ISO 21572:2019
(Main)Foodstuffs — Molecular biomarker analysis — Immunochemical methods for the detection and quantification of proteins
Foodstuffs — Molecular biomarker analysis — Immunochemical methods for the detection and quantification of proteins
This document specifies performance criteria for immunochemical methods for the detection and/or quantification of a specific protein or protein(s) of interest [POI(s)] in a specified matrix. The methods discussed are applicable to the analysis of proteins from a variety of sample types. Some uses for these methods include, but are not limited to, analysing proteins involved in crop and food production, food processing, food marketing, food safety, biotechnology or disease indexing.
Produits alimentaires— Analyse des biomarqueurs moléculaires — Méthodes immunochimiques pour la détection et la quantification des protéines
Le présent document énonce des critères de performances pour les méthodes immunochimiques de détection et/ou de quantification d'une protéine spécifique ou de protéine(s) d'intérêt (POI) dans une matrice donnée. Les méthodes décrites sont applicables à l'analyse de protéines provenant de divers types d'échantillons. Certaines utilisations de ces méthodes comprennent, entre autres, l'analyse des protéines impliquées dans la production végétale et agroalimentaire, la transformation des aliments, la commercialisation des produits alimentaires, la sécurité des aliments, les biotechnologies ou l'indexation des maladies.
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 21572
Third edition
2019-10
Foodstuffs — Molecular biomarker
analysis — Immunochemical methods
for the detection and quantification of
proteins
Produits alimentaire — Analyse des biomarqueurs moléculaires —
Méthodes immunochimiques pour la détection et la quantification des
protéines
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Laboratory equipment . 2
7 Sampling . 2
8 Procedure. 2
8.1 General . 2
8.2 Preparation of sample solution . 2
8.3 Extraction . 3
8.4 Preparation of calibration curves, positive controls, and reference materials . 3
8.5 Assay procedure . 3
9 Interpretation and expression of results . 3
9.1 General . 3
9.2 Quantitative and semi-quantitative analysis . 4
9.3 Qualitative analysis . 4
10 Specific parameters that can influence results . 4
10.1 General . 4
10.2 Special considerations . 5
10.2.1 Selectivity . 5
10.2.2 Extraction efficiency . 5
10.2.3 Matrix effects. 5
10.2.4 Assay applicability . 5
10.2.5 Hook effect . 5
10.2.6 Parallelism/linearity . 5
10.2.7 Limits of detection . 6
10.2.8 Limits of quantification . 6
11 Confirming method . 6
12 Test report . 6
Annex A (informative) Detection of a protein by ELISA . 8
Annex B (informative) Detection of a protein or proteins by lateral flow devices .19
Bibliography .26
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 16,
Horizontal methods for molecular biomarker analysis.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 21572:2013), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows:
— the title has been changed to specify that the document is focused on immunochemical protein
detection methods;
— an introduction has been added;
— terms, definitions and references have been updated;
— the text has been modified to improve the document’s applicability to general protein analysis
applications.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
Analytical techniques based on highly specific immunochemical-binding interactions have become
key tools for analysing many different chemical and macromolecular analytes, including proteins.
Methods utilizing these techniques are widely accepted in the scientific and regulatory communities.
Immunochemical assay methods are most commonly used to detect (presence or absence) and/
or quantify specific protein analytes such as allergenic proteins, disease marker proteins or newly
expressed proteins in biotech crops.
Prior to analysis, samples generally need to be ground or processed in a manner that facilitates
extraction of the analyte from the sample matrix. An important step in analytical method development
is therefore the selection of a suitable extraction buffer that does not interfere with the analytical
method performance and that ensures an appropriate level of analyte stability during the analytical
process.
The immunochemical assay process generally incorporates at least two steps:
— binding or capturing the analyte of interest present in samples with an antibody targeted specifically
to the analyte;
— detection of the antibody-analyte complex using a technique that signals the specific interaction.
Once an analytical method has been developed and optimized, it should be validated to demonstrate
that its performance is reliable and suitable for the intended use and to characterize the method
limitations. This involves performing several experiments with real samples to evaluate parameters
such as accuracy, precision, sensitivity, selectivity and the detection or quantification limits. Validation
also allows for the establishment of method performance criteria, against which routine analytical
performance can be compared to ensure that acceptable analytical results are consistently reported.
This document provides a set of general procedures and analytical considerations for using
immunochemical techniques to analyse target proteins. It discusses aspects of sample processing,
extraction, assay set-up, interpretation and reporting of results, and relevant assay performance
parameters. Two annexes are included containing example procedures that can be followed when
analysing a protein of interest (POI) in a variety of background matrices using methods based on
enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) and lateral flow devices (LFDs).
