ISO 18363-1:2015

Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS — Part 1: Method using fast alkaline transesterification and measurement for 3-MCPD and differential measurement for glycidol

ISO 18363-1:2015 describes a procedure for the indirect determination of 3-MCPD esters (bound 3-MCPD) and possible free 3-MCPD after alkaline catalysed ester cleavage and derivatization with phenylboronic acid (PBA). Furthermore, this part of ISO 18363 enables the indirect determination of glycidyl esters (bound glycidol) under the assumption that no other substances are present that react at room temperature with inorganic chloride to generate 3-MCPD. ISO 18363-1:2015 is applicable to solid and liquid fats and oils. Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this part of ISO 18363.

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination des esters de chloropropanediols (MCPD) et d'acides gras et des esters de glycidol et d'acides gras par CPG/SM — Partie 1: Méthode par transestérification alcaline rapide et mesure pour le 3-MCPD et par mesure différentielle pour le glycidol

L'ISO 18363-1:2015 décrit un mode opératoire permettant la détermination indirecte des esters de 3-MCPD (ou 3-MCPD lié) et des éventuels 3-MCPD libres après clivage des esters par catalyse alcaline et dérivatisation à l'acide phénylboronique (PBA). L'ISO 18363-1:2015 définit également la détermination indirecte des esters de glycidol (ou glycidol lié) en partant de l'hypothèse qu'aucune autre substance présente ne réagit, à température ambiante, avec le chlorure inorganique pour générer du 3-MCPD. L'ISO 18363-1:2015 est applicable aux corps gras solides et liquides. Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du domaine d'application de l'ISO 18363-1:2015.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 16-Aug-2015
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 22-Jan-2021

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 18363-1
First edition
2015-08-15
Animal and vegetable fats and oils —
Determination of fatty-acid-bound
chloropropanediols (MCPDs) and
glycidol by GC/MS —
Part 1:
Method using fast alkaline
transesterification and measurement
for 3-MCPD and differential
measurement for glycidol
Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination des
esters de chloropropanediols (MCPD) et d’acides gras et des esters de
glycidol et d’acides gras —
Partie 1: Méthode par transestérification alcaline rapide et
mesure pour le chloro-3 propane-1,2-diol (3-MCPD) et par mesure
différentielle pour le glycidol
Reference number
ISO 18363-1:2015(E)
©
ISO 2015

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ISO 18363-1:2015(E)

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ISO 18363-1:2015(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 3
5.1 General . 3
5.2 Standard and reference compounds . 3
5.3 Solvents . 3
5.4 Other reagents . 3
6 Apparatus . 4
7 Sample . 4
7.1 Sampling . 4
7.2 Preparation of the test sample . 4
8 Procedure. 5
8.1 Spiking with surrogate standard and homogenization . 5
8.2 Ester cleavage and glycidol transformation . 5
8.3 Matrix clean up . 5
8.4 Derivatization . 5
8.5 Gas chromatography/mass spectrometry references . 6
9 Expression of results . 6
10 Precision . 7
10.1 Interlaboratory test. 7
10.2 Repeatability . 8
10.3 Reproducibility . 8
11 Test report . 8
Annex A (informative) Results of an collaborative trial . 9
Bibliography .11
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ISO 18363-1:2015(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical
Barriers to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information.
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
ISO 18363 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils —
Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS
— Part 1: Method using fast alkaline transesterification and measurement for 3-MCPD and differential
measurement for glycidol
The following parts are under preparation:
— Part 2: Method using alkaline transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
— Part 3: Method using acid transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
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ISO 18363-1:2015(E)

