ISO 18363-2:2025

Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS — Part 2: Method using slow alkaline transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol

This document specifies a procedure for the parallel determination of glycidol together with 2-MCPD and 3-MCPD present in bound or free form in oils and fats. The method is based on alkaline-catalysed ester cleavage, transformation of the released glycidol into monobromopropanediol (MBPD) and derivatisation of the derived free diols (MCPD and MBPD) with phenylboronic acid (PBA). Though free MCPD and glycidol are supposed to be present in fats and oils in low to negligible quantities only, in the event that free analytes are present, they would contribute proportionately to the results. The results always being the sum of the free and the bound form of a single analyte. This method is applicable to solid and liquid fats and oils. This document can also apply to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study is undertaken before the analysis of these matrices. Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this document.

Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination des esters de chloropropanediols (MCPD) et d’acides gras et des esters de glycidol et d’acides gras par CPG/SM — Partie 2: Méthode par transestérification alcaline lente et mesure pour le 2-MCPD, le 3-MCPD et le glycidol

Le présent document spécifie un mode opératoire permettant la détermination parallèle du glycidol ainsi que du 2-MCPD et du 3-MCPD présents sous forme liée ou libre dans les corps gras. La méthode repose sur un clivage des esters par catalyse alcaline, une transformation du glycidol ainsi libéré en monobromopropanediol (MBPD) et une dérivatisation des diols libres (MCPD et MBPD) en présence d’acide phénylboronique (PBA). Bien qu’il soit considéré que du MCPD et du glycidol libres ne sont présents dans les corps gras qu’en quantités faibles ou négligeables, dans le cas où des analytes libres seraient présents, ceux-ci contribueraient proportionnellement aux résultats. Les résultats sont toujours la somme de la forme libre et de la forme liée d’un même analyte. La présente méthode est applicable aux corps gras solides et liquides. Le présent document peut également s’appliquer aux graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une étude de validation est menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices. Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du domaine d’application du présent document.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 07-Jan-2025
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 08-Jan-2025
• Due Date: 08-Jan-2025
• Completion Date: 08-Jan-2025

Relations

• Revises: ISO 18363-2:2018 - Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS — Part 2: Method using slow alkaline transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
• Effective Date: 24-Feb-2024

Standards Content (Sample)

International
Standard
ISO 18363-2
Second edition
Animal and vegetable fats and
2025-01
oils — Determination of fatty-acid-
bound chloropropanediols (MCPDs)
and glycidol by GC/MS —
Part 2:
Method using slow alkaline
transesterification and
measurement for 2-MCPD, 3-MCPD
and glycidol
Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination des
esters de chloropropanediols (MCPD) et d’acides gras et des
esters de glycidol et d’acides gras par CPG/SM —
Partie 2: Méthode par transestérification alcaline lente et mesure
pour le 2-MCPD, le 3-MCPD et le glycidol
Reference number
© ISO 2025
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 3
5.1 General .3
5.2 Solvents and chemicals .3
5.3 Standard and reference compounds .3
5.4 Working solutions .4
5.5 Other solutions .4
6 Apparatus . 4
7 Sample . 5
7.1 Sampling .5
7.2 Preparation of the test sample .5
8 Procedure . 5
8.1 Spiking with surrogate standard and homogenization .5
8.2 Ester cleavage and glycidol transformation .5
8.3 Matrix removal .6
8.4 Derivatization .6
8.5 Gas chromatography/mass spectrometry references .6
9 Expression of results . 7
9.1 Determination of bound glycidol . .7
9.2 Determination of bound 2-MCPD .8
9.3 Determination of bound 3-MCPD .9
9.4 Determination of the degree of diester cleavage .9
9.5 Quality control .9
10 Notes . . 10
Annex A (informative) Examples of relevant chromatograms and data evaluation using “low-
MCPD” palm oil .12
Annex B (informative) Results of interlaboratory tests . 19
Bibliography .21

iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products - Methods
of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN
(Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 18363-2:2018), of which it constitutes a minor
revision to align the Introduction with ISO 18363-4:2021.
A list of all parts in the ISO 18363 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.

iv
Introduction
[1]
The ISO 18363 series can be used for the determination of ester-bound MCPD and glycidol. This
introduction describes the methods specified in the different parts so that the analyst can decide which
methods are suitable for application. The detailed application of each method is contained within the scope
of each individual method.
[2] [3]
ISO 18363-1 is a differential method equivalent to the DGF standard C-VI 18 (10) and identical to AOCS
[4]
Official Method Cd 29c-13 . In brief, it is based on a fast alkaline catalysed release of 3-MCPD and glycidol
from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into induced 3-MCPD. It consists of two parts.
The first part (A) allows the determination of the sum of ester-bound 3-MCPD and ester-bound glycidol,
whereas the second part (B) determines ester-bound 3-MCPD only. Both assays are based on the release
of the target analytes 3-MCPD and glycidol from the ester-bound form by an alkaline catalysed alcoholysis
carried out at room temperature. In part A, an acidified sodium chloride solution is used to stop the
reaction and subsequently convert the glycidol into induced 3-MCPD. Thus, 3-MCPD and glycidol become
indistinguishable in part A. In part B, the reaction stop is achieved by the addition of an acidified chloride-free
salt solution which also prevents the conversion of glycidol into induced MCPD. Consequently, part B allows
the determination of the genuine 3-MCPD content. Finally, the glycidol content of the sample is proportional
to the difference of both assays (A – B) and can be calculated when the transformation ratio from glycidol
to 3-MCPD has been determined. ISO 18363-1 is applicable to the fast determination of ester-bound 3-MCPD
and glycidol in refined and non-refined vegetable oils and fats. ISO 18363-1 can also apply to animal fats and
used frying oils and fats, but a validation study must be undertaken before the analysis of these matrices.
Any free analytes within the sample would be included in the results, but the document does not allow the
distinction between free and bound analytes. However, as of publication of this document, research has not
shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable
oils and fats. In principle, ISO 18363-1 can also be modified in such a way that the determination of 2-MCPD
[5]
is feasible, but again, a validation study must be undertaken before the analysis of this analyte.
[6][7]
This document (i.e. ISO 18363-2) represents AOCS Official Method Cd 29b-13. For information on
corresponding validation data, see Annex B. In brief, it is based on a slow alkaline release of MCPD and
glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into 3-MBPD. This document consists
of two sample preparations that differ in the use of internal standards. Both preparations are used for
the determination of ester-bound 2-MCPD and 3-MCPD. In part A, a preliminary result for ester-bound
glycidol is determined. Because the 3-MCPD present in the sample is converted to some minor extent into
induced glycidol by the sample preparation, part B serves to quantify this amount of induced glycidol that is
subsequently subtracted from the preliminary glycidol result of part A. By
...

