ISO 11701:2009

• Abstract:

  ISO 11701:2009 specifies a method for the quantitative determination of phospholipids content by high performance liquid chromatography (HPLC) using a diol column and a light-scattering detector. The method is applicable to crude, oil-containing lecithins, and to oil-free lecithins and lecithin fractions from vegetable fats and oils. The method is not applicable to animal and ruminant lecithins and enzymatically hydrolysed lecithins as the peak separation of lysophosphatidylethanolamine (LPE), lysophosphatidylinositol (LPI) and lysophosphatidic acid (LPA) is insufficient.

• Status: Published
• Publication Date: 02-Dec-2009
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9060 - Close of review
• Completion Date: 02-Sep-2031

• Consolidates: EN ISO 11701:2009 - Vegetable fats and oils - Determination of phospholipids content in lecithins by HPLC using a light-scattering detector (ISO 11701:2009)
• Effective Date: 12-Feb-2026

Overview

ISO 11701:2009, published by the International Organization for Standardization (ISO), specifies a standardized method for the quantitative determination of phospholipids content in lecithins derived from vegetable fats and oils. The method utilizes high performance liquid chromatography (HPLC) equipped with a diol column and a light-scattering detector. It is applicable to various types of lecithins, including crude, oil-containing, oil-free, and fractionated lecithins from vegetable origins. However, it is not suitable for animal, ruminant, or enzymatically hydrolysed lecithins, due to insufficient separation of certain phospholipids.

This international standard facilitates consistent, accurate, and reproducible results in laboratories and quality control settings, underpinning the integrity of food ingredients and supporting compliance with global best practices in the food and oils industry.

Key Topics

• Phospholipids Analysis
  The standard focuses on the measurement of key phospholipids such as N-acyl-phosphatidylethanolamine, phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine, phosphatidylinositol, and lysophosphatidylcholine.

• HPLC Methodology

  • Utilizes a diol-silica column for effective separation
  • Employs a light-scattering detector to identify and quantify phospholipids
  • Follows precise calibration and sample preparation procedures
  • Ensures accuracy through use of certified reference materials

• Scope of Application

  • Designed specifically for vegetable-derived lecithins
  • Not applicable to animal lecithins or enzymatically altered lecithins

• Precision and Repeatability

  • Includes guidelines to assure test repeatability and reproducibility across laboratories
  • Provides standard procedures for calibration and reporting

Applications

ISO 11701:2009 provides crucial guidance for several sectors:

• Quality Control in Food Manufacturing
  Ensures that lecithin ingredients meet required phospholipid content standards, supporting product consistency and regulatory compliance.

• Ingredient Authentication
  Facilitates the verification of lecithin source and composition, helping detect adulteration or mislabeling in vegetable oils and fats.

• Research and Product Development
  Supports R&D in refining lecithin extraction processes, improving functional or nutritional properties of food ingredients.

• Laboratory Analysis and Accreditation
  Laboratories seeking accreditation or optimizing their internal protocols use this method for reliable, cross-comparable data.

Related Standards

For full implementation and broader context, the following standards are also relevant:

• ISO 661 - Animal and vegetable fats and oils - Preparation of test sample
• ISO 5555 - Animal and vegetable fats and oils - Sampling
• ISO 1042 - Laboratory glassware - One-mark volumetric flasks
• ISO 5725-1 & ISO 5725-2 - Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results

By adopting ISO 11701:2009, organizations can ensure robust, transparent, and international best-practice methods for phospholipids determination in vegetable lecithins using HPLC, reinforcing quality in the food and oils sector.

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11701
First edition
2009-12-15
Vegetable fats and oils — Determination
of phospholipids content in lecithins by
HPLC using a light-scattering detector
Corps gras d'origine végétale — Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par CLHP avec détecteur à diffusion
de la lumière
Reference number
©
ISO 2009
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

©  ISO 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2009 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle .1
5 Reagents .2
6 Apparatus.2
7 Sampling .3
8 Preparation of test sample .3
9 Procedure.3
10 Calculation and expression of results .5
11 Precision of the method.5
12 Test report.6
Annex A (informative) HPLC chromatogram.7
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test .8
Bibliography.11

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11701 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
iv © ISO 2009 – All rights reserved

INTERNATIONAL STANDARD ISO 11701:2009(E)

Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids
content in lecithins by HPLC using a light-scattering detector
1 Scope
This International Standard specifies a method for the quantitative determination of phospholipids content by
high performance liquid chromatography (HPLC) using a diol column and a light-scattering detector.
The method is applicable to crude, oil-containing lecithins, and to oil-free lecithins and lecithin fractions from
vegetable fats and oils.
The method is not applicable to animal and ruminant lecithins and enzymatically hydrolysed lecithins as the
peak separation of lysophosphatidylethanolamine (LPE), lysophosphatidylinositol (LPI) and lysophosphatidic
acid (LPA) is insufficient.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
content of an individual phospholipid
mass fraction of N-acyl-phosphatidylethanolamine (N-acyl-PE) or phosphatidylcholine (PC) or
phosphatidylethanolamine (PE) or phosphatidylinositol (PI) or phosphatidic acid (PA) or
lysophosphatidylcholine (LPC), determined in accordance with the method specified in this International
Standard
NOTE The content is expressed in grams per 100 g, numerically equal to a percentage mass fraction.
4 Principle
The individual phospholipids are separated by HPLC using a diol column and a light-scattering detector. For
the purpose of quantification, a certified reference mixture is used.
5 Reagents
WARNING — Comply with any local regulations which specify the handling of hazardous substances.
Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Water, HPLC grade.
5.2 n-Hexane, HPLC grade.
5.3 2-Propanol, HPLC grade.
5.4 Acetic acid, w , 99,8 % mass fraction.
min
5.5 Triethylamine.
5.6 Solvent mixture: A mixture of 80 ml n-hexane (5.2) and 20 ml 2-propanol (5.3) (volume fraction
ϕ = 80 ml/100 ml for n-hexane and ϕ = 20 ml/100 ml for 2-propanol) is used to dissolve the standards and
sample.
1)
5.7 Reference substance (external standard) ILPS-LE01 , mixed soy phospholipid reference standard,
is a certified reference mixture with defined contents of N-acyl-PE, PA, PE, PC, PI, and LPC.
5.8 Mobile phase for the HPLC.
5.8.1 Eluent A. Mix 814,2 ml of n-hexane (5.2), 170,0 ml of 2-propanol (5.3), 15 ml of acetic acid (5.4), and
0,8 ml of triethylamine (5.5) (volume fraction ϕ = 81,42 ml/100 ml for n-hexane, ϕ = 17,00 ml/100 ml for 2-
propanol, ϕ = 1,50 ml/100 ml for acetic acid, and ϕ = 0,08 ml/100 ml for triethylamine).
In order to obtain a reproducible eluent composition, it is recommended that the solvents be weighed out
taking into account their densities. For a batch size of 2,5 l: 1 341,4 g of n-hexane, 331,5 g of 2-propanol,
39,4 g of acetic acid, and 1,45 g (2,0 ml) of triethylamine.
5.8.2 Eluent B. Mix 844,2 ml of 2-propanol (5.3), 140 ml of water (5.1), 15,0 ml of acetic acid (5.4) and
0,8 ml of triethylamine (5.5) (volume fraction ϕ = 84,42 ml/100ml for 2-propanol, ϕ = 14,00 ml/100 ml for water,
ϕ = 1,50 ml/100 ml for acetic acid and ϕ = 0,08 ml/100 ml for triethylamine).
In order to obtain a reproducible eluent composition, it is recommended that the solvents be weighed out
taking into account their densities. For a batch size of 2,5 l: 1 646,2 g of 2-propanol, 350,0 g of water, 39,4 g
of acetic acid and 1,45 g (2,0 ml) of triethylamine.
6 Apparatus
6.1 Analytical balance, capable of being read to the nearest 0,000 1 g.
6.2 HPLC basic equipment with gradient system and light-scattering detector.
6.3 HPLC column oven, adjustable to 55 °C.
6.4 Degasser or similar equipment for degassing the eluent.

1) ILPS-LE01 is the trade name of a product supplied by the International Lecithin and Phospholipid Society. This
information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by
ISO of the product named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to comparable results.
2 © ISO 2009 – All rights reserved

6.5 HPLC column (250 mm × 4,0 mm) with pre-column (20 mm × 4,0 mm) packed with spherical
2)
microparticles (5 µm) of diol-bounded silica, e.g. LiChrospher 100 diol (5 µm) . The age and history of the
column, the packaging of the column filling material and the temperature may influence the separation.
[1]
6.6 One-mark volumetric flasks, of capacities 50 ml, 100 ml and 2 500 ml, ISO 1042 class A.
6.7 Microlitre syringe, of capacity 25 µl, graduated in microlitres.
3)
6.8 Filter for filtering the external standard and test sample solutions, e.g. Millex HV .
6.9 Integration system.
7 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
[2]
is given in ISO 5555 .
8 Preparation of test sample
See ISO 661.
The sample is heated to a maximum of 60 °C to soften it (overheating shall be avoided) and then
homogenized by vigorous stirring.
9 Procedure
9.1 Preparation of standard reference solutions and test portions
9.1.1 Standard reference solutions R , R , and R
1 2 3
Prepare three different standard reference solutions. For this purpose, accurately weigh out in three different
100 ml one-mark volumetric flasks approximately 550 mg, 850 mg and 1 150 mg of t
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11701
First edition
2009-12-15
Vegetable fats and oils — Determination
of phospholipids content in lecithins by
HPLC using a light-scattering detector
Corps gras d'origine végétale — Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par CLHP avec détecteur à diffusion
de la lumière
Reference number
©
ISO 2009
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

©  ISO 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2009 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle .1
5 Reagents .2
6 Apparatus.2
7 Sampling .3
8 Preparation of test sample .3
9 Procedure.3
10 Calculation and expression of results .5
11 Precision of the method.5
12 Test report.6
Annex A (informative) HPLC chromatogram.7
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test .8
Bibliography.11

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11701 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
iv © ISO 2009 – All rights reserved

INTERNATIONAL STANDARD ISO 11701:2009(E)

Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids
content in lecithins by HPLC using a light-scattering detector
1 Scope
This International Standard specifies a method for the quantitative determination of phospholipids content by
high performance liquid chromatography (HPLC) using a diol column and a light-scattering detector.
The method is applicable to crude, oil-containing lecithins, and to oil-free lecithins and lecithin fractions from
vegetable fats and oils.
The method is not applicable to animal and ruminant lecithins and enzymatically hydrolysed lecithins as the
peak separation of lysophosphatidylethanolamine (LPE), lysophosphatidylinositol (LPI) and lysophosphatidic
acid (LPA) is insufficient.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
content of an individual phospholipid
mass fraction of N-acyl-phosphatidylethanolamine (N-acyl-PE) or phosphatidylcholine (PC) or
phosphatidylethanolamine (PE) or phosphatidylinositol (PI) or phosphatidic acid (PA) or
lysophosphatidylcholine (LPC), determined in accordance with the method specified in this International
Standard
NOTE The content is expressed in grams per 100 g, numerically equal to a percentage mass fraction.
4 Principle
The individual phospholipids are separated by HPLC using a diol column and a light-scattering detector. For
the purpose of quantification, a certified reference mixture is used.
5 Reagents
WARNING — Comply with any local regulations which specify the handling of hazardous substances.
Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Water, HPLC grade.
5.2 n-Hexane, HPLC grade.
5.3 2-Propanol, HPLC grade.
5.4 Acetic acid, w , 99,8 % mass fraction.
min
5.5 Triethylamine.
5.6 Solvent mixture: A mixture of 80 ml n-hexane (5.2) and 20 ml 2-propanol (5.3) (volume fraction
ϕ = 80 ml/100 ml for n-hexane and ϕ = 20 ml/100 ml for 2-propanol) is used to dissolve the standards and
sample.
1)
5.7 Reference substance (external standard) ILPS-LE01 , mixed soy phospholipid reference standard,
is a certified reference mixture with defined contents of N-acyl-PE, PA, PE, PC, PI, and LPC.
5.8 Mobile phase for the HPLC.
5.8.1 Eluent A. Mix 814,2 ml of n-hexane (5.2), 170,0 ml of 2-propanol (5.3), 15 ml of acetic acid (5.4), and
0,8 ml of triethylamine (5.5) (volume fraction ϕ = 81,42 ml/100 ml for n-hexane, ϕ = 17,00 ml/100 ml for 2-
propanol, ϕ = 1,50 ml/100 ml for acetic acid, and ϕ = 0,08 ml/100 ml for triethylamine).
In order to obtain a reproducible eluent composition, it is recommended that the solvents be weighed out
taking into account their densities. For a batch size of 2,5 l: 1 341,4 g of n-hexane, 331,5 g of 2-propanol,
39,4 g of acetic acid, and 1,45 g (2,0 ml) of triethylamine.
5.8.2 Eluent B. Mix 844,2 ml of 2-propanol (5.3), 140 ml of water (5.1), 15,0 ml of acetic acid (5.4) and
0,8 ml of triethylamine (5.5) (volume fraction ϕ = 84,42 ml/100ml for 2-propanol, ϕ = 14,00 ml/100 ml for water,
ϕ = 1,50 ml/100 ml for acetic acid and ϕ = 0,08 ml/100 ml for triethylamine).
In order to obtain a reproducible eluent composition, it is recommended that the solvents be weighed out
taking into account their densities. For a batch size of 2,5 l: 1 646,2 g of 2-propanol, 350,0 g of water, 39,4 g
of acetic acid and 1,45 g (2,0 ml) of triethylamine.
6 Apparatus
6.1 Analytical balance, capable of being read to the nearest 0,000 1 g.
6.2 HPLC basic equipment with gradient system and light-scattering detector.
6.3 HPLC column oven, adjustable to 55 °C.
6.4 Degasser or similar equipment for degassing the eluent.

1) ILPS-LE01 is the trade name of a product supplied by the International Lecithin and Phospholipid Society. This
information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by
ISO of the product named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to comparable results.
2 © ISO 2009 – All rights reserved

6.5 HPLC column (250 mm × 4,0 mm) with pre-column (20 mm × 4,0 mm) packed with spherical
2)
microparticles (5 µm) of diol-bounded silica, e.g. LiChrospher 100 diol (5 µm) . The age and history of the
column, the packaging of the column filling material and the temperature may influence the separation.
[1]
6.6 One-mark volumetric flasks, of capacities 50 ml, 100 ml and 2 500 ml, ISO 1042 class A.
6.7 Microlitre syringe, of capacity 25 µl, graduated in microlitres.
3)
6.8 Filter for filtering the external standard and test sample solutions, e.g. Millex HV .
6.9 Integration system.
7 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
[2]
is given in ISO 5555 .
8 Preparation of test sample
See ISO 661.
The sample is heated to a maximum of 60 °C to soften it (overheating shall be avoided) and then
homogenized by vigorous stirring.
9 Procedure
9.1 Preparation of standard reference solutions and test portions
9.1.1 Standard reference solutions R , R , and R
1 2 3
Prepare three different standard reference solutions. For this purpose, accurately weigh out in three different
100 ml one-mark volumetric flasks approximately 550 mg, 850 mg and 1 150 mg of t
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 11701
Première édition
2009-12-15
Corps gras d'origine végétale —
Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par
CLHP avec détecteur à diffusion de la
lumière
Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids content in
lecithins by HPLC using a light-scattering detector

Numéro de référence
©
ISO 2009
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2009
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2009 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Principe .1
5 Réactifs.2
6 Appareillage .2
7 Échantillonnage.3
8 Préparation de l'échantillon pour essai .3
9 Mode opératoire.3
10 Calcul et expression des résultats .5
11 Fidélité de la méthode.5
12 Rapport d'essai.6
Annexe A (informative) Chromatogramme de CLHP.7
Annexe B (informative) Résultats d'un essai interlaboratoires .8
Bibliographie.11

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11701 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
iv © ISO 2009 – Tous droits réservés

NORME INTERNATIONALE ISO 11701:2009(F)

