ISO 3596-1:1988
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Determination of unsaponifiable matter — Part 1: Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of unsaponifiable matter — Part 1: Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur en matières insaponifiables — Partie 1: Méthode par extraction à l'oxyde diéthylique (méthode de référence)
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
ISO
INTERNATIONAL STANDARD 3596-1
First edition
1988-07-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXAYHAPOAHAR OPTAHM3AQMR fl0 CTAHflAPTM3A~MM
Animal and vegetable fats and oils - Determination
of unsaponifiable matter -
Part 1 :
Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Determination de Ia teneur en mati&res
Corps gras d’origines animale et vt!g&ale -
insaponifiables -
Partie 1 : Methode par extraction & l’oxyde di&thylique fmethode de reference)
Reference number
ISO 3596-1: 1988 (E)
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ISO 35964 : 1988 (El
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO prepared Tech nical Committee
3596- 1 was ISO/TC 34,
bY
Agricultural food products.
ISO 3596 consists of the following Parts, under the general title Animaland vegetable
fats and oils - Determination of unsaponifiable matter:
Part I : Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Part 2 : Rapid method using hexane extraction
Annex A of this part of ISO 3596 is for information only.
0
0 International Organkation for Standardkation, 1988
Printed in Switzerland
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ISO 35964 : 1988 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Animal and vegetable fats and oils - Determination
of unsaponifiable matter -
Part 1 :
Method using diethyl ether extraction (Reference method)
hydroxide and extraction by a specified solvent, are not volatile
1 Scope
under the specified operating conditions.
This part of ISO 3596 specifies the reference method using
diethyl ether extraction for the determination of the un-
NOTE - The unsaponifiable matter inciudes lipids of natura1 origin
saponifiable matter content of animal and vegetable fats and
such as sterols, higher hydrocarbons and alcohols, aliphatic and
oils.
terpenic alcohols, as well as any foreign organic matter extracted by
the solvent and not volatile at 103 OC (e.g. mineral oils) that may be
This method is not applicable to waxes and moreover gives ap- present.
proximate resuits with certain fats of high unsaponifiable mat-
ter content, for example with fats derived from marine animals.
Annex A describes a method using nine hexane extractions
4 Principle
which gives similar results for many animal and vegetable fats
and oils, but because of differentes of solubility of some consti-
Saponification of the fat or oil by boiling under reflux with an
tuents of the unsaponifiable matter in the two solvents, the
ethanolic potassium hydroxide solution. Extraction of the un-
results may not be identical, the hexane method giving lower
saponifiable matter from the soap Solution by diethyl ether.
results. The hexane method may be used when climatic condi-
Evaporation of the solvent and weighing of the residue after
tions, or regulations, do not permit the use of diethyl ether.
drying.
2 Normative references
5 Reagents
The following Standards contain provisions which, through
reference in this text, constitute provisions of this part of
All reagents shall be of recognized analytical grade. The water
ISO 3596. At the time of publication, the editions indicated
used shall be distilled water or water of at least equivalent
were valid. All Standards are subject to revision, and Parties to
purity.
agreements based on this part of ISO 3596 are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions
of the Standards listed below. Members of IEC and ISO main-
5.1 Diethyl ether, freshly distilled, free from Peroxides and
tain registers of currently valid International Standards.
residue.
ISO 661 : 1980, Animal and vegetable fats and oh - Prepara-
tion 0 f test Sample.
5.2 Acetone.
ISO 5555 : 1983, Animal and vegetable fats and oils - Sam-
pling.
5.3 Potassium hydroxide, ethanolic Solution,
c(KOH) = 1 mol/l.
3 Definition
Dissolve 60 g of potassium hydroxide in 50 ml of water and
dilute to 1 000 ml with 95 % 1 Vi VI ethanol. The Solution
For the purposes of this part of ISO 3!36, the following
should be colourless or straw-yellow.
definition applies.
unsaponifiable matter : All the substances present in the pro-
5.4 Potassium hydroxide, aqueous Solution,
duct which, after saponification of the latter by potassium c(KOH) = 0,5 mol/l.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 3596-1 : 1988 (El
these rinsings into the separating funnel. Stopper and Shake
5.5 Phenolphthalein, 10 g/l solution in 95 % (VW)
vigorously for 1 min, periodically releasing pressure by invert-
ethanol.
ing the separating funnel and cautiously opening the stopcock.
