Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice — Determination of patulin content — Part 2: Method using thin-layer chromatography

The principle of the method specified is extraction of patulin in a mixture of ethyl acetate and chloroform (3:2 by volume), filtration of the extract on a silica-gel column and qualitative and quantitative determination by means of two-directional thin-layer chromatography. The spots are developed using a 3-methyl-2-benzothiazoline hydrazone (MBTH) hydrochloride solution. The limit of detection is 25 µg/l, based on 50 ml of ready-to-drink apple juice. The more precise method of analysis is HPLC.

Jus de pommes, concentrés de jus de pommes et boissons à base de jus de pommes — Détermination de la teneur en patuline — Partie 2: Méthode par chromatographie sur couche mince

General Information

Status
Published
Publication Date
23-Jun-1993
Current Stage
9093 - International Standard confirmed
Start Date
15-Jul-2003
Completion Date
20-Jan-2022
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ISO 8128-2:1993 - Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice -- Determination of patulin content
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ISO 8128-2:1993 - Jus de pommes, concentrés de jus de pommes et boissons a base de jus de pommes -- Détermination de la teneur en patuline
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Standards Content (sample)

NORME
ISO
INTERNATIONALE
8128-2
Première édition
1993-07-01
Jus de pommes, concentrés de jus de
pommes et boissons à base de jus de
pommes - Détermination de la teneur en
patuline -
Partie 2:
Méthode par chromatographie sur couche
mince
Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice -
Determina tion of pa tulin content -
Part 2: Method using thin-layer chromatography
Numéro de référence
ISO 8128-2:1993(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8128=2:1993(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une federation
m.ondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comites techniques de I’ISO. Chaque comite membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore etroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 8128-2 a ete élaboree par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 3, Produits
d&iv& des fruits et l&gumes.
L’&O 8128 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre gé-
neral Jus de pommes, concentr& de jus de pommes et boissons à base
de jus de pommes - Dbtermination de la teneur en patuline:
chroma tographie en phase liquide à haute
- Partie 1: Méthode
Par
performance
- Partie 2: Méthode par chromatographie sur couche mince
L’an nexe A de la prés ente partie de I’ISO 8128 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1993

Droits de reproduction réserves. Aucune partie de cette publication ne peut etre reproduite

ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord Acrit de I’editeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1 211 Geneve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8128=2:1993(F)
NORME INTERNATIONALE
Jus de pommes, concentrés de jus de pommes et
Détermination
boissons à base de jus de pommes -
de la teneur en patuline -
Partie 2:
Méthode par chromatographie sur couche mince
ou du chloroforme en raison de leur toxicité et des
1 Domaine d’application
risques d’explosion qu’ils peuvent entraîner,
La présente partie de I’ISO 8128 prescrit une mé-

thode par chromatographie sur couche mince (CCM), 3.1 Solvants, acetate d’éthyle, chloroforme et to-

pour la détermination de la teneur en patuline dans les luene.
jus de pommes, les concentres de jus de pommes
et les boissons à base de jus de pommes.
3.2 Solvants de développement, pour la CCM
bidirectionnelle:
La méthode a une limite de detection de 25 pg/l ba-
sée sur 50 ml de jus de pommes prêt à la consom-
mélange de benzène/méthanol/acide acétique
mation.
(80 % en masse) (19:2:1 en volume);
NOTE 1 Si l’on souhaite obtenir des résultats d’analyse
mélange de toluéne/acétate d’éthyle/acide formi-
plus précis, ou en cas de litige, il convient d’utiliser la mé-
que (90 % en masse) (5:4:1 en volume).
thode par chromatographie en phase liquide à haute perfor-
mance faisant l’objet de I’ISO 8128-l.
3.3 Gel de silice, pour chromatographie sur co-
lonne, de 0,063 mm à 0,2 mm de granulométrie.
2 Principe
3.4 Solution d’élution, mélange de
Extraction de la patuline dans un mélange d’acétate
toluène/acétate d’éthyle (75:25 en volume).
d’éthyle-chloroforme (3:2 en volume). Filtration de
l’extrait sur une colonne de gel de silice et estimation
3.5 Solution étalon de patuline (C7H60,&
qualitative et semi-quantitative par chromatographie
sur couche mince bidirectionnelle (CCM). Les taches
3.5.1 Préparation
sont développées par emploi d’une solution de chlor-
hydrate d’hydrazone de 3-méthyl-2-benzothiazoline
Peser, a 0,l mg près, 10,O mg de patuline, dans une
(MBTH).
fiole jaugée de 100 ml et les dissoudre dans 100 ml
d’acétate d’éthyle (3.1). Ajuster au trait repère avec
de l’acétate d’éthyle.
3 Réactifs
Transférer, à l’aide d’une pipette, 10,O ml de la solu-
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
tion ainsi obtenue dans une autre fiole jaugée de
reconnue, et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de
100 ml et ajuster au trait repère avec de l’acétate
l’eau de pureté au moins équivalente.
d’éthyle.