Introduction
ISO 18363 is a set of International Standards which can be used for the determination of ester-bound
MCPD and glycidol. There are currently three International Standards which have been proposed and
this introduction is a description of these methods, which can be used by the analyst to decide which
methods are suitable for their application. The detailed application of each method is contained within
the scope of the individual method.
This part of ISO 18363 is a differential method equivalent to the DGF standard C-VI 18 (10) and identical
to AOCS Official Method Cd 29c-13. Briefly, it is based on a fast alkaline catalysed release of 3-MCPD
and glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into induced 3-MCPD. It
consists of two parts. The first part (A) allows the determination of the sum of ester bound 3-MCPD and
ester bound glycidol, whereas the second part (B) determines ester-bound 3-MCPD only. Both assays
are based on the release of the target analytes 3-MCPD and glycidol from the ester bound form by an
alkaline catalysed alcoholysis carried out at room temperature. In part A, an acidified sodium chloride
solution is used to stop the reaction and subsequently convert the glycidol into induced 3-MCPD. Thus,
3-MCPD and glycidol become indistinguishable in part A. In part B, the reaction stop is achieved by
the addition of an acidified chloride-free salt solution which also prevents the conversion of glycidol
into induced MCPD. Thereby, part B allows the determination of the genuine 3-MCPD content. Finally,
the glycidol content of the sample is proportional to the difference of both assays (A – B) and can be
calculated when the transformation ratio from glycidol to 3-MCPD has been determined. This part of
ISO 18363 is applicable for the fast determination of ester bound 3-MCPD and glycidol in refined and
non-refined vegetable oils and fats. This part of ISO 18363 can also apply to animal fats and used frying
oils and fats, but a validation study has to be undertaken before the analysis of these matrices. Any
free analytes within the sample would be included in the results, but the standard does not allow the
distinction between free and bound analytes. However, as of publication, research has not shown any
evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable oils and
fats. In principle, this part of ISO 18363 can also be modified in such a way that the determination of
2-MCPD is feasible, but again, a validation study has to be undertaken before the analysis of this analyte.
The second part of the proposed International Standards for the determination of ester-bound MCPD
and glycidol represents the AOCS Official Method Cd 29b-13. Briefly, it is based on a slow alkaline
release of MCPD and glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into
3-MBPD. The second part of the proposed International Standards consists of two sample preparations
that differ in the use of internal standards. Both parts can be used for the determination of ester bound
2-MCPD and 3-MCPD. In part A, a preliminary result for ester bound glycidol is determined. Because
the 3-MCPD present in the sample will be converted to some minor extent into induced glycidol by the
sample preparation, part B serves to quantify this amount of induced glycidol that is subsequently
subtracted from the preliminary glycidol result of part A. By the use of isotopically labelled free MCPD
isomers in assay A and isotopically labelled ester bound 2-MCPD and 3-MCPD in part B, the efficiency
of ester cleavage can be monitored. Both assays A and B are based on the release of the target analytes
2-MCPD, 3-MCPD, and glycidol from the ester bound form by a slow alkaline catalysed alcoholysis in the
cold. In both sample preparations, the reaction is stopped by the addition of an acidified concentrated
sodium bromide solution so as to convert the unstable and volatile glycidol into 3-MBPD which shows
comparable properties to 3-MCPD with regard to its stability and chromatographic performance.
Moreover, the major excess of bromide ions prevents the undesired formation of 3-MCPD from glycidol
in the case of samples which contain naturally occurring amounts of chloride. The second part of the
proposed standards is applicable for the determination of ester bound 3-MCPD, 2-MCPD, and glycidol in
refined and unrefined vegetable oils and fats. The second part of the proposed International Standards
can also apply to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study has to be undertaken
before the analysis of these matrices. Any free analytes within the sample would be included in the
results, but the standard does not allow the distinction between free and bound analytes. However, as
of publication, research has not shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified
analyte content in vegetable oils and fats.
The third part of the proposed International Standards for the determination of ester-bound MCPD
and glycidol represents the AOCS Official Method Cd 29a-13. Briefly, it is based on the conversion of
glycidyl esters into 3-MBPD esters and a slow acidic catalysed release of MCPD and MBPD from the
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ISO 18363-1:2015(E)