Norme
internationale
ISO 18363-2
Deuxième édition
Corps gras d’origines animale et
2025-01
végétale — Détermination des
esters de chloropropanediols
(MCPD) et d’acides gras et des
esters de glycidol et d’acides gras
par CPG/SM —
Partie 2:
Méthode par transestérification
alcaline lente et mesure pour le
2-MCPD, le 3-MCPD et le glycidol
Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-
bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS —
Part 2: Method using slow alkaline transesterification and
measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
Numéro de référence
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Réactifs . 3
5.1 Généralités .3
5.2 Solvants et produits chimiques .3
5.3 Composés étalons et composés de référence .3
5.4 Solutions de travail .4
5.5 Autres solutions .4
6 Appareillage . 4
7 Échantillon . 5
7.1 Échantillonnage .5
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai .5
8 Mode opératoire . 5
8.1 Ajout d’étalon de substitution et homogénéisation .5
8.2 Clivage des esters et transformation du glycidol.6
8.3 Élimination de la matrice .6
8.4 Dérivatisation .6
8.5 Références relatives à la chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de masse
(CPG/SM) .6
9 Expression des résultats . 7
9.1 Détermination du glycidol lié .7
9.2 Détermination du 2-MCPD lié .9
9.3 Détermination du 3-MCPD lié.9
9.4 Détermination du degré de clivage des diesters .9
9.5 Contrôle qualité .10
10 Notes . . 10
Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes pertinents et d’évaluation des données
basés sur de l’huile de palme «à faible teneur en MCPD» .13
Annexe B (informative) Résultats des essais interlaboratoires .20
Bibliographie .22

iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 307,
Oléagineux, corps gras d’origines végétale et animale et leurs co-produits — Méthodes d’échantillonnage et
d’analyse, du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique
entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 18363-2:2018), dont elle constitue une
révision mineure pour aligner l’Introduction avec l’ISO 18363-4:2021.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 18363 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.

iv
Introduction
[1]
La série ISO 18363 peut être utilisée pour la détermination des esters de MCPD et de glycidol.
Cette introduction décrit les méthodes spécifiées dans les différentes parties pour que les analystes puissent
décider des méthodes qui conviennent à leurs applications. L’application détaillée de chaque méthode figure
dans le domaine d’application de chaque méthode concernée.
[2] [3]
L’ISO 18363-1 est une méthode différentielle équivalente à la norme C-VI 18 (10) de la DGF et identique
[4]
à la méthode officielle Cd 29c-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose sur la libération rapide par catalyse
alcaline de 3-MCPD et de glycidol à partir de leurs dérivés esters. Le glycidol est par la suite converti en
3-MCPD. Elle comprend deux parties. La première partie (A) permet de déterminer la somme des esters de
3-MCPD et des esters de glycidol, tandis que la seconde partie (B) ne détermine que les esters de 3-MCPD.
Les deux analyses reposent sur la libération des analytes cibles, le 3-MCPD et le glycidol, à partir des esters
par alcoolyse en présence d’un catalyseur alcalin à température ambiante. Dans la partie A, une solution
acidifiée de chlorure de sodium est utilisée pour interrompre la réaction et induire par la suite la conversion
du glycidol en 3-MCPD. Il n’est par conséquent plus possible de faire la distinction entre le 3-MCPD et le
glycidol dans la partie A. Dans la partie B, la réaction est interrompue par ajout d’une solution saline
acidifiée exempte de chlorure qui évite aussi la conversion du glycidol en MCPD. La partie B permet ainsi de
déterminer la véritable teneur en 3-MCPD. Enfin, la teneur en glycidol de l’échantillon est proportionnelle à
la différence entre les deux analyses (A – B) et peut être calculée lorsque le coefficient de transformation du
glycidol en 3-MCPD a été déterminé. L’ISO 18363-1 s’applique à la détermination rapide des esters de 3-MCPD
et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. L’ISO 18363-1 peut également
s’appliquer aux graisses animales et aux corps gras de friture usagés, mais une étude de validation doit
être menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices. Les analytes libres éventuellement contenus
dans l’échantillon sont habituellement inclus dans les résultats, mais le document ne permet pas de faire la
distinction entre les analytes libres et les analytes liés. Néanmoins, les études disponibles au moment de la
publication du présent document ne révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en
analytes estérifiés dans les corps gras d’origine végétale raffinés. En principe, l’ISO 18363-1 peut également
[5]
être modifiée de façon à permettre la détermination du 2-MCPD, mais une fois encore, une étude de
validation doit être menée avant d’analyser cet analyte.
[6][7]
Le pr
...