ISO/TS 22115:2021
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Separation of lipid classes by capillary gas chromatography (fingerprint method)
Animal and vegetable fats and oils — Separation of lipid classes by capillary gas chromatography (fingerprint method)
This document specifies a method for the semi-quantitative analysis of oils, fats and oil/fat-related samples (deodistillates). It is applicable to the screening of oils, fats and oil/fat-related samples to obtain main (e.g. triglycerides) and minor (e.g. sterols, sterol esters, tocopherols, wax esters, fatty alcohols, glycerol) component information in one single analysis. For a truly quantitative analysis of pre-identified compound classes, specific methods are more appropriate. The method can also be used as a useful qualitative screening tool for the relative comparison of sample compositions.
Corps gras d'origines animale et végétale — Séparation des classes lipidiques par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire (méthode fingerprint)
Le présent document spécifie une méthode d’analyse semi-quantitative des corps gras et échantillons dérivés de corps gras (déodistillats). Il est applicable à l’analyse des corps gras et échantillons dérivés de corps gras pour obtenir des informations sur les composés majoritaires (par exemple triglycérides) et minoritaires (par exemple stérols, esters de stérol, tocophérols, esters de cire, alcools gras, glycérol) au cours d'une seule analyse. Pour une analyse réellement quantitative des classes de composés préalablement identifiées, les méthodes spécifiques sont plus appropriées. La méthode peut également être utilisée comme outil d’analyse qualitative en vue d'effectuer une comparaison relative des compositions d'échantillons.
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TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 22115
First edition
2021-06
Animal and vegetable fats and oils —
Separation of lipid classes by capillary
gas chromatography (fingerprint
method)
Corps gras d'origines animale et végétale — Séparation des classes
lipidiques par chromatographie en phase gazeuse sur colonne
capillaire (méthode fingerprint)
Reference number
ISO/TS 22115:2021(E)
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ISO 2021
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ISO/TS 22115:2021(E)
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ISO/TS 22115:2021(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sample . 3
7.1 Sampling . 3
7.2 Preparation of test sample . 3
8 Procedure. 3
8.1 Preparation of the internal standard, tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml . 3
8.2 Preparation of the individual standard solutions for determination of response factors . 3
8.3 Silylation of the standards . 4
8.4 Preparation of the sample . 4
8.5 Sample solution . 4
8.6 Silylation of the sample . 4
8.7 Gas chromatography . 4
8.8 Peak identification and integration . 5
9 Result of the determination . 6
9.1 Calculation of the response factor . 6
9.2 Quantitative determination . 6
10 Precision of the method . 7
10.1 Interlaboratory test. 7
10.2 Repeatability . 7
10.3 Reproducibility . 7
11 Test report . 7
Annex A (informative) Typical chromatograms . 8
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test .18
Bibliography .22
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ISO/TS 22115:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization
(CEN) Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-
products — Methods of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 22115:2021(E)
Animal and vegetable fats and oils — Separation of lipid
classes by capillary gas chromatography (fingerprint
method)
1 Scope
This document specifies a method for the semi-quantitative analysis of oils, fats and oil/fat-related
samples (deodistillates).
It is applicable to the screening of oils, fats and oil/fat-related samples to obtain main (e.g. triglycerides)
and minor (e.g. sterols, sterol esters, tocopherols, wax esters, fatty alcohols, glycerol) component
information in one single analysis. For a truly quantitative analysis of pre-identified compound classes,
specific methods are more appropriate.
The method can also be used as a useful qualitative screening tool for the relative comparison of sample
compositions.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Principle
The hydroxylated compounds are transformed into silyl derivatives. This operation has no effect on the
apolar (non-hydroxylated) compounds also present in the sample. The sample prepared is analysed by
gas chromatography (GC) on a high-temperature capillary column with a low film thickness, with an
on-column injector and flame-ionization detector.
For quantitative purposes, the compounds are quantified in the presence of an internal standard
(1,2,3-tridecanoylglycerol) and the response factors are determined from a reference standard from
each class.
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ISO/TS 22115:2021(E)
5 Reagents
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of hazardous
substances. Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Silylation reagent mixture: Methylimidazole (CAS 616-47-7) and MSHFBA (CAS 53296-64-3).
Prepare a mixture of silylation reagents: 1 ml of MSHFBA + 50 µl of Methylimidazole.
NOTE This mixture cannot be stored more than one week due to moisture absorption. Indeed, silyl
derivatives are moisture sensitive.
1)
5.2 Reference substances .
5.2.1 Oleic acid (CAS 112-80-1).
5.2.2 1-Monoolein (CAS 111-03-5).
5.2.3 1,3-Diolein (CAS 2465-32-9).
5.2.4 Triolein (CAS 122-32-7).
5.2.5 Tridecanoylglycerol (CAS 621-71-6).
5.2.6 Eicosanol (CAS 629-96-9).
5.2.7 α-Tocopherol (CAS 10191-41-0), γ tocopherol (CAS 54-28-4), δ tocopherol (CAS 119-13-1).
5.2.8 Cholesterol (CAS 57-88-5).
5.2.9 Cholesterol palmitate (CAS 601-34-3).
5.2.10 Squalene (CAS 111-02-4).
2)
5.2.11 Plant sterol mix (CAS 474-67-9, 474-62-4, 83-48-7, 83-46-5).
5.3 Isooctane, trace organic analysis grade, purity 99 % min.
5.4 Chloroform, chromatographic quality.
1) Suitable suppliers are Sigma-Aldrich (www .sigmaaldrich .com) or Larodan (www .larodan .com). This
information is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO
of this supplier.