Allow to stand until there is complete Separation of the two
6 Apparatus phases. Then run off the lower layer as completely as possible
into a second separating funnel.
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
NOTE - If an emulsion is formed, destroy it by adding small quantities
of ethanol or concentrated potassium hydroxide or sodium chloride
6.1 Round-bottomed flasks, of 250 ml capacity, with
solution.
ground neck.
Extract the aqueous ethanolic soap Solution twice more, each
time in the same way with 100 ml of the diethyl ether. Collect
6.2 Reflux condenser, with ground joint to fit the flasks
the three ether extracts in one separating funnel containing 40
(6.1).
ml of water.
with stopcock
63 Separating funnels, of 500 ml capacity,
9.4 Washing of the ethereal extract
and stopper made of polytetrafluoroethylene.
Gently rotate the separating funnel conta ining combined
the
6.4 Boiling watet--bath.
extracts and the 40 ml of water.
NOTE - Violent shaking at this Stage may result in emulsions.
Oven, capable of being maintained at 103 OC + 2 OC.
6.5
Allow the layers to separate completely and draw off the lower
aqueous layer. Wash the ethereal Solution twice more with
7 Sampling 40 ml portions of water, shaking vigorously each time and
discarding the lower aqueous layer after Separation. Draw off
each washing Solution leaving 2 ml, then rotate the separating
Sampling shall be carried out in accordance with ISO 5555.
funnel around its axis. Wait some minutes to allow the remain-
ing aqueous layer to collect. Draw this off, closing the stopcock
when the ethereal Solution reaches the bore of the stopcock.
8 Preparation of the test Sample
Wash the ethereal Solution successively with 40 ml of the
Prepare the test Sample in accordance with ISO 661.
potassium hydroxide Solution (5.41, 40 ml of water, and again
with 40 ml of potassium hydroxide Solution, then at least twice
more with 40 ml of water.
9 Procedure
Continue to wash with water until the washings no longer give
a pink colour on the addition of a drop of the phenolphthalein
Solution (5.5).
9.1 Test Portion
Weigh, to the nearest 0,Ol g, about 5 g of the test Sample
9.5 Evaporation of the solvent
(clause 8) into. ab250 ml flask (6.1).
Transfer the ethereal Solution quantitatively, a Iittle at a time,
through the top of the separating funnel into a 250 ml flask
9.2 Saponification
(6.11, previously dried at 103 OC + 2 OC in the oven (6.5),
cooled and weighed to the nearest 0,l mg. Evaporate the sol-
Add 50 ml of the potassium hydroxide Solution (5.3) and a few
vent on a boiling water-bath (6.4).
anti-bumping granules. Attach the reflux condenser (6.2) to the
flask and boil the contents gently for 1 h. Stop heating. Add
Add 5 ml of acetone (5.2) and evaporate the volatile solvent
100 ml of water through the top of the condenser and swirl.
completely in a gentle current of air, holding the flask obliquely
while turning it in a boiling water-bath.
NOTE - If the extraction of the unsaponifiable matter is carried out
with a view to the determination of the composition of tocopherols, the
addition of pyrogallol is necessary and the extraction should be com-
96 . Drying the residue and determination
pleted quickly (say, within 30 min).
Dry the residue in the oven (6.5) at 103 OC + 2 OC for 15 min,
with the flask in an almost horizontal Position. Allow to cool in
9.3 Extraction of the unsaponifiable matter
a desiccator and weigh to the nearest 0,l mg.
