ISO/DIS 20743

Textiles -- Determination of antibacterial activity of textile products

Textiles -- Détermination de l'activité antibactérienne des produits textiles

Standards Content (sample)

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 20743
ISO/TC 38 Secretariat: JISC
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2020-03-10 2020-06-02
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile
products
Textiles — Détermination de l'activité antibactérienne des produits textiles
ICS: 59.080.01; 07.100.99
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IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
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BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 20743:2020(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
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Contents Page

Foreword ..........................................................................................................................................................................................................................................v

Introduction ................................................................................................................................................................................................................................vi

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Safety precaution ................................................................................................................................................................................................. 2

5 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 2

6 Reagents and culture media ..................................................................................................................................................................... 4

6.1 Water ............................................................................................................................................................................................................... 4

6.2 Tryptone soya broth (TSB) ........................................................................................................................................................... 4

6.3 Tryptone soya agar (TSA) .............................................................................................................................................................. 4

6.4 Agar for transfer .................................................................................................................................................................................... 4

6.5 Nutrient broth (NB) ............................................................................................................................................................................ 5

6.6 Peptone salt solution ......................................................................................................................................................................... 5

6.7 Physiological saline ............................................................................................................................................................................. 5

6.8 SCDLP medium ....................................................................................................................................................................................... 5

6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension................................................................................................. 5

6.10 Neutralizing solution ......................................................................................................................................................................... 6

6.11 Enumeration agar (EA) .................................................................................................................................................................... 6

6.12 Agar for printing .................................................................................................................................................................................... 6

6.13 Cryoprotective solution for bacterial species ............................................................................................................... 6

6.14 Stock solution of ATP standard reagent ............................................................................................................................ 7

6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent ............................................................................................................... 7

6.16 ATP luminescent reagent ............................................................................................................................................................... 7

6.17 ATP extracting reagent ..................................................................................................................................................................... 7

6.18 ATP eliminating reagent ................................................................................................................................................................. 8

6.19 SCDLP or other medium for preparing ATP reference solution ................................................................... 8

6.20 Shake-out physiological saline .................................................................................................................................................. 8

7 Reference strains ................................................................................................................................................................................................. 8

7.1 Strains ............................................................................................................................................................................................................. 8

7.2 Storage of strains .................................................................................................................................................................................. 8

7.2.1 General...................................................................................................................................................................................... 8

7.2.2 Ceramic bead method .................................................................................................................................................. 9

7.2.3 Glycerol suspension method.................................................................................................................................. 9

8 Test procedures ..................................................................................................................................................................................................10

8.1 Absorption method (see Annex E) ......................................................................................................................................10

8.1.1 Incubation ...........................................................................................................................................................................10

8.1.2 Preparation of test inoculum ..............................................................................................................................10

8.1.3 Preparation of test specimens ...........................................................................................................................10

8.1.4 Test operation..................................................................................................................................................................11

8.1.5 Test results .........................................................................................................................................................................12

8.2 Transfer method (see Annex E) .............................................................................................................................................13

8.2.1 Preparation of test inoculum ..............................................................................................................................13

8.2.2 Preparation of specimens .....................................................................................................................................14

8.2.3 Test operation..................................................................................................................................................................14

8.2.4 Test results .........................................................................................................................................................................15

8.3 Printing method (see Annex E) ..............................................................................................................................................16

8.3.1 Incubation ...........................................................................................................................................................................16

8.3.2 Preparation of test inoculum ..............................................................................................................................17

8.3.3 Pretreatment of specimen ....................................................................................................................................17

8.3.4 Test operation..................................................................................................................................................................17

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ISO/DIS 20743:2020(E)

8.3.5 Test results .........................................................................................................................................................................20

9 Test report ................................................................................................................................................................................................................21

Annex A (normative) Strain numbers ..............................................................................................................................................................22

Annex B (normative) Shaking method ............................................................................................................................................................23

Annex C (normative) Quantitative measurement by plate count method ..................................................................24

Annex D (normative) Quantitative measurement by luminescence method ..........................................................25