INTERNATIONAL STANDARD ISO 21572:2019(E)
Foodstuffs — Molecular biomarker analysis —
Immunochemical methods for the detection and
quantification of proteins
1 Scope
This document specifies performance criteria for immunochemical methods for the detection and/or
quantification of a specific protein or protein(s) of interest [POI(s)] in a specified matrix.
The methods discussed are applicable to the analysis of proteins from a variety of sample types. Some
uses for these methods include, but are not limited to, analysing proteins involved in crop and food
production, food processing, food marketing, food safety, biotechnology or disease indexing.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 16577, Molecular biomarker analysis — Terms and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 16577 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing
...
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STANDARD 21572
Third edition
2019-10
Foodstuffs — Molecular biomarker
analysis — Immunochemical methods
for the detection and quantification of
proteins
Produits alimentaire — Analyse des biomarqueurs moléculaires —
Méthodes immunochimiques pour la détection et la quantification des
protéines
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Laboratory equipment . 2
7 Sampling . 2
8 Procedure. 2
8.1 General . 2
8.2 Preparation of sample solution . 2
8.3 Extraction . 3
8.4 Preparation of calibration curves, positive controls, and reference materials . 3
8.5 Assay procedure . 3
9 Interpretation and expression of results . 3
9.1 General . 3
9.2 Quantitative and semi-quantitative analysis . 4
9.3 Qualitative analysis . 4
10 Specific parameters that can influence results . 4
10.1 General . 4
10.2 Special considerations . 5
10.2.1 Selectivity . 5
10.2.2 Extraction efficiency . 5
10.2.3 Matrix effects. 5
10.2.4 Assay applicability . 5
10.2.5 Hook effect . 5
10.2.6 Parallelism/linearity . 5
10.2.7 Limits of detection . 6
10.2.8 Limits of quantification . 6
11 Confirming method . 6
12 Test report . 6
Annex A (informative) Detection of a protein by ELISA . 8
Annex B (informative) Detection of a protein or proteins by lateral flow devices .19
Bibliography .26
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
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For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
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This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 16,
Horizontal methods for molecular biomarker analysis.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 21572:2013), which has been technically
revised. The main changes compared with the previous edition are as follows:
— the title has been changed to specify that the document is focused on immunochemical protein
detection methods;
— an introduction has been added;
— terms, definitions and references have been updated;
— the text has been modified to improve the document’s applicability to general protein analysis
applications.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
Introduction
Analytical techniques based on highly specific immunochemical-binding interactions have become
key tools for analysing many different chemical and macromolecular analytes, including proteins.
Methods utilizing these techniques are widely accepted in the scientific and regulatory communities.
Immunochemical assay methods are most commonly used to detect (presence or absence) and/
or quantify specific protein analytes such as allergenic proteins, disease marker proteins or newly
expressed proteins in biotech crops.
Prior to analysis, samples generally need to be ground or processed in a manner that facilitates
extraction of the analyte from the sample matrix. An important step in analytical method development
is therefore the selection of a suitable extraction buffer that does not interfere with the analytical
method performance and that ensures an appropriate level of analyte stability during the analytical
process.
The immunochemical assay process generally incorporates at least two steps:
— binding or capturing the analyte of interest present in samples with an antibody targeted specifically
to the analyte;
— detection of the antibody-analyte complex using a technique that signals the specific interaction.
Once an analytical method has been developed and optimized, it should be validated to demonstrate
that its performance is reliable and suitable for the intended use and to characterize the method
limitations. This involves performing several experiments with real samples to evaluate parameters
such as accuracy, precision, sensitivity, selectivity and the detection or quantification limits. Validation
also allows for the establishment of method performance criteria, against which routine analytical
performance can be compared to ensure that acceptable analytical results are consistently reported.
This document provides a set of general procedures and analytical considerations for using
immunochemical techniques to analyse target proteins. It discusses aspects of sample processing,
extraction, assay set-up, interpretation and reporting of results, and relevant assay performance
parameters. Two annexes are included containing example procedures that can be followed when
analysing a protein of interest (POI) in a variety of background matrices using methods based on
enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) and lateral flow devices (LFDs).
INTERNATIONAL STANDARD ISO 21572:2019(E)
Foodstuffs — Molecular biomarker analysis —
Immunochemical methods for the detection and
quantification of proteins
1 Scope
This document specifies performance criteria for immunochemical methods for the detection and/or
quantification of a specific protein or protein(s) of interest [POI(s)] in a specified matrix.
The methods discussed are applicable to the analysis of proteins from a variety of sample types. Some
uses for these methods include, but are not limited to, analysing proteins involved in crop and food
production, food processing, food marketing, food safety, biotechnology or disease indexing.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 16577, Molecular biomarker analysis — Terms and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 16577 and the following apply.
