ISO 5508:1978

Animal and vegetable fats and oils — Analysis by gas-liquid chromatography of methyl esters of fatty acids

Corps gras d'origines animale et végétale — Analyse par chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 30-Sep-1978
• Withdrawal Date: 30-Sep-1978
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 01-Sep-1990

Relations

• Revised: SIST ISO 5508:1995 - Animal and vegetable fats and oils -- Analysis by gas chromatography of methyl esters of fatty acids
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: ISO 5508:1990 - Animal and vegetable fats and oils — Analysis by gas chromatography of methyl esters of fatty acids
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL STANDARD 5508
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MEMYHAPOLIHAR OPrAHHBAUHR no CTAHLIAPTH3AUHHWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
L,
Animal and vegetable fats and oils - Analysis by gas-liquid
chromatography of methyl esters of fatty acids
Corps gras d'origines animale et végétale - Analyse par chromatographie en phase gazeuse des esters
méthyliques d'acides gras
First edition - 1978-10-15
-
w
-
UDC 664.3 : 661.73 : 543.544.45 Ref. No. IS0 5508 -1978 (E)
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z
Descriptors : fats, animal fats, vegetable fats, vegetable oils, fatty acids, methyl ester, quantitative analysis, qualitative analysis, gaschroma-
Co
ln a tographic analysis.
rJ
a
Price based on 5 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
FOREWORD
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing
International Standards is carried out through IS0 technical committees. Every
member body interested in a subject for which a technical committee has been set
up has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated
to the member bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the IS0 Council.
International Standard IS0 5508 was developed by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, and was circulated to the member bodies
in July 1976.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Hungary Portugal
Australia
Austria I ran South Africa, Rep. of
Bulgaria Israel Spain
Canada Korea, Rep. of Thailand
Czechoslovakia Netherlands Turkey
France New Zealand United Kingdom
Germany, F.R. Poland Yugoslavia
The member body of the following country expressed disapproval of the document
on technical grounds :
Chile
O International Organization for Standardization, 1978
Printed in Switzerland

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INTERNATIONAL STANDARD IS0 5508-1978 (E)
Animal and vegetable fats and oils - Analysis by gas-liquid
chromatography of methyl esters of fatty acids
1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 4 APQARATUS
This International Standard gives general guidance for the The instructions given relate to the ordinary equipment
application of gas-liquid chromatography to determine used for gas liquid chromatography, employing a packed
the qualitative and quantitative composition of a mixture column and a flameionization detector. Any apparatus
of fatty acid methyl esters obtained according to IS0 5509. giving the efficiency and resolution defined in 5.1.2 is
suitable.
The method is not applicable to polymerized fatty acids.
4.1 Gas chromatoyaph
2 REFERENCE
4.1.1 Injection system
L
IS0 5509, Animal and vegetable fats and oils - Preparation
The injection system shall have the least dead space possible.
of methyl esters of fatty acids.
Unless materially impossible, it shall be capable of being
heated to a temperature 20 to 50°C higher than that of
the column.
3 PRODUCTS REQUIRED
4.1.2 Oven
3.1 Carriergas
The oven shall be capable of heating the column to a
Inert gas (nitrogen, helium, argon, etc.), thoroughly dried
temperature of at least 220 "C and of maintaining the
and with an oxygen content less than 1 O mglkg.
desired temperature to within k 1 OC.
3.2 Auxiliary gases
If programmed heating is to be used, an apparatus with a
twin column is recommended.
3.2.1 Hydrogsn (purity 2 99,9 %), free from organic
impurities.
4.1.3 Packed column
3.22 Air or oxygen, free from organic impurities.
4.1.3.1 COLUMN
The column shall be constructed of a material inert to the
3.3 Reference standards
substances to be analysed (glass or stainless steel).
A mixture of methyl esters, or the methyl esters of an oil
NOTE - If polyunsaturated components with more than 3 double
of known composition, preferably similar to that of the
bonds are present, they may be decomposed in a stainless steel
fatty matter to be analysed. column.
1