2) A suitable supplier is Larodan (www .larodan .com). This information is given for the convenience of users of
this document and does not constitute an endorsement by ISO of this supplier.
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ISO/TS 22115:2021(E)
6 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Volumetric flask, 100 ml and 10 ml.
6.2 Oven, at 103 °C ± 1 °C
6.3 Conical glass sample vials, 10 ml capacity.
6.4 Gas chromatograph for capillary columns, equipped with an on-column injector or equivalent
device, a temperature-programmable oven and a flame ionization detector (FID).
6.5 Fused silica capillary column, capable of being programmed up to 400 °C (“high temperature”
type) for which the following characteristics are advised: 100 % dimethylpolysiloxane or 95 % dimethyl/
5 % diphenyl polysiloxane stationary phase, length 30 m, internal diameter 0,32 mm or 0,25 mm, film
thickness 0,1 µm. Other columns of similar polarity and selectivity may also be used.
6.6 Microsyringe, 5 µl to 10 µl capacity, suitable for on-column injection in gas chromatography.
6.7 Analytical balance, reading accuracy 0,001 g.
6.8 Ultrasonic bath.
6.9 Nitrogen evaporator.
7 Sample
7.1 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this document. A recommended sampling method is
[1]
given in ISO 5555 .
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been
damaged or changed during transport or storage.
7.2 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
8 Procedure
8.1 Preparation of the internal standard, tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml
Weigh 200 mg tridecanoylglycerol (5.2.5) into a 10 ml volumetric flask, fill it up with isooctane (5.3).
8.2 Preparation of the individual standard solutions for determination of response
factors
A 5 mg/ml standard solution in isooctane (5.3) is prepared for each compound (see Table 1) to determine
the response factor for each component group.
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Table 1 — List of the standards for the calculation of the response factors
Class determined Standard
Alcohols Eicosanol (5.2.6)
Free fatty acids Oleic acid (5.2.1)
Hydrocarbons Squalene (5.2.10)
Monoglycerides Monoolein (5.2.2)
Tocopherols α-Tocopherol (5.2.7)
Sterols Cholesterol (5.2.8)
Diglycerides Diolein (5.2.3)
Sterol esters Cholesterol palmitate (5.2.9)
Triglycerides Triolein (5.2.4)
8.3 Silylation of the standards
Introduce 100 µl of the internal standard solution, tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml, and
200 µl of the individual standard solution (each component separately) into a silylation tube (6.3) and
evaporate the solvent to dryness under nitrogen (6.9). Introduce 100 µl of the silylation mixture (5.1).
Keep at 103 °C for 15 min (6.2), then take up into 5 ml isooctane (5.3).
It is recommended when preparing the following solution to check the method precision (optional).
In a 100 ml volumetric flask (6.1), exactly weigh about 50 mg of each standard (5.2), including 50 mg of
the internal standard solution, tridecanoylglycerol (5.2.5), and dilute to 100 ml with chloroform (5.4).
This solution can be stored at ambient temperature for six months.
To keep the solution homogenous over time, the solution has to be placed into an ultrasonic bath for
10 min before use.
Introduce 0,5 ml of the solution into a silylation tube (6.3) and dry under nitrogen (6.9). Introduce 100 µl
of the silylation mixture (5.1). Keep at 103 °C for 15 min (6.2), then take up into 10 ml isooctane (5.3).
8.4 Preparation of the sample
If the sample is solid at room temperature, completely melt the sample in a 103 °C oven (6.2) and
homogenize it.
8.5 Sample solution
In a 10 ml volumetric flask (6.1), exactly weigh about 100 mg of sample. Introduce exactly 1 ml of
internal standard solution (see 8.1) and dilute to 10 ml with isooctane (5.3).
If the sample is not totally soluble in isooctane, chloroform or toluene may be used instead of isooctane.
8.6 Silylation of the sample
Introduce 0,5 ml of the sample solution (see 8.5) into a silylation tube (6.3) and evaporate the solvent to
dryness under nitrogen (6.9.). Introduce 100 µl of the silylation mixture (5.1). Keep at 103 °C for 15 min
(6.2), then take up into 10 ml isooctane (5.3).
8.7 Gas chromatography
Install the column in the gas chromatograph and check the working conditions by injecting the solvent,
isooctane (5.3). The baseline should be straight with a small positive drift. If the drift is high, proceed
to condition the column. For a negative drift, check the connections of the column.
4 © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/TS 22115:2021(E)
If the column is being used for the first time, it is necessary to condition the column by heating it in the
oven using a temperature gradient up to 370 °C (depending on the oven temperature chosen for the
analysis) in 4 h. Maintain the temperature for 2 h.
A 1 m long, 0,5 mm diameter, empty fused silica capillary column is recommended as a pre-column.
The conditions in Table 2 for the gas chromatograph have been found to give useful chromatograms.