ester derivatives. The third part of the proposed International Standards is based on a single sample
preparation in which glycidyl esters are converted into MBPD monoesters, and subsequently, the
free analytes 2-MCPD, 3-MCPD, and 3-MBPD are released by a slow acid-catalysed alcoholysis. The
3-MBPD represents the genuine content of bound glycidol. The third part of the proposed International
Standards can be applied for the determination of ester bound 2-MCPD, 3-MCPD, and glycidol in refined
and non-refined vegetable oils and fats. The third part of the proposed International Standards can also
apply to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study has to be undertaken before
the analysis of these matrices. The method is suited for the analysis of bound (esterified) analytes, but
if required, the third part of the proposed International Standards can be also performed without the
initial conversion of glycidyl esters. In such a setup, both free and bound 2-MCPD and 3-MCPD forms
would be included in the results and the amount of free analytes can be calculated as a difference
between two determinations performed in both setups. However, as of publication, research has not
shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in vegetable oils
and fats.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 18363-1:2015(E)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol
by GC/MS —
Part 1:
Method using fast alkaline transesterification and
measurement for 3-MCPD and differential measurement
for glycidol
1 Scope
This part of ISO 18363 describes a procedure for the indirect determination of 3-MCPD esters (bound
3-MCPD) and possible free 3-MCPD after alkaline catalysed ester cleavage and derivatization with
phenylboronic acid (PBA). Furthermore, this part of ISO 18363 enables the indirect determination of
glycidyl esters (bound glycidol) under the assumption that no other substances are present that react
at room temperature with inorganic chloride to generate 3-MCPD.
This part of ISO 18363 is applicable to solid and liquid fats and oils. Milk and milk products (or fat
coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this part of ISO 18363.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
bound 3-MCPD
sum of all 3-MCPD derivatives being cleaved by alkaline catalysed alcoholysis (especially fatty acid
esters) according to the reference method
Note 1 to entry: The content of 3-MCPD is calculated and reported as a mass fraction, in milligrams per kilogram
(mg/kg).
Note 2 to entry: In fats and oils, the amount of free 3-MCPD which can possibly occur is generally negligibly low
but has a bearing on the result.
3.2
bound glycidol
sum of all glycidyl derivatives being cleaved by alkaline catalysed alcoholysis (especially fatty acid
esters) according to the specified standard
Note 1 to entry: The content of glycidol is calculated and reported as a mass fraction, in milligrams per kilogram
(mg/kg).
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ISO 18363-1:2015(E)

Note 2 to entry: The presence of free glycidol in fats and oils is unlikely because of the instability of this compound.
4 Principle
For the determination of the sum of bound 3-MCPD and bound glycidol as free 3-MCPD (assay A),
an aliquot of the sample is spiked with surrogate standard d -3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl ester and
5
dissolved in tertiary-butyl methyl ether (tBME). The addition of a diluted solution of sodium hydroxide
or sodium methoxide in methanol will release free 3-MCPD and free glycidol. This reaction is stopped
by the addition of an excess amount of sodium chloride in acidic solution. Under acidic conditions, free
glycidol reacts with inorganic chloride to additional 3-MCPD and a small amount of 2-MCPD. Undesired
non-polar compounds in the sample are removed by double extraction of the aqueous phase with
isohexane. The analyte, together with the surrogate standard, is transferred into an organic phase by
multiple extraction of the aqueous phase with diethyl ether, ethyl acetate, or a mixture of both solvents.
Derivatization takes place in the organic phase by reaction with PBA. In order to remove excess amounts
of PBA, concentrate the a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 18363-1
Première édition
2015-08-15
Corps gras d’origines animale et
végétale — Détermination des esters
de chloropropanediols (MCPD) et
d’acides gras et des esters de glycidol
et d’acides gras par CPG/SM —
Partie 1:
Méthode par transestérification
alcaline rapide et mesure pour le
3-MCPD et par mesure différentielle
pour le glycidol
Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-
bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS —
Part 1: Method using fast alkaline transesterification and
measurement for 3-MCPD and differential measurement for glycidol
Numéro de référence
ISO 18363-1:2015(F)
©
ISO 2015