Corps gras d'origine végétale — Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par CLHP avec détecteur à
diffusion de la lumière
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dosage quantitatif des phospholipides par
chromatographie liquide à haute performance (CLHP) en utilisant une colonne de diol et un détecteur à
diffusion de la lumière.
La méthode est applicable aux lécithines brutes contenant de l'huile, aux lécithines exemptes d'huile et aux
fractions de lécithine provenant de corps gras d'origine végétale.
La méthode n'est applicable ni aux lécithines d'origine animale et provenant de ruminants, ni aux lécithines
hydrolysées par des enzymes, la séparation des pics de la lysophosphatidyléthanolamine (LPE), du
lysophosphatidylinositol (LPI) et de l'acide lysophosphatidique (LPA) étant insuffisante.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en phospholipide individuel
fraction massique de N-acyl-phosphatidyléthanolamine (N-acyl-PE), ou de phosphatidylcholine (PC) ou de
phosphatidyléthanolamine (PE) ou de phosphatidylinositol (PI) ou d'acide phosphatidique (PA) ou de
lysophosphatidylcholine (LPC), déterminée conformément à la méthode spécifiée dans la présente Norme
internationale
NOTE La teneur est exprimée en grammes par 100 g, numériquement égale à une fraction massique en
pourcentage.
4 Principe
Les phospholipides individuels sont séparés par CLHP en utilisant une colonne de diol et un détecteur à
diffusion de la lumière. Pour la quantification, un mélange de référence certifié est utilisé.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Se conformer aux réglementations locales spécifiant comment manipuler les
substances dangereuses. Des mesures de sécurité d'ordre technique, organisationnel et personnel
doivent être suivies.
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue.
5.1 Eau, de qualité CLHP.
5.2 n-Hexane, de qualité CLHP.
5.3 2-Propanol, de qualité CLHP.
5.4 Acide acétique, w , fraction massique 99,8 %.
min
5.5 Triéthylamine.
5.6 Mélange solvant: Un mélange de 80 ml de n-hexane (5.2) et de 20 ml de 2-propanol (5.3) (fraction
volumique ϕ = 80 ml/100 ml de n-hexane et ϕ = 20 ml/100 ml de 2-propanol) est utilisé pour dissoudre les
étalons et l'échantillon.
1)
5.7 Substance de référence (étalon externe) ILPS-LE01 , étalon de référence constitué d'un mélange
de phospholipides de soja, qui est un mélange de référence certifié ayant une teneur définie en N-acyl-PE,
PA, PE, PC, PI et LPC.
5.8 Phase mobile de CLHP.
5.8.1 Éluant A: Mélanger 814,2 ml de n-hexane (5.2), 170,0 ml de 2-propanol (5.3), 15 ml d'acide
acétique (5.4) et 0,8 ml de triéthylamine (5.5) (fraction volumique ϕ = 81,42 ml/100 ml de n-hexane,
ϕ = 17,00 ml/100 ml de 2-propanol, ϕ = 1,50 ml/100 ml d'acide acétique et ϕ = 0,08 ml/100 ml de
triéthylamine).
Pour obtenir une composition d'éluant reproductible, il est recommandé de peser les solvants en tenant
compte de leur masse volumique. Pour une taille de lot de 2,5 l: 1 341,4 g de n-hexane, 331,5 g de
2-propanol, 39,4 g d'acide acétique et 1,45 g (2,0 ml) de triéthylamine.
5.8.2 Éluant B: Mélanger 844,2 ml de 2-propanol (5.3), 140 ml d'eau (5.1), 15,0 ml d'acide acétique (5.4) et
0,8 ml de triéthylamine (5.5) (fraction volumique ϕ = 84,42 ml/100 ml de 2-propanol, ϕ = 14,00 ml/100 ml
d'eau, ϕ = 1,50 ml/100 ml d'acide acétique et ϕ = 0,08 ml/100 ml de triéthylamine).
Pour obtenir une composition d'éluant reproductible, il est recommandé de peser les solvants en tenant
compte de leur masse volumique. Pour une taille de lot de 2,5 l: 1 646,2 g de 2-propanol, 350,0 g d'eau,
39,4 g d'acide acétique et 1,45 g (2,0 ml) de triéthylamine.
6 Appareillage
6.1 Balance analytique, pouvant être lue à 0,000 1 g près.

1) ILPS-LE01 est l'appellation commerciale d'un produit fourni par l'International Lecithin and Phospholipid Society. Cette
information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO
approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est
démontré qu'ils conduisent aux mêmes résultats.
2 © ISO 2009 – Tous droits réservés

6.2 Équipement classique de CLHP équipé d'une pompe à gradient et d'un détecteur à diffusion de la
lumière.
6.3 Four pour colonne CLHP, réglable à 55 °C.
6.4 Dégazeur ou équipement similaire permettant de dégazer l'éluant.
6.5 Colonne CLHP (250 mm × 4,0 mm) avec pré-colonne (20 mm × 4,0 mm) garnie de microparticules
2)
sphériques (5 µm) de silice greffée diol, par exemple LiChrospher 100 diol (5 µm) . L'âge et les antécédents
de la colonne, le conditionnement du matériau de garnissage de la colonne et la température peuvent avoir
une incidence sur la séparation.
[1]
6.6 Fioles jaugées à un trait, de capacités 50 ml, 100 ml et 2 500 ml, ISO 1042 classe A.
6.7 Seringue, de capacité 25 µl, graduée en microlitres.
6.8 Filtre permettant de filtrer les solutions d'étalon externe et d'échantillon pour essai, par exemple
3)
Millex HV .
6.9 Système d'intégration.
7 Échantillonnage
Il convient qu'un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire. Il convient qu'il n'ait été ni endommagé
ni modifié au cours du transport ou du stockage.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
[2]
méthode d'échantillonnage recommandée est indiquée dans l'ISO 5555 .
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Voir l'ISO 661.
Pour ramollir l'échantillon, le faire chauffer jusqu'à 60 °C maximum (éviter de le surchauffer), puis
l'homogénéiser en l'agitant vigoureusement.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation des solutions étalons de référence et des prises d'essai
9.1.1 Solutions étalons de référence R , R et R
1 2 3
Préparer trois solutions étalons de référence différentes. Pour ce faire, peser avec exactitude dans trois fioles
jaugées de 100 ml approximativement 550 mg, 850 mg et 1 150 mg de la substance de référence
certifiée (5.7), dissoudre dans le mélange solvant (5.6) et compléter au trait avec le même solvant.
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 11701
Première édition
2009-12-15
Corps gras d'origine végétale —
Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par
CLHP avec détecteur à diffusion de la
lumière
Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids content in
lecithins by HPLC using a light-scattering detector