The solvent vent mode is recommended if the inlet in use is cap
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 22115
Première édition
2021-06
Corps gras d'origines animale et
végétale — Séparation des classes
lipidiques par chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire
(méthode fingerprint)
Animal and vegetable fats and oils — Separation of lipid classes by
capillary gas chromatography (fingerprint method)
Numéro de référence
ISO/TS 22115:2021(F)
©
ISO 2021
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ISO/TS 22115:2021(F)
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
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Tél.: +41 22 749 01 11
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Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/TS 22115:2021(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillon . 3
7.1 Échantillonnage . 3
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), c = 20 mg/ml . 3
8.2 Préparation des solutions étalons individuelles pour la détermination des facteurs
de réponse . 4
8.3 Silylation des étalons . 4
8.4 Préparation de l’échantillon . 4
8.5 Solution de dosage . 4
8.6 Silylation de l’échantillon . 5
8.7 Chromatographie en phase gazeuse . 5
8.8 Identification et intégration des pics . 5
9 Résultats de la détermination . 6
9.1 Calcul du facteur de réponse . 6
9.2 Détermination quantitative . 7
10 Fidélité de la méthode . 7
10.1 Essai interlaboratoires . 7
10.2 Répétabilité . 7
10.3 Reproductibilité . 7
11 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Chromatogrammes types . 9
Annexe B (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires .19
Bibliographie .23
© ISO 2021 – Tous droits réservés iii
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ISO/TS 22115:2021(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets rédigées par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, de la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute autre information au sujet de
l’adhésion de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les
obstacles techniques au commerce (OTC) voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique
CEN/TC 307, Oléagineux, corps gras d'origine végétale et animale et leurs co-produits — Méthodes
d'échantillonnage et d'analyse du comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de
coopération technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Il convient que l'utilisateur adresse tout retour d'information ou toute question concernant le présent
document à l'organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l'adresse www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés
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SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 22115:2021(F)
Corps gras d'origines animale et végétale — Séparation des
classes lipidiques par chromatographie en phase gazeuse
sur colonne capillaire (méthode fingerprint)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode d’analyse semi-quantitative des corps gras et échantillons
dérivés de corps gras (déodistillats).
Il est applicable à l’analyse des corps gras et échantillons dérivés de corps gras pour obtenir des
informations sur les composés majoritaires (par exemple triglycérides) et minoritaires (par exemple
stérols, esters de stérol, tocophérols, esters de cire, alcools gras, glycérol) au cours d'une seule analyse.
Pour une analyse réellement quantitative des classes de composés préalablement identifiées, les
méthodes spécifiques sont plus appropriées.
La méthode peut également être utilisée comme outil d’analyse qualitative en vue d'effectuer une
comparaison relative des compositions d'échantillons.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
4 Principe
Les composés hydroxylés sont transformés en dérivés silylés. Cette opération n’a aucun effet sur les
composés apolaires (non hydroxylés) également présents dans l’échantillon. L'échantillon préparé est
analysé par chromatographie en phase gazeuse (CG) sur une colonne capillaire haute température de
faible épaisseur de film, avec un injecteur on-column et un détecteur à ionisation de flamme.
Pour les analyses quantitatives, les composés sont quantifiés en présence d’un étalon interne
(1,2,3-tridécanoylglycérol) et les facteurs de réponse sont déterminés à partir d’un étalon de référence
de chaque classe.
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ISO/TS 22115:2021(F)
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L’attention est attirée sur les réglementations qui s’appliquent à la
manipulation de substances dangereuses. Des mesures de sécurité d’ordre technique,
organisationnel et personnel doivent être suivies.
Pendant l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue, et de l'eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau d'une pureté équivalente.
5.1 Mélange de réactifs de silylation: Méthylimidazole (n° CAS 616-47-7) et MSHFBA
(n° CAS 53296-64-3).
Préparer un mélange de réactifs de silylation: 1 ml de MSHFBA + 50 µl de méthylimidazole.
NOTE Ce mélange ne peut pas être conservé plus d'une semaine en raison de l’absorption d’humidité. En
effet, les dérivés silylés sont sensibles à l’humidité.
1)
5.2 Substances de référence .
5.2.1 Acide oléique (n° CAS 112-80-1).
5.2.2 1-Monooléine (n° CAS 111-03-5).
5.2.3 1,3-Dioléine (n° CAS 2465-32-9).
5.2.4 Trioléine (n° CAS 122-32-7).
5.2.5 Tridécanoylglycérol (n° CAS 621-71-6).
5.2.6 Éicosanol (n° CAS 629-96-9).
5.2.7 α-Tocophérol (n° CAS 10191-41-0), γ-tocophérol (n° CAS 54-28-4), δ-tocophérol (n°
CAS 119-13-1).
5.2.8 Cholestérol (n° CAS 57-88-5).
5.2.9 Palmitate de cholestérol (n° CAS 601-34-3).
5.2.10 Squalène (n° CAS 111-02-4).
2)
5.2.11 Mélange de phytostérols (n° CAS 474-67-9, 474-62-4, 83-48-7, 83-46-5).
5.3 Isooctane, pour l’analyse de traces organiques, pureté de 99 % min.
5.4 Chloroforme, pour chromatographie.
1) Les fournisseurs appropriés sont Sigma-Aldrich (www .sigmaaldrich .com) ou Larodan (www .larodan .com).
Cette information est donnée par souci de commodité à l'intention des utilisateurs du présent document et ne
saurait constituer un engagement de l'ISO à l’égard de ce fournisseur.
2) Un fournisseur approprié est Larodan (www .larodan .com). Cette information est donnée par souci de
commodité à l'intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de l'ISO à
l’égard de ce fournisseur.
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ISO/TS 22115:2021(F)
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Fiole jaugée, 100 ml et 10 ml.
