ISO 15304:2002

Animal and vegetable fats and oils — Determination of the content of trans fatty acid isomers of vegetable fats and oils — Gas chromatographic method

This International Standard specifies a gas chromatographic method using capillary columns for the determination of the content of trans fatty acid isomers of vegetable oils and fats. The method is specially designed to evaluate, by a single capillary gas chromatographic (GC) procedure, the level of trans isomers as formed during (high temperature) refining, or during hydrogenation of vegetable oils or fats. The method may also be used to report all other fatty acids (e.g. to obtain the full fatty acid composition and total amounts of saturated fatty acids, mono-unsaturated fatty acids and poly-unsaturated fatty acids) from the same sample and same analysis.

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur en isomères trans d'acides gras de corps gras d'origine végétale — Méthode par chromatographie en phase gazeuse

La présente Norme internationale spécifie une méthode par chromatographie en phase gazeuse utilisant des colonnes capillaires pour la détermination de la teneur en isomères trans d'acides gras de corps gras d'origine végétale. Cette méthode est tout particulièrement conçue pour évaluer la teneur en isomères trans obtenus lors du raffinage (à haute température) ou de l'hydrogénation des corps gras d'origine végétale et ce, selon la méthode de chromatographie en phase gazeuse avec une seule colonne capillaire. La méthode peut également être utilisée pour réaliser la détermination de tous les autres acides gras, par exemple pour obtenir la composition complète des acides gras et les quantités totales d'acides gras saturés, monoinsaturés et polyinsaturés d'un même échantillon à partir d'une même analyse.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 13-Mar-2002
• Withdrawal Date: 13-Mar-2002
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 01-Jun-2015

Relations

• Revised: ISO 12966-4:2015 - Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 4: Determination by capillary gas chromatography
• Effective Date: 17-Aug-2013
• Consolidates: ISO 7973:1992 - Cereals and milled cereal products — Determination of the viscosity of flour — Method using an amylograph
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revised: ISO 12966-1:2014 - Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 1: Guidelines on modern gas chromatography of fatty acid methyl esters
• Effective Date: 17-Aug-2013

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15304
First edition
2002-03-15
Corrected version
2003-05-15


Animal and vegetable fats and oils —
Determination of the content of trans fatty
acid isomers of vegetable fats and oils —
Gas chromatographic method
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur en
isomères trans d'acides gras de corps gras d'origine végétale — Méthode
par chromatographie en phase gazeuse




Reference number
ISO 15304:2002(E)
©
 ISO 2002

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ISO 15304:2002(E)
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Published in Switzerland

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ISO 15304:2002(E)
Contents
Foreword . iv
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle . 2
5 Reagents and materials. 2
6 Apparatus. 2
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 3
9 Preparation of methyl esters. 3
10 Procedure. 3
11 Calculations . 5
12 Precision . 7
13 Test report. 7
Annex A (informative) Optimum conditions. 8
Annex B (informative) Examples of typical chromatograms obtained under the recommended
conditions . 11
Annex C (informative) Equivalent chain length (ECL) values . 16
Annex D (informative) FID response factor and FID correction factor. 17
Annex E (informative) Results of interlaboratory test . 18
Bibliography. 20

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ISO 15304:2002(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15304 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal and
vegetable fats and oils.
Annexes A to E of this International Standard are for information only.
In this corrected version, the identification of the main C18:2 cis isomer peak in Figure B.2 (the central peak in the
figure) has been corrected from
C18:1 12cis
to
C18:2 9cis, 12cis

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 15304:2002(E)