Annex E (informative) Testing examples .......................................................................................................................................................27

Annex F (informative) Efficacy of antibacterial activity ................................................................................................................30

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................31

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ISO/DIS 20743:2020(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2. www .iso .org/ directives

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received. www .iso .org/ patents

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.
The committee responsible for this document is ISO/TC 38, Textiles.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 20743:2007), which has been technically

revised.
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ISO/DIS 20743:2020(E)
Introduction

Speciality products of antibacterial-treated textiles have been introduced in the market and are

expanding year by year in various applications. Those textiles certainly meet the consumer's

requirement to seek prevention and protection from the negative effects caused by bacteria and to

secure the quality of life.

In this situation, the test methods to determine the antibacterial activity for antibacterial textile

products were expected to be established in order to address the substantial need for an International

Standard.

The test method for antibacterial activity was developed as ISO 20645 which was a qualitative test

method. There are no testing standards for the quantitative method which gives more objective

information for the antibacterial activity of the textile products.

There are several practical test methods to determine the quantitative antibacterial activity specified

in this International Standard. The test methods are composed of 2 major steps, such as inoculation of

bacteria and quantitative measurement of bacteria.

The methods for the inoculation of bacteria specified in this International Standard are the absorption

method, transfer method and printing method.

The methods of the quantitative measurement of bacteria specified in this International Standard are

colony plate count method and ATP luminescence methods.

Although there are 6 ways for the combination of inoculation methods and quantitative measurements

to execute this test, the choice of the ways depends on the user's availability and consensus between

the concerned parties.
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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 20743:2020(E)
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile
products
1 Scope

This International Standard specifies quantitative test methods to determine the antibacterial activity

of all antibacterial textile products including nonwovens.

This International Standard is applicable to all textile products, including cloth, wadding, thread and

material for clothing, bedclothes, home furnishings and miscellaneous goods, regardless of the type of

antibacterial agent used (organic, inorganic, natural or man-made) or the method of application (built-

in, after-treatment or grafting).

Based on the intended application and on the environment in which the textile product is to be used

and also on the surface properties of the textile properties, the user can select the most suitable of the

following three inoculation methods on determination of antibacterial activity:

a) absorption method (an evaluation method in which the test bacterial suspension is inoculated

directly onto specimens);

b) transfer method (an evaluation method in which test bacteria are placed on an agar plate and

transferred onto specimens);

c) printing method (an evaluation method in which test bacteria are placed on a filter and printed

onto specimens).

The colony plate count method and the ATP (ATP = Adenosine Tri-phosphate) luminescence method are

also specified for measuring the enumeration of bacteria.
2 Normative references

The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated

references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced

document (including any amendments) applies.
ISO 6330, Textiles — Domestic washing and drying procedures for textile testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
control fabric

fabric used to validate the growth condition of test bacteria and validate the test

Note 1 to entry: The same fabric as the fabric to be tested but without antibacterial treatment or a 100 % cotton

fabric without fluorescent brighteners or other finish can be used.
3.2
antibacterial agent

product designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or to

kill bacteria
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ISO/DIS 20743:2020(E)
3.3
antibacterial finish

treatment designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or

to kill bacteria
3.4
antibacterial activity

activity of an antibacterial finish used to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the

number of bacteria or to kill bacteria
3.5
plate count method

method in which the number of bacteria present after incubation is calculated by counting the number

of colonies according to a ten-time dilution method
Note 1 to entry: The results are expressed in “CFU (Colony Forming Unit)”.
3.6
luminescence method
method in which the amount of ATP contained in bacterial cells is measured
Note 1 to entry: The results are expressed in “moles of ATP”.
3.7
neutralizer

chemical agents used to inactivate, neutralize or quench the antibacterial properties of antibacterial

agents
4 Safety precaution

The test methods specified in this International Standard require the use of bacteria.

These tests should be carried out by persons with training and experience in the use of microbiological

techniques.

Appropriate safety precautions should be observed with due consideration given to country-specific

regulations.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.

