ISO 20776-1:2019
(Main)Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices — Part 1: Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices — Part 1: Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases
This document describes one reference method, broth micro-dilution, for determination of MICs. The MIC can be a guide for the clinician, and reflects the activity of the drug under the described test conditions, by taking into account other factors, such as drug pharmacology, pharmacokinetics, or bacterial resistance mechanisms. This allows categorisation of bacteria as "susceptible" (S), "intermediate" (I), or "resistant" (R). In addition, MIC distributions can be used to define wild type or non-wild type bacterial populations. Although clinical interpretation of the MIC value is beyond the scope of this document, modifications of the basic method are required for certain antimicrobial agent - bacteria combinations to facilitate clinical interpretation. These modifications are included in a separate annex of this document. It is necessary to compare other susceptibility testing methods (e.g. disc diffusion or diagnostic test devices) with this reference method for validation, in order to ensure comparable and reliable results.
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des performances des dispositifs pour antibiogrammes — Partie 1: Méthode de référence de microdilution en bouillon pour la détermination de la sensibilité in vitro aux agents antimicrobiens des bactéries aérobies à croissance rapide impliquées dans les maladies infectieuses
Le présent document décrit une méthode de référence, la microdilution en bouillon, pour déterminer les CMI. La CMI peut constituer un guide pour le clinicien et reflète l'activité du médicament dans les conditions d'essai décrites, en tenant compte d'autres facteurs tels que la pharmacologie du médicament, la pharmacocinétique ou les mécanismes de résistance bactérienne. Cela permet de classer les bactéries comme étant «sensibles» (S), «intermédiaires» (I) ou «résistantes» (R). En outre, les distributions de CMI peuvent être utilisées pour définir les populations bactériennes de type sauvage ou non sauvage. Bien que l'interprétation clinique de la valeur de la CMI se trouve au-delà du domaine d'application du présent document, des modifications de la méthode de base sont nécessaires pour certaines combinaisons agent antimicrobien-bactérie afin de faciliter l'interprétation clinique. Ces modifications sont incluses dans une annexe séparée du présent document. Il est nécessaire de comparer les autres méthodes d'essai de sensibilité (par exemple, les méthodes de diffusion en gélose ou les dispositifs d'essai de diagnostic) à cette méthode de référence à des fins de validation et pour garantir des résultats comparables et fiables.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20776-1
Second edition
2019-06
Corrected version
2019-12
Susceptibility testing of infectious
agents and evaluation of performance
of antimicrobial susceptibility test
devices —
Part 1:
Broth micro-dilution reference
method for testing the in vitro activity
of antimicrobial agents against rapidly
growing aerobic bacteria involved in
infectious diseases
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour antibiogrammes —
Partie 1: Méthode de référence de microdilution en bouillon pour la
détermination de la sensibilité in vitro aux agents antimicrobiens des
bactéries aérobies à croissance rapide impliquées dans les maladies
infectieuses
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Test procedures . 3
4.1 General . 3
4.2 Medium . 3
4.3 Antimicrobial agents . 3
4.3.1 General. 3
4.3.2 Preparation of stock solutions . 3
4.3.3 Preparation of working solutions . 4
4.3.4 Preparation of micro-dilution trays . 4
4.3.5 Storage of micro-dilution trays . 4
4.4 Preparation of inoculum . 5
4.4.1 General. 5
4.4.2 Broth culture method . 5
4.4.3 Direct colony suspension method . 5
4.5 Inoculation of micro-dilution trays . 5
4.6 Incubation of micro-dilution trays . 6
4.7 Reading results . 6
4.8 Special test situations where the MIC result might give unreliable results. 6
5 Quality control . 6
Annex A (informative) Requirements for Mueller-Hinton broth . 8
Annex B (informative) Solvents and diluents for making stock solutions of selected
antimicrobial agents . .11
Annex C (informative) Preparation of working dilutions of antimicrobial agents for use in
broth dilution susceptibility tests .16
Annex D (informative) Special test situations .17
Bibliography .18
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in
vitro diagnostic test systems.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 20776-1:2006), which has been
technically revised.
The main changes compared to the previous edition are as follows:
— revised to a broth micro-dilution only performance document;
— removal of S, I, R breakpoint definitions and information;
— moved embedded tables to annexes;
— removed quality control range table;
— updated table (now Annex B) on solvents and diluents for antimicrobial agents used globally;
— updated information on special culture media and method performance for specific currently used
antimicrobial agents.