Animal and vegetable fats and oils — Determination of the content
of trans fatty acid isomers of vegetable fats and oils — Gas
chromatographic method
1 Scope
This International Standard specifies a gas chromatographic method using capillary columns for the determination
of the content of trans fatty acid isomers of vegetable oils and fats.
The method is specially designed to evaluate, by a single capillary gas chromatographic (GC) procedure, the level
of trans isomers as formed during (high temperature) refining, or during hydrogenation of vegetable oils or fats.
The method may also be used to report all other fatty acids (e.g. to obtain the full fatty acid composition and total
amounts of saturated fatty acids, mono-unsaturated fatty acids and poly-unsaturated fatty acids) from the same
sample and same analysis.
NOTE 1 The trans-isomer content as obtained with this method may not agree with the trans-isomer content as obtained
using other methods.
NOTE 2 During (high temperature) refining (deacidification and deodorization), only geometrical isomers are formed of the
mono- and poly-unsaturated fatty acids; i.e. the double bond(s) remain(s) at the same natural position. During hydrogenation,
both positional and geometrical isomers are formed.
NOTE 3 For some specific cis- and trans-isomers formed during hydrogenation, co-elution is possible. This could influence
the accuracy of the result. The level of these isomers is usually negligible in normal partially hydrogenated oils and fats.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
ISO 5509, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of methyl esters of fatty acids
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
3.1
content of trans fatty acid isomers of (high temperature) refined oils and fats
sum of the C18:1 trans, C18:2 trans and C18:3 trans fatty acid methyl esters, expressed as a mass fraction of all
fatty acid methyl esters
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ISO 15304:2002(E)
3.2
content of trans fatty acid isomers of partially hydrogenated oils and fats
sum of all trans double-bond-containing fatty acid methyl esters, expressed as a mass fraction of all fatty acid
methyl esters
NOTE The content of trans fatty acid isomers is expressed in percent.
4 Principle
The methylated fatty acids of the sample are separated on a capillary gas chromatography column with a high polar
stationary phase, with respect to their chain length, degree of (un)saturation and geometry and position of the
double bonds.
5 Reagents and materials
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
5.1 Carrier gas, preferentially helium or hydrogen, or otherwise nitrogen, of gas chromatographic quality, dried
and with oxygen removed by suitable filters.
WARNING — Hydrogen, which is used only with capillary columns, can double the speed of the analysis
(in comparison with helium) but is hazardous. Safety devices are available and it is essential that a suitable
device be incorporated into the apparatus.
5.2 Certified Reference Material (CRM), BCR 162 (soya/maize blend), European Commission, Community
1)
Bureau of Reference.
NOTE In addition to the use of CRM from the EC, the use of other calibration standards from reputable suppliers such as
Supelco, Larodan, Nuchek and Sigma may be accepted. Perhaps different standards will be necessary for different
hydrogenated oils (e.g. lauric, non-lauric oils and palm oil).
6 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Gas chromatograph, equipped with a capillary injection system (preferred split mode, operated at a split
ratio of approximately 1:100) and flame ionization detector (FID).
TM
2) 3) 4)
6.2 Capillary column, with a high polar stationary phase (e.g. CP -Sil 88 , SP-2340 , BPX-70 or similar
highly polar cyanopropyl phases such as SP-2380 and SP-2560 which can give similar resolution of the various
geometrical isomers).
TM
NOTE For improved separations, a 100 m SP-2560 or CP -Sil 88 column and hydrogen as carrier gas are
recommended.