5.1 Spectrophotometer, capable of measuring at a 620 nm to 660 nm wavelength, or McFarland’s

nephelometer.
5.2 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 37 °C ± 2 °C.

5.3 Water baths, one capable of maintaining a constant temperature of 46 °C ± 2 °C and another

capable of maintaining a temperature of 70 °C to 90 °C.
5.4 Mixer, producing a vortex shaking action.

5.5 Stomacher, capable of speeds of 6 blows per second to 8 blows per second, with the corresponding

disposable containers.
5.6 Clean bench, for microbial test.
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ISO/DIS 20743:2020(E)
5.7 Washing machine, in accordance with the specifications of ISO 6330.

5.8 Humidity chamber, tropical chamber or other container capable of maintaining a high-humidity

more than 70 %RH atmospheric condition.
−12 −7

5.9 Luminescence photometer, capable of measuring ATP of 10 mol/l to 10 mol/l at 300 nm to

650 nm with a luminescence-measuring reagent.

5.10 Printing apparatus, capable of applying a 4 N load to a test specimen and rotating the specimen

180° in one direction for a period of 3,0 s.

5.11 Refrigerator, capable of maintaining a temperature of between 2 °C and 8 °C.

5.12 Freezers, one adjustable to a temperature below −70 °C and another to a temperature below −20 °C.

5.13 Balance, which can be read to the nearest 0,01 g.

5.14 Filtering apparatus, consisting of an upper container equipped with a membrane filter and a

lower container equipped with a suction opening.

5.15 Pipette, having the most suitable volume for each use, with a tip made of glass or plastic, and with

a tolerance of 0,5 % or less.

5.16 Vials, 30 ml glass bottles, with screw openings, polytetrafluoroethylene or silicone packing and

caps made of polypropylene, polycarbonate or another suitable material.

5.17 Petri dishes, that have been sterilized, made of glass or plastic, in diameter sizes of 90 mm to

100 mm or 55 mm to 60 mm.
5.18 Glass rod, with a diameter of approximately 18 mm.
5.19 Anti-bumping granules (glass beads), with a diameter of 3 mm to 4 mm.
5.20 Erlenmeyer flask, of capacity 100 ml.

5.21 Cutting template, made of a sterilizable material (stainless steel or glass) with a diameter of

3,8 cm ± 0,1 cm.

5.22 Disposable plastic bags, sterile bags suitable for containing food products, to be used for one of

the shaking methods of the specimens.
5.23 Tweezers, made of a material which can be sterilized.

5.24 Stainless-steel cylinder, with a mass of 200 g ± 10 g and a diameter of 3,5 cm ± 0,1 cm.

5.25 Metal wire basket, for autoclaving.
5.26 Aluminium foil.
5.27 Reciprocal incubation shaker.
5.28 Autoclave, capable of sterilizing at 121 °C ± 2 °C and 103 kPa ± 5 kPa.
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ISO/DIS 20743:2020(E)
6 Reagents and culture media

Reagents used in tests shall be of analytical quality and/or suited for microbiological purposes.

Dehydrated products available on the commercial market are recommended for use in preparing the

culture media. The manufacturer’s instructions for the preparation of these products should be strictly

followed.
6.1 Water

Water used in tests shall be analytical-grade water for microbiological media preparation, which is

freshly distilled and/or ion-exchanged and/or ultra-filtered and/or filtered with RO (reverse osmosis).