Numéro de référence
©
ISO 2009
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2009
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2009 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Principe .1
5 Réactifs.2
6 Appareillage .2
7 Échantillonnage.3
8 Préparation de l'échantillon pour essai .3
9 Mode opératoire.3
10 Calcul et expression des résultats .5
11 Fidélité de la méthode.5
12 Rapport d'essai.6
Annexe A (informative) Chromatogramme de CLHP.7
Annexe B (informative) Résultats d'un essai interlaboratoires .8
Bibliographie.11

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11701 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
iv © ISO 2009 – Tous droits réservés

NORME INTERNATIONALE ISO 11701:2009(F)

Corps gras d'origine végétale — Détermination de la teneur en
phospholipides dans les lécithines par CLHP avec détecteur à
diffusion de la lumière
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dosage quantitatif des phospholipides par
chromatographie liquide à haute performance (CLHP) en utilisant une colonne de diol et un détecteur à
diffusion de la lumière.
La méthode est applicable aux lécithines brutes contenant de l'huile, aux lécithines exemptes d'huile et aux
fractions de lécithine provenant de corps gras d'origine végétale.
La méthode n'est applicable ni aux lécithines d'origine animale et provenant de ruminants, ni aux lécithines
hydrolysées par des enzymes, la séparation des pics de la lysophosphatidyléthanolamine (LPE), du
lysophosphatidylinositol (LPI) et de l'acide lysophosphatidique (LPA) étant insuffisante.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en phospholipide individuel
fraction massique de N-acyl-phosphatidyléthanolamine (N-acyl-PE), ou de phosphatidylcholine (PC) ou de
phosphatidyléthanolamine (PE) ou de phosphatidylinositol (PI) ou d'acide phosphatidique (PA) ou de
lysophosphatidylcholine (LPC), déterminée conformément à la méthode spécifiée dans la présente Norme
internationale
NOTE La teneur est exprimée en grammes par 100 g, numériquement égale à une fraction massique en
pourcentage.
4 Principe
Les phospholipides individuels sont séparés par CLHP en utilisant une colonne de diol et un détecteur à
diffusion de la lumière. Pour la quantification, un mélange de référence certifié est utilisé.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Se conformer aux réglementations locales spécifiant comment manipuler les
substances dangereuses. Des mesures de sécurité d'ordre technique, organisationnel et personnel
doivent être suivies.
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue.
5.1 Eau, de qualité CLHP.
5.2 n-Hexane, de qualité CLHP.
5.3 2-Propanol, de qualité CLHP.
5.4 Acide acétique, w , fraction massique 99,8 %.
min
5.5 Triéthylamine.
5.6 Mélange solvant: Un mélange de 80 ml de n-hexane (5.2) et de 20 ml de 2-propanol (5.3) (fraction
volumique ϕ = 80 ml/100 ml de n-hexane et ϕ = 20 ml/100 ml de 2-propanol) est utilisé pour dissoudre les
étalons et l'échantillon.
1)
5.7 Substance de référence (étalon externe) ILPS-LE01 , étalon de référence constitué d'un mélange
de phospholipides de soja, qui est un mélange de référence certifié ayant une teneur définie en N-acyl-PE,
PA, PE, PC, PI et LPC.
5.8 Phase mobile de CLHP.
5.8.1 Éluant A: Mélanger 814,2 ml de n-hexane (5.2), 170,0 ml de 2-propanol (5.3), 15 ml d'acide
acétique (5.4) et 0,8 ml de triéthylamine (5.5) (fraction volumique ϕ = 81,42 ml/100 ml de n-hexane,
ϕ = 17,00 ml/100 ml de 2-propanol, ϕ = 1,50 ml/100 ml d'acide acétique et ϕ = 0,08 ml/100 ml de
triéthylamine).
Pour obtenir une composition d'éluant reproductible, il est recommandé de peser les solvants en tenant
compte de leur masse volumique. Pour une taille de lot de 2,5 l: 1 341,4 g de n-hexane, 331,5 g de
2-propanol, 39,4 g d'acide acétique et 1,45 g (2,0 ml) de triéthylamine.
5.8.2 Éluant B: Mélanger 844,2 ml de 2-propanol (5.3), 140 ml d'eau (5.1), 15,0 ml d'acide acétique (5.4) et
0,8 ml de triéthylamine (5.5) (fraction volumique ϕ = 84,42 ml/100 ml de 2-propanol, ϕ = 14,00 ml/100 ml
d'eau, ϕ = 1,50 ml/100 ml d'acide acétique et ϕ = 0,08 ml/100 ml de triéthylamine).
Pour obtenir une composition d'éluant reproductible, il est recommandé de peser les solvants en tenant
compte de leur masse volumique. Pour une taille de lot de 2,5 l: 1 646,2 g de 2-propanol, 350,0 g d'eau,
39,4 g d'acide acétique et 1,45 g (2,0 ml) de triéthylamine.
6 Appareillage
6.1 Balance analytique, pouvant être lue à 0,000 1 g près.