1) European Commission, Joint Research Centre, Institute for Reference Materials and Measurements (IRMM), Geel,
Belgium.
2) Available from Chrompack, Middelburg, The Netherlands.
3) Available from Supelco, Bellafonte, PA, USA.
4) Available from SGE Inc., Austin, Texas, USA.
These types of columns are examples of suitable products which are available commercially. This information is given for the
convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of these products.
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ISO 15304:2002(E)
Examples of dimensions:
TM
 CP -Sil 88, (50 to 100) m × 0,25 mm i.d., 0,20 µm film;
 SP-2360, (50 to 100) m × 0,25 mm i.d., 0,20 µm film;
 SP-2340, 60 m × 0,25 mm i.d., 0,20 µm film;
 BPX-70, 50 m × 0,22 mm i.d., 0,25 µm film.
Optimum conditions shall be defined by the user following the instructions in 10.3. (See also annex A.)
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method is
given in ISO 5555 [1].
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
8 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
Before taking the test portion from the sample, mix the sample thoroughly. Melt solid samples completely to ensure
proper mixing.
9 Preparation of methyl esters
Prepare the methyl esters from the triglycerides of the prepared test sample in accordance with ISO 5509.
Methods specified in AOCS Official Method Ce 2-66 [2] or IUPAC 2.301 [3] may also be used.
For trans-isomer determination in, for example, virgin olive oils, the trans-esterification routine as specified in
ISO 5509 is recommended to avoid any heating of the samples.
10 Procedure
10.1 General
In conjunction with the analysis of the test sample (or a series of test samples), analyse a blank sample (n-heptane)
and a reference sample of CRM (5.2).
10.2 GC conditions
10.2.1 Set up the gas chromatograph with one of the recommended combinations of temperature and column as
described in Table 1.
Measure the average carrier gas linear velocity as indicated in Table 1, with a split ratio of approximately 1:100.
See annex B for typical chromatograms obtained with the conditions given in Table 1.
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ISO 15304:2002(E)
Table 1 — Recommended GC conditions for identification and quantification of trans isomers in refined
and hydrogenated vegetable oil samples
Parameter Proposed optimum conditions
TM
Stationary phase SP-2340 CP -Sil 88 BPX-70
Temperature conditions, °C isotherm 192 isotherm 175 isotherm 198
Column head pressure, kPa 125 130 155
15 19 17
Linear velocity of carrier gas
(helium), cm/s
Parameter Proposed optimum conditions for 100 m columns
TM TM
Stationary phase SP-2560 CP -Sil 88 CP -Sil 88
Temperature conditions, °C (120 to 240) °C isotherm 150 isotherm 175
with 4 °C/min
Column head pressure, kPa 220 170 160
Linear velocity of carrier gas 30 30 30
(hydrogen), cm/s

10.2.2 The temperature of the injection port and detector shall be 250 °C.
10.3 Performance check
Inject 0,5 µl to 1,0 µl of the methyl esters (concentration approximately 7 mg/ml in n-heptane) from the test sample
into the gas chromatograph. Compare the result of a similar type of sample with the typical chromatograms given in
annex B.
If the separation obtained is not identical to the example chromatograms, small changes in oven temperature may
be required. Decrease or increase the oven temperature with subsequent steps of 1 °C until good separation is
obtained. These small corrections might be required to correct for batch differences between columns and
instrument temperature control, and generally fall within a range of only a few degrees (plus or minus) at maximum
from the indicated value.
The C20:1 cis peak will elute earlier, relative to linolenic acid C18:3 9cis,12cis,15cis (ccc) if the oven temperature is
increased (see reference [4]).
NOTE 1 The properties of the BPX-70 stationary phase are somewhat different, resulting in elution of the C20:1 cis peak
after the C18:3 9cis,12cis,15cis peak, using these conditions (compare annex B).
If the GC system is set up properly, the separation obtained should allow identification of the small amount of the
naturally present C18:1 11cis isomer next to the C18:1 9cis peak in (high temperature) refined oils, e.g. soyabean
oil. The two C18:1 cis isomers should be clearly separated (see annex B).
NOTE 2 Hydrogenated marine oils can give rise to a much wider range of trans isomers, making identification and
quantification more difficult.
The C20:1 cis natural isomer should be positioned exactly amidst the last eluting trans isomer C18:3 (tcc) and the
C18:3 ccc peak (linolenic acid) in (high temperature) refined oils.
If the separation is sufficient for this type of analysis, in (high temperature) refined oils there should be a small peak
for the C18:1 trans isomer, two approximately equally sized C18:2 trans isomers, and four (sometimes five)
C18:3 trans isomers.
4 © ISO 2002 – All rights reserved

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ISO 15304:2002(E)
For partially hydrogenated oils and fats, the separation of the C18:1 13trans and the C18:1 9cis isomers should be
visible on the chromatogram. This is required for an accurate peak-split between cis and trans isomers (see
annex B).
The 18:1 13trans isomer always elutes with t
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 15304
Première édition
2002-03-15
Version corrigée
2003-05-15


Corps gras d'origines animale et
végétale — Détermination de la teneur en
isomères trans d'acides gras de corps gras
d'origine végétale — Méthode par
chromatographie en phase gazeuse
Animal and vegetable fats and oils — Determination of the content of trans
fatty acid isomers of vegetable fats and oils — Gas chromatographic
method




Numéro de référence
ISO 15304:2002(F)
©
 ISO 2002

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ISO 15304:2002(F)
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Web www.iso.ch
Imprimé en Suisse