6.2 Étuve, réglée à 103 °C ± 1 °C.
6.3 Flacons à échantillons coniques en verre, capacité de 10 ml.
6.4 Chromatographe en phase gazeuse pour colonnes capillaires, équipé d’un injecteur on-column
ou dispositif équivalent, d’un four à température programmable et d’un détecteur à ionisation de flamme
(FID).
6.5 Colonne capillaire en silice fondue, pouvant être programmée jusqu’à 400 °C (type « haute
température ») pour laquelle les caractéristiques suivantes sont recommandées: phase stationnaire 100 %
diméthylpolysiloxane ou 95 % diméthyl/5 % diphényl polysiloxane, longueur 30 m, diamètre interne
0,32 mm ou 0,25 mm, épaisseur de film 0,1 µm. D’autres colonnes de polarité et de sélectivité similaires
peuvent également être utilisées.
6.6 Microseringue, capacité de 5 µl à 10 µl, pour l’injection on-column en chromatographie en phase
gazeuse.
6.7 Balance analytique, précise à 0,001 g.
6.8 Bain à ultrasons.
6.9 Évaporateur sous azote.
7 Échantillon
7.1 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Une méthode
[1]
d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 5555 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif et n’ayant pas été
endommagé ou modifié durant le transport ou le stockage.
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l'ISO 661.
8 Mode opératoire
8.1 Préparation de l’étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), c = 20 mg/ml
Dans une fiole jaugée de 10 ml, peser 200 mg de tridécanoylglycérol (5.2.5) et compléter au volume avec
de l’isooctane (5.3).
© ISO 2021 – Tous droits réservés 3
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ISO/TS 22115:2021(F)
8.2 Préparation des solutions étalons individuelles pour la détermination des facteurs
de réponse
Une solution étalon à 5 mg/ml dans l’isooctane (5.3) est préparée pour chaque composé (voir
le Tableau 1) pour déterminer le facteur de réponse de chaque groupe de composés.
Tableau 1 — Liste des étalons pour le calcul des facteurs de réponse
Classe déterminée Étalon
Alcools Éicosanol (5.2.6)
Acides gras libres Acide oléique (5.2.1)
Hydrocarbures Squalène (5.2.10)
Monoglycérides Monooléine (5.2.2)
Tocophérols α-Tocophérol (5.2.7)
Stérols Cholestérol (5.2.8)
Diglycérides Dioléine (5.2.3)
Esters de stérol Palmitate de cholestérol (5.2.9)
Triglycérides Trioléine (5.2.4)
8.3 Silylation des étalons
Dans un tube de silylation (6.3), introduire 100 µl de la solution étalon interne, le tridécanoylglycérol
(5.2.5), c = 20 mg/ml, et 200 µl de la solution étalon individuelle (chaque composé séparément) et
évaporer à sec sous un courant d’azote (6.9). Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir
à 103 °C pendant 15 min (6.2), puis diluer avec 5 ml d’isooctane (5.3).
Lors de la préparation de la solution suivante, il est recommandé de contrôler la fidélité de la méthode
(facultatif).
Dans une fiole jaugée de 100 ml (6.1), peser exactement environ 50 mg de chaque étalon (5.2), y compris
50 mg de la solution étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), et diluer à 100 ml avec du chloroforme
(5.4).
Cette solution peut être conservée pendant six mois à température ambiante.
Pour que la solution reste homogène dans le temps, elle doit être placée dans un bain à ultrasons
pendant 10 min avant utilisation.
Introduire 0,5 ml de la solution dans un tube de silylation (6.3) et sécher sous un courant d’azote (6.9).
Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir à 103 °C pendant 15 min (6.2), puis diluer
avec 10 ml d’isooctane (5.3).
8.4 Préparation de l’échantillon
Si l’échantillon est solide à température ambiante, faire complètement fondre l’échantillon dans un
four (6.2) réglé à 103 °C et l’homogénéiser.
8.5 Solution de dosage
Dans une fiole jaugée de 10 ml (6.1), peser exactement environ 100 mg d'échantillon. Introduire
exactement 1 ml de solution étalon interne (voir 8.1) et diluer à 10 ml avec de l’isooctane (5.3).
Si l’échantillon n’est pas totalement soluble dans l’isooctane, du chloroforme ou du toluène peut être
utilisé à la place de l’isooctane.
4 © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO/TS 22115:2021(F)
8.6 Silylation de l’échantillon
Introduire 0,5 ml de la solution de dosage (voir 8.5) dans un tube de silylation (6.3) et évaporer à
sec sous un courant d’azote (6.9). Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir à 103 °C
pendant 15 min (6.2), puis diluer avec 10 ml d’isooctane (5.3).
8.7 Chromatographie en phase gazeuse
Installer la colonne dans le chromatographe en phase gazeuse et contrôler les conditions de
fonctionnement en injectant le solvant, l’isooctane (5.3). Il convient que la ligne de base soit plate avec
une légère dérive positive. Si la dérive est élevée, conditionner la colonne. Si la dérive est négative,
contrôler les raccordements de la colonne.
Si la colonne est utilisée pour la première fois, il est nécessaire de conditionner la colonne en la chauffant
dans le four selon un gradient de température allant jusqu'à 370 °C (suivant la température du four
choisie pour l’analyse) en 4 h. Maintenir la température pendant 2 h.