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ISO 18363-1:2015(F)

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ISO 18363-1:2015(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 3
5.1 Généralités . 3
5.2 Composés étalons et composés de référence . 3
5.3 Solvants . 3
5.4 Autres réactifs . 3
6 Appareillage . 4
7 Échantillon . 4
7.1 Échantillonnage . 4
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
8 Mode opératoire. 5
8.1 Ajout d’étalon de substitution et homogénéisation . 5
8.2 Clivage des esters et transformation du glycidol . 5
8.3 Élimination des résidus de la matrice . 5
8.4 Dérivatisation . 5
8.5 Références relatives à la chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de
masse (CPG/SM) . 6
9 Expression des résultats. 6
10 Fidélité . 8
10.1 Essai interlaboratoires . 8
10.2 Répétabilité . 8
10.3 Reproductibilité . 8
11 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires . 9
Bibliographie .11
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ISO 18363-1:2015(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
L’ISO 18363 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d’origines
animale et végétale — Détermination des esters de chloropropanediols (MCPD) et d’acides gras et des esters
de glycidol et d’acides gras par CPG/SM:
— Partie 1: Méthode par transestérification alcaline rapide et mesure pour le 3-MCPD et par mesure
différentielle pour le glycidol
Les parties suivantes sont en cours de préparation:
— Partie 2: Méthode par transestérification alcaline et mesure pour le 2-MCPD, le 3-MCPD et le glycidol
— Partie 3: Méthode par transestérification acide et mesure pour le 2-MCPD, le 3-MCPD et le glycidol
iv © ISO 2015 – Tous droits réservés

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ISO 18363-1:2015(F)