It shall be free from all toxic or bacteria inhibitory substances.
6.2 Tryptone soya broth (TSB)
Tryptone, pancreatic digest of casein 17 g
Soya peptone, papain digest of soya 3 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Glucose 2,5 g
Dipotassium hydrogen phosphate 2,5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.3 Tryptone soya agar (TSA)
Tryptone, pancreatic digest of casein 15 g
Soya peptone, papain digest of soya 5 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Agar 15 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.4 Agar for transfer
Tryptone, pancreatic digest of casein 0,75 g
Soya peptone, papain digest of soya 0,25 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Agar 15 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
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ISO/DIS 20743:2020(E)
6.5 Nutrient broth (NB)
Beef extract 3 g
Peptone 5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, then sterilize by
autoclave (5.28).
pH 6,9 ± 0,2
6.6 Peptone salt solution
Peptone, pancreatic digest of casein 1 g
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 6,9 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.7 Physiological saline
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well, then sterilize by autoclave (5.28).
6.8 SCDLP medium
Peptone, digest of casein 17 g
Peptone, digest of soybean 3 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Dipotassium hydrogenphosphate 2,5 g
Glucose 2,5 g
Lecithin 1 g
Polysorbate 80 7 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).

If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or

another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded

along with the name and concentration.
6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension

This buffer solution consists of 0,005 mol/l sodium dihydrogenphosphate containing 0,037 % sucrose.

pH 7,2 ± 0,2
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6.10 Neutralizing solution
The composition of the standard neutralizing solution shall be as follows.
Polysorbate 80 30 g
Egg-yolk lecithin 3 g
Histidine hydrochloride 1 g
Meat or casein peptone 1 g
Sodium chloride (NaCl) 4,3 g
Monopotassium phosphate 3,6 g
Disodium phosphate dihydrate 7,2 g
Water 1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).

If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or

another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded

along with the name and concentration.
6.11 Enumeration agar (EA)
Dehydrated yeast extract 2,5 g
Casein tryptone 5,0 g
Glucose 1,0 g
Agar 12 g to 18 g (depending on the gel strength of the product)
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.12 Agar for printing
Agar 20 g
Water 1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
6.13 Cryoprotective solution for bacterial species

For freezing, a cryoprotective solution containing 150 g/l of glycerol or 100 g/l of dimethylsulfoxide

shall be used and prepared as follows,
TSB (6.2) or NB (6.5): 1 000 ml
Add,
Glycerol: 150 g
dimethylsulfoxide: 100 g
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
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ISO/DIS 20743:2020(E)

For solutions containing glycerol, sterilize the mixed solution by autoclave (5.28). For solutions

containing dimethylsulfoxide, sterilize the mixed solution by using 0,22 µm membrane filter.

NOTE Any commercially available product may be used as long as it is a cryoprotective solution or preserving

system that contains glycerol or dimethylsulfoxide and allows preservation of the strains in the same manner as

the specified solutions.
6.14 Stock solution of ATP standard reagent

The concentration of ATP standard reagent is 1 X 10 mol/l which is obtained by the following mixing.

Adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate 60,5 mg
Water 1 000 ml (final volume)

After preparation, the solution shall be placed in a tightly sealed container and cryopreserved at a

temperature of −20 °C or lower. The solution shall be used no later than 6 months from the date of

preparation.

NOTE The suitable amount of adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate may be calculated from the

ATP content of each commercial product.
6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 1 117 mg
Ethylenediamine disodium tetraacetatedehydrate 183 mg
Magnesium acetate tetrahydrate 808 mg
DL-dithiothreitol 6,7 mg
Dextrin 25 000 mg
Sucrose 925 mg
Water 250 ml (final volume)
pH 7,5 ± 0,2
6.16 ATP luminescent reagent
Luciferase (EC: 1.13.12.7) 16,0 mg
D-luciferin 12,6 mg
Bovine serum albumin 56 mg
Buffer solution (6.15) 30 ml

Once fully dissolved, let sit at room temperature for 15 min before use. Use within 3 h of preparation.

When a different ATP luminescent reagent is used, its composition shall be recorded.

6.17 ATP extracting reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 45 mg
10 % aqueous benzalkonium chloride 0,2 ml
Water 9,8 ml
pH 12,0 ± 0,5

When a different ATP extraction reagent is used, its composition shall be recorded.

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6.18 ATP eliminating reagent
−13
An agent to reduce the ATP in NB (6.5) to less than 10
...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 20743
ISO/TC 38 Secrétariat: JISC
Début de vote: Vote clos le:
2020-03-10 2020-06-02
Textiles — Détermination de l'activité antibactérienne des
produits textiles
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile products
ICS: 59.080.01; 07.100.99
CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR
OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC
SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT

Le présent document est distribué tel qu’il est parvenu du secrétariat du comité.