Il est recommandé d’utiliser une colonne capillaire vide en silice fondue de 1 m de longueur et de 0,5 mm
de diamètre comme pré-colonne.
Les conditions indiquées dans le Tableau 2 pour le chromatographe en phase gazeuse se sont avérées
appropriées pour obtenir des chromatogrammes satisfaisants.
Il est recommandé d’utiliser le m
...
TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 22115
First edition
Animal and vegetable fats and
oils — Relative composition of oils
and derivatives by capillary gas
chromatography (fingerprint method)
Corps gras d'origines animale et végétale — Composition relative
des corps gras et produits dérivés par chromatographie gazeuse
capillaire (méthode fingerprint)
PROOF/ÉPREUVE
Reference number
ISO/TS 22115:2020(E)
©
ISO 2020
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ISO/TS 22115:2020(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
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Published in Switzerland
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ISO/TS 22115:2020(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sample . 3
7.1 Sampling . 3
7.2 Preparation of test sample . 3
8 Procedure. 3
8.1 Preparation of the internal standard, Tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml . 3
8.2 Preparation of the individual standard solutions for determination of response factors . 3
8.3 Silylation of the standards . 4
8.4 Preparation of the sample . 4
8.5 Sample solution . 4
8.6 Silylation of the sample . 4
8.7 Gas chromatography . 4
8.8 Peak identification and integration . 5
9 Result of the determination . 5
9.1 Calculation of the response factor . 5
9.2 Quantitative determination . 6
10 Precision of the method . 7
10.1 Interlaboratory test. 7
10.2 Repeatability . 7
10.3 Reproducibility . 7
11 Test report . 7
Annex A (informative) Typical chromatograms . 8
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test .18
Bibliography .22
© ISO 2020 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE iii
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ISO/TS 22115:2020(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products —
Methods of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation between
ISO and CEN (Vienna Agreement).
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv PROOF/ÉPREUVE © ISO 2020 – All rights reserved
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TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 22115:2020(E)
Animal and vegetable fats and oils — Relative composition
of oils and derivatives by capillary gas chromatography
(fingerprint method)
1 Scope
This document specifies a method for the semi-quantitative analysis of oils, fats and oil/fat-related
samples (deodistillates).
It is applicable to the screening of oils, fats and oil/fat-related samples to obtain main (e.g. triglycerides)
and minor (e.g. sterols, sterol esters, tocopherols, wax esters, fatty alcohols, glycerol) component
information in one single analysis. For a truly quantitative analysis of pre-identified compound classes,
specific methods are more appropriate.
The method can also be used as a useful qualitative screening tool for the relative comparison of sample
compositions.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Principle
The hydroxylated compounds are transformed into silyl derivatives. This operation has no effect on the
apolar (non-hydroxylated) compounds also present in the sample. The sample prepared is analysed by
gas chromatography (GC) on a high-temperature capillary column with a low film thickness, with an
on-column injector and flame-ionization detector.
For quantitative purposes, the compounds are quantified in the presence of an internal standard
(1,2,3-Tridecanoylglycerol) and the response factors are determined from a reference standard from
each class.
5 Reagents
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of hazardous
substances. Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
© ISO 2020 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 1
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ISO/TS 22115:2020(E)
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Silylation reagent mixture: Methylimidazole (CAS 616-47-7) and MSHFBA (CAS 53296-64-3).
Prepare a mixture of silylation reagents: 1 ml of MSHFBA + 50 µl of Methylimidazole.
NOTE This mixture cannot be stored more than one week due to moisture absorption. Indeed, silyl
derivatives are moisture sensitive.
1)
5.2 Reference substances .
5.2.1 Oleic acid (CAS 112-80-1).
5.2.2 1-Monoolein (CAS 111‑03‑5).
5.2.3 1,3-Diolein (CAS 2465-32-9).
5.2.4 Triolein (CAS 122‑32‑7).
5.2.5 Tridecanoylglycerol (CAS 621-71-6).
5.2.6 Eicosanol (CAS 629-96-9).
5.2.7 α-Tocopherol (CAS 10191-41-0), γ tocopherol (CAS 54-28-4), δ tocopherol (CAS 119‑13‑1).
5.2.8 Cholesterol (CAS 57-88-5).
5.2.9 Cholesterol palmitate (CAS 601-34-3).
5.2.10 Squalene (CAS 111‑02‑4).
2)
5.2.11 Plant sterol mix (CAS 474-67-9, 474-62-4, 83-48-7, 83-46-5).
5.3 Isooctane, trace organic analysis grade, purity 99 % min.
5.4 Chloroform, chromatographic quality.
6 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Volumetric flask, 100 ml and 10 ml.
6.2 Oven, at 103 °C ± 1 °C
6.3 Conical glass sample vials, 10 ml capacity.
1) Suitable suppliers are Sigma-Aldrich (www .sigmaaldrich .com) or Larodan (www .larodan .com). This
information is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO
of this supplier.
2) A suitable supplier is Larodan (www .larodan .com). This information is given for the convenience of users of
this document and does not constitute an endorsement by ISO of this supplier.
2 PROOF/ÉPREUVE © ISO 2020 – All rights reserved
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ISO/TS 22115:2020(E)
6.4 Gas chromatograph for capillary columns, equipped with an on-column injector or equivalent
device, a temperature-programmable oven and a flame ionization detector (FID).