After cooling, transfer the Solution to a 500 ml separating fun-
Repeat the drying for successive 15 min periods until the loss of
nel (6.3). Rinse the flask and the anti-bumping granules several
mass between two successive weighings is less
than 1,5 mg. If
times with the diethyl ether (5.11, using 100 ml in all, and pour
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 3596-1 : 1988 (EI
a constant mass is not obtained after three periods of drying, where
the unsaponifiable matter is probably contaminated and the
determination sh
...
ISO
NORME INTERNATIONALE
3596-l
Première édition
1988-07-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
. MEXJJYHAPOAHAR OPI-AHM3AuMfl Il0 CTAH~APTM3A~MM
Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la teneur en matières
insaponifiables -
Partie 1 :
Méthode par extraction à l’oxyde diéthylique (méthode de
référence)
Animal and vegetable fats and oifs - Determination of unsaponifiable matter -
Part 1 : Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Numéro de référence
ISO 3596-l : 1988 (F)
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IsO 3596-l :1988 (FI
Avant-propos
LIS0 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique crée à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 3596-l a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L’ISO 3596 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras
d’origines animale et vt!gé tale - Détermination de la teneur en mati&res insaponifia-
bles :
Partie 1 : M&hode par extraction à l’oxyde di&hyligue (méthode de réf&rence)
Partie 2 : M&hode rapide par extraction à l’hexane
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 3596 est donnée uniquement à titre d’infor-
mation.
@ Organisation internationale de normalisation, 1988 l
Imprimé en Suisse
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ISO 3596-l : 1988 (F)
NORME INTERNATIONALE
Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la teneur en matières
insaponifiables -
Partie 1 :
Méthode par extraction à l’oxyde diéthylique (méthode de
référence)
1 Domaine d’application ISO 5555 : 1983, Corps gras d’origines animale et végétale -
Échantillonnage.
La présente partie de I’ISO 3596 prescrit la méthode de réfé-
rence pour la détermination de la teneur en matiéres insaponi-
3 Définition
fiables des corps gras d’origines animale et végétale, par extrac-
tion à l’oxyde diéthylique.
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 3596, la défini-
tion suivante s’applique.
Cette méthode n’est pas applicable aux cires et donne toutefois
des résultats approximatifs avec certaines matières grasses à
matières insaponifiables : Toutes les substances présentes
teneur élevée en matières insaponifiables, par exemple avec les
dans le produit qui, après saponification de celui-ci par
corps gras provenant d’animaux marins.
l’hydroxyde de potassium et extraction par un solvant spécifié,
ne sont pas volatiles dans les conditions opératoires spécifiées.
L’annexe A décrit une méthode à neuf extractions à I’hexane,
qui donne des résultats comparables pour beaucoup de corps
NOTE - Les matières insaponifiables comprennent des constituants
gras d’origines animale et végétale mais, en raison des différen-
naturels des matiéres grasses tels les stérols, les hydrocarbures et
ces de solubilités de nombreux constituants de I’insaponifiable
alcools supérieurs, aliphatiques et terpéniques, ainsi que les substan-
entre les deux solvants, les résultats peuvent ne pas être identi-
ces organiques étrangéres extraites par le solvant et non volatiles à
ques, la méthode à I’hexane donnant alors des resultats par 103 OC (par exemple huiles minérales) qu’elles peuvent éventuellement
contenir.
défaut. La méthode à I’hexane peut être utilisée lorsque les con-
ditions climatiques ou la réglementation ne permettent pas
l’emploi de l’oxyde diéthylique.
4 Principe
Saponification du corps gras par traitement à l’ébullition à
reflux avec une solution éthanolique d’hydroxyde de potas-
2 Références normatives
sium. Extraction de I’insaponifiable de la solution de savon par
l’oxyde diéthylique. Évaporation du solvant et pesée du résidu
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par
aprés séchage.
suite de la référence qui en est faite, constituent des disposi-
tions valables pour la présente partie de I’ISO 3596. Au moment
de la publication de cette partie de I’ISO 3596, les éditions indi-
5 Réactifs
quées étaient en vigueur. Toute norme est sujette a révision et
les parties prenantes des accords fondés sur cette partie de
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique, et l’eau utili-
I’ISO 3596 sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer
sée doit être de l’eau distillée ou de pureté équivalente.
les éditions les plus récentes des normes indiquées ci-aprés.