ÊTRE CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE
AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES
FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 20743:2020(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2020
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ISO/DIS 20743:2020(F)
Sommaire Page

Avant-propos ................................................................................................................................................................... v

Introduction ................................................................................................................................................................... vi

1 Domaine d’application .................................................................................................................................. 1

2 Références normatives .................................................................................................................................. 1

3 Termes et définitions ..................................................................................................................................... 2

4 Mesures de sécurité ........................................................................................................................................ 2

5 Appareillage ...................................................................................................................................................... 3

6 Réactifs et milieux de culture ..................................................................................................................... 4

6.1 Eau ........................................................................................................................................................................ 4

6.2 Bouillon tryptone soja (TSB) ....................................................................................................................... 5

6.3 Gélose tryptone soja (TSA) .......................................................................................................................... 5

6.4 Gélose pour transfert ..................................................................................................................................... 5

6.5 Bouillon nutritif ............................................................................................................................................... 5

6.6 Eau peptonée saline ....................................................................................................................................... 6

6.7 Solution physiologique saline ..................................................................................................................... 6

6.8 Milieu de culture SCDLP ................................................................................................................................ 6

6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction ............................................... 6

6.10 Solution neutralisante ................................................................................................................................... 7

6.11 Gélose de dénombrement ............................................................................................................................ 7

6.12 Gélose pour impression ................................................................................................................................ 7

6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes ........................................................................ 8

6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP ............................................................................................... 8

6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP ........................................................................ 8

6.16 Réactif luminescent à l’ATP ......................................................................................................................... 9

6.17 Réactif d’extraction de l’ATP ....................................................................................................................... 9

6.18 Réactif d’élimination de l’ATP .................................................................................................................... 9

6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP .......... 9

6.20 Solution physiologique saline d’extraction ........................................................................................ 10

7 Souches de référence .................................................................................................................................. 10

7.1 Souches ............................................................................................................................................................ 10

7.2 Conservation des souches ......................................................................................................................... 10

7.2.1 Généralités ...................................................................................................................................................... 10

7.2.2 Méthode des billes en céramique ........................................................................................................... 10

7.2.3 Méthode par suspension de glycérol ..................................................................................................... 11

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

8 Modes opératoires d’essai......................................................................................................................... 12

8.1 Méthode par absorption (voir Annexe E) .............................................................................................. 12

© ISO 2020

8.1.1 Incubation ....................................................................................................................................................... 12

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en oeuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, 8.1.2 Préparation de l’inoculum d’essai.......................................................................................................... 13

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

8.1.3 Préparation des éprouvettes ................................................................................................................... 13

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

8.1.4 Réalisation de l’essai ................................................................................................................................... 14

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ISO/DIS 20743:2020(F)
Sommaire Page

Avant-propos ................................................................................................................................................................... v

Introduction ................................................................................................................................................................... vi

1 Domaine d’application .................................................................................................................................. 1

2 Références normatives .................................................................................................................................. 1

3 Termes et définitions ..................................................................................................................................... 2

4 Mesures de sécurité ........................................................................................................................................ 2

5 Appareillage ...................................................................................................................................................... 3

6 Réactifs et milieux de culture ..................................................................................................................... 4

6.1 Eau ........................................................................................................................................................................ 4

6.2 Bouillon tryptone soja (TSB) ....................................................................................................................... 5

6.3 Gélose tryptone soja (TSA) .......................................................................................................................... 5

6.4 Gélose pour transfert ..................................................................................................................................... 5

6.5 Bouillon nutritif ............................................................................................................................................... 5

6.6 Eau peptonée saline ....................................................................................................................................... 6

6.7 Solution physiologique saline ..................................................................................................................... 6

6.8 Milieu de culture SCDLP ................................................................................................................................ 6

6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction ............................................... 6