Introduction
L’ISO 18363 est un ensemble de Normes internationales pouvant être utilisé pour la détermination
des esters de MCPD et de glycidol. Trois Normes internationales ont été proposées à ce sujet et une
description fournie dans l’introduction peut être utilisée par l’analyste pour décider des méthodes
appropriées à leur application. L’application détaillée de chaque méthode figure dans le domaine
d’application de la méthode concernée.
La présente partie de l’ISO 18363 est une méthode différentielle équivalente à la norme C-VI 18
(10) de la DGF et identique à la méthode officielle Cd 29c-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose sur la
libération rapide par catalyse alcaline de 3-MCPD et de glycidol à partir de leurs dérivés esters. Le
glycidol est par la suite converti en 3-MCPD. Elle comprend deux parties. La première partie (A) permet
de déterminer la somme des esters de 3-MCPD et des esters de glycidol, tandis que la seconde partie
(B) ne détermine que les esters de 3-MCPD. Les deux analyses reposent sur la libération des analytes
cibles, le 3-MCPD et le glycidol, à partir des esters par alcoolyse en présence d’un catalyseur alcalin
à température ambiante. Dans la partie A, une solution acidifiée de chlorure de sodium est utilisée
pour interrompre la réaction qui induit par la suite la conversion du glycidol en 3-MCPD. Il n’est par
conséquent plus possible de faire la distinction entre le 3-MCPD et le glycidol dans la partie A. Dans la
partie B, la réaction est interrompue par ajout d’une solution saline acide acidifiée exempte de chlorure
qui évite aussi la conversion du glycidol en MCPD. La partie B permet donc de déterminer la véritable
teneur en 3-MCPD. Enfin, la teneur en glycidol de l’échantillon est proportionnelle à la différence entre
les deux analyses (A – B) et peut être calculée lorsque le coefficient de transformation du glycidol en
3-MCPD a été déterminé. La présente partie de l’ISO 18363 est applicable à la détermination rapide
des esters de 3-MCPD et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. La
présente partie de l’ISO 18363 peut également s’appliquer aux graisses animales et aux huiles de friture
usagées, mais une étude de validation doit être menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices.
Les analytes libres éventuellement contenus dans l’échantillon sont habituellement inclus dans les
résultats, mais la norme ne permet pas de faire la distinction entre les analytes libres et les analytes
liés. Néanmoins, les études disponibles au moment de la publication de la présente norme ne révèlent
aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en analytes estérifiés dans les corps gras
d’origine végétale raffinés. En principe, la présente partie de l’ISO 18363 peut également être modifiée
de façon à permettre la détermination du 2-MCPD, mais une fois encore, une étude de validation doit
être menée avant d’analyser cet analyte.
La deuxième partie des Normes internationales proposées pour la détermination des esters de
MCPD et de glycidol correspond à la méthode officielle Cd 29b-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose
sur une libération alcaline lente de MCPD et de glycidol à partir des formes esters. Le glycidol est par
la suite converti en 3-MBPD. La deuxième partie des Normes internationales proposées comprend
deux préparations d’échantillons qui se distinguent par l’utilisation d’étalons internes. Les deux
parties peuvent être utilisées pour la détermination des esters de 2-MCPD et de 3-MCPD. Un résultat
préliminaire pour le glycidol issu des formes esters est déterminé dans la partie A. Comme le 3-MCPD
présent dans l’échantillon sera partiellement converti en glycidol lors de la préparation de l’échantillon,
la partie B sert à quantifier la teneur en glycidol issue de cette transformation qui est ensuite soustraite
du résultat préliminaire obtenu pour le glycidol dans la partie A. L’utilisation d’isomères isotopiques
de MCPD libres dans l’analyse A et de formes isotopiques d’esters de 2-MCPD et de 3-MCPD dans la
partie B permet de surveiller le rendement du clivage des esters. Les analyses A et B reposent toutes
les deux sur la libération des analytes cibles, 2-MCPD, 3-MCPD et glycidol à partir des esters dans le
cadre d’une alcoolyse lente en présence d’un catalyseur alcalin dans le froid. Dans les deux préparations
d’échantillons, la réaction est interrompue par l’ajout d’une solution acidifiée et concentrée de bromure
de sodium de façon à transformer le glycidol instable et volatil en 3-MBPD qui présente des propriétés
comparables au 3-MCPD en matière de stabilité et de performances chromatographiques. De plus, l’excès
important d’ions bromure empêche la formation non souhaitée de 3-MCPD à partir du glycidol dans
les échantillons contenant naturellement des quantités de chlorure. La deuxième partie des normes
proposées est applicable à la détermination des esters de 3-MCPD, de 2-MCPD et de glycidol dans les
corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. La deuxième partie des Normes internationales
proposées peut également s’appliquer aux graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une
étude de validation doit être menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices. Les analytes libres
éventuellement contenus dans l’échantillon sont habituellement inclus dans les résultats, mais la norme
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ISO 18363-1:2015(F)