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IS0 5508-1978 (E)
- Length : 1 to 3 m. A relatively short column should 5 PROCEDURE
be used when long-chain fatty acids (above Cz0) are
The operations described below relate to the use of a flame-
present. When analysing acids with 4 or 6 carbon atoms,
ionization detector.
it is recommended that a 2 m column be used.
NOTE - A gas-liquid chromatograph employing a catharometer
- Internal diameter : 2 to 4 mm.
detector (working on thermal conductivity changes) may be used.
Operating conditions are then modified as indicated in clause 7.
4.1.3.2 PACKING
5.1 Test conditions
- Support : Acid-washed and silanized diatomaceous
earth, or other suitable inert support with a narrow
5.1.1 Selection of optimum operating conditions
range of grain size (25 pm between the limits 125 pm
to 200 pm), the average grain size being related to the
In selecting the test conditions, the following variables
internal diameter and length of the column.
should be taken into account :
- Stationary phase : Polyester type of polar liquid (for
length and diameter of the column;
example, diethylene glycol polysuccinate, butanediol
nature and amount of the stationary phase;
polysuccinate, ethyleneglycol polyadipate, etc.), cyano-
silicones or any other liquid permitting the chromato-
temperature of the column;
graphic separation required (see clause 5). The stationary
phase should amount to 5 to 20% of the packing. A
carrier gas flow;
non-polar stationary phase can be used for certain
resolution required;
separations.
size of the test portion, selected in such a way that
4.1.3.3 CONDITIONING OF THE COLUMN
a
the assembly of the detector and electrometer gives
linear response;
With the column disconnected, if possible, from the de-
tector, gradually heat the oven to 185 OC and pass a current
- duration of analysis.
of inert gas through the freshly prepared column at a rate
Generally, the following values will lead to the desired
of 20 to 60 ml/min for at least 16 h at this temperature,
results, i.e. at least 2 O00 theoretical plates for methyl
and for a further 2 h at 195 OC.
stearate and its elution within about 15 min.
4.1.4 Detector
Internal diameter
Carrier gas-flow
of column
The daector should preferably be capable of being heated
to a temperature above that of the column.
ml/min
mm
15 to 25
2
4.2 Syringe
20 to 40
3
4 40 to 60
Maximum capacity 10 pl, graduated in 0,l pl.
Concentration of
Temperature
4.3 Recorder
stationary phase
If the recorded curve is to be used to calculate the compo-
% OC
sition of the mixture analysed, an electronic recorder of
5 175
high precision, compatible with the apparatus used, is
10 180
required. The recorder shall have the following character-
15 185
ristics :
20 185
- rate of response below 1,5 s, preferably 1 s;
Where the apparatus allows it, the injector should be at a
(The rate of response is the time taken for the recording
temperature of about 200 OC and the detector at a tempera-
pen to pass from O to 90 X folhwing the sudden intro-
ture equal to or higher than that of the column.
duction of a 100 % signal.)
As a rule, the ratio of the flow rate of the hydrogen sup-
- width of the paper : 25 cm minimum;
lied to the flame-ionization detector to that of the carrier
- paper speed : adjustable to values between 0,4 gas varies from 1 : 2 to 1 : 1 depending on column dia-
and 2,5 cm/min. meter. The flow of oxygen is about 5 to 10 times that of
the hydrogen.
4.4 integrator or calculator (optional)
5.1.2 Determination of efficiency and resolution
Rapid and accurate calculation can be performed with the
Carry out the analysis of a mixture of methyl stearate and
help of an electronic integrator or calculator. This shall
oleate in about equivalent proportions (for example
give a linear response with adequate sensitivity, and the
methyl esters from cocoa butter).
correction for deviation of the base line shall be satisfactory.
2

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IS0 5508-1978 (E)
Choose the size of the test portion, the temperature of the If the analysis is for constituents present only in trace
column and the carrier gas flow so that the maximum of amounts, the size of the test portion may be increased
the methyl stearate peak is recorded about 15 min after (up to ten-fold).
the solvent peak, and occupies about 3/4 of the full scale.
5.3 Analysis
Calculate the number of theoretical plates, n (efficiency),
using the formula :
Generally, the operating conditions shall be those defined
2 in 5.1.1. Nevertheless, it is possible to work with a lower
n = 16 (2) column temperature when the determination of fatty acids
with fewer than 12 carbon atoms is required, or at a higher
temperature when determining f
...