6.10 Solution neutralisante ................................................................................................................................... 7

6.11 Gélose de dénombrement ............................................................................................................................ 7

6.12 Gélose pour impression ................................................................................................................................ 7

6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes ........................................................................ 8

6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP ............................................................................................... 8

6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP ........................................................................ 8

6.16 Réactif luminescent à l’ATP ......................................................................................................................... 9

6.17 Réactif d’extraction de l’ATP ....................................................................................................................... 9

6.18 Réactif d’élimination de l’ATP .................................................................................................................... 9

6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP .......... 9

6.20 Solution physiologique saline d’extraction ........................................................................................ 10

7 Souches de référence .................................................................................................................................. 10

7.1 Souches ............................................................................................................................................................ 10

7.2 Conservation des souches ......................................................................................................................... 10

7.2.1 Généralités ...................................................................................................................................................... 10

7.2.2 Méthode des billes en céramique ........................................................................................................... 10

7.2.3 Méthode par suspension de glycérol ..................................................................................................... 11

8 Modes opératoires d’essai......................................................................................................................... 12

8.1 Méthode par absorption (voir Annexe E) .............................................................................................. 12

8.1.1 Incubation ....................................................................................................................................................... 12

8.1.2 Préparation de l’inoculum d’essai.......................................................................................................... 13

8.1.3 Préparation des éprouvettes ................................................................................................................... 13

8.1.4 Réalisation de l’essai ................................................................................................................................... 14

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ISO/DIS 20743:2020(F)

8.1.5 Résultats d’essai ............................................................................................................................................ 16

8.2 Méthode par transfert (voir Annexe E) .................................................................................................. 17

8.2.1 Préparation de l’inoculum d’essai .......................................................................................................... 17

8.2.2 Préparation des éprouvettes .................................................................................................................... 18

8.2.3 Réalisation de l’essai ................................................................................................................................... 18

8.2.4 Résultats d’essai ............................................................................................................................................ 20

8.3 Méthode par impression (voir Annexe E) .............................................................................................. 21

8.3.1 Incubation ....................................................................................................................................................... 21

8.3.2 Préparation de l’inoculum d’essai .......................................................................................................... 22

8.3.3 Prétraitement de l’éprouvette ................................................................................................................. 22

8.3.4 Réalisation de l’essai ................................................................................................................................... 23

8.3.5 Résultats d’essai ............................................................................................................................................ 26

9 Rapport d’essai .............................................................................................................................................. 27

Annexe A (normative) Numéros de souches ...................................................................................................... 28

Annexe B (normative) Méthode d’agitation ....................................................................................................... 29

Annexe C (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par comptage sur plaque ................. 30

Annexe D (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par luminescence ............................... 31

Annexe E (informative) Exemples d’essais ......................................................................................................... 33

Annexe F (informative) Efficacité de l’activité antibactérienne ................................................................. 37

Bibliographie ................................................................................................................................................................ 38

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ISO/DIS 20743:2020(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux

de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général

confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire

partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non

gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement

avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation

électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir

www.iso.org/directives).

L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de

ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les

références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration

du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par

l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour

information, par souci de commodité, { l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 38, Textiles.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 20743:2007), qui a fait l’objet d’une

révision technique.
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ISO/DIS 20743:2020(F)
Introduction

Des produits textiles antibactériens spécialisés ont été introduits sur le marché et leur utilisation s’étend

chaque année à diverses applications. Ces textiles satisfont assurément aux exigences des consommateurs

quant { la prévention et { la protection contre les effets négatifs des bactéries, et quant { l’assurance de

leur qualité de vie.

C’est dans ces circonstances qu’il a été prévu d’établir des méthodes d’essai visant { déterminer l’activité

antibactérienne des produits textiles antibactériens, afin de répondre au besoin réel de disposer d’une

Norme internationale en la matière.

La méthode d’essai pour l’activité antibactérienne a été élaborée dans le cadre de l’ISO 20645, qui traite

d’une méthode d’essai qualitative. Il n’existe pas de norme d’essai pour la méthode quantitative, qui donne

des informations plus objectives concernant l’activité antibactérienne des produits textiles.