A list of all parts in the ISO 20776 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
This corrected version of ISO 20776-1:2019 incorporates the following correction:
— Correction of the diluent pH value for ampicillin from 8,0 to 6,0 in Annex B.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
In vitro antimicrobial susceptibility tests are performed on micro-organisms suspected of causing
disease, particularly if the organism is thought to belong to a species that may exhibit resistance
to frequently used antimicrobial agents. The tests are also important in resistance surveillance,
epidemiological studies of susceptibility and in comparisons of new and existing agents.
Dilution procedures are used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) of
antimicrobial agents for antimicrobial susceptibility testing. MIC methods are used in resistance
surveillance, defining identifying wild type phenotypes, comparative testing of new agents, to establish
the susceptibility of organisms that give equivocal results in routine tests, for tests on organisms where
routine tests may be unreliable and when a quantitative result is required for clinical management. In
dilution tests, micro-organisms are tested for their ability to produce visible growth in broth (broth
dilution) containing serial dilutions of the antimicrobial agent or on a series of agar plates (agar
dilution).
The lowest concentration of an antimicrobial agent (in mg/l) that, under defined in vitro conditions,
prevents the appearance of visible growth of a micro-organism within a defined period of time is known
as the MIC. The MIC is a guide for the clinician to the susceptibility of the organism to the antimicrobial
agent and aids treatment decisions. Careful control and standardization is required for intra- and inter-
laboratory reproducibility of broth MIC tests. The MICs generally span two to three doubling dilutions
with a dominant central value.
Broth dilution is a technique in which containers holding identical volumes of broth with antimicrobial
agent solutions in incrementally (usually geometrically) increasing concentrations are inoculated with
a known number of micro-organisms.
Broth micro-dilution denotes the performance of the broth dilution test in micro-dilution trays.
The method described in this document is intended for the testing of pure cultures of aerobic bacteria
that are easily grown by overnight incubation on agar and grow well in standardized micro-dilution
trays containing standardized Mueller-Hinton broth (volume of ≤200 µl), which may need to be
modified depending on the antimicrobial agent being tested.
The broth micro-dilution method described in this document is essentially the same as those used in
many countries, and as the methods published by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)
[1] [2]
and the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) . These methods
[3]
are based on those described by Ericsson and Sherris .
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20776-1:2019(E)
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of
performance of antimicrobial susceptibility test devices —
Part 1:
Broth micro-dilution reference method for testing the
in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly
growing aerobic bacteria involved in infectious diseases
WARNING — The use of this document may involve hazardous materials, operations and
equipment. This document does not purport to address all of the safety problems associated
with its use. It is the responsibility of the user of this document to establish appropriate safety
and health practices and to determine the applicability of any other restrictions prior to use.
1 Scope
This document describes one reference method, broth micro-dilution, for determination of MICs.
The MIC can be a guide for the clinician, and reflects the activity of the drug under the described
test conditions, by taking into account other factors, such as drug pharmacology, pharmacokinetics,
or bacterial resistance mechanisms. This allows categorisation of bacteria as “susceptible” (S),
“intermediate” (I), or “resistant” (R). In addition, MIC distributions can be used to define wild type
or non-wild type bacterial populations. Although clinical interpretation of the MIC value is beyond
the scope of this document, modifications of the basic method are required for certain antimicrobial
agent - bacteria combinations to facilitate clinical interpretation. These modifications are included in a
separate annex of this document. It is necessary to compare other susceptibility testing meth
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20776-1
Second edition
2019-06
Corrected version
2019-12
Susceptibility testing of infectious
agents and evaluation of performance
of antimicrobial susceptibility test
devices —
Part 1:
Broth micro-dilution reference
method for testing the in vitro activity
of antimicrobial agents against rapidly
growing aerobic bacteria involved in
infectious diseases
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour antibiogrammes —
Partie 1: Méthode de référence de microdilution en bouillon pour la
détermination de la sensibilité in vitro aux agents antimicrobiens des
bactéries aérobies à croissance rapide impliquées dans les maladies
infectieuses
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
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below or ISO’s member body in the country of the requester.