1) ILPS-LE01 est l'appellation commerciale d'un produit fourni par l'International Lecithin and Phospholipid Society. Cette
information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO
approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est
démontré qu'ils conduisent aux mêmes résultats.
2 © ISO 2009 – Tous droits réservés

6.2 Équipement classique de CLHP équipé d'une pompe à gradient et d'un détecteur à diffusion de la
lumière.
6.3 Four pour colonne CLHP, réglable à 55 °C.
6.4 Dégazeur ou équipement similaire permettant de dégazer l'éluant.
6.5 Colonne CLHP (250 mm × 4,0 mm) avec pré-colonne (20 mm × 4,0 mm) garnie de microparticules
2)
sphériques (5 µm) de silice greffée diol, par exemple LiChrospher 100 diol (5 µm) . L'âge et les antécédents
de la colonne, le conditionnement du matériau de garnissage de la colonne et la température peuvent avoir
une incidence sur la séparation.
[1]
6.6 Fioles jaugées à un trait, de capacités 50 ml, 100 ml et 2 500 ml, ISO 1042 classe A.
6.7 Seringue, de capacité 25 µl, graduée en microlitres.
6.8 Filtre permettant de filtrer les solutions d'étalon externe et d'échantillon pour essai, par exemple
3)
Millex HV .
6.9 Système d'intégration.
7 Échantillonnage
Il convient qu'un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire. Il convient qu'il n'ait été ni endommagé
ni modifié au cours du transport ou du stockage.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
[2]
méthode d'échantillonnage recommandée est indiquée dans l'ISO 5555 .
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Voir l'ISO 661.
Pour ramollir l'échantillon, le faire chauffer jusqu'à 60 °C maximum (éviter de le surchauffer), puis
l'homogénéiser en l'agitant vigoureusement.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation des solutions étalons de référence et des prises d'essai
9.1.1 Solutions étalons de référence R , R et R
1 2 3
Préparer trois solutions étalons de référence différentes. Pour ce faire, peser avec exactitude dans trois fioles
jaugées de 100 ml approximativement 550 mg, 850 mg et 1 150 mg de la substance de référence
certifiée (5.7), dissoudre dans le mélange solvant (5.6) et compléter au trait avec le même solvant.
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 11701
Первое издание
2009-12-15
Жиры и масла растительные.
Определение содержания
фосфолипидов в лецитинах методом
жидкостной хроматографии высокого
разрешения (HPLC) с использованием
детектора рассеянного света
Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids content in
lecithins by HPLC using a light-scattering detector

Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2009
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2009 – Все права сохраняются

Содержание Страница
Предисловие .iv
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Принцип.1
5 Реактивы .2
6 Аппаратура.2
7 Отбор проб.3
8 Подготовка пробы для испытания .3
9 Методика .3
10 Расчет и выражение результатов .5
11 Прецизионность метода.5
12 Протокол испытания.6
Приложение A (информативное) HPLC хроматограмма.7
Приложение B (информативное) Результаты межлабораторного испытания .8
Библиография.11

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член ISO, заинтересованный
в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в
этом комитете. Международные организации, правительственные и неправительственные, имеющие
связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO непосредственно сотрудничает с
Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам электротехнической
стандартизации.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 11701 разработан Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 11,
Жиры и масла животные и растительные.

iv © ISO 2009 – Все права сохраняются

МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 11701:2009(R)

Жиры и масла растительные. Определение содержания
фосфолипидов в лецитинах методом жидкостной
хроматографии высокого разрешения (HPLC) с
использованием детектора рассеянного света
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод количественного определения содержания
фосфолипидов методом жидкостной хроматографии высокого разрешения (HPLC) с использованием
диоловой колонки и детектора рассеянного света.
Данный метод применим к неочищенным маслосодержащим лецитинам, не содержащим масла
лецитинам и лецитиновым фракциям из растительных жиров и масел.
Метод не применим к животным и жвачным лецитинам, а также к ферментативно гидролизованным
лецитинам, поскольку разделение пиков лизофосфатидилэтаноламина (LPE), лизофосфатидилинозитола
(LPI) и лизофосфатидной кислоты (LPA) неудовлетворительно.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 661, Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания
3 Термины и определения
Применительно к этому документу используются следующие термины и определения.
3.1
содержание отдельного фосфолипида
content of an individual phospholipid
массовая доля N-ацилфосфатидилэтаноламина (N-acyl-PE) или фосфатидилхолина (PC) или
фосфатидилэтаноламина (PE) или фосфатидилинозитола (PI) или фосфатидной кислоты (PA) или
лизофосфатидилхолина (LPC), определенная в соответствии с методом, установленным в данном
международном стандарте
ПРИМЕЧАНИЕ Это содержание выражают в граммах на 100 г, что численно равно массовой доле в процентах.
4 Принцип
Отдельные фосфолипиды разделяют с помощью HPLC, используя диоловую колонку и детектор
рассеянного света. Для количественного определения используют сертифицированную эталонную
смесь.
5 Реактивы
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Необходимо учитывать местные регламенты, в которых указываются
правила обращения с опасными веществами. Необходимо соблюдать меры по охране
здоровья и технике безопасности.
При анализе, если не оговорено иначе, используют только реактивы признанного аналитического
качества.
5.1 Вода, качества HPLC.
5.2 н-Гексан, качества HPLC.
5.3 2-Пропанол, качества HPLC.
5.4 Уксусная кислота, w , 99,8 % массовая доля.
min
5.5 Триэтиламин.
5.6 Смесь растворителей: Смесь 80 мл н-гексана (5.2) и 20 мл 2-пропанола (5.3) (объемная доля
ϕ = 80 мл/100 мл для н-гексана и ϕ = 20 мл/100 мл для 2-пропанола) используют для растворения
стандартов и пробы.
1)
5.7 Эталонное вещество (внешний стандарт) ILPS-LE01 , эталон смеси соевых фосфолипидов —
это сертифицированная эталонная смесь с заданным содержанием N-ацил-PE, PA, PE, PC, PI и LPC.
5.8 Подвижная фаза для HPLC.
5.8.1 Элюент A. Смешивают 814,2 мл н-гексана (5.2), 170,0 мл 2-пропанола (5.3), 15 мл уксусной
кислоты (5.4) и 0,8 мл триэтиламина (5.5) (объемная доля ϕ = 81,42 мл/100 мл для н-гексана,
ϕ = 17,00 мл/100 мл для 2-пропанола, ϕ = 1,50 мл/100 мл для уксусной кислоты и ϕ = 0,08 мл/100 мл
для триэтиламина).
Для получения воспроизводимого состава элюента рекомендуется взвешивать растворители с учетом
их плотности. Для объема партии 2,5 л: 1 341,4 г н-гексана, 331,5 г 2-пропанола, 39,4 г уксусной
кислоты и 1,45 г (2,0 мл) триэтиламина.
5.8.2 Элюент B. Смешивают 844,2 мл 2-пропанола (5.3), 140 мл воды (5.1), 15,0 мл уксусной кислоты
(5.4) и 0,8 мл триэтиламина (5.5) (объемная доля ϕ = 84,42 мл/100мл для 2-пропанола, ϕ = 14,00 мл/100 мл
для воды, ϕ = 1,50 мл/100 мл для уксусной кислоты и ϕ = 0,08 мл/100 мл для триэтиламина).
Для получения воспроизводимого состава элюента рекомендуется взвешивать растворители с учетом
их плотности. Для объема партии of 2,5 л: 1 646,2 г 2-пропанола, 350,0 г воды, 39,4 г уксусной кислоты
и 1,45 г (2,0 мл) триэтиламина.
6 Аппаратура
6.1 Аналитические весы, с возможностью считывания до 0,000 1 г.
6.2 Основное оборудование для HPLC с градиентной системой и детектором рассеянного света.
6.3 Термостат колонки для HPLC, регулируемый до 55 °C.