Les membres de la CEI et de I’ISO possédent le registre des nor-
5.1 Oxyde di&hylique, récemment distillé, exempt de
mes internationales en vigueur à un moment donné.
peroxydes et de résidus.
ISO 661 : 1980, Corps gras d’origines animale et vbg&ale -
Préparation de l’échantillon pour essai.
5.2 Acétone.
.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 3596-1 : 1988 (FI
5.3 Hydroxyde de potassium, solution éthanolique 9.3 Extraction des matières insaponifiables
c(KOH) = 1 mol/l.
Après refroidissement, transvaser la solution dans une ampoule
Dissoudre 60 g d’hydroxyde de potassium dans 50 ml d’eau et
à decanter de 500 ml (6.3). Rincer le ballon et les régularisateurs
diluer a 1 000 ml avec de I’éthanol à 95 % ( V/ v). La solution d’ébullition plusieurs fois avec de l’oxyde diéthylique (5.11, en
doit être incolore ou jaune paille. utilisant au total 100 ml d’oxyde diéthylique, et verser les liqui-
des de rinçage dans l’ampoule à décanter. Boucher et agiter
énergiquement pendant 1 min, en équilibrant périodiquement la
5.4 Hydroxyde de potassium, solution aqueuse,
pression par retournement de l’ampoule à décanter et ouverture
c(KOH) = 0,5 mol/l.
du robinet.
5.5 PhdnolphtaMine, solution à 10 g/l dans I’éthanol à
Laisser reposer jusqu’à séparation compléte des deux phases,
95 % wm.
puis soutirer la phase inférieure le plus complètement possible
en la recueillant dans une seconde ampoule à décanter.
6 Appareillage
NOTE - S’il se forme une émulsion, la détruire par addition de petites
quantités d’éthanol ou de solution concentrée d’hydroxyde de potas-
sium ou de chlorure de sodium.
Matériel courant de laboratoire, et notamment :
Procéder à deux nouvelles extractions de la phase savonneuse,
6.1 Ballons, à fond rond, de 250 ml de capacité, à col rodé.
en utilisant a chaque fois de la même façon 100 ml d’oxyde
diéthylique. Rassembler les trois extraits éthérés dans une
6.2 Rbfrigérant & reflux, avec joint rodé adaptable aux bal-
ampoule à décanter contenant 40 ml d’eau.
lons (6.1).
9.4 Lavage des extraits éthérés
6.3 Ampoules B dkanter, de 500 ml de capacité, avec robi-
nets et bouchons en polytétrafluoréthylène.
Faire tourner doucement l’ampoule à décanter contenant les
extraits éthérés et les 40 ml d’eau.
6.4 Bain d’eau bouillante.
NOTE - A ce stade une agitation violente risque de conduire à des
émulsions.
6.5 Étuve, réglable à 103 OC + 2 OC.
Laisser les couches se séparer complètement et soutirer la cou-
che aqueuse inférieure. Laver la couche éthérée deux fois
7 Échantillonnage
encore avec à chaque fois 40 ml d’eau, en agitant énergique-
ment à chaque fois et en éliminant la couche aqueuse inférieure
L’échantillonnage doit être effectué conformément à I’ISO
aprés séparation. Soutirer chaque solution de lavage jusqu’à ce
5555.
qu’il en reste 2 ml, puis faire tourner l’ampoule à décanter
autour de son axe. Attendre quelques minutes pour permettre
au reste de la phase aqueuse de se rassembler et l’éliminer; fer-
8 Prbparation de l’échantillon pour essai
mer le robinet quand la phase éthérée atteint l’orifice du robi-
net.
Préparer l’échantillon pour essai conformément à I’ISO 661.
Laver la solution étherée successivement avec 40 ml de la solu-
tion d’hydroxyde de potassium (5.41, 40 ml d’eau, et de nou-
9 Mode opératoire
veau 40 ml de la solution d’hydroxyde de potassium, et encore
au moins deux fois avec 40 ml d’eau.