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Test procedures . 3
4.1 General . 3
4.2 Medium . 3
4.3 Antimicrobial agents . 3
4.3.1 General. 3
4.3.2 Preparation of stock solutions . 3
4.3.3 Preparation of working solutions . 4
4.3.4 Preparation of micro-dilution trays . 4
4.3.5 Storage of micro-dilution trays . 4
4.4 Preparation of inoculum . 5
4.4.1 General. 5
4.4.2 Broth culture method . 5
4.4.3 Direct colony suspension method . 5
4.5 Inoculation of micro-dilution trays . 5
4.6 Incubation of micro-dilution trays . 6
4.7 Reading results . 6
4.8 Special test situations where the MIC result might give unreliable results. 6
5 Quality control . 6
Annex A (informative) Requirements for Mueller-Hinton broth . 8
Annex B (informative) Solvents and diluents for making stock solutions of selected
antimicrobial agents . .11
Annex C (informative) Preparation of working dilutions of antimicrobial agents for use in
broth dilution susceptibility tests .16
Annex D (informative) Special test situations .17
Bibliography .18
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in
vitro diagnostic test systems.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 20776-1:2006), which has been
technically revised.
The main changes compared to the previous edition are as follows:
— revised to a broth micro-dilution only performance document;
— removal of S, I, R breakpoint definitions and information;
— moved embedded tables to annexes;
— removed quality control range table;
— updated table (now Annex B) on solvents and diluents for antimicrobial agents used globally;
— updated information on special culture media and method performance for specific currently used
antimicrobial agents.
A list of all parts in the ISO 20776 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
This corrected version of ISO 20776-1:2019 incorporates the following correction:
— Correction of the diluent pH value for ampicillin from 8,0 to 6,0 in Annex B.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
In vitro antimicrobial susceptibility tests are performed on micro-organisms suspected of causing
disease, particularly if the organism is thought to belong to a species that may exhibit resistance
to frequently used antimicrobial agents. The tests are also important in resistance surveillance,
epidemiological studies of susceptibility and in comparisons of new and existing agents.
Dilution procedures are used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) of
antimicrobial agents for antimicrobial susceptibility testing. MIC methods are used in resistance
surveillance, defining identifying wild type phenotypes, comparative testing of new agents, to establish
the susceptibility of organisms that give equivocal results in routine tests, for tests on organisms where
routine tests may be unreliable and when a quantitative result is required for clinical management. In
dilution tests, micro-organisms are tested for their ability to produce visible growth in broth (broth
dilution) containing serial dilutions of the antimicrobial agent or on a series of agar plates (agar
dilution).
The lowest concentration of an antimicrobial agent (in mg/l) that, under defined in vitro conditions,
prevents the appearance of visible growth of a micro-organism within a defined period of time is known
as the MIC. The MIC is a guide for the clinician to the susceptibility of the organism to the antimicrobial
agent and aids treatment decisions. Careful control and standardization is required for intra- and inter-
laboratory reproducibility of broth MIC tests. The MICs generally span two to three doubling dilutions
with a dominant central value.
Broth dilution is a technique in which containers holding identical volumes of broth with antimicrobial
agent solutions in incrementally (usually geometrically) increasing concentrations are inoculated with
a known number of micro-organisms.
Broth micro-dilution denotes the performance of the broth dilution test in micro-dilution trays.
The method described in this document is intended for the testing of pure cultures of aerobic bacteria
that are easily grown by overnight incubation on agar and grow well in standardized micro-dilution
trays containing standardized Mueller-Hinton broth (volume of ≤200 µl), which may need to be
modified depending on the antimicrobial agent being tested.
The broth micro-dilution method described in this document is essentially the same as those used in
many countries, and as the methods published by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)
[1] [2]
and the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) . These methods
[3]
are based on those described by Ericsson and Sherris .
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20776-1:2019(E)
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of
performance of antimicrobial susceptibility test devices —
Part 1:
Broth micro-dilution reference method for testing the
in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly
growing aerobic bacteria involved in infectious diseases
WARNING — The use of this document may involve hazardous materials, operations and
equipment. This document does not purport to address all of the safety problems associated
with its use. It is the responsibility of the user of this document to establish appropriate safety
and health practices and to determine the applicability of any other restrictions prior to use.
1 Scope
This document describes one reference method, broth micro-dilution, for determination of MICs.
