from fibres with
a thiourea/urea/dithiothreitol (DTT) solution, and then digested by trypsin to obtain peptides. In the
process described here, peptides are directly extracted by trypsin digestion of mechanically powdered
fibres. The method has been shown to be useful even for highly processed samples and is applicable to
various types of animal hairs such as goat (cashmere or mohair), wool and yak.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20418-3:2020(E)
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis
of some animal hair fibres —
Part 3:
Peptide detection using LC-MS without protein reduction
1 Scope
This document specifies a qualitative and quantitative procedure to determine the composition of
animal hair fibre blends (made of wool, cashmere, yak, alpaca, camel or angora) by LC-MS without
protein reduction.
NOTE 1 The composition of non-animal hair fibres can be measured by ISO 1833 (all parts). Both results are
combined to determine the total fibre composition.
The method is based on a preliminary identification, by light microscopy, of all fibres in the blend on the
[4]
basis of their morphology, according to ISO/TR 11827 . It is not applicable if fibres of the same animal
species (such as blends of cashmere and mohair) are present.
NOTE 2 In this case, the quantitative analysis is performed using microscopical analysis [for example,
ISO 17751 (all parts)].
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this docu
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20418-3
Première édition
2020-06
Textiles — Analyse protéomique
qualitative et quantitative de certaines
fibres animales —
Partie 3:
Détection des peptides par LC-MS sans
réduction protéique
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some
animal hair fibres —
Part 3: Peptide detection using LC-MS without protein reduction
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ISO 2020
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Publié en Suisse
ii © ISO 2020 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Symboles et abréviations . 2
5 Principe . 3
6 Réactifs . 3
7 Appareillage . 3
8 Méthode d’essai . 4
8.1 Échantillonnage . 4
8.2 Identification préliminaire . 4
8.3 Lavage pour dégraissage . 4
8.4 Réduction en poudre des fibres . 4
8.5 Digestion à la trypsine . 4
8.6 Marqueurs peptidiques . 5
8.7 Analyse LC-MS . 5
8.8 Évaluation de la validité des données observées . 6
8.9 Calcul du facteur de correction . 6
8.9.1 Facteur de correction . 6
8.9.2 Facteur de correction de Cac1 vis-à-vis de Mou1 et de Yac1 (kc) . 6
8.9.3 Facteur de correction de Yac2 vis-à-vis de Mou2, Mou3 et de Cac2 (ky) . 6
8.9.4 Facteur de correction de l’alpaga et du chameau (ka) . 6
8.9.5 Facteur de correction de l’angora (kr) . 7
8.10 Calcul des proportions de mélange . 7
8.10.1 Calcul des proportions de mélange du cachemire, de la laine de mouton et
du yack . 7
8.10.2 Calcul avec Mou1, Cac1, Yac1 et kc . 7
8.10.3 Calcul avec Mou2, Mou3, Cac2, Yac2 et ky . 7
8.10.4 Calcul avec Mou1, Mou2, Mou3, Cac2, Yac1 . 8
8.10.5 Calcul des proportions de mélange de chameau, d’alpaga et d’angora . 8
9 Rapport d’essai . 9
Annexe A (informative) Marqueurs peptidiques de fibres de cachemire, de laine de mouton
et de yack .11
Annexe B (informative) Exemple de conditions d’analyse LC-MS .14
Annexe C (informative) Analyse de fibres de chameau, d’alpaga et d’angora .17
Annexe D (informative) Exemple de chromatogrammes de masse de marqueurs peptidiques .20
Annexe E (informative) Résultats de l’étude interlaboratoires .24
Bibliographie .26
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 38, Textiles, en collaboration avec le
Comité technique CEN/TC 248, Textiles et produits textiles, du Comité européen de normalisation (CEN)
conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20418 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés
Introduction
Le cachemire est une fibre fine et longue obtenue à partir des poils des chèvres cachemire, qui est
coûteuse du fait de sa haute qualité et de sa rareté. Des cas de non-conformité de l’étiquetage ou
d’adultération d’articles en cachemire qui intègrent d’autres fibres animales moins onéreuses telles que
la laine de mouton et le yack ont été régulièrement signalés dans le monde entier.