N O R M E I N T ER N AT I O N A LE 5508
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIOIJIME~YHAPOLIWAR OPTAHHJAUHR il0 CTAH~PTH3AUHH.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
IL- Corps gras d'origines animale et végétale - Analyse par
chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d'acides gras
Animal and vegetable fats and oils - Analysis by gas-liquid chromatography of methyl esters of fatty acids
Première édition - 1978-10-15
4
U
-
CDU 664.3 : 661.73 : 543.544.45 Réf. no : IS0 5508-1978 (FI
02
p.
m
c
D.ocriptours : corps gras, corps gras animal, corps gras végétal, huile végétale, acide gras, ester méthylique, analyse quantitative, analyse
m
O
qualitative, méthode chromatographique en phase gazeuse.
In
In
Prix basé sur 5 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
AVANT-PROPOS
L‘ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I‘ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I‘ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partiedu comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont
soumis aux comites membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes internationales par le Conseil de I’ISO.
La Norme internationale IS0 5508 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres
en juillet 1976.
Les comités membres des pays suivants l’ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d’ Espagne Pologne
Portugal
Allemagne, R.F. France
Roy au me- Uni
Australie Hongrie
Iran Tchécoslovaquie
Autriche
Israël Thaïlande
Bulgarie
Canada Nouvelle-Zélande Turquie
Corée, Rép. de Pays-Bas Yougoslavie
Le comité membre du pays suivant l’a désapprouvée pour des raisons techniques :
Chili
O Organisation internationale de normalisation, 1978 0
Imprimé en Suisse

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NORME INTERNATIONALE IS0 5508-1978 (F)
Corps gras d'origines animale et végétale - Analyse par
chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques
d'acides gras
1 OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION huile, de composition connue, si possible voisine de celle du
corps gras à analyser.
La présente Norme internationale donne des directives
générales pour la détermination par chromatographie en
phase gazeuse de la composition qualitative et quantitative 4 APPAREILLAGE
d'un mélange d'esters méthyliques d'acides gras obtenu
Les prescriptions fournies concernent les appareillages usuels
selon l'lS0 5509.
avec colonne a rem-
de chromatographie en phase gazeuse
plissage et détecteur à ionisation de flamme. Tout appareil-
La méthode n'est pas applicable aux acides gras polymérisés.
lage ayant la même efficacité et la même résolution que
celles définies en 5.1.2 peut convenir.
,.,- 2 RÉFÉRENCE
4.1 Appareil de chromatographie en phase gazeuse
IS0 5509, Corps gras d'origines animale et végétale - Pré-
paration des esters méth yliques d'acides gras.
4.1.1 Dispositif d'injection
Le dispositif d'injection doit avoir le plus faible volume
3 PRODUITS NÉCESSAIRES
mort possible. II sera de préférence capable d'être porté à
une température supérieure de 20 à 50 "C à celle de la
3.1 Gaz vecteur
colonne.
Gaz inerte (azote, hélium, argon, etc.) soigneusement
désséché et contenant moins de 1 O mglkg d'oxygène. 4.1.2 Four
Le four doit être capable de porter la colonne a une tempé-
3.2 Gaz auxiliaires
rature d'au moins 220°C et de maintenir la température
choisie à 1 "C pres.
3.2.1 Hydrogène (de pureté 2 99,9 %), ne contenant pas
Dans le cas d'utilisation de conditions programmées, il est
d'impuretés organiques.
conseillé de choisir un appareil a double colonne.
3.2.2 Air ou oxygène, ne contenant pas d'impuretés orga-
4.1.3 Colonne a remplissage
niques.
4.1.3.1 COLONNE
3.3 Produits d'étalonnage
Mélange d'esters méthyliques, ou esters méthyliques d'une La colonne doit être en matériau inerte vis-à-vis des corps
1