9.1 Prise d’essai
Poursuivre le lavage à l’eau jusqu’à ce que les eaux de lavage ne
donnent plus une coloration rose après ajout d’une goutte de
Peser, à 0,Ol g près, dans un ballon de 250 ml (6.1) environ 5 g
solution de phénolphtaléine (5.5).
de l’échantillon pour essai (chapitre 8).
9.5 Évaporation du solvant
9.2 Saponification
Par le haut de l’ampoule à décanter, transvaser quantitative-
Ajouter 50 ml de la solution d’hydroxyde de potassium (5.3) et
ment, en plusieurs fois, la solution éthérée dans un ballon de
quelques régularisateurs d’ébullition. Adapter le réfrigérant à
250 ml (6.1) préalablement séché à 103 OC + 2 OC dans l’étuve
reflux (6.2) au ballon et chauffer le contenu pendant 1 h à légère
(6.51, refroidi et taré à 0,l mg près. Évaporer le solvant sur bain
ébullition. Arrêter le chauffage. Ajouter 100 ml d’eau par le haut
d’eau bouillante (6.4).
du réfrigérant et agiter en tournant.
Ajouter 5 ml d’acétone (5.21, et évaporer complétement le sol-
NOTE - Si l’extraction des matiéres insaponifiables est effectuée en
vant volatil en s’aidant d’un léger courant d’air, le ballon étant
vue de la détermination de la composition des tocophérols, l’addition
de pyrogallol est nécessaire. Cette extraction doit alors être effectuée maintenu obliquement tout en le faisant tourner dans le bain
rapidement (soit en 30 min).
d’eau bouillante.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 3596-1 : 1988 W-1
10 Expression des résultats
9.6 Séchage du résidu et détermination
La teneur en matiéres insaponifiables, en pourcentage en
Sécher le résidu pendant 15 min à l’étuve (6.51, réglée à
masse de l’échantillon, est égale à :
103 OC + 2 OC en plaçant le ballon en position presque hori-
zontale. Laisser refroidir au dessiccateur (6.6) et peser à 0,l mg
loo(m, - m2 - mg)
prés.
m0
Sécher à nouveau pendant des périodes
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Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la teneur en matières
insaponifiables -
Partie 1 :
Méthode par extraction à l’oxyde diéthylique (méthode de
référence)
Animal and vegetable fats and oifs - Determination of unsaponifiable matter -
Part 1 : Method using diethyl ether extraction (Reference method)
Numéro de référence
ISO 3596-l : 1988 (F)
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Avant-propos
LIS0 (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique crée à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 3596-l a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L’ISO 3596 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras
d’origines animale et vt!gé tale - Détermination de la teneur en mati&res insaponifia-
bles :
Partie 1 : M&hode par extraction à l’oxyde di&hyligue (méthode de réf&rence)
Partie 2 : M&hode rapide par extraction à l’hexane
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 3596 est donnée uniquement à titre d’infor-
mation.
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Corps gras d’origines animale et végétale -
Détermination de la teneur en matières
insaponifiables -
Partie 1 :
Méthode par extraction à l’oxyde diéthylique (méthode de
référence)
1 Domaine d’application ISO 5555 : 1983, Corps gras d’origines animale et végétale -
Échantillonnage.
La présente partie de I’ISO 3596 prescrit la méthode de réfé-
rence pour la détermination de la teneur en matiéres insaponi-
3 Définition
fiables des corps gras d’origines animale et végétale, par extrac-
tion à l’oxyde diéthylique.
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 3596, la défini-
tion suivante s’applique.
Cette méthode n’est pas applicable aux cires et donne toutefois
des résultats approximatifs avec certaines matières grasses à
matières insaponifiables : Toutes les substances présentes
teneur élevée en matières insaponifiables, par exemple avec les
dans le produit qui, après saponification de celui-ci par
corps gras provenant d’animaux marins.
l’hydroxyde de potassium et extraction par un solvant spécifié,
ne sont pas volatiles dans les conditions opératoires spécifiées.