6.5 Fused silica capillary column, capable of being programmed up to 400 °C (“high temperature”
type) for which the following characteristics are advised: 100 % dimethylpolysiloxane or 95 % dimethyl/
5 % diphenyl polysiloxane stationary phase, length 30 m, internal diameter 0,32 mm or 0,25 mm, film
thickness 0,1 µm. Other columns of similar polarity and selectivity may also be used.
6.6 Microsyringe, 5 µl to 10 µl capacity, suitable for on-column injection in gas chromatography.
6.7 Analytical balance, reading accuracy 0,001 g.
6.8 Ultrasonic bath.
6.9 Nitrogen evaporator.
7 Sample
7.1 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this document. A recommended sampling method is
[1]
given in ISO 5555 .
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been
damaged or changed during transport or storage.
7.2 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
8 Procedure
8.1 Preparation of the internal standard, Tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml
Weigh 200 mg Tridecanoylglycerol (5.2.5) into a 10 ml volumetric flask, fill it up with isooctane (5.3).
8.2 Preparation of the individual standard solutions for determination of response
factors
A 5 mg/ml standard solution in isooctane (5.3) is prepared for each compound (see Table 1) to determine
the response factor for each component group.
Table 1 — List of the standards for the calculation of the response factors
Class determined Standard
Alcohols Eicosanol (5.2.6)
Free fatty acids Oleic acid (5.2.1)
Hydrocarbons Squalene (5.2.10)
Monoglycerides Monoolein (5.2.2)
Tocopherols α-Tocopherol (5.2.7)
Sterols Cholesterol (5.2.8)
Diglycerides Diolein (5.2.3)
© ISO 2020 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 3
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ISO/TS 22115:2020(E)
Table 1 (continued)
Class determined Standard
Sterol esters Cholesterol palmitate (5.2.9)
Triglycerides Triolein (5.2.4)
8.3 Silylation of the standards
Introduce 100 µl of the internal standard solution, Tridecanoylglycerol (5.2.5), c = 20 mg/ml, and
200 µl of the individual standard solution (each component separately) into a silylation tube (6.3) and
evaporate the solvent to dryness under nitrogen (6.9). Introduce 100 µl of the silylation mixture (5.1).
Keep at 103 °C for 15 min (6.2), then take up into 5 ml isooctane (5.3).
It is recommended when preparing the following solution to check the method precision (optional).
In a 100 ml volumetric flask (6.1), exactly weigh about 50 mg of each standard (5.2), including 50 mg of
the internal standard solution, Tridecanoylglycerol (5.2.5), and dilute to 100 ml with chloroform (5.4).
This solution can be stored at ambient temperature for six months.
To keep the solution homogenous over time, the solution has to be placed into an ultrasonic bath for
10 min before use.
Introduce 0,5 ml of the solution into a silylation tube (6.3) and dry under nitrogen (6.9). Introduce 100 µl
of the silylation mixture (5.1). Keep at 103 °C for 15 min (6.2), then take up into 10 ml isooctane (5.3).
8.4 Preparation of the sample
If the sample is solid at room temperature, completely melt the sample in a 103 °C oven (6.2) and
homogenize it.
8.5 Sample solution
In a 10 ml volumetric flask (6.1), exactly weigh about 100 mg of sample. Introduce exactly 1 ml of
internal standard solution (see 8.1) and dilute to 10 ml with isooctane (5.3).
If the sample is not totally soluble in isooctane, chloroform or toluene may be used instead of isooctane.
8.6 Silylation of the sample
Introduce 0,5 ml of the sample solution (see 8.5) into a silylation tube (6.3) and evaporate the solvent to
dryness under nitrogen (6.9.). Introduce 100 µl of the silylation mixture (5.1). Keep at 103 °C for 15 min
(6.2), then take up into 10 ml isooctane (5.3).
8.7 Gas chromatography
Install the column in the gas chromatograph and check the working conditions by injecting the solvent,
isooctane (5.3). The baseline should be straight with a small positive drift. If the drift is high, proceed
to condition the column. For a negative drift, check the connections of the column.
If the column is being used for the first time, it is necessary to condition the column by heating it in the
oven using a temperature gradient up to 370 °C (depending on the oven temperature chosen for the
analysis) in 4 h. Maintain the temperature for 2 h.
A 1 m long, 0,5 mm diameter, empty fused silica capillary column is recommended as a pre-column.
The conditions in Table 2 for the gas chromatograph have been found to give useful chromatograms.
Solvent vent mode is recommended if the inlet in use is capable of using it.