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IS0 5508-1978 (F)
4.4 Intégrateur ou calculateur (facultatif)
à analyser : verre, ou, à défaut, acier inoxydable.
NOTE - Si des constituants polyinsaturés à plus de 3 doubles liai-
L'emploi d'un intégrateur électronique ou d'un calculateur
sons sont présents, une colonne en acier inoxydable peut provoquer
permet un calcul rapide et précis. Celui-ci doit fournir une
leur décomposition.
réponse linéaire, avoir une sensibilité suffisante, et la correc-
tion de la déviation de la ligne de base doit être satisfaisante.
- Longueur : de 1 à 3m. Une colonne relativement
courte sera utilisée dans le cas où des acides gras à longue
chaîne (> Cz0) sont présents. Dans le cas de la détermi-
5 MODE OPÉRATOIRE
nation des acides en C, et en C,, il est recommandé
Les détails opératoires donnés ci-dessous concernent I'em-
d'utiliser une colonne de 2 m.
ploi d'un détecteur à ionisation de flamme.
- Diamètrè intérieur : de 2 à 4 mm.
NOTE - Un appareil de chromatographie en phase gazeuse avec un
détecteur à conductibilité thermique katharomètre) peut être
4.1.3.2 REM P L ISSAG E
utilisé. Les conditions opératoires doivent alors être modifiées
comme indiqué au chapitre 7.
- Support : terre de diatomées lavée aux acides et
silanisée, ou tout autre support inerte pouvant convenir,
5.1 Conditions d'essai
avec un étroit intervalle de granulométrie (25 bm entre
125 et 200 pm), la dimension moyenne étant liée au
5.1.1 Choix des conditions optimales de travail
-d
diamètre intérieur et à la longueur de la colonne.
Pour choisir les conditions de travail, il y a lieu de tenir
- Phase stationnaire : phase polaire de type polyester
compte des variables suivantes :
(par exemple polysuccinate de diéthylèneglycol, poly-
- longueur et diamètre de la colonne;
succinate de butanediol, polyadipate d'éthylèneglycol,
etc.), cyanosilicones ou toute autre phase permettant la
- nature et quantité de la phase stationnaire;
séparation chromatographique (voir chapitre 5). Le taux
d'imprégnation sera compris entre 5 et 20 %. Pour cer-
- température de la colonne;
taines séparations, des phases apolaires pourront être
- débit du gaz vecteur;
utilisées.
- résolution souhaitée;
4.1.3.3 CONDITIONNEMENT DE LA COLONNE
- importance de la prise d'essai, choisie de façon telle
Après avoir, si possible, déconnecté la colonne du détecteur,
que l'ensemble détecteur-électromètre fournisse une
le four à 185 OC et maintenir la
porter progressivement
réponse linéaire;
colonne venant d'être préparée, sous un courant de gaz
inerte de 20 à 60 ml/min durant au moins 16 h à cette
- durée de l'analyse.
température, puis durant 2 h à 195 OC.
En général, les valeurs suivantes seront celles donnant les
résultats désirés, à savoir nombre de plateaux théoriques,
4.1.4 Détecteur
pour le stéarate de méthyle, au moins égal à 2 O00 et élu-
15 min environ :
tion de celui-ci en
Le détecteur sera de préférence capable d'être porté à une
1
-
température supérieure à celle de la colonne.
Diamètre intérieur
Vitesse du gaz vecteur
de la colonne
mi/min
mm
4.2 Seringue
15 à 25
2
20 à 40
3
Seringue de 10 pl au maximum, graduée en 0,l pl.
40 à 60
4
Concentration de la
Température
phase stationnaire
4.3 Enregistreur
% OC
Lorsque la courbe enregistrée est utilisée pour calculer la
175
5
composition du mélange analysé, l'enregistreur doit être un
10 180
appareil électronique de grande précision, compatible avec
185
15
l'appareillage utilisé, et ayant les caractéristiques suivantes :
185
20
- vitesse de réponse inférieure a 1,5 s, de préférence 1 s;
Lorsque l'appareil le permet, l'injecteur devrait être à une
(La vitesse de réponse est le temps nécessaire pour que la
température voisine de 200 OC, et le détecteur à une tempé-
plume de l'enregistreur aille de O à 90 % lors de I'intro-
rature égale ou supérieure à celle de la colonne.
duction soudaine d'un signal de 1 O0 %.)
En général, le rapport du débit d'hydrogène du détecteur a
- largeur du papier : 25 cm minimum;
ionisation de flamme à celui du gaz vecteur, varie de 1 : 2
à 1 : 1, selon le diamètre de la colonne. Le débit d'oxygène
- vitesse de déroulement du papier : réglable à des
est d'environ 5 à 10 fois celui de l'hydrogène.
valeurs comprises entre 0,4 et 2,5 cm/min.
2

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IS0 5508-1978 (F)
5.1.2 Détermination de l'efficacité et de la résolution 5.2 Prise d'essai
Effectuer l'analyse d'un mélange de stéarate et d'oléate de À l'aide de la seringue (4.21, prélever de 0.1 à 2 pI de la
méthyle en proportions sensiblement équivalentes (par solution d'esters méthyliques obtenue selon 1'1S0 5509.
exemple esters méthyliques de beurre de cacao). Dans le cas des esters exempts de solvants, préparer une
solution à 1 O0 mg/ml environ dans de I'heptane pour chro-
Choisir l'importance de la prise d'essai, la température de la
matographie en phase gazeuse et injecter 0,l à 1 pI de cette
colonne et le débit du gaz vecteur, de façon que le maxi-
solution.
mum du pic du stéarate de méthyle soit enregistré environ
Pour la recherche de constituants présents à l'état de traces,
15 min après le pic du solvant, et que ce pic corresponde à
cette prise d'essai pourra être augmentée (jusqu'à dix fois).
environ les 3/4 de l'échelle totale.
Calculer le nombre de plateaux théoriques, n, à l'aide de la
5.3 Ana
...