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NORME ISO
INTERNATIONALE 21572
Troisième édition
2019-10
Produits alimentaire — Analyse
des biomarqueurs moléculaires —
Méthodes immunochimiques pour
la détection et la quantification des
protéines
Foodstuffs — Molecular biomarker analysis — Immunochemical
methods for the detection and quantification of proteins
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Matériel de laboratoire . 2
7 Échantillonnage . 2
8 Mode opératoire. 2
8.1 Généralités . 2
8.2 Préparation de la solution d’échantillon . 2
8.3 Extraction . 3
8.4 Préparation des courbes d’étalonnage, des contrôles positifs et des matériaux de
référence . 3
8.5 Mode opératoire d’analyse . 3
9 Interprétation et expression des résultats . 3
9.1 Généralités . 3
9.2 Analyse quantitative et semi-quantitative . 4
9.3 Analyse qualitative. 4
10 Paramètres spécifiques pouvant influer sur les résultats . 4
10.1 Généralités . 4
10.2 Considérations particulières . 5
10.2.1 Sélectivité . 5
10.2.2 Efficacité de l’extraction . 5
10.2.3 Effets de matrice . 5
10.2.4 Applicabilité de l’analyse . 6
10.2.5 Effet crochet . 6
10.2.6 Parallélisme/Linéarité . 6
10.2.7 Limites de détection . . 6
10.2.8 Limites de quantification . 6
11 Méthode de confirmation . 6
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Détection d’une protéine par ELISA . 8
Annexe B (informative) Détection de protéine(s) à l’aide de dispositifs
d’immunochromatographie .20
Bibliographie .28
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 16, Méthodes horizontales pour l’analyse moléculaire de biomarqueurs.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 21572:2013) qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— le titre a été modifié pour spécifier que le présent document concerne les méthodes immunochimiques
de détection des protéines;
— une introduction a été ajoutée;
— les termes, définitions et références ont été mis à jour;
— le texte a été modifié pour améliorer l’applicabilité du présent document aux applications générales
d’analyse des protéines.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
Les techniques analytiques reposant sur les interactions des liaisons immunochimiques hautement
spécifiques sont devenues des outils indispensables pour analyser de nombreux analytes chimiques
et macromoléculaires différents, notamment les protéines. Les méthodes utilisant ces techniques sont
communément reconnues dans les communautés scientifique et réglementaire. Les méthodes d’analyse
immunochimique sont couramment utilisées pour détecter (présence ou absence) et/ou quantifier les
analytes protéiques spécifiques tels que les protéines allergènes, les protéines marqueurs de maladies
ou les protéines nouvellement exprimées dans les cultures biotechnologiques.
Avant l’analyse, les échantillons nécessitent généralement d’être broyés ou transformés de manière
à faciliter l’extraction de l’analyte hors de la matrice des échantillons. Lors du développement de la
méthode analytique, il est donc essentiel de choisir un tampon d’extraction approprié qui n’interfère
pas avec le bon déroulement de la méthode analytique et qui assure un niveau approprié de stabilité des
analytes pendant l’analyse.
L’analyse immunochimique comprend généralement au moins deux étapes:
— la liaison ou capture de l’analyte d’intérêt présent dans les échantillons avec un anticorps ciblant
spécifiquement l’analyte;
— la détection du complexe anticorps-analyte à l’aide d’une technique qui signale l’interaction
spécifique.
Une fois la méthode analytique développée et optimisée, il convient de la valider pour démontrer que
ses performances sont fiables et adaptées à l’usage prévu et pour caractériser ses limites. Cela implique
d’effectuer plusieurs expériences sur des échantillons réels pour évaluer certains paramètres tels que
l’exactitude, la fidélité, la sensibilité, la sélectivité et les limites de détection ou de quantification. La
validation permet également d’établir les critères de performance de la méthode en fonction desquels
les performances analytiques de routine peuvent être comparées pour l’obtention systématique de
résultats analytiques acceptables.
Le présent document fournit un ensemble de modes opératoires généraux et de considérations
analytiques applicables à l’utilisation de techniques immunochimiques pour analyser les protéines
cibles. Il donne des informations sur le traitement des échantillons, l’extraction, la configuration de
l’analyse, l’interprétation et le compte-rendu des résultats, ainsi que sur les paramètres de performance
d’analyse. Il comprend deux annexes qui contiennent des exemples de modes opératoires qui peuvent
être suivies lors de l’analyse d’une protéine d’intérêt (POI) dans plusieurs matrices de référence en
utilisant des méthodes reposant sur des essais immuno-enzymatiques (ELISA) et des dispositifs
d’immunochromatographie (LFD).