Des méthodes officielles actuelles permettant d’identifier les différentes fibres animales s’appuient sur
une observation au microscope. Toutefois, l’identification au microscope est devenue de plus en plus
difficile du fait d’un emploi plus large de traitements chimiques ou physiques au cours du procédé de
fabrication. Au vu de ces problèmes, plusieurs autres méthodes ont également été étudiées visant soit à
différencier les structures des fibres par spectroscopie dans le proche infrarouge ou par spectroscopie
térahertz, soit à différencier des séquences ADN par réaction en chaîne par polymérase. Néanmoins,
chaque méthode présente des limitations sur le plan de l’application pratique. Par conséquent, il est
nécessaire de mettre au point de nouvelles méthodes d’identification.
Les fibres animales se composent principalement de protéines appelées kératines ainsi que de
certaines protéines associées. De ce fait, les méthodes d’identification les plus prometteuses reposent
sur l’analyse des protéines contenues dans les textiles. Habituellement, les protéines sont analysées
en étant soumises à une digestion par la trypsine afin de les transformer en molécules plus petites,
c’est-à-dire en peptides, qui sont ensuite caractérisés par spectrométrie de masse. Par conséquent, les
méthodes d’identification au moyen d’un spectromètre de masse à désorption/ionisation laser assistée
par matrice avec analyseur à temps de vol ou d’un système de chromatographie en phase liquide
couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS, acronyme issu de l'anglais «liquid chromatography–mass
spectrometry») ont été étudiées. Ce dernier type d’appareillage, par comparaison au premier type
d’appareillage, est moins onéreux et les laboratoires d’essai en sont plus fréquemment équipés du fait de
la polyvalence de cet instrument analytique. De plus, la LC-MS permet d’analyser de grandes quantités
et est donc préférable pour calculer les proportions de mélange de fibres animales.
Les kératines sont hautement insolubles du fait des liaisons disulfure qu’elles tendent à former, tant
sur le plan intramoléculaire que sur le plan intermoléculaire. C’est la raison pour laquelle les kératines
sont généralement extraites en présence d’agents réducteurs. Toutefois, cette étape de réduction est
chronophage et complexe. Le présent document spécifie une méthode alternative reposant sur la
sélection de peptides exempts de cystéine à titre de marqueurs d’identification, éliminant de ce fait la
nécessité d’avoir recours à l’étape de réduction et permettant une préparation rapide des échantillons
de LC-MS.
L’ISO 20418-1 et le présent document traitent tous deux de l’analyse par LC-MS, mais diffèrent quant
à la méthode d’extraction des peptides. Dans l’ISO 20418-1, les protéines sont dans un premier temps
extraites des fibres à l’aide d’une solution de thiourée/urée/dithiothréitol (DTT), puis sont coupées
par digestion à la trypsine afin d’obtenir des peptides. Dans le procédé décrit ici, les peptides sont
directement extraits par digestion à la trypsine des fibres réduites en poudre de manière mécanique.
Cette méthode s’est avérée très
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20418-3
Première édition
2020-06
Textiles — Analyse protéomique
qualitative et quantitative de certaines
fibres animales —
Partie 3:
Détection des peptides par LC-MS sans
réduction protéique
Textiles — Qualitative and quantitative proteomic analysis of some
animal hair fibres —
Part 3: Peptide detection using LC-MS without protein reduction
Numéro de référence
©
ISO 2020
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2020
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2020 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Symboles et abréviations . 2
5 Principe . 3
6 Réactifs . 3
7 Appareillage . 3
8 Méthode d’essai . 4
8.1 Échantillonnage . 4
8.2 Identification préliminaire . 4
8.3 Lavage pour dégraissage . 4
8.4 Réduction en poudre des fibres . 4
8.5 Digestion à la trypsine . 4
8.6 Marqueurs peptidiques . 5
8.7 Analyse LC-MS . 5
8.8 Évaluation de la validité des données observées . 6
8.9 Calcul du facteur de correction . 6
8.9.1 Facteur de correction . 6
8.9.2 Facteur de correction de Cac1 vis-à-vis de Mou1 et de Yac1 (kc) . 6
8.9.3 Facteur de correction de Yac2 vis-à-vis de Mou2, Mou3 et de Cac2 (ky) . 6
8.9.4 Facteur de correction de l’alpaga et du chameau (ka) . 6
8.9.5 Facteur de correction de l’angora (kr) . 7
8.10 Calcul des proportions de mélange . 7
8.10.1 Calcul des proportions de mélange du cachemire, de la laine de mouton et
du yack . 7