La présente Norme internationale spécifie plusieurs méthodes d’essai pratiques permettant de déterminer

quantitativement l’activité antibactérienne. Ces méthodes d’essai sont composées de deux grandes étapes,

{ savoir l’ensemencement des bactéries et le mesurage quantitatif des bactéries.

Les méthodes d’ensemencement des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale sont la

méthode par absorption, la méthode par transfert et la méthode par impression.

Les méthodes de mesurage quantitatif des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale sont

la méthode par comptage sur plaque et la méthode par luminescence de l’ATP.

Bien qu’il existe six manières de combiner les méthodes d’ensemencement et de mesurage quantitatif pour

réaliser cet essai, le choix de ces manières dépend des pratiques des utilisateurs et résulte d’un consensus

entre les parties intéressées.
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 20743:2020(F)
Textiles — Détermination de l’activité antibactérienne des
produits textiles
1 Domaine d’application

La présente Norme internationale spécifie des méthodes d’essai quantitatives permettant de

déterminer l’activité antibactérienne de tous les produits textiles antibactériens, y compris les

nontissés.

La présente Norme internationale s’applique { tous les produits textiles, y compris l’étoffe, le

rembourrage, le fil et les matériaux utilisés pour les vêtements, la literie, l’ameublement et divers

articles, quel que soit le type d’agent antibactérien utilisé (organique, inorganique, naturel ou

synthétique) ou quelle que soit la méthode d’application (intégration, post-traitement ou greffage).

Tenant compte de l’application prévue et de l’environnement dans lequel le produit textile est destiné {

être utilisé, et également des propriétés de surface du textile, l’utilisateur peut choisir la plus adaptée

des trois méthodes d’ensemencement suivantes pour la détermination de l’activité antibactérienne :

a) méthode par absorption (méthode d’évaluation dans laquelle la suspension bactérienne d’essai est

ensemencée directement sur des éprouvettes) ;

b) méthode par transfert (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur

une boîte de milieu gélosé, puis transférées sur des éprouvettes) ;

c) méthode par impression (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur

un filtre, puis imprimées sur des éprouvettes).

La méthode par comptage sur plaque et la méthode par luminescence de l’ATP (adénosine

triphosphate) sont également spécifiées pour le dénombrement des bactéries.
2 Références normatives

Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de manière normative dans le présent

document et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée

s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y

compris les éventuels amendements).

ISO 6330, Textiles — Méthodes de lavage et de séchage domestiques en vue des essais des textiles

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ISO/DIS 20743:2020(F)
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

3.1
étoffe témoin

étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des bactéries d’essai et valider l’essai

Note 1 { l’article : Il est possible d’utiliser une étoffe identique { celle devant être soumise { essai, mais n’ayant

subi aucun traitement antibactérien, ou une étoffe de coton 100 % sans azurage optique ni autre apprêt.

3.2
agent antibactérien

produit conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de

bactéries ou pour tuer les bactéries
3.3
apprêt antibactérien

traitement conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de

bactéries ou pour tuer les bactéries
3.4
activité antibactérienne

activité d’un apprêt antibactérien dont l’utilisation vise { empêcher ou { atténuer la croissance des

bactéries, à réduire le nombre de bactéries ou à tuer les bactéries
3.5
méthode par comptage sur plaque

méthode dans laquelle le nombre de bactéries présentes après incubation est calculé en comptant le

nombre de colonies selon une méthode de dilution au dixième
Note 1 { l’article : Les résultats sont exprimés en UFC (unité formant colonie).
3.6
méthode par luminescence

méthode par laquelle la quantité d’ATP présente dans les cellules bactériennes est mesurée

Note 1 { l’article : Les résultats sont exprimés en « moles d’ATP ».
3.7
neutralisant

agent chimique utilisé pour désactiver, neutraliser ou atténuer les propriétés antibactériennes des

agents antibactériens
4 Mesures de sécurité

Les méthodes d’essai spécifiées dans la présente Norme internationale impliquent l’utilisation de

bactéries.
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ISO/DIS 20743:2020(F)

Il convient que ces essais soient réalisés par des personnes formées et expérimentées dans la mise en

œuvre des techniques microbiologiques.