The MIC can be a guide for the clinician, and reflects the activity of the drug under the described
test conditions, by taking into account other factors, such as drug pharmacology, pharmacokinetics,
or bacterial resistance mechanisms. This allows categorisation of bacteria as “susceptible” (S),
“intermediate” (I), or “resistant” (R). In addition, MIC distributions can be used to define wild type
or non-wild type bacterial populations. Although clinical interpretation of the MIC value is beyond
the scope of this document, modifications of the basic method are required for certain antimicrobial
agent - bacteria combinations to facilitate clinical interpretation. These modifications are included in a
separate annex of this document. It is necessary to compare other susceptibility testing meth
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20776-1
Deuxième édition
2019-06
Version corrigée
2019-12
Sensibilité in vitro des agents
infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour
antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence de
microdilution en bouillon pour la
détermination de la sensibilité in
vitro aux agents antimicrobiens
des bactéries aérobies à croissance
rapide impliquées dans les maladies
infectieuses
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of
performance of antimicrobial susceptibility test devices —
Part 1: Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro
activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic
bacteria involved in infectious diseases
Numéro de référence
©
ISO 2019
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
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Tél.: +41 22 749 01 11
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Modes opératoires d’essai . 3
4.1 Généralités . 3
4.2 Milieu . 3
4.3 Agents antimicrobiens. 3
4.3.1 Généralités . 3
4.3.2 Préparation des solutions mères . 4
4.3.3 Préparation des solutions de travail . 4
4.3.4 Préparation de plaques de microdilution. 4
4.3.5 Stockage des plaques de microdilution . 5
4.4 Préparation de l’inoculum . 5
4.4.1 Généralités . 5
4.4.2 Méthode de culture en bouillon . 5
4.4.3 Méthode de mise en suspension directe des colonies . 5
4.5 Ensemencement des plaques de microdilution . 6
4.6 Incubation des plaques de microdilution . 6
4.7 Résultats des lectures. 6
4.8 Situations particulières pour lesquelles le résultat de la CMI peut donner des
résultats peu fiables . 7
5 Contrôle de qualité . 7
Annexe A (informative) Exigences relatives au bouillon Mueller-Hinton. 8
Annexe B (informative) Solvants et diluants pour la réalisation des solutions mères des
agents antimicrobiens sélectionnés.11
Annexe C (informative) Préparation de dilutions de travail des agents antimicrobiens à
utiliser lors des essais de sensibilité de dilution en bouillon .17
Annexe D (informative) Cas d’essai particuliers .18
Bibliographie .19
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d'analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 20776-1:2006), qui a fait l’objet
d’une révision technique.
Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— révision en un document concernant uniquement les performances de microdilution en bouillon;
— suppression des informations et définitions relatives à la concentration critique S, I, R;
— déplacement des tableaux intégrés vers les annexes;
— suppression du tableau des plages de contrôle de qualité;
— mise à jour du tableau (désormais Annexe B) relatif aux solvants et diluants généralement utilisés
pour les agents antimicrobiens;
— mise à jour des informations sur les milieux de culture spécifiques et les performances de la méthode
pour les agents antimicrobiens spécifiques actuellement utilisés.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20776 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
La présente version corrigée de l'ISO 20776:2019 inclut la correction suivante:
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
— Correction de la valeur du pH du diluant pour l'ampicilline de 8,0 à 6,0 dans l'Annexe B.
Introduction
Les essais de sensibilité in vitro aux antimicrobiens sont réalisés sur des micro-organismes suspectés
de provoquer une maladie, en particulier si le micro-organisme est connu pour appartenir à une espèce
qui peut montrer une résistance aux agents antimicrobiens fréquemment employés. Les essais sont
également importants pour la surveillance de la résistance, pour les études épidémiologiques de la
sensibilité et pour comparer les nouveaux agents antimicrobiens à ceux déjà existants.