NORME INTERNATIONALE ISO 21572:2019(F)
Produits alimentaire — Analyse des biomarqueurs
moléculaires — Méthodes immunochimiques pour la
détection et la qua
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 21572
Troisième édition
2019-10
Produits alimentaire — Analyse
des biomarqueurs moléculaires —
Méthodes immunochimiques pour
la détection et la quantification des
protéines
Foodstuffs — Molecular biomarker analysis — Immunochemical
methods for the detection and quantification of proteins
Numéro de référence
©
ISO 2019
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Matériel de laboratoire . 2
7 Échantillonnage . 2
8 Mode opératoire. 2
8.1 Généralités . 2
8.2 Préparation de la solution d’échantillon . 2
8.3 Extraction . 3
8.4 Préparation des courbes d’étalonnage, des contrôles positifs et des matériaux de
référence . 3
8.5 Mode opératoire d’analyse . 3
9 Interprétation et expression des résultats . 3
9.1 Généralités . 3
9.2 Analyse quantitative et semi-quantitative . 4
9.3 Analyse qualitative. 4
10 Paramètres spécifiques pouvant influer sur les résultats . 4
10.1 Généralités . 4
10.2 Considérations particulières . 5
10.2.1 Sélectivité . 5
10.2.2 Efficacité de l’extraction . 5
10.2.3 Effets de matrice . 5
10.2.4 Applicabilité de l’analyse . 6
10.2.5 Effet crochet . 6
10.2.6 Parallélisme/Linéarité . 6
10.2.7 Limites de détection . . 6
10.2.8 Limites de quantification . 6
11 Méthode de confirmation . 6
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Détection d’une protéine par ELISA . 8
Annexe B (informative) Détection de protéine(s) à l’aide de dispositifs
d’immunochromatographie .20
Bibliographie .28
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 16, Méthodes horizontales pour l’analyse moléculaire de biomarqueurs.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 21572:2013) qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— le titre a été modifié pour spécifier que le présent document concerne les méthodes immunochimiques
de détection des protéines;
— une introduction a été ajoutée;
— les termes, définitions et références ont été mis à jour;
— le texte a été modifié pour améliorer l’applicabilité du présent document aux applications générales
d’analyse des protéines.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
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Introduction
Les techniques analytiques reposant sur les interactions des liaisons immunochimiques hautement
spécifiques sont devenues des outils indispensables pour analyser de nombreux analytes chimiques
et macromoléculaires différents, notamment les protéines. Les méthodes utilisant ces techniques sont
communément reconnues dans les communautés scientifique et réglementaire. Les méthodes d’analyse
immunochimique sont couramment utilisées pour détecter (présence ou absence) et/ou quantifier les
analytes protéiques spécifiques tels que les protéines allergènes, les protéines marqueurs de maladies
ou les protéines nouvellement exprimées dans les cultures biotechnologiques.
Avant l’analyse, les échantillons nécessitent généralement d’être broyés ou transformés de manière
à faciliter l’extraction de l’analyte hors de la matrice des échantillons. Lors du développement de la
méthode analytique, il est donc essentiel de choisir un tampon d’extraction approprié qui n’interfère
pas avec le bon déroulement de la méthode analytique et qui assure un niveau approprié de stabilité des
analytes pendant l’analyse.
L’analyse immunochimique comprend généralement au moins deux étapes:
— la liaison ou capture de l’analyte d’intérêt présent dans les échantillons avec un anticorps ciblant
spécifiquement l’analyte;
— la détection du complexe anticorps-analyte à l’aide d’une technique qui signale l’interaction
spécifique.
Une fois la méthode analytique développée et optimisée, il convient de la valider pour démontrer que
ses performances sont fiables et adaptées à l’usage prévu et pour caractériser ses limites. Cela implique
d’effectuer plusieurs expériences sur des échantillons réels pour évaluer certains paramètres tels que
l’exactitude, la fidélité, la sensibilité, la sélectivité et les limites de détection ou de quantification. La
validation permet également d’établir les critères de performance de la méthode en fonction desquels
les performances analytiques de routine peuvent être comparées pour l’obtention systématique de
résultats analytiques acceptables.
Le présent document fournit un ensemble de modes opératoires généraux et de considérations
analytiques applicables à l’utilisation de techniques immunochimiques pour analyser les protéines
cibles. Il donne des informations sur le traitement des échantillons, l’extraction, la configuration de
l’analyse, l’interprétation et le compte-rendu des résultats, ainsi que sur les paramètres de performance
d’analyse. Il comprend deux annexes qui contiennent des exemples de modes opératoires qui peuvent
être suivies lors de l’analyse d’une protéine d’intérêt (POI) dans plusieurs matrices de référence en
utilisant des méthodes reposant sur des essais immuno-enzymatiques (ELISA) et des dispositifs
d’immunochromatographie (LFD).
NORME INTERNATIONALE ISO 21572:2019(F)
Produits alimentaire — Analyse des biomarqueurs
moléculaires — Méthodes immunochimiques pour la
détection et la qua
...
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