Il convient d’observer les mesures de sécurité appropriées en prenant en considération la

réglementation propre à chaque pays.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.

5.1 Spectrophotomètre, permettant de mesurer { une longueur d’onde comprise entre 620 nm

et 660 nm, ou néphélomètre de McFarland.
5.2 Incubateur, pouvant maintenir une température constante de (37 ± 2) °C.

5.3 Bains-marie, pouvant l’un maintenir une température constante de (46 ± 2) °C et l’autre une

température comprise entre 70 °C et 90 °C.
5.4 Agitateur, produisant une agitation de type vortex.

5.5 Machine Stomacher, pouvant atteindre des vitesses comprises entre 6 coups par seconde

et 8 coups par seconde, munie des sacs jetables correspondants.
5.6 Paillasse propre, pour l’essai microbien.
5.7 Machine à laver, conforme aux spécifications de l’ISO 6330.

5.8 Chambre d’humidité, chambre tropicale ou autre enceinte pouvant maintenir des conditions

atmosphériques d’humidité élevée, supérieures à 70 % HR (humidité relative).

5.9 Photomètre de luminescence, permettant de mesurer l’ATP { une concentration comprise

−12 −7

entre 10 mol/l et 10 mol/l { une longueur d’onde comprise entre 300 nm et 650 nm avec un réactif

de mesurage de la luminescence.

5.10 Appareil d’impression, permettant d’appliquer une charge de 4 N sur une éprouvette et de faire

tourner cette éprouvette de 180° dans un sens pendant 3,0 s.

5.11 Réfrigérateur, pouvant maintenir une température comprise entre 2 °C et 8 °C.

5.12 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à −70 °C et l’autre à une

température inférieure à −20 °C.
5.13 Balance, permettant de peser à 0,01 g près.

5.14 Appareil de filtration, constitué d’un récipient supérieur muni d’une membrane filtrante et d’un

récipient inférieur muni d’un orifice d’aspiration.

5.15 Pipette, présentant le volume le mieux adapté pour chaque utilisation, munie d’un embout en

verre ou en matière plastique et ayant une tolérance inférieure ou égale à 0,5 %.

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ISO/DIS 20743:2020(F)

5.16 Flacons, contenants en verre d’une capacité de 30 ml, { ouverture vissée, munis d’un joint en

polytétrafluoroéthylène (PTFE) ou en silicone et d’un couvercle en polypropylène, en polycarbonate ou

autre matériau approprié.

5.17 Boîtes de Petri, en verre ou en matière plastique, stérilisées et dont le diamètre est compris

entre 90 mm et 100 mm ou entre 55 mm et 60 mm.
5.18 Tige en verre, de 18 mm de diamètre environ.

5.19 Régulateurs d’ébullition (billes en verre), dont le diamètre est compris entre 3 mm et 4 mm.

5.20 Fiole Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.

5.21 Gabarit de découpage, en matériau stérilisable (acier inoxydable ou verre) de (3,8 ± 0,1) cm de

diamètre.

5.22 Sachets plastiques jetables, sacs stériles appropriés pour une utilisation alimentaire, à utiliser

pour l’une des méthodes d’agitation des éprouvettes.
5.23 Brucelles, en matériau stérilisable.

5.24 Cylindre en acier inoxydable, d’une masse de (200 ± 10) g et d’un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.

5.25 Corbeille en fil métallique, pour l’autoclavage.
5.26 Feuille d’aluminium.
5.27 Agitateur-incubateur à agitation va-et-vient.

5.28 Autoclave, permettant d’effectuer une stérilisation à (121 ± 2) °C et à (103 ± 5) kPa.

6 Réactifs et milieux de culture

Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés à des fins

microbi
...