ne permet pas de faire la distinction entre les analytes libres et les analytes liés. Néanmoins, les études
disponibles au moment de la publication de la présente norme ne révèlent aucune teneur en analytes
libres aussi élevée que la teneur en analytes estérifiés dans les corps gras d’origine végétale.
La troisième partie des Normes internationales proposées pour la détermination des esters de MCPDet
de glycidol correspond à la méthode officielle Cd 29a-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose sur la
transformation des esters de glycidol en esters de 3-MBPD et une libération lente par catalyse acide du
MCPD et du MBPD à partir des formes esters. La troisième partie des Normes internationales proposées
repose sur la préparation d’un échantillon unique dans lequel les esters de glycidol sont transformés en
monoesters de MBPD puis les analytes libres de 2-MCPD, 3-MCPD et 3-MBPD sont libérés par alcoolyse
lente en présence d’un catalyseur acide. Le 3-MBPD représente la véritable teneur en glycidol issu des
formes esters. La troisième partie des Normes internationales proposées peut être appliquée pour
la détermination des esters de 2-MCPD, 3-MCPD et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale
raffinés et non raffinés. La troisième partie des Normes internationales proposées peut également
s’appliquer aux graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une étude de validation doit être
menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices. La méthode est adaptée à l’analyse d’analytes liés
(estérifiés), mais si nécessaire, la troisième partie des Normes internationales proposées peut également
être réalisée sans la transformation initiale des esters de glycidol. Dans cette configuration, les formes
libres et liées du 2-MCPD et du 3-MCPD sont généralement toutes deux incluses dans les résultats et la
teneur en analytes libres peut être calculée comme la différence entre deux déterminations réalisées
dans les deux configurations. Néanmoins, les études disponibles au moment de la publication de la
présente norme ne révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en analytes
estérifiés dans les corps gras d’origine végétale.
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NORME INTERNATIONALE ISO 18363-1:2015(F)
Corps gras d’origines animale et végétale — Détermination
des esters de chloropropanediols (MCPD) et d’acides gras
et des esters de glycidol et d’acides gras par CPG/SM —
Partie 1:
Méthode par transestérification alcaline rapide et mesure
pour le 3-MCPD et par mesure différentielle pour le glycidol
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 18363 décrit un mode opératoire permettant la détermination indirecte des
esters de 3-MCPD (ou 3-MCPD lié) et des éventuels 3-MCPD libres après clivage des esters par catalyse
alcaline et dérivatisation à l’acide phénylboronique (PBA). La présente partie de l’ISO 18363 définit
également la détermination indirecte des esters de glycidol (ou glycidol lié) en partant de l’hypothèse
qu’aucune autre substance présente ne réagit, à température ambiante, avec le chlorure inorganique
pour générer du 3-MCPD.
La présente partie de l’ISO 18363 est applicable aux corps gras solides et liquides. Le lait et les produits
laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du domaine d’application de la
présente partie de l’ISO 18363.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
3-MCPD lié
somme de tous les dérivés de 3-MCPD soumis à un clivage par alcoolyse en présence d’un catalyseur
alcalin (notamment les esters d’acides gras) conformément à la méthode de référence
Note 1 à l’article: La teneur en 3-MCPD est calculée et consignée sous forme de fraction massique, exprimée en
milligrammes par kilogramme (mg/kg).
Note 2 à l’article: Dans les corps gras, la teneur en 3-MCPD libre susceptible d’être trouvée est généralement très
basse mais a une influence sur le résultat.
3.2
glycidol lié
somme de tous les dérivés de glycidol soumis à un clivage par alcoolyse en présence d’un catalyseur
alcalin (notamment les esters d’acides gras) conformément à la norme spécifiée
Note 1 à l’article: La teneur en glycidol est calculée et consignée sous forme de fraction massique, exprimée en
milligrammes par kilogramme (mg/kg).
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Note 2 à l’article: La présence de glycidol libre dans les corps gras est peu probable en raison de l’instabilité
de ce composé.
4 Principe
Pour la détermination de la somme du 3-MCPD lié et du glycidol lié sous forme de 3-MCPD libre (analyse
A), une fraction aliquote de l’échantillon est mise en solution avec l’étalon de substitution, ester de
d -3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl, puis est dissoute dans du tert-butyl-méthyl éther (tBME). L’ajout d’une
5
solution diluée d’hydroxyde de sodium ou de méthoxyde de sodium dans du méthanol va permettre
la formation de 3-MCPD libre et de glycidol libre. Cette réaction est interrompue par ajout d’un excès
de chlorure de sodium dans une solution acide. En milieu acide, le glycidol libre réagit avec le chlorure
inorganique pour former du 3-MCPD supplémentaire et une petite quantité de 2-MCPD. Les composés
apolaires de l’échantillon qui ne présentent pas d’intérêt sont éliminés par double extraction de la phase
aqueuse avec de l’isohexane. L’analyte, ainsi que l’étalon de substitution, est transféré dans une phase
organique par extractions multiples de la phase aqueuse à l’aide d’éther diéthylique, d’acétate d’éthyle
ou d’un mélange des deux solvants. La dérivatisation se produit dans la phase organique par réaction
avec l’acide phénylboronique (PBA). Afin d’éliminer l’excès de PBA, de concentrer les analytes et de les
transférer dans un solvant organique inerte, l’extrait d’échantillon est placé sur une petite quantité de
sulfate de sodium anhydre puis il est évaporé à sec sous flux d’azote avant d’être à nouveau dissout
dans de l’isooctane pour mesurage par CPG/MS.
Pour la détermination du 3-MCPD lié, une seconde fraction aliquote de l’échantillon (analyse B) est mise
en solution avec l’étalon de substitution, ester de d -3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl, puis est dissoute dans
5
du tBME. L’ajout d’une solution diluée d’hydroxyde de sodium ou de méthoxyde de sodium dans du
méthanol va permettre la formation de 3-MCPD libre et de glycidol libre. Cette réaction est interrompue
par ajout d’un excès de solution saline acide exempte de chlorure (par exemple sulfate de sodium,
sulfate d’ammonium, bromure de sodium). En milieu acide exempt de chlorure, le glycidol libre réagit
pour former différents produits selon le sel utilisé, mais ne génère pas de 3-MCPD supplémentaire. La
préparation additionnelle de l’échantillon et le mesurage sont similaires à ceux décrits pour l’analyse A.
Pour le calcul du glycidol lié, la différence entre les deux résultats (analyses A et B) est multipliée par un
coefficient non stœchiométrique reflétant la transformation du glycidol en 3-MCPD. Ce mode opératoire
part de l’hypothèse que la différence entre les deux déterminations obtenues est uniquement due à
l’occurrence exclusive d’esters de glycidol.
La quantification des analytes est réalisée en utilisant l’ester de d -3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl comme
5
étalon de substitution. Par conséquent, aucun contrôle du clivage complet des esters n’est nécessaire.
Un étalonnage est réalisé périodiquement sur l’ensemble de la méthode en présence de matrice, afin
de déterminer la linéarité de la méthode, la récupération relative et, dans le cas du glycidol lié, de
déterminer le coefficient de transformation. Si la méthode reste inchangée, il n’est pas nécessaire de
procéder à cet étalonnage tous les jours.
Les échantillons qui contiennent uniquement du 3-MCPD et pas de glycidol produisent des valeurs plus
basses (environ 2 % à 10 %) lorsque l’analyse B est utilisée à la place de l’analyse A. Cette différence est
due à un effet isotopique du mode opératoire B. Cet effet peut être déterminé par dosage d’un échantillon
d’huile non contaminé avec des quantités égales d’ester de 3-MCPD-1,2-bis-dipalmitoyl et d’ester de d -
5
3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl puis par séparation en deux fractions aliquotes. Les aliquotes sont ensuite
analysées trois fois conformément aux modes opératoires A et B. À partir des déterminations obtenues,
un facteur de correction peut être défini comme étant le ratio des résultats des deux modes opératoires.
L’effet isotopique apparaît également en présence de glycidol lié.
Comme du 3-MCPD peut apparaître dans certains polymères utilisés pour humidifier des résines de
renfort et dans d’autres buts, il est recommandé d’analyser quotidiennement un échantillon à blanc pour
contrôler l’absence de toute contamination non souhaitée. Le blanc doit être une huile ne contenant pas
de 3-MCPD ou de glycidol (par exemple huile végétale vierge). Une contamination peut se produire par
le biais des consommables tels que les filtres ou les flacons à bouchon vissé. Conditionner la verrerie
entre 400 °C et 500 °C peut réduire ce risque, la meilleure solution restant toutefois l’utilisation de
matériaux non contaminés.
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ISO 18363-1:2015(F)

