ISO 11868:2007

Heat-treated milk — Determination of lactulose content — Method using high-performance liquid chromatography

ISO 11868|IDF 147:2007 specifies a method for the determination of the lactulose content of heated milk, skimmed, partially skimmed or whole milk, by high-performance liquid chromatography, in order to distinguish milk sterilized by ultra-heat treatment (UHT) from in-bottle sterilized milk. The method has been tested over a lactulose content range of 200 mg/l to 1 500 mg/l and is applicable to all heat-treated milks. The method described is to be used in cases of dispute.

Lait traité thermiquement — Détermination de la teneur en lactulose — Méthode par chromatographie liquide à haute performance

L'ISO 11868|FIL 147:2007 spécifie une méthode par chromatographie liquide à haute performance pour la détermination de la teneur en lactulose du lait traité thermiquement (lait écrémé, demi-écrémé ou entier) afin de distinguer le lait stérilisé à ultra-haute température (UHT) du lait stérilisé en bouteilles. La méthode a été testée pour des teneurs en lactulose situées dans une plage allant de 200 mg/l à 1 500 mg/l et est applicable à tous les laits traités thermiquement. La méthode décrite dans la présente Norme internationale doit être utilisée en cas de litige.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 08-Mar-2007
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 10-Mar-2023

Relations

• Revises: ISO 11868:1997 - Heat-treated milk — Determination of lactulose content — Method using high-performance liquid chromatography
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11868
IDF
147
Second edition
2007-03-15

Heat-treated milk — Determination of
lactulose content — Method using high-
performance liquid chromatography
Lait traité thermiquement — Détermination de la teneur en lactulose —
Méthode par chromatographie liquide à haute performance




Reference numbers
ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
©
ISO and IDF 2007

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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 1
5 Apparatus . 2
6 Sampling. 3
7 Preparation of test sample. 4
8 Procedure . 4
8.1 Test portion . 4
8.2 Preparation of calibration samples. 4
8.3 Chromatographic determination. 5
8.4 Recovery. 6
9 Calculation and expression of results. 6
9.1 Calibration . 6
9.2 Calculation of lactulose content . 6
10 Precision. 7
10.1 Interlaboratory test . 7
10.2 Repeatability. 7
10.3 Reproducibility. 7
11 Test report . 7
Annex A (informative) Example of a chromatogram. 8
Annex B (informative) Results of interlaboratory test. 9
Bibliography . 10

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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11868⎪IDF 147 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
IDF.
This edition of ISO 11868⎪IDF 147 cancels and replaces ISO 11868:1997, of which it constitutes a minor
revision.
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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of
standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11868⎪IDF 147 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by a former Joint ISO/IDF/AOAC Group of Experts on Characterization of milk and
milk products according to heat treatment (E704), under the aegis of its project leader, Mr M.A.J.S. van
Boekel (NL).
This edition of ISO 11868⎪IDF 147 cancels and replaces IDF 147A:1994, of which it constitutes a minor
revision.

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ISO 11868:2007(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 147:2007(E)

Heat-treated milk — Determination of lactulose content —
Method using high-performance liquid chromatography
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the lactulose content of heated milk,
skimmed, partially skimmed or whole milk, by high-performance liquid chromatography, in order to distinguish
milk sterilized by ultra-heat treatment (UHT) from in-bottle sterilized milk.
The method has been tested over a lactulose content range of 200 mg/l to 1 500 mg/l and is applicable to all
heat-treated milks.
The method described in this International Standard is to be used in cases of dispute.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
lactulose content of skimmed, partially skimmed or whole milk
mass of substances determined by the procedure specified in this International Standard
NOTE The lactulose content is expressed as milligrams per litre of sample.
3 Principle
Fat and protein are removed from a sample of milk, which is then filtered. The lactulose content of the filtrate
is determined by high-performance liquid chromatography (HPLC). The result obtained for the sample is
evaluated by reference to standard samples consisting of lactulose-free skimmed milk with known amounts of
added lactulose.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and double-distilled water or
water of equivalent purity.
4.1 Lactose monohydrate.
4.2 Lactulose, at least 99 % pure.
4.3 Sample pretreatment solution.
Dissolve 91,0 g of zinc acetate dihydrate, Zn(CH COO)⋅2HO, 54,6 g of phosphotungstic acid
3 2 2
tetracosahydrate, H [P(W O ) ]⋅24H O, and 58,1 ml of glacial acetic acid in water in a 1 000 ml volumetric
3 3 10 4 2
flask and dilute to the mark with water.
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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
4.4 Eluent.
Filter the water, HPLC grade, through a membrane filter with a 0,45 µm pore diameter (5.8) and, prior to use,
boil to remove dissolved air.
To remove dissolved air, other methods giving the same results (e.g. helium sparging) may be used instead of
boiling water.
NOTE These alternatives are usually more expensive.
4.5 Standard samples.
4.5.1 Lactulose standard solution.
Weigh, to the nearest 0,1 mg, about 75 mg of lactulose (4.2) in a 100 ml volumetric flask (5.6). Dissolve in
water and dilute to the mark with water.
4.5.2 Pasteurized skimmed milk, lactulose free, as determined using the method specified below.
Use identical pasteurized skimmed milk samples containing approximately 250 mg, 500 mg, 750 mg and
1 000 mg of lactulose per litre, obtained by the addition of 5 ml, 10 ml, 15 ml and 20 ml, respectively, of the
lactulose standard solution (as described in 8.2) to the pasteurized skimmed milk.
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg.
5.2 Glass funnels, of diameter about 7 cm.
5.3 Filters.
5.3.1 Filter papers, medium grade, of diameter about 12,5 cm.
5.3.2 Cellulose acetate membranes, with 0,45 µm pore diameter.
5.4 Measuring cylinder, of capacity 25 ml.
5.5 Graduated pipette, of capacity 10 ml, graduated in 0,1 ml.
5.6 One-mark volumetric flasks, of capacity 50 ml, 100 ml and 1 000 ml.
5.7 One-mark pipettes, capable of delivering 5 ml, 10 ml, 15 ml and 20 ml.
5.8 Glass filtration equipment, with 0,45 µm pore diameter filter.
5.9 Glass flasks, of capacity 20 ml, with stopcock.
5.10 Ultrasonic water bath.
5.11 Water vacuum pump.
5.12 HPLC equipment, as follows.
5.12.1 Magnetic stirrer and heater, for keeping the eluent at a temperature of 90 °C ± 2 °C before it is
transported to the precolumn for analysis.
2 © ISO and IDF 2007 – All rights reserved