1) ILPS-LE01 — торговая марка продукта, поставляемого Международным обществом по лецитинам и
фосфолипидам. Эта информация дается для удобства пользователей данного международного стандарта и не
означает поддержки этого продукта со стороны ISO. Могут использоваться эквивалентные продукты при условии,
что они дают сравнимые результаты.
2 © ISO 2009 – Все права сохраняются

6.4 Аппарат для дегазации или аналогичное оборудование для дегазации элюента.
6.5 Колонка для HPLC (250 мм × 4,0 мм) с предколонкой (20 мм × 4,0 мм), заполненная
сферическими микрочастицами (5 мкм) диоксида кремния с диоловой связью, например, LiChrospher
2)
100 diol (5 мкм) . Срок службы и история колонки, заполнение колонки наполнителем и температура
могут оказывать влияние на разделение.
[1]
6.6 Мерные колбы с одной меткой, вместимостью 50 мл, 100 мл и 2 500 мл, ISO 1042 класс A.
6.7 Микрошприц, вместимостью 25 мкл, отградуированный в микролитрах.
6.8 Фильтр для фильтрования растворов внешнего стандарта и пробы для испытания, например,
3)
Millex HV .
6.9 Система интеграции.
7 Отбор проб
В лабораторию следует поставлять представительную пробу. Ёе не следует подвергать порче или
изменению во время транспортировки или хранения.
Отбор проб не включен в метод, установленный в этом международном стандарте. Рекомендуемый
[2]
метод отбора проб приводится в ISO 5555 .
8 Подготовка пробы для испытания
См. ISO 661.
Для размягчения пробы нагревают её максимум до 60 °C (необходимо избегать перегрева) и затем
гомогенизируют путем энергичного перемешивания.
9 Методика
9.1 Приготовление стандартных эталонных растворов и проб для анализа
9.1.1 Стандартные эталонные растворы R , R , и R
1 2 3
Готовят три различных стандартных эталонных раствора. Для этого точно взвешивают в три разные
мерные колбы с одной меткой вместимостью 100 мл примерно 550 мг, 850 мг и 1 150 мг
сертифицированной эталонной смеси (5.7), растворяют в сме
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 11701
Первое издание
2009-12-15
Жиры и масла растительные.
Определение содержания
фосфолипидов в лецитинах методом
жидкостной хроматографии высокого
разрешения (HPLC) с использованием
детектора рассеянного света
Vegetable fats and oils — Determination of phospholipids content in
lecithins by HPLC using a light-scattering detector

Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2009
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2009 – Все права сохраняются

Содержание Страница
Предисловие .iv
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Принцип.1
5 Реактивы .2
6 Аппаратура.2
7 Отбор проб.3
8 Подготовка пробы для испытания .3
9 Методика .3
10 Расчет и выражение результатов .5
11 Прецизионность метода.5
12 Протокол испытания.6
Приложение A (информативное) HPLC хроматограмма.7
Приложение B (информативное) Результаты межлабораторного испытания .8
Библиография.11

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член ISO, заинтересованный
в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в
этом комитете. Международные организации, правительственные и неправительственные, имеющие
связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO непосредственно сотрудничает с
Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам электротехнической
стандартизации.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 11701 разработан Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 11,
Жиры и масла животные и растительные.

iv © ISO 2009 – Все права сохраняются

МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 11701:2009(R)