5 Réactifs
5.1 Généralités
AVERTISSEMENT — L’attention du lecteur est attirée sur les règlements qui régissent la
manipulation des substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique,
organisationnel et du personnel doivent être suivies.
Sauf indication contraire, des réactifs analytiquement purs doivent être utilisés; l’eau doit être de
qualité 3 conformément à l’ISO 3696.
5.2 Composés étalons et composés de référence
5.2.1 Étalon de substitution pour solution de travail: ester de d -3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl (par
5
exemple 26,87 µg/ml dans du toluène; équivalent de 5,0 µg/ml de 3-MCPD libre); d’autres esters de d -
5
3-MCPD-1,2-bis représentatifs pourraient également être utilisés.
5.2.2 Ester de 3-MCPD-1,2-bis-palmitoyl (26,6 µg/ml dans du toluène; équivalent de 5,0 µg/ml de
3-MCPD libre); d’autres esters de 3-MCPD-1,2-bis représentatifs pourraient également être utilisés.
5.2.3 3-MCPD, w ≥ 99,0 %.
5.2.4 Stéarate de glycidyle, w ≥ 95,0.
5.3 Solvants
5.3.1 Toluène.
5.3.2 Tert-butyl méthyl éther (tBME), (2-méthoxy-2-méthylpropane).
5.3.3 Méthanol.
5.3.4 Isohexane (2-méthylpentane).
5.3.5 Acétate d’éthyle.
5.3.6 Éther diéthylique.
5.3.7 Isooctane.
5.4 Autres réactifs
5.4.1 Solution d’hydroxyde de sodium, ρ = 20 g/l dans du méthanol ou solution de méthoxyde de
sodium, ρ = 25 g/l dans du méthanol.
5.4.2 Solution acidifiée de chlorure de sodium (ρ = 200 g/l). Ajouter 35 ml d’acide sulfurique
(25 %) à 1 l de solution aqueuse de chlorure de sodium (200 g/l). 600 µl de cette solution permet de
neutraliser 200 μl de solution d’hydroxyde de sodium ou de méthoxyde de sodium (5.4.1) et d’ajuster la
valeur du pH dans la plage acide. L’utilisation d’autres acides (tels que l’acide acétique, par exemple) est
possible, mais leur aptitude à l’emploi doit préalablement être soumise à des essais d’ajout d’étalon ou à
une analyse d’échantillons issus d’essais interlaboratoires.
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ISO 18363-1:2015(F)