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ISO 11868:2007(E)
IDF 147:2007(E)
5.12.2 Pump, capable of delivering a volume flow rate of between 0,3 ml/min and 0,6 ml/min, with a
pulsation of less than 1 % of the pressure drop over the column (1,5 MPa to 4 MPa).
1)
5.12.3 HPX-87 P column (Bio-Rad, 30 cm × 0,78 cm) , or an equivalent column packed with sulfonic ion
exchanger in the lead form, based on a polystyrene divinylbenzene 8 % crosslinked polymer. The pre-column
1)
consists of the Bio-Rad de-ashing system (a cartridge, 3 cm × 0,46 cm, packed with a cation-exchange resin
in the hydrogen form and a cartridge, 3 cm × 0,46 cm, packed with an anion-exchange resin in the carbonate
form) or a system of equivalent effectiveness.
The pre-columns extend both the life and the leng
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 11868
FIL
147
Deuxième édition
2007-03-15


Lait traité thermiquement —
Détermination de la teneur en lactulose —
Méthode par chromatographie liquide à
haute performance
Heat-treated milk — Determination of lactulose content — Method using
high-performance liquid chromatography




Numéros de référence
ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
©
ISO et FIL 2007

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
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ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs . 1
5 Appareillage . 2
6 Échantillonnage . 3
7 Préparation de l'échantillon pour essai. 4
8 Mode opératoire . 4
8.1 Prise d'essai . 4
8.2 Préparation des échantillons étalons. 4
8.3 Détermination chromatographique. 5
8.4 Rendement . 6
9 Calcul et expression des résultats. 6
9.1 Étalonnage. 6
9.2 Calcul de la teneur en lactulose . 6
10 Fidélité . 7
10.1 Étude interlaboratoires. 7
10.2 Répétabilité. 7
10.3 Reproductibilité. 7
11 Rapport d'essai . 7
Annexe A (informative) Exemple de chromatogramme. 8
Annexe B (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires . 9
Bibliographie . 10

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11868⎪FIL 147 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL). Elle est publiée conjointement
par l'ISO et la FIL.
La présente édition de l'ISO 11868⎪FIL 147 annule et remplace l'ISO 11868:1997, dont elle constitue une
révision mineure.
iv © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour
l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux de la FIL votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11868⎪FIL 147 a été élaborée par la Fédération internationale de laiterie (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée conjointement
par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'ancienne Équipe d'Action mixte ISO/FIL/AOAC chargée de la
Caractérisation du lait et des produits laitiers selon le traitement à la chaleur (E704), sous la conduite de son
chef de projet, Monsieur M.A.J.S. van Boekel (NL).
Cette édition de l'ISO 11868⎪FIL 147 annule et remplace la FIL 147A:1994, dont elle constitue une révision
mineure.

© ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés v

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ISO 11868:2007(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 147:2007(F)

Lait traité thermiquement — Détermination de la teneur en
lactulose — Méthode par chromatographie liquide à haute
performance
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode par chromatographie liquide à haute performance
pour la détermination de la teneur en lactulose du lait traité thermiquement (lait écrémé, demi-écrémé ou
entier) afin de distinguer le lait stérilisé à ultra-haute température (UHT) du lait stérilisé en bouteilles.
La méthode a été testée pour des teneurs en lactulose situées dans une plage allant de 200 mg/l à 1 500 mg/l
et est applicable à tous les laits traités thermiquement.
La méthode décrite dans la présente Norme internationale doit être utilisée en cas de litige.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
teneur en lactulose du lait écrémé, demi-écrémé ou entier
masse des substances déterminées par la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale
NOTE La teneur en lactulose est exprimée en milligrammes par litre d'échantillon.
3 Principe
Élimination des matières grasses et des protéines d'un échantilllon de lait, suivie d'une filtration.
Détermination de la teneur en lactulose dans le filtrat par chromatographie liquide à haute performance
(CLHP). Évaluation du résultat obtenu pour l'échantillon par comparaison avec des échantillons étalons de lait
écrémé sans lactulose auxquels ont été ajoutées des quantités connues de lactulose.
4 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de l'eau
bidistillée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Lactose, monohydraté.
4.2 Lactulose, ayant une pureté minimale de 99 %.
4.3 Solution de prétraitement de l'échantillon.
Dissoudre dans de l'eau 91,0 g d'acétate de zinc dihydraté, Zn(CH COO) ,2H O, 54,6 g d'acide
3 2 2
phosphotungstique tétracosahydraté, H [P(W O ) ],24H O, et 58,1 ml d'acide acétique cristallisable dans
3 3 10 4 2
une fiole jaugée de 1 000 ml et compléter au trait repère avec de l'eau.
© ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés 1

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
4.4 Éluant.
Filtrer l'eau, de qualité CLHP, à travers un filtre sur membrane d'un diamètre de pore de 0,45 µm (5.8), et,
avant l'emploi, la porter à ébullition pour éliminer l'air dissous.
Au lieu de porter l'eau à ébullition, il est possible d'utiliser d'autres méthodes d'élimination de l'air dissous qui
conduisent au même résultat (par exemple barbotage à l'hélium).
NOTE La plupart de ces variantes sont plus onéreuses.
4.5 Échantillons étalons.
4.5.1 Solution étalon de lactulose.
Peser, à 0,1 mg près, environ 75 mg de lactulose (4.2) dans une fiole jaugée de 100 ml (5.6). Dissoudre dans
de l'eau et compléter à 100 ml avec de l'eau.
4.5.2 Lait écrémé pasteurisé, sans lactulose, reconnu comme tel en utilisant la méthode décrite
ci-dessous.
Utiliser des échantillons identiques de lait écrémé pasteurisé contenant environ 250 mg, 500 mg, 750 mg et
1 000 mg de lactulose par litre, obtenus en leur ajoutant, respectivement, 5 ml, 10 ml, 15 ml et 20 ml de
solution étalon de lactulose (comme décrit en 8.2).
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Balance analytique, précise à 0,1 mg près.
5.2 Entonnoirs en verre, d'environ 7 cm de diamètre.
5.3 Filtres.
5.3.1 Papiers filtres, à filtration moyenne, d'environ 12,5 cm de diamètre.
5.3.2 Membranes en acétate de cellulose, d'un diamètre de pore de 0,45 µm.
5.4 Éprouvette graduée, de 25 ml de capacité.
5.5 Pipette graduée, de 10 ml de capacité, avec graduations de 0,1 ml.
5.6 Fioles jaugées, de 50 ml, 100 ml et 1 000 ml de capacité.
5.7 Pipettes à un trait, de 5 ml, 10 ml, 15 ml et 20 ml de capacité.
5.8 Appareil de filtration en verre, avec filtre d'un diamètre de pore de 0,45 µm.
5.9 Flacons en verre, de 20 ml de capacité, munis d'un robinet d'arrêt.
5.10 Bain d'eau à ultrasons.
5.11 Pompe à vide hydraulique.
5.12 Matériel de CLHP, comme suit.
2 © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

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ISO 11868:2007(F)
FIL 147:2007(F)
5.12.1 Agitateur magnétique et réchauffeur, pour conserver l'éluant à la température de 90 °C ± 2 °C,
avant qu'il ne soit transporté à la précolonne pour analyse.
5.12.2 Pompe, capable de délivrer un débit de 0,3 ml/min à 0,6 ml/min avec une pulsation inférieure à 1 %
de la perte de charge sur la colonne (1,5 MPa à 4 MPa).
1)
5.12.3 Colonne HPX-87 P (Bio-Rad, 30 cm × 0,78 cm) ou colonne équivalente garnie d'un échangeur
d'ions sulfoniques sous forme plomb, greffée sur un polymère réticulé à 8 % de polystyrène divinylbenzène.
1)
La précolonne est constituée du système de déminéralisation Bio-Rad (cartouche de 3 cm × 0,46 cm, garnie
d'une résine échangeuse de cations sous forme hydrogène et cartouche de 3 cm × 0,46 cm, garnie d'une
résine échangeuse d'anions sous forme carbonate) ou système offrant une efficacité similaire.
Les précolonnes augmentent à la fois la durée de vie et la longueur de la colonne analytique, en diminuant les
problèmes de séparation et en réduisant de manière importante les erreurs de dosage quantitatif. Quand le
s
...