4 PROOF/ÉPREUVE © ISO 2020 – All rights reserved
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ISO/TS 221
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 22115
Première édition
Corps gras d'origines animale et
végétale — Composition relative des
corps gras et produits dérivés par
chromatographie en phase gazeuse
sur colonne capillaire (méthode
fingerprint)
Animal and vegetable fats and oils — Relative composition of oils and
derivatives by capillary gas chromatography (fingerprint method)
PROOF/ÉPREUVE
Numéro de référence
ISO/TS 22115:2020(F)
©
ISO 2020
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ISO/TS 22115:2020(F)
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
ii PROOF/ÉPREUVE © ISO 2020 – Tous droits réservés
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ISO/TS 22115:2020(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillon . 3
7.1 Échantillonnage . 3
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), c = 20 mg/ml . 3
8.2 Préparation des solutions étalons individuelles pour la détermination des facteurs
de réponse . 4
8.3 Silylation des étalons . 4
8.4 Préparation de l’échantillon . 4
8.5 Solution de dosage . 4
8.6 Silylation de l’échantillon . 5
8.7 Chromatographie en phase gazeuse . 5
8.8 Identification et intégration des pics . 5
9 Résultats de la détermination . 6
9.1 Calcul du facteur de réponse . 6
9.2 Détermination quantitative . 7
10 Fidélité de la méthode . 7
10.1 Essai interlaboratoires . 7
10.2 Répétabilité . 7
10.3 Reproductibilité . 7
11 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Chromatogrammes types . 9
Annexe B (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires .19
Bibliographie .23
© ISO 2020 – Tous droits réservés PROOF/ÉPREUVE iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 22115:2020(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets rédigées par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, de la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute autre information au sujet de
l’adhésion de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les
obstacles techniques au commerce (OTC) voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique
CEN/TC 307, Oléagineux, corps gras d'origine végétale et animale et leurs co-produits — Méthodes
d'échantillonnage et d'analyse du comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de
coopération technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Il convient que l'utilisateur adresse tout retour d'information ou toute question concernant le présent
document à l'organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l'adresse www .iso .org/ members .html.
iv PROOF/ÉPREUVE © ISO 2020 – Tous droits réservés
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SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 22115:2020(F)
Corps gras d'origines animale et végétale — Composition
relative des corps gras et produits dérivés par
chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire
(méthode fingerprint)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode d’analyse semi-quantitative des corps gras et échantillons
dérivés de corps gras (déodistillats).
Il est applicable à l’analyse des corps gras et échantillons dérivés de corps gras pour obtenir des
informations sur les composés majoritaires (par exemple triglycérides) et minoritaires (par exemple
stérols, esters de stérol, tocophérols, esters de cire, alcools gras, glycérol) au cours d'une seule analyse.
Pour une analyse réellement quantitative des classes de composés préalablement identifiées, les
méthodes spécifiques sont plus appropriées.
La méthode peut également être utilisée comme outil d’analyse qualitative en vue d'effectuer une
comparaison relative des compositions d'échantillons.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
4 Principe
Les composés hydroxylés sont transformés en dérivés silylés. Cette opération n’a aucun effet sur les
composés apolaires (non hydroxylés) également présents dans l’échantillon. L'échantillon préparé est
analysé par chromatographie en phase gazeuse (CG) sur une colonne capillaire haute température de
faible épaisseur de film, avec un injecteur on-column et un détecteur à ionisation de flamme.
Pour les analyses quantitatives, les composés sont quantifiés en présence d’un étalon interne
(1,2,3-tridécanoylglycérol) et les facteurs de réponse sont déterminés à partir d’un étalon de référence
de chaque classe.
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5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L’attention est attirée sur les réglementations qui s’appliquent à la
manipulation de substances dangereuses. Des mesures de sécurité d’ordre technique,
organisationnel et personnel doivent être suivies.
Pendant l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue, et de l'eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau d'une pureté équivalente.
5.1 Mélange de réactifs de silylation: Méthylimidazole (n° CAS 616-47-7) et MSHFBA
(n° CAS 53296-64-3).
Préparer un mélange de réactifs de silylation: 1 ml de MSHFBA + 50 µl de méthylimidazole.
NOTE Ce mélange ne peut pas être conservé plus d'une semaine en raison de l’absorption d’humidité. En
effet, les dérivés silylés sont sensibles à l’humidité.
1)
5.2 Substances de référence .
5.2.1 Acide oléique (n° CAS 112-80-1).
5.2.2 1-Monooléine (n° CAS 111-03-5).
5.2.3 1,3-Dioléine (n° CAS 2465-32-9).
5.2.4 Trioléine (n° CAS 122-32-7).
5.2.5 Tridécanoylglycérol (n° CAS 621-71-6).
5.2.6 Éicosanol (n° CAS 629-96-9).
5.2.7 α-Tocophérol (n° CAS 10191-41-0), γ-tocophérol (n° CAS 54-28-4), δ-tocophérol (n°
CAS 119-13-1).
5.2.8 Cholestérol (n° CAS 57-88-5).
5.2.9 Palmitate de cholestérol (n° CAS 601-34-3).
5.2.10 Squalène (n° CAS 111-02-4).
2)
5.2.11 Mélange de phytostérols (n° CAS 474-67-9, 474-62-4, 83-48-7, 83-46-5).
5.3 Isooctane, pour l’analyse de traces organiques, pureté de 99 % min.
5.4 Chloroforme, pour chromatographie.
1) Les fournisseurs appropriés sont Sigma-Aldrich (www .sigmaaldrich .com) ou Larodan (www .larodan .com).
Cette information est donnée par souci de commodité à l'intention des utilisateurs du présent document et ne
saurait constituer un engagement de l'ISO à l’égard de ce fournisseur.
2) Un fournisseur approprié est Larodan (www .larodan .com). Cette information est donnée par souci de
commodité à l'intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de l'ISO à
l’égard de ce fournisseur.
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6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Fiole jaugée, 100 ml et 10 ml.
6.2 Étuve, réglée à 103 °C ± 1 °C.
6.3 Flacons à échantillons coniques en verre, capacité de 10 ml.
6.4 Chromatographe en phase gazeuse pour colonnes capillaires, équipé d’un injecteur on-
column ou dispositif équivalent, d’un four à température programmable et d’un détecteur à ionisation
de flamme (FID).