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ISO 15304:2002(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Réactifs et matériaux . 2
6 Appareillage. 2
7 Échantillonnage. 3
8 Préparation de l'échantillon pour essai . 3
9 Préparation des esters méthyliques . 3
10 Mode opératoire . 4
11 Calcul. 5
12 Fidélité. 7
13 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Conditions optimales. 9
Annexe B (informative) Exemples de chromatogrammes types obtenus dans les conditions
recommandées . 12
Annexe C (informative) Valeurs de la longueur équivalente de chaîne (LEC). 17
Annexe D (informative) Facteur de réponse et facteur de correction pour le détecteur à ionisation de
flamme. 18
Annexe E (informative) Résultats des essais interlaboratoires. 19
Bibliographie. 21

© ISO 2002 – Tous droits réservés iii

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ISO 15304:2002(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente Norme internationale peuvent faire
l'objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15304 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11, Corps
gras d'origines animale et végétale.
Les annexes A à E de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d’information.
Dans la présente version corrigée, l’identification du pic principal d’isomères C18:2 cis (le pic se trouvant au centre
de la figure) a été rectifiée en remplaçant
C18:1 12cis
par
C18:2 9cis, 12cis.
iv © ISO 2002 – Tous droits réservés

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NORME INTERNATIONALE ISO 15304:2002(F)

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la
teneur en isomères trans d'acides gras de corps gras d'origine
végétale — Méthode par chromatographie en phase gazeuse
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode par chromatographie en phase gazeuse utilisant des
colonnes capillaires pour la détermination de la teneur en isomères trans d’acides gras de corps gras d’origine
végétale.
Cette méthode est tout particulièrement conçue pour évaluer la teneur en isomères trans obtenus lors du raffinage
(à haute température) ou de l’hydrogénation des corps gras d’origine végétale et ce, selon la méthode de
chromatographie en phase gazeuse avec une seule colonne capillaire.
La méthode peut également être utilisée pour réaliser la détermination de tous les autres acides gras, par exemple
pour obtenir la composition complète des acides gras et les quantités totales d’acides gras saturés, monoinsaturés
et polyinsaturés d’un même échantillon à partir d’une même analyse.
NOTE 1 La teneur en isomères trans d’acides gras obtenue selon cette méthode peut ne pas correspondre à celle obtenue
en appliquant d’autres méthodes.
NOTE 2 Au cours du raffinage (à haute température) (désacidification et désodorisation), seuls les isomères géométriques
sont formés pour des acides gras monoinsaturés et polyinsaturés, alors que la position de la ou des doubles liaisons sur la
chaîne hydrocarbonée n’est pas modifiée. Au cours de l’hydrogénation, des isomères de position et des isomères géométriques
sont formés.
NOTE 3 Une coélution est possible dans le cas de certains isomères spécifiques cis et trans formés pendant
l’hydrogénation, ce qui pourrait influer sur l’exactitude du résultat. La teneur en isomères est alors généralement négligeable
dans les corps gras courants partiellement hydrogénés.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
ISO 5509, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation des esters méthyliques d’acides gras
© ISO 2002 – Tous droits réservés 1