5.4.3 Solution acidifiée de bromure de sodium, (ρ = 600 g/l). Ajouter 35 ml d’acide sulfurique
(25 %) à 1 l de solution aqueuse de chlorure de sodium (600 g/l). 600 µl de cette solution permet de
neutraliser 200 µl de solution d’hydroxyde de sodium ou de méthoxyde de sodium (5.4.1) et d’ajuster la
valeur du pH dans la plage acide. L’utilisation d’autres acides (tels que l’acide acétique, par exemple) est
possible, mais leur aptitude à l’emploi doit préalablement être soumise à des essais d’ajout d’étalon ou à
une analyse d’échantillons issus d’essais interlaboratoires.
5.4.4 Sulfate de sodium anhydre, poudre.
5.4.5 Acide phénylboronique, saturé dans de l’éther diéthylique avec précipitation.
5.4.6 Azote (par exemple qualité 5,0, pureté, la fraction en volume = 99,999 %).
6 Appareillage
6.1 Pipettes Eppendorf (par exemple 10 µl à 100 µl, 10 µl à 200 µl, 100 µl à 1 000 µl).
6.2 Pipettes à piston et volumétriques, différentes tailles.
6.3 Fioles jaugées, différentes tailles.
6.4 Balance analytique, précision de lecture de 0,000 1 g, précision de pesée de 0,001 g.
6.5 Flacons à bouchon vissé (d’une capacité de 2 ml environ) et bouchons à vis avec septum en
polytétrafluoroéthylène (PTFE).
6.6 Pipettes Pasteur et poires à pipeter.
6.7 Micro-inserts (d’une capacité d’environ 200 µl) pour flacons à bouchon vissé (d’une capacité de
2 ml environ).
6.8 Équipement générateur de flux d’azote.
6.9 Système CPG/SM avec injecteur à température programmable.
6.10 Colonne chromatographique en silice fondue, phase stationnaire 50 % diphényl - 50 %
diméthylpolysiloxane, longueur 30 m, diamètre intérieur 0,25 mm, é
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