L’annexe A décrit une méthode à neuf extractions à I’hexane,
qui donne des résultats comparables pour beaucoup de corps
NOTE - Les matières insaponifiables comprennent des constituants
gras d’origines animale et végétale mais, en raison des différen-
naturels des matiéres grasses tels les stérols, les hydrocarbures et
ces de solubilités de nombreux constituants de I’insaponifiable
alcools supérieurs, aliphatiques et terpéniques, ainsi que les substan-
entre les deux solvants, les résultats peuvent ne pas être identi-
ces organiques étrangéres extraites par le solvant et non volatiles à
ques, la méthode à I’hexane donnant alors des resultats par 103 OC (par exemple huiles minérales) qu’elles peuvent éventuellement
contenir.
défaut. La méthode à I’hexane peut être utilisée lorsque les con-
ditions climatiques ou la réglementation ne permettent pas
l’emploi de l’oxyde diéthylique.
4 Principe
Saponification du corps gras par traitement à l’ébullition à
reflux avec une solution éthanolique d’hydroxyde de potas-
2 Références normatives
sium. Extraction de I’insaponifiable de la solution de savon par
l’oxyde diéthylique. Évaporation du solvant et pesée du résidu
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par
aprés séchage.
suite de la référence qui en est faite, constituent des disposi-
tions valables pour la présente partie de I’ISO 3596. Au moment
de la publication de cette partie de I’ISO 3596, les éditions indi-
5 Réactifs
quées étaient en vigueur. Toute norme est sujette a révision et
les parties prenantes des accords fondés sur cette partie de
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique, et l’eau utili-
I’ISO 3596 sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer
sée doit être de l’eau distillée ou de pureté équivalente.
les éditions les plus récentes des normes indiquées ci-aprés.
Les membres de la CEI et de I’ISO possédent le registre des nor-
5.1 Oxyde di&hylique, récemment distillé, exempt de
mes internationales en vigueur à un moment donné.
peroxydes et de résidus.
ISO 661 : 1980, Corps gras d’origines animale et vbg&ale -
Préparation de l’échantillon pour essai.
5.2 Acétone.
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5.3 Hydroxyde de potassium, solution éthanolique 9.3 Extraction des matières insaponifiables
c(KOH) = 1 mol/l.
Après refroidissement, transvaser la solution dans une ampoule
Dissoudre 60 g d’hydroxyde de potassium dans 50 ml d’eau et
à decanter de 500 ml (6.3). Rincer le ballon et les régularisateurs
diluer a 1 000 ml avec de I’éthanol à 95 % ( V/ v). La solution d’ébullition plusieurs fois avec de l’oxyde diéthylique (5.11, en
doit être incolore ou jaune paille. utilisant au total 100 ml d’oxyde diéthylique, et verser les liqui-
des de rinçage dans l’ampoule à décanter. Boucher et agiter
énergiquement pendant 1 min, en équilibrant périodiquement la
5.4 Hydroxyde de potassium, solution aqueuse,
pression par retournement de l’ampoule à décanter et ouverture
c(KOH) = 0,5 mol/l.
du robinet.
5.5 PhdnolphtaMine, solution à 10 g/l dans I’éthanol à
Laisser reposer jusqu’à séparation compléte des deux phases,
95 % wm.
puis soutirer la phase inférieure le plus complètement possible
en la recueillant dans une seconde ampoule à décanter.
6 Appareillage
NOTE - S’il se forme une émulsion, la détruire par addition de petites
quantités d’éthanol ou de solution concentrée d’hydroxyde de potas-
sium ou de chlorure de sodium.
Matériel courant de laboratoire, et notamment :
Procéder à deux nouvelles extractions de la phase savonneuse,
6.1 Ballons, à fond rond, de 250 ml de capacité, à col rodé.
en utilisant a chaque fois de la même façon 100 ml d’oxyde
diéthylique. Rassembler les trois extraits éthérés dans une
6.2 Rbfrigérant & reflux, avec joint rodé adaptable aux bal-
ampoule à décanter contenant 40 ml d’eau.
lons (6.1).