8.10.2 Calcul avec Mou1, Cac1, Yac1 et kc . 7
8.10.3 Calcul avec Mou2, Mou3, Cac2, Yac2 et ky . 7
8.10.4 Calcul avec Mou1, Mou2, Mou3, Cac2, Yac1 . 8
8.10.5 Calcul des proportions de mélange de chameau, d’alpaga et d’angora . 8
9 Rapport d’essai . 9
Annexe A (informative) Marqueurs peptidiques de fibres de cachemire, de laine de mouton
et de yack .11
Annexe B (informative) Exemple de conditions d’analyse LC-MS .14
Annexe C (informative) Analyse de fibres de chameau, d’alpaga et d’angora .17
Annexe D (informative) Exemple de chromatogrammes de masse de marqueurs peptidiques .20
Annexe E (informative) Résultats de l’étude interlaboratoires .24
Bibliographie .26
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 38, Textiles, en collaboration avec le
Comité technique CEN/TC 248, Textiles et produits textiles, du Comité européen de normalisation (CEN)
conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20418 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés
Introduction
Le cachemire est une fibre fine et longue obtenue à partir des poils des chèvres cachemire, qui est
coûteuse du fait de sa haute qualité et de sa rareté. Des cas de non-conformité de l’étiquetage ou
d’adultération d’articles en cachemire qui intègrent d’autres fibres animales moins onéreuses telles que
la laine de mouton et le yack ont été régulièrement signalés dans le monde entier.
Des méthodes officielles actuelles permettant d’identifier les différentes fibres animales s’appuient sur
une observation au microscope. Toutefois, l’identification au microscope est devenue de plus en plus
difficile du fait d’un emploi plus large de traitements chimiques ou physiques au cours du procédé de
fabrication. Au vu de ces problèmes, plusieurs autres méthodes ont également été étudiées visant soit à
différencier les structures des fibres par spectroscopie dans le proche infrarouge ou par spectroscopie
térahertz, soit à différencier des séquences ADN par réaction en chaîne par polymérase. Néanmoins,
chaque méthode présente des limitations sur le plan de l’application pratique. Par conséquent, il est
nécessaire de mettre au point de nouvelles méthodes d’identification.
Les fibres animales se composent principalement de protéines appelées kératines ainsi que de
certaines protéines associées. De ce fait, les méthodes d’identification les plus prometteuses reposent
sur l’analyse des protéines contenues dans les textiles. Habituellement, les protéines sont analysées
en étant soumises à une digestion par la trypsine afin de les transformer en molécules plus petites,
c’est-à-dire en peptides, qui sont ensuite caractérisés par spectrométrie de masse. Par conséquent, les
méthodes d’identification au moyen d’un spectromètre de masse à désorption/ionisation laser assistée
par matrice avec analyseur à temps de vol ou d’un système de chromatographie en phase liquide
couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS, acronyme issu de l'anglais «liquid chromatography–mass
spectrometry») ont été étudiées. Ce dernier type d’appareillage, par comparaison au premier type
d’appareillage, est moins onéreux et les laboratoires d’essai en sont plus fréquemment équipés du fait de
la polyvalence de cet instrument analytique. De plus, la LC-MS permet d’analyser de grandes quantités
et est donc préférable pour calculer les proportions de mélange de fibres animales.
Les kératines sont hautement insolubles du fait des liaisons disulfure qu’elles tendent à former, tant
sur le plan intramoléculaire que sur le plan intermoléculaire. C’est la raison pour laquelle les kératines
sont généralement extraites en présence d’agents réducteurs. Toutefois, cette étape de réduction est
chronophage et complexe. Le présent document spécifie une méthode alternative reposant sur la
sélection de peptides exempts de cystéine à titre de marqueurs d’identification, éliminant de ce fait la
nécessité d’avoir recours à l’étape de réduction et permettant une préparation rapide des échantillons
de LC-MS.
L’ISO 20418-1 et le présent document traitent tous deux de l’analyse par LC-MS, mais diffèrent quant
à la méthode d’extraction des peptides. Dans l’ISO 20418-1, les protéines sont dans un premier temps
extraites des fibres à l’aide d’une solution de thiourée/urée/dithiothréitol (DTT), puis sont coupées
par digestion à la trypsine afin d’obtenir des peptides. Dans le procédé décrit ici, les peptides sont
directement extraits par digestion à la trypsine des fibres réduites en poudre de manière mécanique.
Cette méthode s’est avérée très
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.