Жиры и масла растительные. Определение содержания
фосфолипидов в лецитинах методом жидкостной
хроматографии высокого разрешения (HPLC) с
использованием детектора рассеянного света
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод количественного определения содержания
фосфолипидов методом жидкостной хроматографии высокого разрешения (HPLC) с использованием
диоловой колонки и детектора рассеянного света.
Данный метод применим к неочищенным маслосодержащим лецитинам, не содержащим масла
лецитинам и лецитиновым фракциям из растительных жиров и масел.
Метод не применим к животным и жвачным лецитинам, а также к ферментативно гидролизованным
лецитинам, поскольку разделение пиков лизофосфатидилэтаноламина (LPE), лизофосфатидилинозитола
(LPI) и лизофосфатидной кислоты (LPA) неудовлетворительно.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 661, Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания
3 Термины и определения
Применительно к этому документу используются следующие термины и определения.
3.1
содержание отдельного фосфолипида
content of an individual phospholipid
массовая доля N-ацилфосфатидилэтаноламина (N-acyl-PE) или фосфатидилхолина (PC) или
фосфатидилэтаноламина (PE) или фосфатидилинозитола (PI) или фосфатидной кислоты (PA) или
лизофосфатидилхолина (LPC), определенная в соответствии с методом, установленным в данном
международном стандарте
ПРИМЕЧАНИЕ Это содержание выражают в граммах на 100 г, что численно равно массовой доле в процентах.
4 Принцип
Отдельные фосфолипиды разделяют с помощью HPLC, используя диоловую колонку и детектор
рассеянного света. Для количественного определения используют сертифицированную эталонную
смесь.
5 Реактивы
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Необходимо учитывать местные регламенты, в которых указываются
правила обращения с опасными веществами. Необходимо соблюдать меры по охране
здоровья и технике безопасности.
При анализе, если не оговорено иначе, используют только реактивы признанного аналитического
качества.
5.1 Вода, качества HPLC.
5.2 н-Гексан, качества HPLC.
5.3 2-Пропанол, качества HPLC.
5.4 Уксусная кислота, w , 99,8 % массовая доля.
min
5.5 Триэтиламин.
5.6 Смесь растворителей: Смесь 80 мл н-гексана (5.2) и 20 мл 2-пропанола (5.3) (объемная доля
ϕ = 80 мл/100 мл для н-гексана и ϕ = 20 мл/100 мл для 2-пропанола) используют для растворения
стандартов и пробы.
1)
5.7 Эталонное вещество (внешний стандарт) ILPS-LE01 , эталон смеси соевых фосфолипидов —
это сертифицированная эталонная смесь с заданным содержанием N-ацил-PE, PA, PE, PC, PI и LPC.
5.8 Подвижная фаза для HPLC.
5.8.1 Элюент A. Смешивают 814,2 мл н-гексана (5.2), 170,0 мл 2-пропанола (5.3), 15 мл уксусной
кислоты (5.4) и 0,8 мл триэтиламина (5.5) (объемная доля ϕ = 81,42 мл/100 мл для н-гексана,
ϕ = 17,00 мл/100 мл для 2-пропанола, ϕ = 1,50 мл/100 мл для уксусной кислоты и ϕ = 0,08 мл/100 мл
для триэтиламина).
Для получения воспроизводимого состава элюента рекомендуется взвешивать растворители с учетом
их плотности. Для объема партии 2,5 л: 1 341,4 г н-гексана, 331,5 г 2-пропанола, 39,4 г уксусной
кислоты и 1,45 г (2,0 мл) триэтиламина.
5.8.2 Элюент B. Смешивают 844,2 мл 2-пропанола (5.3), 140 мл воды (5.1), 15,0 мл уксусной кислоты
(5.4) и 0,8 мл триэтиламина (5.5) (объемная доля ϕ = 84,42 мл/100мл для 2-пропанола, ϕ = 14,00 мл/100 мл
для воды, ϕ = 1,50 мл/100 мл для уксусной кислоты и ϕ = 0,08 мл/100 мл для триэтиламина).
Для получения воспроизводимого состава элюента рекомендуется взвешивать растворители с учетом
их плотности. Для объема партии of 2,5 л: 1 646,2 г 2-пропанола, 350,0 г воды, 39,4 г уксусной кислоты
и 1,45 г (2,0 мл) триэтиламина.
6 Аппаратура
6.1 Аналитические весы, с возможностью считывания до 0,000 1 г.
6.2 Основное оборудование для HPLC с градиентной системой и детектором рассеянного света.
6.3 Термостат колонки для HPLC, регулируемый до 55 °C.

1) ILPS-LE01 — торговая марка продукта, поставляемого Международным обществом по лецитинам и
фосфолипидам. Эта информация дается для удобства пользователей данного международного стандарта и не
означает поддержки этого продукта со стороны ISO. Могут использоваться эквивалентные продукты при условии,
что они дают сравнимые результаты.
2 © ISO 2009 – Все права сохраняются

6.4 Аппарат для дегазации или аналогичное оборудование для дегазации элюента.
6.5 Колонка для HPLC (250 мм × 4,0 мм) с предколонкой (20 мм × 4,0 мм), заполненная
сферическими микрочастицами (5 мкм) диоксида кремния с диоловой связью, например, LiChrospher
2)
100 diol (5 мкм) . Срок службы и история колонки, заполнение колонки наполнителем и температура
могут оказывать влияние на разделение.
[1]
6.6 Мерные колбы с одной меткой, вместимостью 50 мл, 100 мл и 2 500 мл, ISO 1042 класс A.
6.7 Микрошприц, вместимостью 25 мкл, отградуированный в микролитрах.
6.8 Фильтр для фильтрования растворов внешнего стандарта и пробы для испытания, например,
3)
Millex HV .
6.9 Система интеграции.
7 Отбор проб
В лабораторию следует поставлять представительную пробу. Ёе не следует подвергать порче или
изменению во время транспортировки или хранения.
Отбор проб не включен в метод, установленный в этом международном стандарте. Рекомендуемый
[2]
метод отбора проб приводится в ISO 5555 .
8 Подготовка пробы для испытания
См. ISO 661.
Для размягчения пробы нагревают её максимум до 60 °C (необходимо избегать перегрева) и затем
гомогенизируют путем энергичного перемешивания.
9 Методика
9.1 Приготовление стандартных эталонных растворов и проб для анализа
9.1.1 Стандартные эталонные растворы R , R , и R
1 2 3
Готовят три различных стандартных эталонных раствора. Для этого точно взвешивают в три разные
мерные колбы с одной меткой вместимостью 100 мл примерно 550 мг, 850 мг и 1 150 мг
сертифицированной эталонной смеси (5.7), растворяют в сме
...