9.4 Lavage des extraits éthérés
6.3 Ampoules B dkanter, de 500 ml de capacité, avec robi-
nets et bouchons en polytétrafluoréthylène.
Faire tourner doucement l’ampoule à décanter contenant les
extraits éthérés et les 40 ml d’eau.
6.4 Bain d’eau bouillante.
NOTE - A ce stade une agitation violente risque de conduire à des
émulsions.
6.5 Étuve, réglable à 103 OC + 2 OC.
Laisser les couches se séparer complètement et soutirer la cou-
che aqueuse inférieure. Laver la couche éthérée deux fois
7 Échantillonnage
encore avec à chaque fois 40 ml d’eau, en agitant énergique-
ment à chaque fois et en éliminant la couche aqueuse inférieure
L’échantillonnage doit être effectué conformément à I’ISO
aprés séparation. Soutirer chaque solution de lavage jusqu’à ce
5555.
qu’il en reste 2 ml, puis faire tourner l’ampoule à décanter
autour de son axe. Attendre quelques minutes pour permettre
au reste de la phase aqueuse de se rassembler et l’éliminer; fer-
8 Prbparation de l’échantillon pour essai
mer le robinet quand la phase éthérée atteint l’orifice du robi-
net.
Préparer l’échantillon pour essai conformément à I’ISO 661.
Laver la solution étherée successivement avec 40 ml de la solu-
tion d’hydroxyde de potassium (5.41, 40 ml d’eau, et de nou-
9 Mode opératoire
veau 40 ml de la solution d’hydroxyde de potassium, et encore
au moins deux fois avec 40 ml d’eau.
9.1 Prise d’essai
Poursuivre le lavage à l’eau jusqu’à ce que les eaux de lavage ne
donnent plus une coloration rose après ajout d’une goutte de
Peser, à 0,Ol g près, dans un ballon de 250 ml (6.1) environ 5 g
solution de phénolphtaléine (5.5).
de l’échantillon pour essai (chapitre 8).
9.5 Évaporation du solvant
9.2 Saponification
Par le haut de l’ampoule à décanter, transvaser quantitative-
Ajouter 50 ml de la solution d’hydroxyde de potassium (5.3) et
ment, en plusieurs fois, la solution éthérée dans un ballon de
quelques régularisateurs d’ébullition. Adapter le réfrigérant à
250 ml (6.1) préalablement séché à 103 OC + 2 OC dans l’étuve
reflux (6.2) au ballon et chauffer le contenu pendant 1 h à légère
(6.51, refroidi et taré à 0,l mg près. Évaporer le solvant sur bain
ébullition. Arrêter le chauffage. Ajouter 100 ml d’eau par le haut
d’eau bouillante (6.4).
du réfrigérant et agiter en tournant.
Ajouter 5 ml d’acétone (5.21, et évaporer complétement le sol-
NOTE - Si l’extraction des matiéres insaponifiables est effectuée en
vant volatil en s’aidant d’un léger courant d’air, le ballon étant
vue de la détermination de la composition des tocophérols, l’addition
de pyrogallol est nécessaire. Cette extraction doit alors être effectuée maintenu obliquement tout en le faisant tourner dans le bain
rapidement (soit en 30 min).
d’eau bouillante.
2
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ISO 3596-1 : 1988 W-1
10 Expression des résultats
9.6 Séchage du résidu et détermination
La teneur en matiéres insaponifiables, en pourcentage en
Sécher le résidu pendant 15 min à l’étuve (6.51, réglée à
masse de l’échantillon, est égale à :
103 OC + 2 OC en plaçant le ballon en position presque hori-
zontale. Laisser refroidir au dessiccateur (6.6) et peser à 0,l mg
loo(m, - m2 - mg)
prés.
m0
Sécher à nouveau pendant des périodes
...
Questions, Comments and Discussion
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