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ISO 15304:2002(F)
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en isomères trans d’acides gras de corps gras raffinés (à haute température)
somme des esters méthyliques C18:1 trans, C18:2 trans et C18:3 trans d’acides gras, exprimée en fraction
massique de tous les esters méthyliques d’acides gras
3.2
teneur en isomères trans d’acides gras de corps gras partiellement hydrogénés
somme de tous les esters méthyliques trans d’acides gras contenant une double liaison, exprimée en fraction
massique de tous les esters méthyliques d’acides gras
NOTE La teneur en isomères trans d’acides gras est exprimée en pourcentage.
4 Principe
Les esters méthyliques d’acides gras de l’échantillon sont séparés par chromatographie en phase gazeuse sur une
colonne capillaire avec une phase stationnaire de polarité élevée, et ceci par rapport à la longueur de leur chaîne,
au degré de saturation ou d’insaturation, ainsi qu’à la géométrie et à la position des doubles liaisons.
5 Réactifs et matériaux
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Gaz vecteur, de préférence de l’hélium ou de l’hydrogène, sinon de l’azote, de qualité pour chromatographie
en phase gazeuse, séché et privé d’oxygène à l’aide de filtres appropriés.
AVERTISSEMENT — L’hydrogène, utilisé uniquement avec les colonnes capillaires, permet de doubler la
vitesse d’analyse (par rapport à l’hélium), mais il présente des dangers. Il existe cependant des dispositifs
de sécurité et il est indispensable d’incorporer un dispositif approprié dans l’appareil.
1)
5.2 Matériau de référence certifié (CRM ), BCR 162 (mélange de soja/maïs), Communauté européenne,
Bureau communautaire de référence.
NOTE Outre le CRM de l’UE, des étalons d’autres fournisseurs connus, tels que Supelco, Larodan, Nu-Check et Sigma,
peuvent être acceptés. Différents étalons seront peut-être nécessaires pour des huiles hydrogénées différentes (par exemple
les huiles avec et sans acide laurique et l’huile de palme).
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Appareil de chromatographie en phase gazeuse, muni d’un dispositif d’injection par colonne capillaire (de
préférence en mode diviseur, fonctionnant à une vitesse de division d’environ 1:100) et d’un détecteur à ionisation
de flamme (FID).

1) Commission européenne, Centre de recherche scientifique et technique européen, Institut des matériaux et des mesures
de référence (IRMM), Geel, Belgique.
2 © ISO 2002 – Tous droits réservés

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ISO 15304:2002(F)
2) 3)
TM
6.2 Colonne capillaire, avec phase stationnaire de polarité élevée (par exemple CP -Sil 88 , SP-2340 ,
4)
BPX-70 ou phases cyano-propyl à polarité élevée similaires, telles que SP-2380 et SP-2560), qui peuvent
donner une résolution similaire des divers isomères géométriques.
NOTE Pour de meilleures séparations, il est recommandé d’avoir recours à une colonne SP-2560 de 100 m de longueur
TM
ou à une colonne CP -Sil 88 de 100 m de longueur, en utilisant de l’hydrogène comme gaz vecteur.
Exemples de dimensions:
TM
 CP -Sil 88: longueur 50 m à 100 m; diamètre interne 0,25 mm; épaisseur de film 0,20 µm;
 SP-2560: longueur 50 m à 100 m; diamètre interne 0,25 mm; épaisseur de film 0,20 µm;
 SP-2340: longueur 60 m; diamètre interne 0,25 mm; épaisseur de film 0,20 µm;
 BPX-70: longueur 50 m; diamètre interne 0,22 mm; épaisseur de film 0,25 µm.
L’utilisateur doit définir des conditions optimales en suivant les instructions données en 10.3. (Voir également
l’annexe A.)
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une méthode
d’échantillonnage recommandée figure dans l’ISO 5555 [1].
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, n’ayant pas été endommagé ou
modifié pendant le transport ou l’entreposage.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 661.
Avant de prélever la prise d’essai sur l’échantillon, mélanger soigneusement ce dernier. Faire fondre entièrement
les échantillons solides afin de garantir un mélange correct.
9 Préparation des esters méthyliques
Préparer les esters méthyliques à partir des triglycérides de l’échantillon pour essai préparé conformément à
l’ISO 5509.
Les méthodes Ce 2-66 de l’AOCS [2] ou 2.301 de l’UICPA [3] peuvent également être utilisées.
Pour la détermination des isomères trans, par exemple dans les huiles d’olive vierge, la transestérification spécifiée
dans l’ISO 5509 est recommandée pour éviter tout échauffement des échantillons.