Les méthodes de dilution sont employées pour déterminer les concentrations minimales
inhibitrices (CMI) des agents antimicrobiens pour les essais de sensibilité antimicrobienne. Les
méthodes de détermination des CMI sont employées dans la surveillance de la résistance, pour la
définition et l’identification des phénotypes de type sauvage, pour comparer l’activité des nouveaux
agents antimicrobiens, ainsi que pour établir la sensibilité des micro-organismes aux résultats
équivoques avec les essais de routine, pour les micro-organismes dont les essais de routine peuvent
ne pas être fiables et lorsqu’un résultat quantitatif est nécessaire à la décision clinique. Dans les essais
de dilution, les micro-organismes sont soumis à essai afin de déterminer leur capacité à produire une
croissance visible dans un bouillon (dilution en bouillon) ou sur des boîtes gélosées (dilution en gélose)
contenant des dilutions en série de l’agent antimicrobien.
La concentration la plus faible d’un agent antimicrobien (en mg/l) qui, dans des conditions in vitro
définies, empêche l’apparition d’une croissance visible d’un micro-organisme au cours d’une période
définie, est connue sous le nom de CMI. Pour le clinicien, la CMI constitue une indication sur la sensibilité
de l’organisme à l’agent antimicrobien et facilite les décisions de traitement. Un contrôle strict de la
méthode et une normalisation sont nécessaires à la reproductibilité intralaboratoire et interlaboratoires
des essais de CMI en bouillon. Les CMI s’étendent généralement sur deux ou trois dilutions avec une
valeur centrale dominante.
La dilution en bouillon est une technique dans laquelle des contenants comportant des volumes
identiques de bouillon avec des solutions d’agent antimicrobien à des concentrations augmentant de
manière incrémentielle (généralement de manière géométrique) sont ensemencés avec un nombre
connu de micro-organismes.
La microdilution en bouillon indique un essai par dilution en bouillon sur des plaques de microdilution.
La méthode décrite dans le présent document est conçue pour soumettre à essai des cultures pures
de bactéries aérobies qui sont facilement cultivables en les incubant pendant une nuit sur une gélose
et qui se cultivent bien dans des plaques normalisées de microdilution contenant du bouillon Mueller-
Hinton normalisé (volume ≤ 200 µl), ce qui peut nécessiter des modifications en fonction de l’agent
antimicrobien soumis à essai.
La méthode de microdilution en bouillon décrite dans le présent document est essentiellement la
même que celles utilisées dans de nombreux pays, ainsi que les méthodes publiées par le Clinical and
[1]
Laboratory Standards Institute (CLSI) et par l’European Committee on Antimicrobial Susceptibility
[2] [3]
Testing (EUCAST). Ces méthodes s’appuient sur la méthode décrite par Ericsson et Sherris .
vi © ISO 2019 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 20776-1:2019(F)
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence de microdilution en bouillon pour
la déterminati
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20776-1
Deuxième édition
2019-06
Version corrigée
2019-12
Sensibilité in vitro des agents
infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour
antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence de
microdilution en bouillon pour la
détermination de la sensibilité in
vitro aux agents antimicrobiens
des bactéries aérobies à croissance
rapide impliquées dans les maladies
infectieuses
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of
performance of antimicrobial susceptibility test devices —
Part 1: Broth micro-dilution reference method for testing the in vitro
activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic
bacteria involved in infectious diseases
Numéro de référence
©
ISO 2019
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Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Modes opératoires d’essai . 3
4.1 Généralités . 3
4.2 Milieu . 3
4.3 Agents antimicrobiens. 3
4.3.1 Généralités . 3
4.3.2 Préparation des solutions mères . 4
4.3.3 Préparation des solutions de travail . 4
4.3.4 Préparation de plaques de microdilution. 4
4.3.5 Stockage des plaques de microdilution . 5
4.4 Préparation de l’inoculum . 5
4.4.1 Généralités . 5
4.4.2 Méthode de culture en bouillon . 5
4.4.3 Méthode de mise en suspension directe des colonies . 5
4.5 Ensemencement des plaques de microdilution . 6
4.6 Incubation des plaques de microdilution . 6
4.7 Résultats des lectures. 6
4.8 Situations particulières pour lesquelles le résultat de la CMI peut donner des
résultats peu fiables . 7
5 Contrôle de qualité . 7
Annexe A (informative) Exigences relatives au bouillon Mueller-Hinton. 8
Annexe B (informative) Solvants et diluants pour la réalisation des solutions mères des
agents antimicrobiens sélectionnés.11
Annexe C (informative) Préparation de dilutions de travail des agents antimicrobiens à
utiliser lors des essais de sensibilité de dilution en bouillon .17
Annexe D (informative) Cas d’essai particuliers .18
Bibliographie .19
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d'analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 20776-1:2006), qui a fait l’objet
d’une révision technique.
Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— révision en un document concernant uniquement les performances de microdilution en bouillon;
— suppression des informations et définitions relatives à la concentration critique S, I, R;
— déplacement des tableaux intégrés vers les annexes;
— suppression du tableau des plages de contrôle de qualité;
— mise à jour du tableau (désormais Annexe B) relatif aux solvants et diluants généralement utilisés
pour les agents antimicrobiens;
— mise à jour des informations sur les milieux de culture spécifiques et les performances de la méthode
pour les agents antimicrobiens spécifiques actuellement utilisés.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20776 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
La présente version corrigée de l'ISO 20776:2019 inclut la correction suivante:
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— Correction de la valeur du pH du diluant pour l'ampicilline de 8,0 à 6,0 dans l'Annexe B.
Introduction
Les essais de sensibilité in vitro aux antimicrobiens sont réalisés sur des micro-organismes suspectés
de provoquer une maladie, en particulier si le micro-organisme est connu pour appartenir à une espèce
qui peut montrer une résistance aux agents antimicrobiens fréquemment employés. Les essais sont
également importants pour la surveillance de la résistance, pour les études épidémiologiques de la
sensibilité et pour comparer les nouveaux agents antimicrobiens à ceux déjà existants.
Les méthodes de dilution sont employées pour déterminer les concentrations minimales
inhibitrices (CMI) des agents antimicrobiens pour les essais de sensibilité antimicrobienne. Les
méthodes de détermination des CMI sont employées dans la surveillance de la résistance, pour la
définition et l’identification des phénotypes de type sauvage, pour comparer l’activité des nouveaux
agents antimicrobiens, ainsi que pour établir la sensibilité des micro-organismes aux résultats
équivoques avec les essais de routine, pour les micro-organismes dont les essais de routine peuvent
ne pas être fiables et lorsqu’un résultat quantitatif est nécessaire à la décision clinique. Dans les essais
de dilution, les micro-organismes sont soumis à essai afin de déterminer leur capacité à produire une
croissance visible dans un bouillon (dilution en bouillon) ou sur des boîtes gélosées (dilution en gélose)
contenant des dilutions en série de l’agent antimicrobien.
La concentration la plus faible d’un agent antimicrobien (en mg/l) qui, dans des conditions in vitro
définies, empêche l’apparition d’une croissance visible d’un micro-organisme au cours d’une période
définie, est connue sous le nom de CMI. Pour le clinicien, la CMI constitue une indication sur la sensibilité
de l’organisme à l’agent antimicrobien et facilite les décisions de traitement. Un contrôle strict de la
méthode et une normalisation sont nécessaires à la reproductibilité intralaboratoire et interlaboratoires
des essais de CMI en bouillon. Les CMI s’étendent généralement sur deux ou trois dilutions avec une
valeur centrale dominante.
La dilution en bouillon est une technique dans laquelle des contenants comportant des volumes
identiques de bouillon avec des solutions d’agent antimicrobien à des concentrations augmentant de
manière incrémentielle (généralement de manière géométrique) sont ensemencés avec un nombre
connu de micro-organismes.
La microdilution en bouillon indique un essai par dilution en bouillon sur des plaques de microdilution.
La méthode décrite dans le présent document est conçue pour soumettre à essai des cultures pures
de bactéries aérobies qui sont facilement cultivables en les incubant pendant une nuit sur une gélose
et qui se cultivent bien dans des plaques normalisées de microdilution contenant du bouillon Mueller-
Hinton normalisé (volume ≤ 200 µl), ce qui peut nécessiter des modifications en fonction de l’agent
antimicrobien soumis à essai.
La méthode de microdilution en bouillon décrite dans le présent document est essentiellement la
même que celles utilisées dans de nombreux pays, ainsi que les méthodes publiées par le Clinical and
[1]
Laboratory Standards Institute (CLSI) et par l’European Committee on Antimicrobial Susceptibility
[2] [3]
Testing (EUCAST). Ces méthodes s’appuient sur la méthode décrite par Ericsson et Sherris .
vi © ISO 2019 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 20776-1:2019(F)
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence de microdilution en bouillon pour
la déterminati
...
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