AVERTISSEMENT - Des pr&autions particuli&es La teneur en patuline de cette solution étalon est de

doivent être prises lors de l’utilisation du benzene 10 pg/ml approximativement.
---------------------- Page: 3 ----------------------
BO 8128=2:1993(F)
CCM, de
Mesurer I’absorbance à 276 nm de cette solution 4.4 Plaques supports pour

étalon à l’aide d’un spectrométre approprie, avec des 20 cm x 20 cm, recouvertes de ge I de silice (3.3)

sans indicateur

cellules en quartz présentant un parcours optique de (épaisseur de la couche 0,25 mm),

10 mm. fluorescent.
NOTE 2 Le mode de préparation de la solution étalon
être réglée à
4.5 Étuve, ventilée, pouvant 1
ainsi que la vérification de sa pureté sont basés sur la réfé-
13O”C+l “C.
rence [3].
5 Échantillonnage
3.5.2 Calcul de la concentration
II est important que le laboratoire reçoive un échan-
Calculer la concentration, pp,, exprimée en micro-
tillon réellement représentatif, non endommage ou
grammes par millilitre, de la solution de patuline
modifie lors du transport et de l’entreposage.
(3.5.1) à l’aide de l’équation
A x Mr x 1 000 x C
6 Mode opératoire
. Pps =
A276
Préparation de la solution d’essai
6.1

A est I’absorbance de la solution etalon de Diluer les concentres de jus de pommes dans l’eau,

patuline; en utilisant un mélange 1:5 de concentre et d’eau, en
volume. Proceder ensuite comme pour les autres
est I’absorbance de la solution de patuline,
A276 produits de la façon suivante.
au maximum d’absorption de 276 nm (voir
Extraire 50 ml de l’échantillon pour laboratoire (dilue
note 3).
si necessaire avec de l’eau) avec 50 ml d’un mélange
est la masse moleculaire relative de la
d’acétate d’éthyle/chloroforme [(3:2 en volume)]
patuline;
pendant au moins 1 min.
C est la constante de l’appareil (1 en géné-
Répéter l’extraction deux autres fois avec des por-
ral).
mélange d’acetate
tions de 50 ml de
d’éthyle/chloroforme et filtrer chaque portion sur un
NOTE 3 Le coefficient d’absorption moléculaire de la
entonnoir en verre fritté, contenant une couche de
patuline mesuré à 276 nm, est égal à 14 600.
1 cm de sulfate de sodium anhydre, en recueillant le
filtrat directement dans un ballon d’évaporation de
250 ml.
3.6 Solution de chlorhydrate de MBTH.
Évaporer sous vide jusqu’à siccité dans un évapo-
...

NORME
ISO
INTERNATIONALE
8128-2
Première édition
1993-07-01
Jus de pommes, concentrés de jus de
pommes et boissons à base de jus de
pommes - Détermination de la teneur en
patuline -
Partie 2:
Méthode par chromatographie sur couche
mince
Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice -
Determina tion of pa tulin content -
Part 2: Method using thin-layer chromatography
Numéro de référence
ISO 8128-2:1993(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8128=2:1993(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une federation
m.ondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comites techniques de I’ISO. Chaque comite membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore etroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 8128-2 a ete élaboree par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 3, Produits
d&iv& des fruits et l&gumes.
L’&O 8128 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre gé-
neral Jus de pommes, concentr& de jus de pommes et boissons à base
de jus de pommes - Dbtermination de la teneur en patuline:
chroma tographie en phase liquide à haute
- Partie 1: Méthode
Par
performance
- Partie 2: Méthode par chromatographie sur couche mince
L’an nexe A de la prés ente partie de I’ISO 8128 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1993

Droits de reproduction réserves. Aucune partie de cette publication ne peut etre reproduite

ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord Acrit de I’editeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1 211 Geneve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
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NORME INTERNATIONALE
Jus de pommes, concentrés de jus de pommes et
Détermination
boissons à base de jus de pommes -
de la teneur en patuline -
Partie 2:
Méthode par chromatographie sur couche mince
ou du chloroforme en raison de leur toxicité et des
1 Domaine d’application
risques d’explosion qu’ils peuvent entraîner,
La présente partie de I’ISO 8128 prescrit une mé-

thode par chromatographie sur couche mince (CCM), 3.1 Solvants, acetate d’éthyle, chloroforme et to-

pour la détermination de la teneur en patuline dans les luene.
jus de pommes, les concentres de jus de pommes
et les boissons à base de jus de pommes.
3.2 Solvants de développement, pour la CCM
bidirectionnelle:
La méthode a une limite de detection de 25 pg/l ba-
sée sur 50 ml de jus de pommes prêt à la consom-
mélange de benzène/méthanol/acide acétique
mation.
(80 % en masse) (19:2:1 en volume);
NOTE 1 Si l’on souhaite obtenir des résultats d’analyse
mélange de toluéne/acétate d’éthyle/acide formi-
plus précis, ou en cas de litige, il convient d’utiliser la mé-
que (90 % en masse) (5:4:1 en volume).
thode par chromatographie en phase liquide à haute perfor-
mance faisant l’objet de I’ISO 8128-l.
3.3 Gel de silice, pour chromatographie sur co-
lonne, de 0,063 mm à 0,2 mm de granulométrie.
2 Principe
3.4 Solution d’élution, mélange de
Extraction de la patuline dans un mélange d’acétate
toluène/acétate d’éthyle (75:25 en volume).
d’éthyle-chloroforme (3:2 en volume). Filtration de
l’extrait sur une colonne de gel de silice et estimation
3.5 Solution étalon de patuline (C7H60,&
qualitative et semi-quantitative par chromatographie
sur couche mince bidirectionnelle (CCM). Les taches
3.5.1 Préparation
sont développées par emploi d’une solution de chlor-
hydrate d’hydrazone de 3-méthyl-2-benzothiazoline
Peser, a 0,l mg près, 10,O mg de patuline, dans une
(MBTH).
fiole jaugée de 100 ml et les dissoudre dans 100 ml
d’acétate d’éthyle (3.1). Ajuster au trait repère avec
de l’acétate d’éthyle.
3 Réactifs
Transférer, à l’aide d’une pipette, 10,O ml de la solu-
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
tion ainsi obtenue dans une autre fiole jaugée de
reconnue, et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de
100 ml et ajuster au trait repère avec de l’acétate
l’eau de pureté au moins équivalente.
d’éthyle.

AVERTISSEMENT - Des pr&autions particuli&es La teneur en patuline de cette solution étalon est de

doivent être prises lors de l’utilisation du benzene 10 pg/ml approximativement.
---------------------- Page: 3 ----------------------
BO 8128=2:1993(F)
CCM, de
Mesurer I’absorbance à 276 nm de cette solution 4.4 Plaques supports pour

étalon à l’aide d’un spectrométre approprie, avec des 20 cm x 20 cm, recouvertes de ge I de silice (3.3)

sans indicateur

cellules en quartz présentant un parcours optique de (épaisseur de la couche 0,25 mm),

10 mm. fluorescent.
NOTE 2 Le mode de préparation de la solution étalon
être réglée à
4.5 Étuve, ventilée, pouvant 1
ainsi que la vérification de sa pureté sont basés sur la réfé-
13O”C+l “C.
rence [3].
5 Échantillonnage
3.5.2 Calcul de la concentration
II est important que le laboratoire reçoive un échan-
Calculer la concentration, pp,, exprimée en micro-
tillon réellement représentatif, non endommage ou
grammes par millilitre, de la solution de patuline
modifie lors du transport et de l’entreposage.
(3.5.1) à l’aide de l’équation
A x Mr x 1 000 x C
6 Mode opératoire
. Pps =
A276
Préparation de la solution d’essai
6.1

A est I’absorbance de la solution etalon de Diluer les concentres de jus de pommes dans l’eau,

patuline; en utilisant un mélange 1:5 de concentre et d’eau, en
volume. Proceder ensuite comme pour les autres
est I’absorbance de la solution de patuline,
A276 produits de la façon suivante.
au maximum d’absorption de 276 nm (voir
Extraire 50 ml de l’échantillon pour laboratoire (dilue
note 3).
si necessaire avec de l’eau) avec 50 ml d’un mélange
est la masse moleculaire relative de la
d’acétate d’éthyle/chloroforme [(3:2 en volume)]
patuline;
pendant au moins 1 min.
C est la constante de l’appareil (1 en géné-
Répéter l’extraction deux autres fois avec des por-
ral).
mélange d’acetate
tions de 50 ml de
d’éthyle/chloroforme et filtrer chaque portion sur un
NOTE 3 Le coefficient d’absorption moléculaire de la
entonnoir en verre fritté, contenant une couche de
patuline mesuré à 276 nm, est égal à 14 600.
1 cm de sulfate de sodium anhydre, en recueillant le
filtrat directement dans un ballon d’évaporation de
250 ml.
3.6 Solution de chlorhydrate de MBTH.
Évaporer sous vide jusqu’à siccité dans un évapo-
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