2) Disponible chez Chrompack, Middelburg, Pays-Bas.
3) Disponible chez Supelco, Bellafonte, PA, États-Unis.
4) Disponible chez SGE Inc., Austin, TX, États-Unis.
Les types de colonnes mentionnés ci-dessus sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette
information est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du (des) produit(s) ainsi désigné(s).
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ISO 15304:2002(F)
10 Mode opératoire
10.1 Généralités
Associer l’analyse d’un échantillon à blanc (n-heptane) et d’un échantillon de référence de CRM (5.2) à l’analyse
de l’échantillon pour essai (ou d’une série d’échantillons pour essai).
10.2 Conditions de CPG
10.2.1 Régler l’appareil de chromatographie en phase gazeuse selon l’une des conditions recommandées de
température et en fonction de la colonne choisie, comme décrit dans le Tableau 1.
Mesurer la vitesse linéaire moyenne du gaz vecteur, comme indiqué dans le Tableau 1, le rapport de division étant
environ de 1:100.
Voir à l’annexe B les chromatogrammes types obtenus dans les conditions mentionnées dans le Tableau 1.
Tableau 1 — Conditions recommandées de CPG pour l’identification et la quantification
des isomères trans dans les échantillons d’huiles végétales raffinées et hydrogénées
Paramètre Conditions optimales proposées
TM
Phase stationnaire SP-2340 BPX-70
CP -Sil 88
Conditions de température, °C isotherme 192 isotherme 175 isotherme 198
Pression en tête de colonne, kPa 125 130 155
Vitesse linéaire du gaz vecteur (hélium), cm/s 15 19 17
Paramètre Conditions optimales proposées pour des colonnes de 100 m
TM TM
Phase stationnaire
SP-2560 CP -Sil 88 CP -Sil 88
120 °C à 240 °C
Conditions de température, °C isotherme 150 isotherme 175
(à 4 °C/min)
Pression en tête de colonne, kPa 220 170 160
Vitesse linéaire du gaz vecteur (hydrogène), cm/s 30 30 30
10.2.2 La température de l’orifice d’injection et du détecteur doit être de 250 °C.
10.3 Contrôle des performances
Injecter 0,5 µl à 1,0 µl d’esters méthyliques (concentration d’environ 7 mg/ml dans le n-heptane) de l’échantillon
pour essai dans l’appareil de chromatographie en phase gazeuse. Comparer le résultat d’un type similaire
d’échantillon avec les exemples de chromatogrammes types (annexe B).
Si la séparation obtenue n’est pas identique aux exemples de chromatogrammes, il peut être nécessaire de
procéder à de petites modifications de la température du four. Diminuer ou augmenter cette température par
incréments de 1 °C jusqu’à obtention d’une bonne séparation. Ces petites corrections pourraient être nécessaires
pour tenir compte des différences entre lots pour le réglage de la température des colonnes et des instruments;
elles se situent généralement dans une plage de quelques degrés au maximum (en plus ou en moins) par rapport
à la valeur indiquée.
L’élution du pic de C20:1 cis se produira avant celle des pics de C18:3 9cis, 12cis, 15cis (ccc) de l’acide linolénique
si l’on augmente la température du four (voir la référence [4]).
NOTE 1 Les propriétés de la phase stationnaire du BPX-70 sont légèrement différentes et, par suite, l’élution du pic de
C20:1 cis se produira après celle des pics C18:3 9cis, 12cis, 15cis, dans ces conditions (comparer avec l’annexe B).
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Si le système de CPG est correctement réglé, la séparation obtenue permet normalement d’identifier la petite
quantité d’isomère C18:1 11cis naturellement présente à côté du pic de C18:1 9cis dans les huiles raffinées (à
haute température), par exemple pour l’huile de soja. Il convient que les deux isomères C18:1 cis soient clairement
séparés (voir annexe B).
NOTE 2 Les huiles de poisson hydrogénées peuvent élargir la palette d’isomères trans, ce qui rend l’identification et la
quantification plus difficile.
Il est recommandé de positionner l’isomère naturel C20:1 cis exactement entre le dernier isomère trans élué
C18:3 (tcc) et le pic de C18:3 ccc (acide linolénique) dans les huiles raffinées (à haute température).
Si la séparation est suffisante pour ce type d’analyse dans les huiles raffinées (à haute température), il convient
d’obtenir un petit pic pour l’isomère trans C18:1, deux isomères trans C18:2 de taille approximativement égale et
quatre (parfois cinq) isomères trans C18:3.
Dans le cas des corps gras partiellement hydrogénés, il convient que la séparation des isomères C18:1 13trans et
C18:1 9cis soit visible sur le chromatogramme, ce qui nécessite une sépar
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