6.5 Colonne capillaire en silice fondue, pouvant être programmée jusqu’à 400 °C (type « haute
température ») pour laquelle les caractéristiques suivantes sont recommandées: phase stationnaire 100 %
diméthylpolysiloxane ou 95 % diméthyl/5 % diphényl polysiloxane, longueur 30 m, diamètre interne
0,32 mm ou 0,25 mm, épaisseur de film 0,1 µm. D’autres colonnes de polarité et de sélectivité similaires
peuvent également être utilisées.
6.6 Microseringue, capacité de 5 µl à 10 µl, pour l’injection on-column en chromatographie en phase
gazeuse.
6.7 Balance analytique, précise à 0,001 g.
6.8 Bain à ultrasons.
6.9 Évaporateur sous azote.
7 Échantillon
7.1 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Une méthode
[1]
d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 5555 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif et n’ayant pas été
endommagé ou modifié durant le transport ou le stockage.
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l'ISO 661.
8 Mode opératoire
8.1 Préparation de l’étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), c = 20 mg/ml
Dans une fiole jaugée de 10 ml, peser 200 mg de tridécanoylglycérol (5.2.5) et compléter au volume avec
de l’isooctane (5.3).
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8.2 Préparation des solutions étalons individuelles pour la détermination des facteurs
de réponse
Une solution étalon à 5 mg/ml dans l’isooctane (5.3) est préparée pour chaque composé (voir
le Tableau 1) pour déterminer le facteur de réponse de chaque groupe de composés.
Tableau 1 — Liste des étalons pour le calcul des facteurs de réponse
Classe déterminée Étalon
Alcools Éicosanol (5.2.6)
Acides gras libres Acide oléique (5.2.1)
Hydrocarbures Squalène (5.2.10)
Monoglycérides Monooléine (5.2.2)
Tocophérols α-Tocophérol (5.2.7)
Stérols Cholestérol (5.2.8)
Diglycérides Dioléine (5.2.3)
Esters de stérol Palmitate de cholestérol (5.2.9)
Triglycérides Trioléine (5.2.4)
8.3 Silylation des étalons
Dans un tube de silylation (6.3), introduire 100 µl de la solution étalon interne, le tridécanoylglycérol
(5.2.5), c = 20 mg/ml, et 200 µl de la solution étalon individuelle (chaque composé séparément) et
évaporer à sec sous un courant d’azote (6.9). Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir
à 103 °C pendant 15 min (6.2), puis diluer avec 5 ml d’isooctane (5.3).
Lors de la préparation de la solution suivante, il est recommandé de contrôler la fidélité de la méthode
(facultatif).
Dans une fiole jaugée de 100 ml (6.1), peser exactement environ 50 mg de chaque étalon (5.2), y
compris 50 mg de la solution étalon interne, le tridécanoylglycérol (5.2.5), et diluer à 100 ml avec du
chloroforme (5.4).
Cette solution peut être conservée pendant six mois à température ambiante.
Pour que la solution reste homogène dans le temps, elle doit être placée dans un bain à ultrasons
pendant 10 min avant utilisation.
Introduire 0,5 ml de la solution dans un tube de silylation (6.3) et sécher sous un courant d’azote (6.9).
Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir à 103 °C pendant 15 min (6.2), puis diluer
avec 10 ml d’isooctane (5.3).
8.4 Préparation de l’échantillon
Si l’échantillon est solide à température ambiante, faire complètement fondre l’échantillon dans un
four (6.2) réglé à 103 °C et l’homogénéiser.
8.5 Solution de dosage
Dans une fiole jaugée de 10 ml (6.1), peser exactement environ 100 mg d'échantillon. Introduire
exactement 1 ml de solution étalon interne (voir 8.1) et diluer à 10 ml avec de l’isooctane (5.3).
Si l’échantillon n’est pas totalement soluble dans l’isooctane, du chloroforme ou du toluène peut être
utilisé à la place de l’isooctane.
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8.6 Silylation de l’échantillon
Introduire 0,5 ml de la solution de dosage (voir 8.5) dans un tube de silylation (6.3) et évaporer à
sec sous un courant d’azote (6.9). Introduire 100 µl du mélange de silylation (5.1). Maintenir à 103 °C
pendant 15 min (6.2), puis diluer avec 10 ml d’isooctane (5.3).
8.7 Chromatographie en phase gazeuse
Installer la colonne dans le chromatographe en phase gazeuse et contrôler les conditions de
fonctionnement en injectant le solvant, l’isooctane (5.3). Il convient que la ligne de base soit plate avec
une légère dérive positive. Si la dérive est élevée, conditionner la colonne. Si la dérive est négative,
contrôler les raccordements de la colonne.
Si la colonne est utilisée pour la première fois, il est nécessaire de conditionner la colonne en la chauffant
dans le four selon un gradient de température allant jusqu'à 370 °C (suivant la température du four
choisie pour l’analyse) en 4 h. Maintenir la température pendant 2 h.
Il est recommandé d’utiliser une colonne capillaire vide en silice fondue de 1 m de longueur et de 0,5 mm
de diamètre comme pré-colonne.
Les conditions indiquées dans le Tableau 2 pour le chromatographe en phase gazeuse se sont avérées
appropriées pour obtenir des chromatogrammes satisfaisants.
Il est recommandé d’utiliser le mode d'évacuation du solvant si l’injecteur employé le permet.
Optimiser le programm
...
Questions, Comments and Discussion
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